铁蛋白范文
时间：2023-04-04 21:08:23
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篇1
1、铁蛋白是一种广泛存在的储铁蛋白，具有纳米尺寸的水合氧化铁内核和笼形结构的蛋白质外壳。铁蛋白是含20%铁的蛋白质。通常，存在于几乎所有身体组织尤其是肝细胞和网状内皮细胞内，作为铁储备。微量的血清铁蛋白反映了正常的铁储备。检测血清铁蛋白是缺铁性贫血诊断的重要依据。
2、铁蛋白的分子结构是由一层蛋白壳围绕着铁和磷酸盐分子组成的铁核，外径12～13nm，分子量500kDa。从不同来源（如人、马、牛蛙和细菌等）的铁蛋白结构特征来看，所有的铁蛋白虽然在一级结构上变化很大（氨基酸序列相似性有时才达到14%），但本质上都有相同的体系结构。蛋白壳均为由24个亚基以高度对称性方式组成的内空心结构，空心直径约为8nm，其中的氢氧化铁核中可积累多达4000个铁原子且不影响蛋白表面和与其它分子的相互作用；蛋白亚基中包括亚铁氧化的接触反应位点和与溶剂进行交换的亲水小孔。
（来源：文章屋网 ）
篇2
摘要 :目的 通过测定早产、胎膜早破患者母血清铁蛋白的水平，探讨其与早产、胎膜早破的关系。 方法 将研究对象分为先兆早产24h内分娩者、24h内未分娩者，未足月胎膜早破组、足月胎膜早破组及对照组，用放射免疫法测定孕妇血清铁蛋白水平并进行比较。 结果 与对照组比较，先兆早产组铁蛋白均升高，其中24h分娩者铁蛋白水平高于24h未分娩者。与对照组比较，足月、未足月胎膜早破组铁蛋白均升高，2组胎膜早破间铁蛋白水平无明显变化。 结论 铁蛋白与胎膜早破及早产关系密切，临床上可作为预测早产的指标。
关键词 :铁蛋白;早产;胎膜早破
Abstract:Objective To explore the relationship between maternal serum ferritin and premature labor and premature rup-ture of membranes（PROM）.Methods The70subjects were pided into5groups:group of threatened premature labor group without labor，threatened premature labor with labor within24h，normal control pregnancy of comarable periods of gestation group，and the groups of pre-term pregnancy premaure rupture of membranes（PROM）and term pregnancy PROM.The level of serum ferrintin was determinated by radioimmunoassay.Results In contrast to the control，the levels of ferritin in the threatened premature labor were high，higher in the group who delivered within24h than in the group without labor.The levels of ferritin were higher in the two PROMgroups，and there were no apparent differences in ferritin between the two PROMgroups.Conclu-sions Ferritin is closely related to PROM and premature labor，but not to the onset of labor.It can be a marker for predicting premature labor.
Key words:ferrintin;premature labor;premature rupture of membranes
早产是由多种原因引起的子宫收缩、宫颈扩张综合征［1］ ，占整个妊娠的5%～15%［2］ ，是围生期新生儿死亡的首要原因。近几年的研究显示，通过测定某些生化指标的变化，可以从某种程度上预测早产的发生。本研究测定了早产、胎膜早破及足月产孕产妇血清铁蛋白的水平，探讨其与早产的关系。
1 资料和方法
1.1 研究对象 2002年9月―2003年12月在山东大学齐鲁医院门诊就诊及住院保胎治疗或分娩的患者共70例。①未足月组49例，又分为先兆早产组及对照组:先兆早产组中24h内分娩者13例，24h内未分娩者21例;对照组15例。②胎膜早破组21例，其中未足月胎膜早破组10例，足月胎膜早破组11例。早产组病例按以下标准收集:①孕28～37周;②规律宫缩≥4次.20min，并伴有宫颈改变;③宫颈扩张≥2cm;④宫缩伴有宫颈管消失≥80%。
所有病例年龄、胎次无明显差异，血红蛋白均≥105g.L，无铁负荷过高，均无吸烟、酗酒史，无急、慢性传染病，无内、外科和产科伴发病及并发症。
1.2 标本的采集与处理 所有研究对象均采集肘静脉血3ml。置于干燥的玻璃试管内，3h内离心，离心前暂放4℃保存，3000r.min离心10min，留取上清于-80℃保存，采用放射免疫法测定铁蛋白。 1.3 统计学处理 采用方差分析（q检验），检验水准:α=0.05。
2 结果
各组孕妇血中铁蛋白的水平见表1、2。
表1 先兆早产孕妇血铁蛋白水平比较（略）
与对照组比较:*P
与对照组比较，先兆早产组铁蛋白均升高（P
表2 不同孕期胎膜早破患者血铁蛋白水平比较（略）
与对照组比较:*P
与对照组比较，2组胎膜早破者铁蛋白均升高（P0.05）。
3 讨论
宫内感染与早产、胎膜早破的关系十分密切，其机制不完全清楚，目前认为与前列腺素的大量合成密切相关。同时与感染时大量细胞因子的异常分泌、基质金属蛋白酶活性增加、一氧化氮及促肾上腺皮质激素释放激素合成增多有关。感染发生后体内铁蛋白水平可能升高，本研究正是基于这一点，探讨孕妇体内血清铁蛋白水平一项是否可以作为预测早产或胎膜早破的指标。有研究表明，体内铁蛋白含量升高可通过促进氧化代谢使机体对病原微生物产生抵抗作用［3］ 。
本研究结果表明，早产及胎膜早破患者血清铁蛋白均较对照组明显升高，而24h内分娩者较24h内未分娩者又明显升高，说明铁蛋白与早产、胎膜早破关系密切，与文献报道一致［4］ 。早产及胎膜早破患者铁蛋白升高的原因可能为体内铁负荷过高或有潜在感染。本研究中铁负荷过高者已被排除，因此，铁蛋白升高的原因很可能为机体对亚临床感染的“应激反应”，与文献报道一致［5］ 。因此铁蛋白有望成为临床早产诊断的预测性指标，对于临床无症状而血清铁蛋白升高的孕妇可能预测早产的发生。
参考文献 :
［1］ Romero R，Mazor M，Munoz H，et al.The preterm labor syndrome［J］.Ann N Y Acad Sci，1994，734:414-429.
［2］ 郑怀美.现代妇产科学［M］.上海:上海医科大学出版社，1998:163-169.
［3］ Brailsford S，Lunce J，Winyard P，et al.A possible role for ferritin dur-ing inflammation［J］.Free Radie Res Commun，1985，1（2）:101-109.
篇3
关键词 乳铁蛋白；高效液相色谱法；肝素亲和柱
中图分类号 TS252.7 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）16-0291-02
乳铁蛋白是近年来国内外开发研究速度最快的一种营养添加剂，由于其具有广谱抗菌、抗病毒感染、调节体内铁平衡、调解骨髓细胞的生成、抑制人体肿瘤细胞、同多种抗生素及抗真菌制剂协同有效治疗疾病等功效，使其产品在国内外乳制品加工中的应用范围日益广泛[1-3]。我国《食品营养强化剂使用标准（GB14880-2012）》中规定婴幼儿配方食品中乳铁蛋白的最大允许使用量为1.0 g/kg，而目前国内外未建立与乳制品中乳铁蛋白测定相关的国家标准。为保证乳铁蛋白的安全生产和使用，该文建立了乳制品中乳铁蛋白的检测方法，最大限度地保证市场中乳铁蛋白添加型产品的安全和质量水平，以保证乳制品安全，促进行业健康发展[4]。
1 材料与方法
1.1 供试材料、试剂与仪器
1.1.1 供试材料。供试材料为婴幼儿配方奶粉、婴幼儿配方米粉、成人配方奶粉。
1.1.2 试剂与仪器。Agilent 1200 高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器。肝素亲和柱（美国通用医药有限公司）。乙腈（色谱纯，美国Sigma公司产品），无水乙醇、氯化钠、磷酸、磷酸氢二钠、三氟乙酸（分析级，国药集团化学试剂有限公司产品）。超纯水Nanopure Life Science（赛默飞世尔科技有限公司）。离心机Jouan Ceterifuge MR23i（赛默飞世尔科技有限公司）。
1.2 试验方法
1.2.1 提取试剂的选择。在相同试验条件下分别以水和磷酸缓冲液作为提取试剂，测定样品加标回收率，比较水和磷酸缓冲液对样品中乳铁蛋白的提取效果。
1.2.2 提取温度的选择。乳铁蛋白分子量为80 kDa，是具有大约700个氨基酸残基序列的单体糖蛋白，并连接1～2个配糖体。对于这一类大分子量的蛋白质，提取溶剂温度过高会造成乳铁蛋白结构的变化，致使检测结果偏离实际值。研究分别选取25、50、60、70、80、90 ℃进行比较。准确吸取1 mL 200 μg/mL的标准溶液于EP管中，分别于25、50、60、70、80、90 ℃下恒温水浴1 h，上机测定[5-6]。
1.2.3 肝素亲和柱的选择。肝素（Heparin）是一种含硫酸酯的酸性多糖，有文献报道乳铁蛋白可与这类多负电荷分子糖胺多糖结合。故在该文中采用HiTrapTM Heparin HP（1 mL）肝素亲和柱作为目标化合物纯化和浓缩的前处理步骤。通过经过和未经过肝素亲和柱纯化的样品比较图，分析其对乳铁蛋白检测应用的可行性[7]。
1.3 液相色谱条件
色谱柱：C4，5μm，300A（孔径），250 mm×4.6 mm（内径）；检测波长：280 nm；柱温：30 ℃；进样体积：50 μL；流速：1.0 mL/min；流动相：0.1%三氟乙酸溶液和乙腈，梯度洗脱参数如表1所示。
1.4 样品前处理
1.4.1 提取。准确称取1 g试样（试样中含乳铁蛋白0.1～10.0 mg）于50 mL烧杯中，加入5 mL温热的磷酸氢二钠溶液（温度不超过50 ℃），搅拌使样品完全溶解，将样品全部转入50 mL具塞塑料离心管中，再向原烧杯中加入5 mL磷酸氢二钠溶液，合并2次液体。漩涡振荡器振荡2 min，于室温下3 000 r/min离心10 min。将上层脂肪层和下层沉淀层之间的液体小心转移到另一个50 mL离心管中，再向原离心管中加入5 mL磷酸氢二钠溶液重复操作1次，合并2次液体作为样品提取液备用。
1.4.2 净化。肝素亲和层析柱先用5 mL磷酸氢二钠溶液平衡，处理完毕后加入样品提取液，待样品液体完全流出后，再用10 mL磷酸氢二钠溶液淋洗，弃去全部流出液。最后用3 mL磷酸氢二钠-氯化钠溶液洗脱，收集全部流出液，用磷酸氢二钠-氯化钠溶液定容至3 mL。将收集溶液过0.45 μm水相滤膜，供液相色谱-DAD检测分析用。
2 结果与分析
2.1 提取试剂的选择
试验证明，在同样的试验条件下用磷酸缓冲液作为提取试剂的回收率比水作为提取试剂高50%。另外，样品中含有比较高浓度的蛋白类物质时，乳铁蛋白在磷酸盐缓冲液中的溶解度优于水中；后续试验采用肝素亲和的活化需要磷酸盐缓冲液；采用缓冲液作为提取试剂可以保证样品上柱前的pH值在试验要求范围。
2.2 提取温度的选择
试验数据表明，随着温度的上升，乳铁蛋白的结构发生了变化。从表2可知，目标峰的峰高由25 ℃的76.9降低至90 ℃的22.2。因此得出结论，为了保证试验结果的准确性，在乳铁蛋白提取过程中必须控制提取缓冲液的温度在50 ℃以下。
2.3 肝素亲和柱的选择
从图1可知，未经过肝素亲和柱纯化的样品成分比较复杂，给乳铁蛋白的检测造成了相当大的难度，经过肝素亲和柱纯化的样品，杂质就比较少，峰形比较好，符合检测的要求。
2.4 线性关系及方法检出限
用液相色谱法测定不同浓度的乳铁蛋白标准溶液，其测定结果表明乳铁蛋白的标准溶液与峰面积响应值之间存在着较好的线性关系，从表3、图2可知，相关系数R2为0.999 1，回归方程分别为y=2.540 7x-13.275。
根据限量检测要求，对婴幼儿配方奶粉、婴幼儿配方米粉、成人配方奶粉等几类样品中乳铁蛋白进行了加标回收重复试验。根据信噪比S/N=3，试验结果表明，该方法检出限均达到20 mg/100 g。
2.5 回收率的测定
应用该方法，添加标准物质，对婴幼儿配方奶粉、婴幼儿配方米粉、成人配方奶粉3类样品中进行乳铁蛋白回收率的测定，从表4可知，按已确定的样品提取条件和色谱条件测定添加回收量，试验表明平均回收率达到75%～100%，相对标准偏差
3 结论与讨论
采用高效液相色谱法（HPLC）的方法测定乳制品中乳铁蛋白含量的测定。试样中的乳铁蛋白经磷酸盐缓冲液提取，提取液经HiTrapTM Heparin HP柱或相当者净化浓缩后，用反相高效液相色谱柱分离，于紫外检测器280 nm处检测，外标法定量。该方法与文献中报道的方法相比，具有操作方便简单、耗时较短、重复性好、回收率高、灵敏度高的优势。
4 参考文献
[1] LEVAY P F，VILJOEN M.Lactoferrin：a general review[J].Haemtologica，1995，80（3）：252-267.
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[3] VORLAND L H.Lactoferrin：a multifunctional glycoprotein.APMIS.1999， 107（7-12）：971-981.
[4] ZHANG G H，MANN D M，TSAI C M.Neutralization of endotoxin in vitro and in vivo by a human lactoferrin derived peptide[J].Infect Immun，1999，67（3）：1353-1358.
[5] 徐峥奎.乳铁蛋白的开发现状与前景[J].中国保健食品，2013（4）：16-17.
篇4
关键词：缺铁性贫血；血清铁蛋白；骨髓铁染色；诊断
Abstract： Objective：Observe the effects of thalidomide treatment of elderly patients and relapsed multiple myeloma clinical efficacy and effectiveness and safety， and to explore the most effective mechanism for the treatment of senile relapsed multiple myeloma.Method：clinical observation on 13 cases of primary treatment and 12 patients above 60 years of age with recurrent elderly myeloma patients， were made of arsenic trioxide combined with thalidomide treatment， intravenous arsenic trioxide for 10mg/d which， at the same time， the continuous injection 28 days， oral low dose thalidomide 100 200mmg/d， according to the actual situation of patients may be appropriate to increase， the maximum the limit is 300mg/d， 28 days for a course of treatment， taking two courses of treatment， efficacy and side effects were observed during the evaluation of curative effect， in accordance with the standard EBM T effect， according to the NCI CTCAECTCAE （National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events， version 3） standard to evaluate the adverse reaction.Result：in the 13 patients newly diagnosed 5 cases of partial remission （38.46%）， 5 cases of progress （38.46%）， and 3 cases ineffective （23.08%）. In 12 cases of senile multiple myeloma patients， 4 cases of partial remission （33.3%）， 5 cases （41%） had improvement， 3 cases （25%） are invalid， the total effective rate was 74.3%. Observed that， in the treatment of common adverse reactions are nausea and fatigue， abdominal distension and constipation， skin rash， liver injury， neutropenia， but after treatment will improve.Conclusion：Arsenic trioxide thalidomide for the treatment of senile relapsed multiple myeloma is safe and effective， worthy of promotion.
Keywords： Arsenic trioxide； Thalidomide； Elderly and relapsed multiple myeloma
缺铁性贫血是临床上贫血的原因中最常见的，是由于需铁量增加而铁摄入量不足、铁利用障碍或铁丢失过多所致。人体如果对铁摄入不足，会影响到血红蛋白的合成，红细胞中的血红蛋白减少，红细胞数随之减少，组织供氧不足，导致缺铁性贫血。临床以呼吸急促、心跳加速、易疲劳、健忘、头晕、眼花、乏力、食欲减退以及嗜睡等，以学龄前儿童、孕妇、育龄妇女为最多，是世界上重要的营养缺乏病之一。血清铁蛋白是检测体内铁贮量的重要指标，铁蛋白及骨髓铁染色能够直接反映体内铁的贮存情况，有助于临床上缺铁性贫血的诊断。本院选取50例缺铁性贫血患者与150例同期健康者作为研究对象，检测骨髓铁染色和铁蛋白，并仔细分析其临床结果，评价两项指标对缺铁性贫血的价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取我院2013年01月-2014年07月收治的50例缺铁性贫血患者与150例同期健康者，平均年龄43岁，男113例，平均年龄46岁，女87例，平均年龄39岁。其中50例缺铁性贫血患者作为实验组，另外50例同期健康者作为对照组两组差异有统计学意义（ P
1.2 仪器与试剂 采用电化学发光法，应用罗氏E44电化学发光仪及配套试剂，按试剂说明书进行操作，骨髓铁染色使用亚铁氰化钾染液。
1.3 方法 应用标准的真空采血管，对研究对象进行血液3ml采集，离心10min，利用电化学发光仪检测血清铁蛋白含量，正常的参考范围（13-400）ng/ml；骨髓铁染色应用亚铁氰化钾，将亚铁氰化钾染液滴加到新鲜干燥的骨髓涂片上，室温染色30min用流水冲洗，核固红染色3min用流水冲洗，用低倍镜及油镜观察并判断骨髓铁染色结果，记录细胞内外铁含量，计算细胞内铁阳性率，检测方法按《全国临床检验操作规程》进行。
1.4 统计学处理 采用SPSS 15.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，比较采用χ2检验，以P
2 结果
实验组与对照组骨髓铁染色结果和铁蛋白检测结果比较 见表1。 血清铁蛋白（SF）对照组均在正常范围内，实验组SF值平均19.8±3.9μg/ml，骨髓细胞内铁含量（4.6±3.5）%， 与对照组150例同期健康者对比，实验组50例中骨髓细胞内外铁含量明显减少，铁蛋白减少，差异有统计学意义（ P
3 讨论
缺铁性贫血（IDA）是临床上最常见的贫血，病因是由于体内贮存铁摄入不足或丢失，导致干扰亚铁血红素的合成而贫血。血清铁蛋白是检测体内铁贮量的重要指标，其具有比较强的与铁结合能力，以及储备功能，血清铁蛋白主要存在肝、肾、骨髓中，提供铁元素，合成含铁物质。其缺点为炎症、恶性疾病易影响检测值，影响对缺铁的判断；骨髓铁染色也是缺铁性贫血诊断的重要方法，其对缺少铁元素，同时有其他并发症的患者的确诊有明显的指导作用，但骨髓细胞内铁的含量在缺铁性贫血红细胞红细胞生成期阶段开始明显减低，对早期检测铁元素缺乏敏感度低，具有局限性。二者联合检测，可以提高对诊断缺铁性贫血的价值。
表1结果显示，实验对象共200例，实验组血清铁蛋白（19.8±3.9）μg/ml， 明显低于正常值，骨髓细胞内铁含量（3.7±3.6）%，明显低于对照组，骨髓铁染色也有变化，差异有统计学意义（ P
在本次临床研究当中，根据上述数据可以得出，在对201例样本进行骨髓铁染色和铁蛋白检测的过程中，检测结果差异有统计学意义（ P
综上所述，血清铁蛋白，骨髓细胞内外铁含量能够有效地放映体内铁的贮存和利用情况，二者具有良好的相关性，有利于诊断缺铁性贫血，差异有统计学意义（ P
参考文献：
[1]张养华. 骨髓铁染色和血清铁蛋白对患者小细胞性贫血的鉴别诊断价值[J]. 中国民康医学，2015，08：28-29.
[2]王敏，李晓兰，赵成艳，富晶. 检测血清铁蛋白、骨髓铁染色对慢性病贫血及缺铁性贫血鉴别诊断的临床价值[J]. 放射免疫学杂志，2013，04：542-543.
[3]冯新平，呼格吉乐，张保平. 缺铁性贫血患者血清铁蛋白等相关指标检测的临床意义[J]. 国际检验医学杂志，2015，09：1227-1228.
[4]孙峰，肖明兵，陈秀芳，周庆，尹红. 细胞形态学、骨髓铁染色及血清铁蛋白联合检测对缺铁性贫血的诊断价值[J]. 南通医学院学报，2002，01：31-32.
[5]邹海珊. 血红细胞4项参数诊断缺铁性贫血的临床价值[J]. 中国医学创新，2015，06：132-134.
[6]吕龙. 血清铁、铁蛋白和铁染色对缺铁性贫血诊断价值的研究[J]. 中国医药科学，2012，10：131+133.
篇5
【关键词】缺糖基转铁蛋白；酒精性肝病
酒精滥用是一个普遍存在的社会问题，随之而来的酒精性肝病的发病率近年也明显增高。血清缺糖基转铁蛋白（CDT）在长期酗酒者血清中出现频率较高，在国外已被广泛用于酒精性肝病的实验诊断[1]。本文通过检测酒精性肝病患者的血清CDT，并与其他肝功能指标ALT、AST、γ-GT、ALP进行比较，探讨CDT对酒精性肝病的诊断价值。
1资料与方法
1.1研究对象收集大连市友谊医院2012年1月至2012年12月期间确诊为酒精性肝病的患者33例，年龄为23-62岁。诊断标准为中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组2003年制定的《酒精性肝病诊断标准》。收集无饮酒史的病毒性肝炎患者45例，其中甲肝5例，乙肝37例，丙肝3例，年龄为21-65岁。收集无饮酒史的健康体检者50例作为对照组，年龄为18-55岁。
1.2仪器与试剂应用西门子BNⅡ全自动蛋白分析仪检测血清CDT，CDT试剂及标准品、质控品均为仪器配套试剂，正常参考范围为28.1-76.0mg/L。应用日立7600全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、γ-GT、ALP，检测试剂由北京九强生物技术有限公司提供。
1.3检测方法清晨空腹抽取静脉血4ml，分离血清。所有项目的检测都为当天完成。CDT采用乳胶颗粒增强的免疫散射比浊法检测，ALT、AST、γ-GT和ALP采用双波长速率法检测。
1.4统计学分析应用SPSS12.0统计软件对各组数据进行分析，两样本均数比较采用t检验。
2结果
2.1各组CDT的检测结果比较酒精性肝病组、非酒精性肝病组和对照组的CDT检测结果分别为137.3±32.4mg/L、45.6±9.5mg/L和41.5±10.1mg/L。酒精性肝病组与对照组比较，差异具有统计学意义（P0.05）。
2.2各组中各项生化指标测定阳性率的比较酒精性肝病组CDT、AST、ALT、γ-GT和ALP的阳性数和阳性率分别为29（88%）、9（27%）、8（24%）、24（73%）、7（21%）。非酒精性肝病组CDT、AST、ALT、γ-GT和ALP的阳性数和阳性率分别为4（9%）、39（87%）、41（91%）、27（60%）、23（51%）。对照组各生化指标的阳性数均为0。
3讨论
目前，肝组织病理学活检仍是确诊酒精性肝病的主要方法。此方法具有一定创伤性，易引起并发症且无法对酒精性肝病进行动态观察[2]。因此，寻找高敏感性和特异性的实验室诊断指标，诊断和评估酒精性肝病的发生及治疗的疗效具有重要意义。
酒精性肝病组CDT与对照组比较，差异具有统计学意义（P0.05）。表明CDT用于酒精性肝病的诊断具有较高的特异性。酒精性肝病组CDT的阳性率为88%，敏感度为88%，表明其用于酒精性肝病的诊断具有较高的敏感性。
非酒精性肝病组ALT、AST、ALP阳性率分别为91%、87%和51%，酒精性肝病组此三项阳性率分别为24%、27%和21%，表明这三项酶学指标可以有效地反映非酒精性肝病患者的肝损害程度，但是对酒精性肝病的敏感性不高，诊断价值不大。非酒精新肝病组和酒精性肝病组γ-GT的阳性率均较高，分别是60%和73%，表明γ-GT对酒精性肝病的诊断具有一定价值，但特异性不高，容易造成诊断的假阳性，这可能与γ-GT易受其他疾病和药物影响有关[3]。
综上所述，与ALT、AST、ALP、γ-GT比较，血清CDT用于诊断酒精性肝病具有较高的敏感性和特异性，可以作为酒精性肝病的诊断指标，对其诊断与预后具有重要价值。
参考文献
[1]Anttila P，Jarv iK，Latvala J，et al.Biomarkers of alcohol consumption in patients class ified according to the degree of liver disease severity[J].Scand J Clin Lab Invest，2005，65（2）：141-151.
篇6
关键词：MCV MCH MCHC RDW红细胞参数 铁蛋白 缺铁性贫血 临床诊断价值
贫血是临床常见的血液疾病，世界卫生组织调查显示，全球贫血的患病率达到25%，在血液病中排首位，同时因该病住院的患者在综合性医院住院患者中占到20%～40%[1]。缺铁性贫血（IDA）是由于人体内铁的需要量增加和（或）铁吸收不足，体内铁缺乏，导致血红蛋白的合成受影响，从而引起的贫血，是贫血中十分常见的类型[2-3]。IDA的临床症状缺乏特异性，儿童主要表现为苍白、头晕、乏力、软弱等；而在老年人中严重的IDA可导致含有亚铁离子的蛋白质合成障碍[4-5]。贫血的类型多，而不同贫血类型的治疗方法有很大差异，所以诊断及鉴别诊断显得十分重要[6]。骨髓像检查与骨髓铁染色是目前诊断铁缺乏的“金标准”，但有创伤性，操作复杂，不能普及。血红蛋白和红细胞等传统的血液学参数并不能特异性地区分贫血类型[7]。本研究探讨了红细胞参数和铁蛋白（SF）在IDA患者中的变化，内容如下。1 资料与方法1.1 一般资料
选择2010年1月至2019年10月126例IDA患者、80例巨幼红细胞性贫血（MA）患者及114例健康志愿者作为研究对象，分别设为IDA组、MA组及正常对照组。所有患者均按《血液病诊断及疗效标准》确诊，其中IDA组：男性40例，女性86例，年龄15～87岁，平均年龄（50.49±17.35）岁；M A组：男性3 2例，女性4 8例，年龄3 1～8 8岁，平均年龄（50.52±14.47）岁；正常对照组：男性48例，女性66例，年龄23～86岁，平均年龄（50.52±16.41）岁。3组间性别、年龄差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2 纳入与排除标准
纳入标准：(1)基线资料完整。(2)参与者知情同意，具备配合能力。(3)医院伦理委员会审核批准。(4)无检查禁忌。排除标准：(1)遵医行为差、拒绝配合者。(2)凝血功能障碍者。(3)重大疾病合并情况者。
1.3 方法
所有受检者均采集清晨空腹血4 m L，其中2 m L用EDTA-K2抗凝，使用全自动血细胞分析仪及原装配套系列试剂检测红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）、红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞体积分布宽度（RDW）。另2 m L不抗凝，经3 000 r/min离心5 min后分离血清，使用免疫发光仪及原装配套试剂盒检测SF水平。
1.4统计学方法
采用spss18.0统计软件分析处理数据，计算机工具处理。计数资料如敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度以率（%）表示，采用χ2检验；计量资料如MCV、MCH、MCHC、RDW以均数±标准差表示，采用t检验。P<0.05情况下，表示有统计学意义。2 结果与正常对照组比较，I D A组患者的M C V、M C H、MCHC、RDW和SF明显降低；与MA组比较，IDA组患者的MCV、MCH、MCHC、RDW和SF也明显降低。经统计学计算，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。
表1 3组MCV、MCH、MCHC、RDW和SF检测结果比较
各指标单独检测与联合检测对IDA的诊断效能：MCV、M C H、M C H C、R D W、S F联合检测对I D A的敏感度为100.00%、特异度为78.40%、阳性预测值为75.00%、阴性预测值为100.00%、准确度为86.90%。见表2。
表2 各指标单独检测与联合检测对IDA的诊断效能（%）
篇7
关键词：血清铁蛋白；2型糖尿病；冠心病；临床价值
冠心病、糖尿病均属于临床常见的慢性疾病。据有关资料显示，在近些年来，随着人们生活方式的改变及饮食结构的调整，促使冠心病、糖尿病等慢性疾病的发病率呈现出逐年上升的趋势，给人们的身体健康及生活质量带来了严重影响[1]。而且，根据冠心病和糖尿病的临床特征，往往表现为冠心病合并糖尿病发作。但有大量临床实践表明，我们可以通过为该类疾病患者进行炎性反应、凝血功能障碍以及血清内脂素水平等检测来起到尽早诊治糖尿病合并冠心病的重要作用[2-3]。为了探讨血清铁蛋白在2型糖尿病合并冠心病中的临床价值，本研究拟结合我院两年间收治的40例2型糖尿病合并冠心病患者及其临床资料进行讨论，并抽取同期到我院进行健康体检的40例正常人群作为对照组进行比较，现将具体内容报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料收集2012年4月~2013年10月到我院接受诊治的40例2型糖尿病合并冠心病患者及其临床资料，其中男性患者有26例，女性患者有14例，年龄范围在38~71岁，平均年龄（62.45±9.04）岁，均经冠状动脉造影和相关临床检查确诊为冠心病（冠状动脉直径狭窄超过50%者达1支以上），并与世界卫生组织于1999年的相关糖尿病诊断标准和分型指南相符合，排除既往有严重心脑肝肾疾病、视网膜病变、全身系统疾病者，或半年内进行过手术治疗、有外伤者，以及患有其他糖尿病急性并发症和不配合研究者，并将该部分患者设为观察组，同期抽取40例到我院做健康体检的正常者作为对照组，两组在性别、年龄等一般资料方面的比较，差异不具有统计学意义，P＞0.05，存在较高的可比性。
1.2方法在清晨空腹超过12h的情况下，为所有入选者进行2mL的肘静脉血采样，并选择基于直接化学发光技术的双抗体夹心法对其血清铁蛋白、FPG、UA、TG、TC以及LDL-C和HDL-C水平等指标进行检测，所选试剂及仪器均选自德国宝灵曼公司。做好相关数据的观察和记录。
1.3统计学分析此次研究主要选择SPSS16.0统计包软件对所有研究数据进行分析和处理，计量材料选择均差±标准差（x±s）形式显示，组间比较应用独立样本t检验，以P＜0.05作为差异有统计学意义的判断依据，以P＜0.01表示比较具有显著性差异，有统计学意义；以P＞0.05表示差异无统计学意义。
2结果
经研究发现，观察组的血清铁蛋白为（304.23±7.74）ng/mL，对照组的血清铁蛋白为（167.35±6.52）ng/mL，可见观察组血清铁蛋白相对于对照组要较高，比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；并且在FPG、UA、TG、TC以及LDL-C和HDL-C等其他指标方面，发现两组比较差异同样具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。
3讨论
糖尿病合并冠心病是临床常见的慢性疾病之一。糖尿病通常是因为胰岛素分泌不足，或是无法满足人体需要，以及靶细胞对人体胰岛素的敏感度下降，所导致的碳水化合物、蛋白质、脂肪、水以及电解质等的代谢紊乱的一种内分泌代谢性疾病，具有血糖浓度升高的显著特征[4]。而冠心病则是由于脂质代谢异常冠状动脉狭窄进而导致血流受阻、心脏缺血并影响心功能的心血管疾病，该病通常会引发严重的心绞痛或心肌梗死，对人们的生活质量和生命健康造成了极大的威胁[5]。但临床可通过对炎性反应、凝血功能障碍以及血清铁蛋白和内脂素等进行检测，以此来做到尽早诊断和防控病情的效果,尤其是血清铁蛋白的含量高低与2型糖尿病合并冠心病之间的关系，更成为了近年来人们所热议的话题之一[6]。并且目前已有相当一部分研究证实，2型糖尿病合并冠心病患者的血清铁蛋白含量往往要高于健康人群，研究认为可以此作为预测患者是否有2型糖尿病合并冠心病的风险[6]。
血清铁蛋白是铁储存的蛋白，一方面，当铁超载时，在人体肝脏部位会有大量的铁沉积下来，影响肝脏摄取和灭活胰岛素的功能，导致外周高胰岛素血症的出现；并且血清铁蛋白在氧化应激反应下，还可生成大量的氧自由基，促使肌肉及脂肪等组织运载、消化糖的能力下降，此外，血清铁蛋白还会抑制细胞对胰岛素的摄取，导致糖尿病；另一方面，据美国不完全统计，人体血清铁蛋白每增加10pmol/L，患者患上冠心病的风险也会呈现出一定程度的递增，其中男性的增幅为0.5%，而女性的增幅则达到了5.1%[7-9]；可见血清铁蛋白在预测患者是否有冠心病方面同样具有较高的临床价值。结合本研究结果来看，40例2型糖尿病合并冠心病患者经血清铁蛋白检测，发现其含量为（304.23±7.74）ng/mL，明显要高于健康体检者的（167.35±6.52）ng/mL，经统计学处理，发现两组间的比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。并且在空腹血糖、尿酸、甘油三酯、总胆固醇以及低密度脂蛋白胆固醇等指标方面，本次研究发现观察组分别为（7.53±0.92）mmol/L、（389.47±101.46）umol/L、（2.31±0.61）mmol/L、（4.70±0.58）mmol/L和（2.69±0.51）mmol/L，均要高于对照组，而在高密度脂蛋白胆固醇方面，观察组为（0.83±0.15）mmol/L，则要明显低于对照组的（1.14±0.14），比较差异同样具有统计学意义（P＜0.05）。这与徐淑静等[9]研究结果具有一致性。可见临床在诊断患者是否有2型糖尿病合并冠心病时，可在测定血清铁蛋白含量是否增加的基础上对其他指标进行综合检测，以此来提高诊断符合率。不过临床在检测时，还应注意血清铁蛋白在男女性中的含量存在一定的差异性，一般男性的参考范围在30 ng/mL~400ng/mL，女性在13 ng/mL~150 ng/mL[5]；并且绝经后女性的血清铁蛋白与同龄男性较为接近[9]。
经本研究表明，血清铁蛋白水平的提升与2型糖尿病合并冠心病存在着密切关系，临床需要给予足够重视，并通过及时、准确为患者进行血清铁蛋白水平检测，来起到尽早诊断和及时治疗的作用，具有较高的临床应用价值，值得进一步推广。
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篇8
[关键词] 转铁蛋白受体；血清铁蛋白；孕妇
[中图分类号] R715 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）06（b）-042-02
缺铁性贫血是孕妇的一种营养不良的现象，诊断缺铁性贫血（iron-deficiency anemia,IDA）的方法很多，但存在敏感性和创伤性等问题，寻找一种可靠的诊断指标是临床能够合理指导孕妇补铁、保证孕妇自身和胎儿健康发育所必须。我们通过对可溶性血清转铁蛋白受体(serum transferring receptor, sTfR)等有关铁缺乏症的几种实验指标的检测，以验证sTfR检测诊断孕妇缺铁性贫血的可行性。
1资料与方法
1.1一般资料
2007年1～6月来我院妇科产前检查的妊娠妇女中，随机选择年龄24～32岁，平均（26.0±5.1）岁的妊娠妇女，并排除合并其他疾病者。妊娠妇女的贫血诊断按照《中华内科学》1999年的贫血标准诊断：妊娠妇女血红蛋白及红细胞数比成人低10%的为贫血[1]。依据贫血诊断将妊娠妇女分为三组：健康组、轻度贫血组[Hb：(98.6±6.9) g/L]、中度贫血组[(87.3±5.6) g/L]，从三组中各随机抽取60例作为研究对象。
1.2 方法
抽取上述两组妊娠妇女外周血3 ml，分离血清置于-20℃留待备用。sTfR测定采用透射免疫比浊法，试剂由芬兰Orion Diagnostic公司提供，在Olympus AU640全自动生化仪上测定。血清铁蛋白(serum ferritin，SF)测定采用放射免疫，试剂来源于北京北方放免研究所，在BJ-2008P放射免疫计数器上检测。血常规分析采用Sysmex XT-1800全自动五分类血液分析仪。主要检测参数为血红蛋白(Hb)、红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)和红细胞体积分布宽度(RDW)。
1.3 统计学方法
本研究数据以均数±标准差表示，采用方差分析，应用SPSS10.0软件对数据进行统计学分析，P
2 结果
2.1三组妇女红细胞指数的比较结果（表1）
由表1可以看出，RDW：健康组与轻度贫血组比较，差异无显著性(P＞0.05)；健康组与中度贫血组比较，差异有显著性(P0.05)。MCV、MCH、MCHC和RDW均不能敏感地提示两贫血组为小细胞低色素性贫血。
2.2三组妇女血清sTfR、SF的检测情况结果（表2）
由表2可以看出，健康组与轻、中度组妇女的sTfR、SF比较，差异有显著性（均P
2.3 sTfR、SF对贫血的诊断作用比较
分别选择sTfR 1.2 mg/L、SF 15.0 μg/L为临床界值，其敏感性、特异性、 阳性预测值和阴性预测值见表3。
3讨论
铁蛋白受体是参与机体铁代谢的一种跨膜性糖蛋白，当组织缺铁时，sTfR就会升高，是一个很敏感的检测指标[2，3]，人体内75%～80%的sTfR存在于红骨髓的红系细胞表面，血清或血浆中sTfR主要是红细胞成数过程中脱落下来的游离形式，它与机体中铁营养状况成负相关，缺铁时sTfR增高，铁营养过剩时sTfR降低。因此，测定sTfR可以诊断贫血患者是否有缺铁的症状[4]。
通过对孕妇两贫血组与健康组进行了sTfR、SF和血液常规检验发现：sTfR能够敏感地提示贫血组存在缺铁症状；对于妊娠期贫血妇女，血常规分析中的能够反映红细胞体积和细胞内血红蛋白浓度变化的MCV、MCH、MCHC和RDW等参数的敏感性和特异性不高，可能与贫血程度有关；因此，笔者认为，sTfR、SF用于孕妇的铁营养状态监测是一个非常敏感的指标，虽然SF是常用的较为准确的诊断IDA的检验项目,但SF易受炎症、肿瘤因素的干扰，从而影响SF对IDA诊断的准确性[5]，而sTfR是细胞膜上的一种跨膜性糖蛋白，能特异性地与携铁的Tf结合并介导的胞饮作用将铁运至细胞内。幼红细胞在成熟过程中，膜TfR逐渐减少，并经水解被释放入血清中而成sTfR，sTfR的含量与细胞的sTfR总量成正比，sTfR的表达在mRNA水平上受体的调节[6]，在储存铁耗竭以后至贫血产生的过程中，当各种缺铁性指标还没有明显变化时，sTfR已开始升高，且与缺铁的程度有一定的相关性。在缺铁红细胞尚未形成而只是单纯的储存铁耗竭状态下，sTfR可用于观察储存铁减少的生理状况和鉴别同为小细胞贫血的慢性疾病的继发性贫血。尤其是对于轻度贫血的孕妇具有临床诊断价值。
本实验结果还显示，sTfR测定缺铁性贫血的灵敏度为68.2%，特异性为81.5%。说明sTfR检测诊断妊娠合并缺铁性贫血具有可行性，特别是妊娠妇女SF测定不可信时，sTfR显示了独特优越性。孕妇营养缺乏等易引起缺铁性贫血的因素存在，因此，sTfR可鉴别出因缺铁引起的贫血，及时指导调整饮食，适时补铁，以免病情进展，通过sTfR的测定还可避免盲目补铁对机体造成的影响。
[参考文献]
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篇9
【摘要】 目的 构建细粒棘球蚴铁蛋白基因的重组表达质粒ferritin/pET-28a，表达、纯化出重组蛋白，并对重组蛋白的免疫学特性进行初步研究。方法 将目的基因亚克隆至表达载体pET-28a，转化入大肠杆菌BL21(DE3)plysS，加入IPTG对其进行诱导表达。通过Ni2+的His-bind树脂柱纯化出重组蛋白，用50μg/100μL免疫ICR小鼠，获得抗血清，通过western-blot及ELISA对重组铁蛋白的免疫学特性进行初步研究。结果 表达并纯化出分子量约19kD重组铁蛋白，western-blot显示重组蛋白免疫制备的抗血清可识别纯化的重组蛋白及抗原囊液、原头蚴，位置大致相同，约19kD。ELISA结果显示实验组小鼠与对照组小鼠血清中IgG的OD值有统计学意义(P＜0.01)。结论 细粒棘球蚴重组铁蛋白Eg.ferritin具有较好的抗原性及免疫原性，具有成为包虫疫苗候选分子的潜能。
【关键词】 细粒棘球蚴；重组铁蛋白；纯化；免疫特性
铁蛋白(ferritin)是普遍存在于生物体内的一种保守性较高的多功能多亚基蛋白，其作用是储存铁，对生物体内铁含量进行调控，在生物体内铁含量过多时起到解毒作用［1-2］，它的存在保证了生命体的正常活动。本实验中心已构建了重组表达质粒ferritin/pGEX-6p-1，但由于重组蛋白ferritin/GST以包涵体形式存在于细胞中，无法通过亲和层析柱纯化出单一的Eg.ferritin［3］。只能通过切胶纯化的方法获得融合蛋白Ferritin/GST，虽然试验结果说明该融合蛋白具有较好的抗原性及免疫原性，但影响蛋白特性的因素较多，不能很好的反映蛋白的实际特性，因此本次试验将铁蛋白基因重组到表达质粒pET-28a中，pET-28a是个高效表达载体，能纯化变性及非变性的蛋白，通过表达纯化可获得较纯的Eg.ferritin，以便更好地研究蛋白的特性，为铁蛋白能成为包虫病候选疫苗提供依据。
1 材料与方法
1.1 质粒与菌种 Eg.ferritin/pGEM-T/JM109及E.coli BL21(DE3)plysS由本室保存；pET-28a表达载体购自Novagen公司。
1.2 试剂 T4连接酶、限制性内切酶BamH I、Not I、IPTG、N'N'N'N-四甲基乙二胺、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺购自Promega公司；β-巯基乙醇、二甲基亚砜、弗氏完全(不完全)佐剂、过硫酸铵、Tween-20等试剂购自于SIGMA公司；考马斯亮蓝购自BIOMOL公司；酵母提取物、蛋白提取物购自OXOID公司；蛋白预染Marker购自北京赛百盛；卡那霉素、TMB、4-氯-1-奈酚购自AMRESCO；羊抗鼠HRP-IgG、质粒DNA提取试剂盒等购自北京华美公司；DNA纯化回收试剂盒购自北京赛百盛生物有限公司；标准蛋白分子量Marker 购自中国科学院上海生物化学研究所；含Ni2+的His-bind树脂纯化试剂盒购自Novagen公司；其它常用试剂为国产分析纯。
1.3 实验动物 ICR小鼠，6～8周，(18±2)g，雌性，由宁夏医科大学实验动物中心提供。
1.4 Eg.ferritin/pET-28a重组质粒的构建及鉴定 取Eg.ferritin/pGEM-T/JM109菌株划板接菌［4］，并挑单个菌落进行培养，通过碱裂解法提取重组质粒；同时取适量的表达载体pET-28a，将两者分别用BamH I，Not I进行双酶切处理，用1%的琼脂糖凝胶电泳分离带有双黏性末端的目的片段和表达载体，切胶，经DNA回收试剂盒纯化目的片段及载体。目的片段与表达载体在T4连接酶的作用下，16℃连接过夜。继而将连接产物转化到已制备好的感受态菌BL21(DE3)plysS中［5］，经含卡那霉素终浓度为50μg/mL的LB固体培养基筛选阳性菌株［6］。挑取阳性菌株含卡那霉素的LB培养基中振荡培养，经质粒提取试剂盒纯化重组质粒，用限制性内切酶BamH I，Not I进行酶切鉴定。
1.5 重组铁蛋白的表达、纯化
1.5.1 重组蛋白的表达 将重组菌接种于含卡那霉素(终浓度为50μg/mL)的3mL 的LB培养基中，37℃ 200 r/min 振荡培养数小时，按1∶50接种于50mL培养基中，37℃，220 r/min，培养至OD600=0.5时，加入IPTG至终浓度为0.05mmol/L，继续振荡培养6h，4℃ 4000r/min 离心15min，弃上清，收集细菌沉淀，SDS-PAGE观察表达情况。
1.5.2 表达产物的鉴定 将样本与2×SDS-PAGE样本缓冲液混合，经12% SDS-PAGE，180V电压，电泳至溴酚兰指示剂到胶底为止，用0.2%考马斯亮蓝R250染色2h，用含7%冰醋酸5%甲醇的脱色液脱色至本底无色。
1.5.3 重组抗原的纯化及制备 对细胞进行裂解，发现重组蛋白以包涵体的形式存在，按照Novagen公司His-bind树脂纯化试剂盒说明书中的包涵体大量纯化方法进行纯化，然后将纯化好的包涵体蛋白放入透析袋中，用1×PBS透析去除尿素。
1.6 动物免疫及特异性抗血清的制备
1.6.1 动物免疫 ICR小鼠分两组，即免疫组与对照组，每组10只。1)免疫组每只注射弗氏佐剂与重组抗原Eg.ferritin的乳化剂50μg/100μL。对照组注射弗氏佐剂和PBS的乳化剂100μL。根据Bio-Rad公司的Gel Doc1000凝胶分析系统对纯化的抗原进行定量。2)免疫方法 每组小鼠在0、2、4周各免疫1次，共3次，第1次基础免疫用弗氏完全佐剂，以后2次为加强免疫均用弗氏不完全佐剂。采用背部皮下多点注射免疫，每次注射量为100μL/只。分别于0、2、4、6周断尾采血，共4次，8周眼眶取血并处死小鼠。
1.6.2 特异性抗血清的制备 将血液4000r/min 离心 10min，提取血清，-20℃保存。
1.7 血清特异性识别 纯化的重组抗原Eg.ferritin、天然可溶性抗原囊液、原头蚴通过10%分离胶及5%的浓缩胶，180V电压下进行SDS-PAGE电泳 1h。在30mA下对硝酸纤维膜进行印迹转移1h。然后将硝酸纤维膜浸入5%的脱脂奶粉溶液中，37℃ 封闭1h，以PBS-T(PBS中含0.5‰ Tween-20)溶液洗3次，每次5min。再将硝酸纤维膜剪开分别浸泡于1∶100稀释的Eg.ferritin免疫的特异性小鼠抗血清及对照组鼠血清中，4℃ 过夜。次日将膜用PBS-T溶液洗3次，每次5min，然后与1∶1000稀释的羊抗鼠IgG-辣根过氧化物酶(HRP)结合，37℃反应1h。再以PBS-T溶液洗4次，每次10min。加入新配制的底物液(6mg 4-氯-1-奈酚，2mL冷甲醇，10mL的TBS，12μL的H2O2)37℃显色5min，最后用蒸馏水冲洗终止反应。
1.8 抗血清中IgG的测定 采用ELISA法，用纯化的Eg.ferritin 5μg/mL包被酶标板100μL/孔，4℃过夜。次日，PBS-T洗3次，5％牛奶封闭100μL/孔，37℃ 1h，PBS-T洗3次，取0～8周的免疫组及对照组小鼠血清作为一抗，按1∶100稀释，100μL/孔，37℃ 1h，PBS-T洗4次，羊抗鼠HRP-IgG为二抗，按1∶1000稀释，100μL/孔，37℃ 1h，PBS-T洗4次，加入显色剂100μL/孔，待对照孔显色时，加入2M H2SO4 50μL/孔 终止反应。以包被抗原及进行牛奶封闭的孔为空白调零，置酶标仪450nm波长处测OD值。
1.9 统计学方法 应用SPSS11.0统计学分析软件，采用两样本t检验的方法对测定的OD值进行分析。
2 结果
2.1 表达质粒Eg.ferritin/pET-28a的酶切鉴定
将构建的重组表达质粒Eg.ferritin/pET-28a 用限制性内切酶BamH I和Not I 双酶切后，经1％琼脂糖凝胶电泳检测到插入片断大小约560bp，与目的基因片段相符。M1.Lambda DNA/HindⅢMarker；1.pET-28a空质粒；2.Eg·ferritin/
2.2 Eg.ferritin 的纯化
含Ni2+的His-bind树脂亲合柱纯化Eg.ferritin/pET-28a表达的蛋白，经SDS-PAGE，根据标准蛋白分子量可知，纯化蛋白的分子量约19kD.
2.3 特异性抗血清识别纯化蛋白和天然抗原
纯化Eg.ferritin免疫小鼠制备的抗血清可特异性识别未纯化的重组Eg.ferritin，纯化的Eg.ferritin 及天然抗原(原头蚴、囊液)，识别蛋白条带的位置大致相同约19kD(见图3)。
2.4 小鼠血清IgG水平变化
根据对小鼠血清IgG水平在0～8周变化趋势的检测及对免疫组和对照组小鼠血清IgG的比较发现，小鼠血清中IgG的水平随着免疫次数及时间的延长呈上升趋势，免疫4周以后同一时期的免疫组小鼠血清中的IgG水平明显高于对照组(P＜0.01)。表1 两组小鼠免疫不同时间血清IgG水平变化
3 讨论
本实验将细粒棘球蚴铁蛋白基因重新克隆到表达载体pET-28a上，主要考虑：① pET-28a表达载体具有高效表达的能力［7］；② pET28a质粒在插入目的DNA后表达的蛋白N 末端含6个组氨酸，它作为His标签蛋白，可与Ni2+鳌合，使得重组融合蛋白在变性或非变性状态下均可被含Ni2+的His-band 树脂亲合柱纯化，即使被纯化的重组蛋白含量很低也能被有效地纯化出来。克服了本中心已经构建的重组表达质粒ferritin/pGEX-6p-1表达的重组蛋白ferritin/GST不能通过GSTTrapTMFF亲和层析柱纯化的弊端［3］；③重组蛋白是标签蛋白His和目的蛋白共同组成的融合蛋白，为获取目的蛋白，本应通过相应的剪切酶将标签蛋白剪切下来，但由于N-末端组氨酸所表达的蛋白分子量很小，它的存在不改变目的蛋白的活性，所以无须去除。这不仅能减少实验步骤，降低纯化蛋白在酶切过程中的损失，同时还可节省用来购买剪刀酶的费用，为后续研究提供了较好的实验材料。基于此我们得到了一个高效表达且易于纯化重组蛋白的基因工程菌株，并得到了较纯的重组蛋白，进行动物实验。通过实验说明Eg.ferritin作为抗原可诱导动物产生较强的的体液免疫应答，证明其有良好的抗原性；免疫血清与细粒棘球蚴天然抗原(囊液和原头蚴)的Western blot实验结果显示，免疫血清能够较好地识别天然抗原中位于19kD处的条带，说明Eg.ferritin具有较好免疫原性，由此推测中国大陆株细粒棘球蚴铁蛋白基因具有作为包虫疫苗候选分子的潜能，为进行重组铁蛋白对宿主的免疫保护性及保护性机制等方面研究的可能性提供了依据。
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篇10
【关键词】 骨髓增生异常综合征；巨幼细胞性贫血；血清铁蛋白；叶酸；维生素B12
DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2015.14.028
骨髓增生异常综合征（MDS）是一组病因及发病机制不明的造血系统恶性疾病。它的临床表现为造血系统多样性增生异常， 一系、二系或三系的造血特征显现病态， 出现特征性改变的是红系、粒系的核型呈异样的巨幼样变[1]。
巨幼细胞性贫血（MA）， 其致病的根本原因有两点：①人体内由于食物吸收滞涩、营养元素稀少等原因造成维生素B12或叶酸缺乏， 不能满足人体的代谢要求， 直接导致脱氧核糖核酸合成障碍， 引起人体出现贫血征兆；②因家族遗传原因或在治疗某种疾病时用药不慎导致DNA合成障碍， 从而引起贫血。巨幼细胞性贫血临床表现的主要征兆有三点：①患者出现大红细胞性贫血病症；②经检测可发现患者的骨髓内出现明显的巨幼红细胞系列；③在骨髓内出现红细胞系列发生变化的同时， 粒细胞、巨核细胞以及个别增殖性体细胞的形态也随之发生相应的变化。该巨幼红细胞就像钻入骨髓的坏分子一样在骨髓内搞破坏活动， 导致大量无效性红细胞生成， 并且对人体带来巨大的危害。
MDS和MA虽然是两种不同性质的血液病， 但二者在临床表现上有一个共性的特征， 这就是MDS和MA都会引起不同程度的大细胞性贫血。MDS会出现类似MA巨幼变， MA会出现典型的巨幼红细胞。
本院检验科近几年来通过联合检测血清铁蛋白、叶酸、维生素B12， 从而为鉴别MDS和MA取得了明显的效果， 现报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 42例MDS患者作为MDS组， 40例MA患者作为MA组， 30例健康人作为健康组， 健康组男20例， 女10例， 年龄18～35岁；MA组男30例， 女10例， 年龄6～60岁， 平均年龄43岁。MDS组男32例， 女10例， 年龄10～69岁， 平均年龄48岁， 分型：MDS-RA 38例， MDS-RAS 4例。
1. 2 方法 采用检测仪器为贝克曼化学发光DxI 800 Access， 铁蛋白、叶酸、维生素B12试剂均为美国贝克曼公司的专用配套试剂。运用骨髓铁和糖原染色试剂、配方、结果判断均参照《血液病诊断及疗效标准》。标本来源：初诊的MA和MDS患者入院次日空腹采取静脉血3 ml分离血清测定。患者进行常规的骨髓穿刺后涂片， 待干后试骨髓铁染色及糖染色。
1. 3 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P
2 结果
MDS组铁蛋白、叶酸都高于健康组， MA组铁蛋白、叶酸都低于健康组， MDS组和MA组的维生素B12值分别是健康组的13倍和3倍， 差异均具有统计学意义（P
3 讨论
细胞核DNA发生合成障碍的重要原因是叶酸和维生素B12缺乏或者发生代谢紊乱。形态学上粒、红两系均可出现巨幼样改变， 即胞体增大的类似MA改变[2]。在鉴别中， 要与MA中的红系巨幼进行对比， 仔细鉴定， 分辨判断， 由本组资料可以看出， MA组的叶酸和铁蛋白低于健康组（P
人体内的铁有一定量以铁蛋白和含铁血黄素的形式存在， 储存于骨髓中的单核吞噬细胞胞质内， 幼红细胞的线粒体中也含有铁血黄素。这些铁在酸性的低铁氧化钾溶液中反应， 生成蓝色的铁氧化铁沉淀（普鲁士蓝）， 定位于含铁的部位。故此染色法又称为普鲁士蓝反应， 即骨髓铁染色反应。在临床上， 发生缺铁性贫血时， 早期骨髓中储存的铁就已耗尽[3]。铁粒幼细胞百分率减低， 常15%。
在本组实验中， MDS病例细胞外铁++～+++， 铁粒幼细胞的80%～98%， 而MA患者细胞外铁+～++， 铁粒幼细胞的28%～38%， 且差异有统计学意义（P
根据实验， 作者发现， 核红细胞糖原染色[过碘酸希夫（PAS）染色]， 在染色MDS时， 可出现阳性反应， 说明MDS血清铁蛋白、叶酸、维生素B12含量显著高于健康组， 提示MDS患者对铁蛋白、叶酸、维生素B12利用异常， 与MA的PAS染色相比， 具有统计学意义。MA与PAS染色成阴性。二者是有明显的区别， 可作为临床鉴定的重要手段。
综上所述， 血清铁蛋白、叶酸、维生素B12联合检测能有效指导MDS和MA的诊断， 治疗甚至提示预后的作用， 值得临床重视与推广运用。
参考文献
[1] 丁勇敏， 周午琼.五项生化指标在巨幼细胞性贫血和骨髓增生异常综合征的鉴别价值.浙江临床学， 2008， 4（10）：494-495.
[2] 李家增， 王鸿利， 韩中朝.血液实验诊断学.上海：上海科学出版社， 1994：45.