一剪梅简谱范文

导语：如何才能写好一篇一剪梅简谱，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

文/金长泽

近日，美国癌症研究所公布了抗癌新食谱——低脂肪、高纤维、纯天然。研究发现，只要饮食习惯合理，许多癌症是可以预防的。

1.多素少荤。只靠一种食物单打独斗无法降低癌症危险，但如果把它们合理地搭配起来，效果就会迥然不同。就餐时，素食至少要占2/3，而动物蛋白最好不超过1/3。

2.每天5份果蔬。超重会增加结肠癌、食管癌和肾癌等多种癌症发病几率。而水果蔬菜既有助于保持健康体重，又有助于降低癌症风险。专家建议，每天至少吃5份水果蔬菜。

3.叶酸早餐。美国癌症协会表示，补充叶酸的最佳方法不是吃药，而是多吃水果、蔬菜和强化谷物食品。叶酸有助于预防结肠癌、直肠癌和乳腺癌。每天早餐中的谷物和全麦食品是叶酸的最好来源。其他富含叶酸的食物还包括：橙汁、柠檬、草莓、芦笋和鸡蛋、鸡肝、豆类、菠菜，莴苣等。

4.少吃加工熟食。偶尔吃一次三明治或热狗，对健康并无大碍。但少吃腊肠、火腿之类的加工肉食，有助于降低结直肠癌和胃癌的发病率。另外，熏肉和咸肉中潜在的致癌物也会增加癌症风险。

5.西红柿防前列腺癌。吃西红柿可降低包括前列腺癌在内的多种癌症风险，因为西红柿中丰富的番茄红素发挥了关键作用。研究还显示，番茄汁、番茄酱等西红柿制品也具有抗癌的潜力。

6.时常喝绿茶。每天上班给自己泡杯茶吧。经常喝茶会降低膀胱癌、胃癌和胰腺癌的发病率。其中，绿茶具有较强的抗癌功效，它可以预防结肠癌、肝癌、乳腺癌及前列腺癌。

7.控制饮酒量。口腔癌、喉癌、食道癌、肝癌和乳腺癌都与饮酒密切相关。饮酒还会增加结直肠癌的风险。美国癌症协会建议，即使男性日饮酒量控制在2杯，女性每日1杯，仍然会增加癌症发病率。

8.喝白水最好。喝白水比其他饮料有助于增加排尿量，可以更好地稀释膀胱中潜在的致癌物。

9.十字花科蔬菜。十字花科类蔬菜是最经典的抗癌蔬菜，包括西兰花、菜花、卷心菜、甘蓝菜和羽衣甘蓝，其中含有的营养成分能抗击结肠癌、肺癌、宫颈癌等。

10.炸、烤、焙增加患癌风险。在高温下炸、烤或焙会导致肉食形成某些化学物质，增加致癌危险。而蒸、煮、炖等烹调方式相对较安全。另外，炖肉时最好加一些富含营养和防癌作用的蔬菜。

11.新鲜草莓和树莓果汁。草莓和树莓中含有植物营养素鞣花酸，这种强效抗氧化剂可通过多种方式抗击癌症，使致癌物质失去活力并减缓癌细胞生长。

12.少吃糖。虽然糖未必会直接导致癌症，但热量摄入过多，是肥胖的重要病因之一。而肥胖又是一大癌症风险。因此富含维生素的水果可以作为糖的替代品。

5种食物能解酒

文/徐澄

鸡蛋 鸡蛋中富含半胱氨酸，具有解毒作用。研究发现，鸡蛋中丰富的B族维生素可缓解宿醉。

生姜 酒后吃点姜可刺激和恢复消化系统，缓解便秘、胀气等不适症状。

番茄汁 饮酒之后，肝脏负责分解酒精以保持血糖稳定。血糖是大脑的主要能源，血糖过低容易导致疲倦、乏力等。此时喝一杯番茄汁可补充糖分，减轻醉酒后头痛等不适感。

篇2

葡萄奶昔的做法：

1、葡萄洗净去皮，沥干水分。

2、将葡萄放入料理机，加入牛奶。

3、启动料理机，打成奶昔即可。

葡萄：

葡萄为葡萄科葡萄属木质藤本植物，小枝圆柱形，有纵棱纹，无毛或被稀疏柔毛，叶卵圆形，圆锥花序密集或疏散，基部分枝发达，果实球形或椭圆形，花期4－5月，果期8－9月。

葡萄是世界最古老的果树树种之一，葡萄的植物化石发现于第三纪地层中，说明当时已遍布于欧、亚及格陵兰。葡萄原产亚洲西部，世界各地均有栽培，世界各地的葡萄约95％集中分布在北半球。

篇3

关键词：血糖仪即时检测；血糖；葡萄糖氧化酶

 应用血糖仪监测血糖可以为糖尿病患者评价血糖控制情况以及监控药物使用带来方便，同时因其操作简单被医院即时检测（Point of care testing，POCT）监测血糖而广泛应用。在实际工作中，血标本的采用在不同的医疗机构中并无严格要求。而便携式血糖仪测定血液葡萄糖在指南中的采血部位要求是指尖毛细血管血，而应用其他来源血标本则可能出现误读[1]。有报道指出，如应用血清或血浆血测量血糖值，血糖仪的读数常常偏高[2]。因而，POCT测量的准确性是其能否广泛应用并被治疗采纳的关键。目前，血糖的定值仍以检验科实验室的葡萄糖氧化酶测量的检测结果为准。文章旨在探究血糖仪即时检测与葡萄糖氧化酶检测血糖值的差异，评价即时检测（POCT）的可靠性，为血糖仪血样采集的统一寻找依据。现将研究结果报告如下。

1 资料与方法

1.1  一般资料：选取我院2011年6月～2012年2月门诊及住院患者100例，男48例，女52例，年龄32～77岁，平均（54.1±14.9）岁。所选病例无贫血等血液病史，近期无Vit C药物使用史，无酮症酸中毒和尿酸增高患者。

1.2  研究方法：肘静脉血抽取2 ml，取少量立即行血糖仪测量静脉血全血血糖，剩余标本置于血清分离管中送检，血清分离血样经3 000 r/min离心10 min后，吸取血清应用全自动生化分析仪2 h内测定静脉血浆血糖。另采末梢血应用血糖仪检测，依据说明严格操作。

1.3  仪器及试剂：H7600全自动生化分析仪及配套葡萄糖氧化酶血糖试剂。罗氏便携式血糖仪活力型及罗氏原装配套试纸及质控品监控测定过程。

1.4  统计学处理：采用SPSS 13.0软件处理数据，各项参数以均数±标准差（ ）表示，对血糖仪及生化仪测定血糖浓度值均数采用U检验。

2 结果

3组血糖平均值：POCT组静脉血血糖值为（8.04±3.32）nmol/L，POCT组末梢血血糖值为（8.47±3.64）nmol/L，葡萄糖氧化酶组血浆血糖值为（8.85±4.81）nmol/L。与葡萄糖氧化酶检测静脉血浆得到的血糖值比较，POCT所测得的静脉血以及末梢血血糖值均较低。葡萄糖氧化酶测得的血浆血糖值与POCT测得的静脉血血糖值比较，差异有统计学意义（P＜0.05），与POCT测得末梢血血糖值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

糖尿病治疗越来越突出患者及家属参与治疗过程的重要性。定时测量血糖对于掌握病情及监控血糖和用药十分必要，这就需要方便快捷地血糖测量。血糖仪因其操作简单，需要血量少，使得患者及其家属能够在家完成其血糖测量，方便记录血糖情况。在很多医疗机构中，便携式血糖仪也越来越多地应用。但不同产地不同型号的血糖仪在检测结果上存在差异，给诊断和治疗带来影响。这一点除了推荐使用高质量的血糖仪，还需要对测量方式以及血样来源加以规范。美国临床检验标准委员会（NCCLS）发表的“医院内POCT葡萄糖”C30-A要求进行床边检测的血糖仪以及配套试纸必须是相同品牌和相同型号的[3]。本次研究，我们采用的均为罗氏血糖仪活力型，并使用配套相同型号试纸，排除因不同血糖仪测量的误差。曾有报道指出，血糖仪测量结果均低于生化仪测量结果，这一点也与我们的实验结果相符[4-6]。我们的研究表明，血糖仪即时检测末梢血血糖值与葡萄糖氧化酶测得血浆血糖值相近，其结果可以接受。但在实际治疗中，POCT不能完全取代葡萄糖氧化酶测量。应用POCT测量还应定期对照葡萄糖氧化酶测量方法，校对血糖仪准确性。

4 参考文献

[1] Clincal and Laboratory Stanards Institute.Ancillary(bedside) blood gluose testing in acute and chroncvale facilities ap-proved guidelin[J].CLSI,2002,22(1):2.

[2] 丛玉隆.POCT的临床应用与存在问题[J].中华检验医学杂志,2007,30(12):1325.

[3] 池胜英,陈筱菲,徐  克,等.33台快速血糖仪调查结果分析[J].临床检验杂志,2005,23(2):160.

[4] 冯仁丰.美国医院内非检验科进行葡萄糖POCT的管理要求介绍[J].上海医学检验,1999,14(3):139.

[5] 李俊琦,李  冬,赵  莹.影响血糖检测准确性的因素分析及对策[J].吉林医学,2011,32(14):2884.

篇4

关键词靶向亲和液相色谱质谱联用技术； 黄藤总生物碱； 乙酰胆碱酯酶； 抑制剂

1引 言

阿尔茨海默病 （Alzheimer's disease， AD） 是以大脑中β淀粉样蛋白老年斑 （SPs） 沉积、神经纤维缠结 （Neurofibrillary tangles， NFTs） 和突触及神经元缺失为特征的一种神经系统退行性疾病，已成为威胁现代社会老年人健康的重大疾病之一[1]。针对AD的病理特征及病因所研发的药物中， 乙酰胆碱酯酶抑制剂（AChEI）已广泛用于临床治疗AD。AchEI通过抑制体内AChE活性，减少乙酰胆碱分解，缓解AD对生活能力和认知能力的损害[2]。但已上市的AChEI如他克林、利斯的明等虽然有一定效果，但存在活性不强、副作用较大的缺点[3]。目前，从中药中寻找具有选择性强、副作用小的AChEI成为医药研究的热点[4～6]，同时也是治疗AD的研究中最活跃的领域。

黄藤为防己科天仙藤属植物黄藤（Fibraurea recisa Pierre.）的藤茎，收载于2015年版药典，具有清热解毒、泻火通便的功效，主要含有异喹啉类生物碱，具有抗真菌[7]、抗炎、抗肿瘤[8]等药理作用。本课题组前期研究发现[9]，黄藤总生物碱主要成分为黄藤素， 具有显著抑制AChE活性的作用。

靶向亲和技术主要利用亲和原理，将待测的具有潜在活性的小分子混合物与生物活性受体（主要是酶类）在接近生理条件下的缓冲液中混合，得到受体配体复合物和未结合的小分子化合物，通过超滤除去未结合的小分子，复合物经有机溶剂处理，将小分子配体释放出来，再通过LCMS技术，直接或者间接检测解离的复合物[10，11]。与传统生物活性筛选方法即在化合物库中逐一的筛选相比，此方法灵敏、快速，且不改变蛋白结构， 可以高通量地筛选出活性化合物[12，13]， 已广泛用于筛选与靶蛋白结合的药物中[14]，成为药物筛选的重要工具[6，15，16]。本研究采用靶向亲和液相色谱质谱联用技术筛选黄藤中能够抑制乙酰胆碱酯酶的活性成分，筛选出12种具有潜在抑制乙酰胆碱酯酶的活性成分，并鉴定了其中6种化合物，为建立中药中乙酰胆碱酯酶抑制剂的快速筛选提供了科学依据。

2实验部分

2.1仪器与试剂

Agilent 1100 series LCMSD液相色谱质谱联用仪（美国Agilent公司），包括：Agilent SL型多级离子阱质谱仪、低压四元梯度泵、二极管阵列检测器（DAD）、自动进样、柱温箱、Chemistation化学工作站等； BS124S电子天平（美国赛多利斯公司）； MR96A自动酶标仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）； XL90超速离心机（美国Beckman公司）； 旋D式恒温振荡器（苏州培英实验设备有限公司）； 尤尼柯UV2800紫外可见分光光度计（尤尼柯（上海）仪器有限公司）； RE5298型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。

黄藤药材购于安国市瑞泰堂药材行，经吉林省中医药科学院赵全成研究员鉴定为防己科天仙藤属植物黄藤（Fibraurea recisa Pierre.）的干燥藤茎； 黄藤素、盐酸药根碱、盐酸小檗碱均购于中国食品药品检定研究院（批号分别为：0732200005、110733201007、110713200609）； 巴马汀红碱、7，8二氢8羟基小檗碱、Groenlandicine（自制，纯度≥98%）。乙酰胆碱酯酶（来源于苍蝇头部， 上海源叶生物科技有限公司）； 碘化硫代乙酰胆碱（ATCI）、5，5二硫双（2硝基苯甲酸）（DTNB）（美国Sigma公司）； 盐酸多奈哌齐（卫材（中国）药业有限公司）； YM30离心超滤管（美国Millipore公司）； 24孔板，96孔板（美国Corning公司）； 乙睛、甲醇和甲酸均为色谱纯（美国Fisher公司）； 实验用水为娃哈哈纯净水； 其余试剂均为分析纯。

2.2黄藤总生物碱样品的制备

取黄藤药材2 kg，用10倍量的60%乙醇回流提取2次，每次2 h，滤过，合并滤液，减压浓缩得浸膏228.3 g。将浸膏加水溶解，通过预先处理好的D101大孔树脂柱（Φ100×10 cm），先用3倍柱体积水洗，再用8倍柱体积40%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得黄藤总生物碱50.6 g。

取黄藤总生物碱适量，加0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液（PBS，pH 8.0）溶解，制成1.0 mg/mL的溶液，用于超滤实验和活性实验分析。取黄藤总生物碱适量，加甲醇溶解并配制成0.1 mg/mL溶液，用于液相色谱质谱联用分析； 黄藤素、盐酸药根碱、盐酸小檗碱、巴马汀红碱、7，8二氢8羟基小檗碱、Groenlandicine对照品用上述的0.1 mol/L PBS溶液配成1.0 mg/mL溶液，用于活性实验分析。

2.3乙酰胆碱酯酶（AChE）活性抑制实验

参照文献[17]方法并做适当调整，在96孔板中加入0. 1 mol/L PBS缓冲液（pH 8.0） 140 μL，待测样品溶液20 μL和0.5 U/mL酶溶液15 μL，混匀，在4℃放置20 min。加入2 mmol/L DTNB 10 μL和15 mmol/L ATCI 10 μL，37℃反应20 min，立刻测定405 nm处吸光度值。同时设立背景对照组和空白对照组。按下式计算酶活性抑制率（Enzyme activity inhibition ratio， EAIR）。

EAIR（%）=Ablank-（Asample-Abackground）Ablank×100%（1）

其中， Ablank表示不加样品体系的吸光度值； Asample表示为加入样品和酶的体系吸光度值； Abackground表示为不加酶的体系吸光度值。

样品组设定5个等梯度浓度，重复实验3次。以样品浓度（μg/mL）为横坐标，以AChE抑制率为纵坐标，绘制曲线，计算IC50。

2.4离心超滤筛选方法

参照文献[15，18]的方法，在24孔板中加入0.1 mol/L PBS缓冲液（pH 8.0）300 μL、1 mg/mL黄藤总生物碱溶液100 μL、0.5 U/mL乙酰胆碱酯酶的酶液100 μL，37℃孵育30 min，转移至离心超滤管（YM30）中。12000 r/min离心20 min，加PBS缓冲液重复3次，每次500 μL，弃去离心液，再向超滤管中加入90%（V/V）甲醇500 μL，室温放置10 min后，离心15 min，重复3次，合并离心液，冷冻干燥后加40 μL甲醇/水（50∶50， V/V）溶解，用于LCMS/MS分析。同时设立空白对照组和阳性对照组。

同时，为了考察酶与底物的相互作用强度，设置了灭活酶的对照实验。AChE经100℃热灭活后，通过AChE的抑制率实验确定酶已失活。并称取等量的灭活酶同法处理进行实验，求出结合率（Binding degree， BD）[19]。

BD（%）= （Ab-Ac） /Aa×100%（2）

其中， Aa表示亲和离心超滤筛选前黄藤总生物碱溶液各化合物色谱峰面积； Ab表示亲和作用后活性酶结合的各相对应化合物的色谱峰面积； Ac表示变性失活酶结合的各相对应化合物的色谱峰面积。

2.5色谱与质谱条件

液相色谱条件： ACE C18色谱柱（250 mm× 4.6 mm， 5 μm）； 流动相： 乙腈0.1% H2PO4（每100 mL中加0.1 g 十二烷基硫酸钠）=36∶64（V/V）； 流速： 1 mL/min； 检测波长： 345 nm； 柱温： 30℃； 进样量： 10 μL。

质谱条件： 电喷雾离子源（ESI）； 正离子模式同时采集； 扫描范围m/z 50～1200； 目标分子量： 350 Da； 干燥气温度： 350℃； 干燥气流量： 10.0 L/min； 雾化气压强： 0.24 MPa； 毛细管电压： 4 kV。

3结果与讨论

3.1黄藤总生物碱的含量测定结果

参照文献[20]中总生物碱的测定方法，以黄藤素为对照品，采用0.05%溴甲酚绿为酸性染料进行染色，在200～400 nm波长范围内进行扫描，最终选择在345 nm测得2.2项下制备的样品中总生物碱的含量为97.5%。说明制备的样品主要成分为生物碱类成分，本研究所建立的提取方法可以作为黄藤总生物碱的提取方法。

3.2黄藤总生物碱的靶向亲和液相色谱质谱联用分析

黄藤总生物碱经亲和超滤实验共筛选出12种可能的AChE抑制剂（见图1A）。与黄藤总生物碱原溶液的HPLC色谱图（图1B）相比，在超滤实验条件下黄藤总生物碱中只有部分化合物能够与乙酰胆碱酯酶结合。并且与不加酶的空白对照试验的HPLC色谱图相比，说明本方法可以有效地避免由小分子化合物吸附到超滤膜上而造成假阳性（图1C）。 进行了黄藤总生物碱与灭活的乙酰胆碱酯酶的结合实验，依据色谱峰的峰面积与其在缓冲溶液中的浓度成正比，利用图1B和1D的HPLC色谱图中峰面积的变化情况来反映其对应的化合物与AChE的结合率[12]，求出各化合物与AChE的结合率均大于13.00%，这表明黄藤总生物碱中的活性成分能够与AChE有效结合（图1D）。对阳性对照药盐酸多奈哌齐进行了超滤实验（见图1E），结果表明， 超滤实验方法可行，具有较强的准确性。

采用HPLCDADESIMS2联用技术，在正离子模式下，通过自动二级质谱方式同时获取样品中生物碱类成分的一级和二级质谱图，根据每一成分的色V保留时间、准分子离子峰和二级质谱碎片信息，参照ESIMSn数据、标准对照品及文献[7，21～23]数据进行对比，对其结构进行鉴定，确定了黄藤总生物碱中12种可能的AChE抑制剂，并且鉴定了其中6种化合物的的结构，分析结果见表1。

篇5

随着改革的不断深入，以人为本的理念不断深入人心，大学生个性的发展不再像以前被禁锢和束缚，表现出多文化发展趋势。同时，健美操是一项富于创新的运动，不断面临着改革，如今大量风格各异的时尚运动，直接冲击现有的健美操教学大纲，学生对现有的教学模式有了进一步需求，一周一次的健美操选项课，很难维持高校健美操活动的开展，也满足不了学生健身的热情和愿望，希望有更多的机会实践、学习、展示，发挥自己的特长。所以，随着健美操运动的迅速发展，必须改变单一的健美操课程模式，分析健美操课程发展中存在的问题，探讨健美操课程的发展，对健美操课程重新定位，实行课内外一体化创新模式，有利于高校健美操课程的健康发展。

1 研究对象与方法

1.1 研究对象

实验组160人，2012级健美操选项班学生。

1.2 研究方法

（1）文献资料法，查阅国内相关的健美操教学。（2）问卷调查法，选择健美操班的学生发放问卷160份，回收160份。（3）系统法，运用系统知识与方法，对课题的研究内容进行全面分析和研究。

2 研究的结果和分析

2.1 高校健美操教学现状调查及反思

目前，在教育不断改革的过程中，高校健美操课程始终落后于时代的发展，教育观念基本上决定某种教育形式的形成和发展。受传统教育思想影响，对体育课程的认识不够全面，课程改革创新趋于形式和表面。一些高校的健美操课程尚无完整的教学体系。具体表现在以下几个方面：教学内容单一，主要以大众健美操为主，缺乏系统性。教学形式枯燥，教学方法单调，缺少灵活性。考评方法片面，评定指标窄，缺少全面性。教学评价采用单纯性的技术评分制，过多依赖教师的主观认定。所以传统的健美操教学，过多强调教师的主导作用，学生仍然没有摆脱被动接受教学内容的状况，教学效果也偏重学生学会几个动作，学生单纯地模仿、记忆、练习，没有思考、交流、探索的余地，更谈不上创新能力培养。这一教学模式，忽视和否定了学生在选择学习内容、学习方法、学习进度、学习环境等方面的主动性。忽视了学生的兴趣。教学评价只考虑效果的评价，而忽略了学生个性发展过程的进步度的评价，挫伤了学生的自信心。只重视课堂教学，舍弃课程延伸空间，而且学生中各方面素质存在差异，在健美操的学习中出现体能、技能、心智参差不齐的现象，统一的内容、模式制约了学生个性的发展、单一的课程模式，制约了健美操的发展。

3 “课内外一体化”健美操教学模式的构建

美国教育家乔以斯?威尔在他的《教学模式》一书中，把教学模式界定为“一种可用于形成课程，设计教材和在课堂以及其他场合指导教学的计划和范型”。明确指出，体育教学不应简单地把课堂作为其唯一的实施场所。我们在借鉴国内外先进体育教育理论及总结以往教学得失的基础上，从我校大学生的具体情况出发，加强教材建设，优化实践内容，加强课外练习，组建健美操学习班。构建以课堂教学为主，以课外练习为辅，以健美操代表队为点，以大型团体操表演为平台的“课内外一体化”教学模式。全面提高健美操教掌质量，从健康、娱乐、文化、社会多个层面发挥健美操的功效。本模式包含的内容，既相互独立，又相互联系。（见图1）

4 “课内外一体化”教学模式的实施

4.1 优化教学内容

健美操时代感强，是一项富于创新的运动，它以日新月异的发展速度出现在健身的潮流下，内容从开始的大众健美操到风格各异的时尚运动，拓宽正规课程内容，完善健美操已开课程，融入时下流行的元素，如形体、啦啦操、舞蹈健身、拉丁健美操等，增加趣味性，体现时代感，提高身体素质，娱乐身心，采用新的课程模式，以实现学生身心协调发展的新目标。

4.2 改进教学方法

由健美操显性课程向隐性课程拓展，把健美操课从单纯的传授知识和技能中解脱出来，改革教学方法，优化教学手段，提高教学效率。如：讨论法、评价法、学生带领法、分组比赛法、表演法、队形变化法等。合理地利用和选择教学手段，使学生能欣赏到高水平的比赛和表演，提高学生的信息量，强调学生形成积极主动的学习态度心理健康，审美观念，锻炼价值，不断拓展健美操的教育功能，培养学生自主学习、自觉锻炼的功能。

4.3 拓宽教学评价体系

建立多元化的综合评价体系，构建体能、技能、运动参与、心理健康、社会适应评价指标。学生身心素质的改善，能力的提高及进步幅度纳入评价范围。

4.4 课外活动

课外活动是高校体育课的延续、补充，是实施高校体育目标的重要途径。要实现健美操的多种功能，每周一次的体育课毕竟非常有限，要充分利用课堂外的运动时间，增加对相关健美操知识的引导，让学生的体育信息量及兴趣尽可能最大化，消化过程延伸到课外，从而实现学生在校期间体育锻炼不间断，近目标的实现“课内外一体化”。具体实施如下。

（1）组建健美操社团。

（2）建立领操员制，为学生提供展示才能的机会。

（3）进行专题讲座，扩容学生信息量，又可答疑解惑。

（4）健美操课外培训及选修课。

（5）院系间健美操比赛，及不同级别，不同层次的教学比赛。

4.5 校健美操代表队的训练比赛

由健美操选项班的普通学生组建的校运动队，其训练与竞赛是高等院校教学的重要内容。它的比赛成绩，代表着一个学校该项目的发展水平。同时，这也是各高校展示宣传自己的一个重要手段，健美操队的训练和比赛，能起到一定的“比赛效应”和“表演效应”，对健美操运动的普及宣传有着不可低估的作用。

4.6 校园文化建设

大型团体操的表演是实现健美操教学过程的一项重要举措。是健美操课内外一体化的新途径，在每年的校运动会开幕式上，组织健美操选项班的学生进行大型团体操的表演，现已成为校运会独特的一道风景线，深受学生的喜爱。这也是健美操教学效果最好的检验方式之一。为大学生提供展示自身才华的平台，对健美操教学和在更大范围内的开展活动有着积极的促进作用。同时，由学生自己组织的院系内比赛和健美操选项班教学比赛，对学生的创造力和组织能力也是一个很好的锻炼。

5 “课内外一体化”教学模式实施后的成绩及效果

（1）参加团体操人数：2012年208人占总人数94%；2014年250人，占总人数97%。

（2）《全国大众健美操锻炼标准》通过率：2013年四级94%；2014年五级90%；2014年三级98%。

（3）健美操课出勤率：2012年出勤率97%，上课迟到率4.3%；2013年出勤率98%，上课迟到率1.4%；2014年出勤率99%，上课迟到率0.4%。

篇6

【摘要】 目的 从采自不同来源的临床标本分离凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)，测定其胞外多糖蛋白复合物(glycocalyx)，并以胞外多糖产生作为毒力指标确定CNS的致病性。方法 用刚果红粘附试验检测CNS的胞外多糖，并用刚果红-阿里新蓝染液对胞外多糖进行联合染色，以采自皮肤的CNS样本作阴性对照。 结果 在刚果红琼脂培养基中致病性CNS菌落呈黑色，阴性对照组CNS菌落为红色。镜下观察，在淡蓝色背景下致病性CNS菌体着色较深，菌体表面的蛋白复合物为深红色，阴性对照组菌体着色较浅，菌体表面无蛋白复合物而显淡红色。结论 致病性CNS菌的分离及其细菌胞外多糖蛋白复合物的检测并以此作毒力指标，为临床判定致病性CNS感染能提供可靠的实验依据。

【关键词】 凝固酶阴性葡萄球菌;多糖蛋白复合物; 刚果红培养基;刚果红-阿里新蓝染液

【Abstract】 Objective To isolate and identify coagulase-negative staphylococci (CNS) from different sites of clinical patients and evaluate clinical pathogenesis of extracellular glycocalyx of CNS as a potential indicator of virulence. Methods Isolates were obtained from clinical samples of blood， urine， sputum，semen， secretions and cerebrospinal fluid， then to detect extracellular glycocalyx of CNS with congo red adhesion experiment and stain with Congo red and Alcian blue together， and to compare with isolates from skins of healthy controls. Results A positive result of pathogenic CNS on congo red agar(CRA) was indicated by black colonies and a negative control usually remained pink ones， with observation under light blue background by light microscope colonies of pathogenic CNS with production of glycocalyx stained by congo red and Alcian blue together grow upon deep red and ones of healthy control without glycocalyx present light red. Conclusion Isolation of pathogenic CNS and assessment of its virulence by CRA and congo red combining Alcian blue staining might offer theoretical basis and reliable experimental evidence for judging nosocomial infection of pathogenic CNS.

【Key words】 coagulase-negative staphylococci (CNS);glycocalyx;congo red agar(CRA);congo red and Alcian blue stains

凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase-negative staphylococci，CNS)属人体正常菌群，广泛存在于人体的皮肤和黏膜上，一般情况下不会导致疾病。但随着介入性治疗和免疫抑制剂的广泛使用，现已成为医院内感染的重要的条件致病菌。怎样快速、准确地检出CNS并预测其耐药性变化，对临床治疗及预防都有十分重要的意义[1～3]。本研究旨在通过刚果红粘附试验和刚果红-阿里新蓝联合染色[4]，对采自临床各科的各种标本进行CNS进行分离培养并做胞外多糖蛋白复合物的检测，以胞外多糖产生作毒力指标确定CNS的致病性，建立快速可靠的诊断治疗方法，为医院有效控制CNS感染提供实验基础和理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验分组 本研究分临床组60株和对照组20株。

1.2 标本来源 临床组60株，采自恩施自治州中心医院各科不同年龄和性别住院患者的痰液、尿液、分泌物、、血液和脑脊液。对照组20株，采自恩施自治州卫生学校不同年龄和性别学生的手部、耳垂皮肤。两组标本均按规定要求采集。

1.3 细菌培养基及细菌染液配制

1.3.1 牛脑心浸液肉汤刚果红琼脂细菌培养基 刚果红水溶液(0.8g/L)，121℃高压灭菌15min。蔗糖(50g/L)、琼脂(10g/L )，加双蒸水1000ml，121℃高压灭菌15min，待温度缓慢降至55℃时，加入牛脑心浸液(37g/L)及刚果红水溶液(适量)，制成固体培养基。

1.3.2 染液配制 阿里新蓝(AB)染液：阿里新蓝2g，冰醋酸3ml，蒸馏水97ml。刚果红(CRA)染液：刚果红2g，蒸馏水100ml。

1.4 细菌分离、鉴定

1.4.1 刚果红琼脂粘附试验 将各标本分离出的CNS接种于培养基中，37℃条件下孵育24h，然后置室温中24h。

1.4.2 刚果红-阿利新蓝染色 滴生理盐水少许于洁净载玻片上，用接种针挑取粘附试验分离的细菌与之混匀后， 再滴加与生理盐水等量的AB染液， 混匀并静置3～5min， 烤箱50～60℃加热固定， 直到染液水分完全挥发， 然后再滴加少许刚果红染液， 均匀涂布， 用烤箱干燥，以蒸馏水冲洗至无染料流下为止，烤干水分，油镜观察。

2 结果

临床组分离出35个阳性菌株，总阳性率为58%，对照组全部为阴性菌株(见表1)。表1 80株CNS粘附试验结果

致病性CNS有胞外多糖蛋白复合物生成，在刚果红琼脂培养基中菌落呈黑色，且干燥，显晶体光泽，阴性对照组CNS菌落为红色。镜下观察在淡蓝色背景下，致病性CNS菌体着色较深，胞外多糖蛋白复合物呈现暗红色(见图1～2)，阴性对照组菌体颜色明显淡于阳性组而呈现淡红色(见图3～4)。

3 讨论

在CNS引起的感染中，胞外多糖蛋白复合物的作用通过动物模型和临床研究已得到确认[5]。Christensen等报道，60%有临床意义的血培养分离 CNS产生了胞外多糖。虽不能直接说明胞外多糖蛋白复合物产生和疾病发生的关系，但有显著的统计学意义[6]。对从一些临床分离CNS产生胞外多糖蛋白复合物的研究表明，胞外多糖蛋白复合物有助于CNS粘附生物大分子并与疗效差和易复发有关[4]。CNS的胞外多糖蛋白复合物，为介导外源物体表面粘附和延长感染病程的主要毒力因子，是评定CNS致病性的重要条件[7]。

CNS胞外多糖蛋白复合物检测可提示其致病意义，且可提示其耐药性变化。对明确感染诊断、制定有效治疗方案有十分重要的意义，但不能作为惟一的因素。 CNS有数十种之多，是否所有CNS与医院获得性感染都有关，同一菌种是否都存在粘附性，在机体中所表现的毒力是否有差异，目前还不完全清楚[3]。 对于这些问题，还需进一步研究CNS的基因标志物，只有建立起敏感、快速，精确性和可靠性更高的鉴定方法或技术，才能更有效地解决医院CNS获得性感染的治疗和控制问题。

在细菌培养过程中，CNS产生的胞外多糖蛋白复合物可能丢失，因此本研究将采自临床各科的CNS标本，用牛脑心浸液肉汤刚果红琼脂培养法获取粘附菌株和非粘附菌株，即直接向培养基加入刚果红，使菌落在形成过程中显色，且在细菌生长的最佳时期作涂片，再用刚果红-阿里新蓝染液进行联合染色，直接、客观地观察到CNS胞外多糖蛋白复合物的生成情况，避免了阳性结果偏低的可能性。这种方法操作简便，用途广泛，除能用于细菌胞外多糖粘附素的观察外，也将在临床微生物原位标本检验中有较广的应用价值。

参考文献

1 Claire Poyart. Rapid and Accurate Species-Level Identification of Co-agulase-Negative Staphylococci by Using the sod Agene as a Target， Journal of Clinical Microbiology， 2001， 39: 4296-4301.

2 Kloos WE， Bannerman T L. Update on clinical significance of coagulase-negative sta-phylococci. Clin Microbiol Rev，1994，7:117-140.

3 Spare MK， Tebbs SE. Genotypic and phenotypic properties of coagulase-negative sta-phylococci causing dialysis catheter-related sepsis. J Hosp Infect，2003，54: 272-278.

4 Freeman DJ，Falkiner FR， Keane CT. New method for detecting slime production by coagulasc ncgativc staphylococci.J Clin Pathol.1989，42:872-874.

5 Ishak A，Groschel HM， Mandell L， et al. Association of slime wjth pathogenicity of coa-gulase-negative staphylococci causing nosocomial scpticcmia，Microbiology，1985，1025-1029.