表白的话语范文
时间：2023-03-17 08:18:50
导语：如何才能写好一篇表白的话语，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
1、愿把我的心嵌入你的心，使我俩的爱永远不变。
2、如果你是那河，我愿做河水里的小鱼，时时游弋在你的怀中。如果你是月亮，我愿做一颗平淡的小星，点缀你的美丽。
3、想你想的睡不着觉，念你念的心怦怦直跳；恋你恋的鬼迷心窍，爱你爱的快要死掉！
4、在我绝望的时刻我真的不愿去想 我只想忘掉一切。
5、曾经迷惘的心中，是你牵引我走出寂寞。
6、在每一个有你相伴的夜，不再过於寂寥冷清。
7、风轻云淡的美丽，是因为有你的存在，心与心的真诚，是因为你的信任，不论你在什么地方，你都是我唯一的眷念。
8、两个人因为开心在一起叫喜欢，如果不开心还想在一起就是爱了。
9、我现在真的好想你，给你发信息可以缓解一下我对你的想念，可你现在好像很忙，觉得我很烦是吗？打扰了！
10、个人的感情也是命中注定的，有时候没什么可以多想的，该来的会来，该走的总会走，好好地爱自己，一个人最不能辜负的人就是自已，除了自已该做的，就好好对自已吧，不要有过高的要求，也许一切就会过得容易一些，自已也会快乐一些。
11、在我心中任何时刻都只有想你！爱你！
12、愿天上的每一个流星，都为你而闪耀天际。
13、我今天很不顺利，看见漂亮女生微笑会让我心情好一点，你可以为我笑一下吗？不要虚拟的，可以吗？
14、若有来世，我必踏遍千山万水，去寻找那古老的唯一，寻找我永远的爱人，你是我不变的最爱！
15、这辈子最疯狂的事，就是爱上了你，最大的希望，就是有你陪我疯一辈子。
16、让我迷上你，迷上你的笑，迷上你的每一个动作，迷上你的每一个表情；你的心情就是我的心情——你高兴，所以我高兴，你忧愁，所以我忧愁。
17、情话绵绵：愿拥起落日余晖凭你采摘，愿留住刹那永恒让爱来白。我愿变成一朵美丽的小花，常开在你目光注视的时间，飘香在你足迹踏过的地方。
18、泪水是我想你的滋味，我寄出的心无力挽回，如果回忆是唯一的回信，我不会忘记我曾经美丽。
19、窗外雪花纷飞，我疑心是你的脚步，羞涩地抬起头，窗外依旧，轻风、飞雪，又飘向记忆的深处，于是，我告诉你，我真地想你！
20、雨在下，风在刮，有人为你牵挂；有人哭，有人笑，()有人为你睡不着觉。
21、不是因为寂寞才想你，而是因为想你才寂寞。孤独的感觉之所以如此之重，只是想你太深。
22、把满腔柔情绽放为一株百合，让缕缕馨香穿越遥遥时空，夜夜袭上你的额头，拂去你所有的疲惫和失意。
23、看着微笑的你，突然发现，我真是世界上最幸福的人。
24、喜欢有你的一些信息，即使只是短短的问候，好让我感觉到你没有忘记我，心里还想着我，还有我的存在。
25、风一样的是你的靓发，我是一片云依恋在你的身旁；水一样的是你的娇柔，我是一叶舟徘徊在你的暖乡。
篇2
2、余生相拥。
3、永浴爱河。
4、念你如故。
5、与你共度。
6、白头相守。
7、花前月下。
8、白头偕老。
9、生死相伴。
篇3
【关键词】 创伤弧菌； 金属蛋白酶； 正交设计； 直观分析； 方差分析
Abstract Objective: To optimize the expression of recombinant metalloprotease of Vvibrio vulnificus in E.coliBL21/DE3 induced by IPTG. Method: The plasmid of pET-32a-vvp/E.coliBL21 was constructed by our laboratory. Four different factors，including time， temperature， agitation speed and concentration of IPTG， were studied by orthogonal experimental design. The data were analyzed by direct calculation and ANOVA method. Results: The R value of agitation rate resulting from direct calculation was highest among four factors. The P value of agitation rate was lower than 0.05. The P value of the other factors were higher than 0.05. Conclusions: The expression level is remarkable affected by the agitation rate. The expression level of VVP protein is highest when agitation rate is 250 rpm. Therefore we have established a method for high-level expression of VVP-four hours-inducing time， 37℃-inducing temperature， 1mmol/L concentration of IPTG and agitation rate in 250rpm.
Key words vibrio vulnificus; metalloprotease; orthogonal experimental design; direct analysis; analysis of variance(ANOVA)
很多临床病例及动物实验已经证明，进食被创伤弧菌（Vibrio vulnificus，Vv）污染的食物或者皮肤破损接触Vv均可引起Vv感染，主要表现为严重的蜂窝组织炎和败血症［1~3］。一旦出现败血症，其死亡率高达50%以上［4~6］。因其病情凶险，故对创伤弧菌感染的临床早期快速诊断尤为重要。目前，Vv的致病机制尚未明了。但有研究表明该菌分泌的金属蛋白酶（VVP）具有增加血管通透性，引起出血性损伤的作用，已被证实是创伤弧菌的主要毒力因素之一［7~9］，并且vvp基因在不同创伤弧菌菌株之间具有高度保守性。故金属蛋白酶可作为创伤弧菌感染重要的临床实验室检测靶标。而要制备以VVP为靶标的Vv免疫检测试剂盒，首先必须获得作为足量高纯度的VVP抗原来制备抗体。但是金属蛋白酶作为创伤弧菌种特征性的外毒素，其自然分泌产量并不高，且由于方法学的限制，采用常规生化方法获得足量高纯度溶细胞素相当困难。而通过基因工程的方法，我们可以在一个合适的系统中，使外源基因高效表达，从而生产有价值的蛋白质，对其应用或进行功能的研究。但是外源基因在工程菌中的诱导表达受很多因素的影响，例如，诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度及摇菌的转数等。因此，如何得到一种最佳的诱导条件组合，从而使蛋白高效稳定的表达是我们研究的基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株和质粒
原核表达载体pET-32a-vvp由本课题组构建；宿主菌E.coliBL21/DE3由南方医科大学公共卫生与热带医学学院吴昆博士惠赠。
1.1.2 诱导剂IPTG和筛选用氨苄青霉素
购自鼎国生物制品有限公司。
1.2 方法
1.2.1 实验设计
针对诱导过程中对菌体表达蛋白产生影响的4个因素诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度以及诱导时摇菌的转数，运用SPSS 11.5统计学软件进行正交实验设计。因素及水平见表1。表1 因素水平表（略）
1.2.2 诱导
质粒pET-32a-vvp转化E.coliBL21/DE3后，挑取单菌落接种于含氨卞青霉素(100mg/L)的LB培养基中，37℃活化过夜，次日按1:100的比例转接，37℃培养至OD600约0.8时即根据不同诱导条件进行诱导，诱导条件见实验设计。离心收集菌体，做SDS-PAGE分析，考马斯亮蓝染色、脱色后观察。扫描后运用图像分析软件Quantity One得出各不同诱导条件下融合蛋白VVP的表达浓度。
1.2.3 正交试验直观分析法
分别计算每个因素各水平下的平均收率，用各因素各个水平平均收率的极差R(极差=平均收率的最大值- 平均收率的最小值)来反映各因素的水平变动时对试验结果影响的大小［10］。
1.2.4 方差分析
运用SPSS 11.5统计学软件对正交设计资料进行分析。
1.2.5 结果验证
在由上述方法得出的最佳诱导条件下，对转化了质粒pET-32a-vvp的E.coliBL21/DE3进行诱导，并对结果进行SDS-PAGE分析，以验证此组合的诱导条件的诱导表达效果。并设置转化空载体组及未诱导组进行对照。
2 结果
2.1 SDS-PAGE 结果
取16组经不同诱导条件诱导的菌液作组间平行SDS-PAGE，经Quantity One对染色凝胶做图像分析，来确定融合蛋白VVP表达的相对比例。SDS-PAGE 结果见图1，图上方的数字代表组别。经扫描得到各组VVP的表达比例见表2。
2.2 优化结果
2.2.1 正交试验直观分析法
运用正交试验直观分析法得出的条件优化结果见表2和图2，K1、K2、K3、K4分别表示每个因素各水平下的蛋白表达量的均值［10］。由极值R的大小推知，各因素的重要性依次为诱导摇菌转数、诱导时间、诱导温度、诱导剂IPTG浓度。本实验的最佳搭配诱导条件为摇菌转数250r/m、诱导时间4h、诱导温度37℃、诱导剂IPTG浓度1mmol/L。表2 实验设计与结果分析（略）
2.2.2 方差分析
运用SPSS 11.5统计学软件对进行正交设计资料进行方差分析得出的条件优化结果见表3。摇菌转数的P值小于0.05，即该因素对试实验结果影响显著；而时间、温度及IPTG浓度的P 值均大于0.05。表3 方差分析表（略）
2.2.2 结果的验证
在诱导条件为摇菌转数250r/m、诱导时间4h、诱导温度37℃、诱导剂IPTG浓度1mmol/L的情况下，VVP的表达量达到了40.67%。而其它4组对照组均无表达，见图3。
3 讨论
正交试验设计是一种安排多因素多水平试验，并利用普通的统计分析方法来分析试验结果的一种试验设计方法［10］。对于多因素多水平的问题，通常都希望通过试验找出因素的主次关系和最优搭配条件。用正交设计合理地安排试验，可以做到省时、省力、省钱，同时又能得到基本满意的试验效果［10］。因此在本研究中，我们运用这种实验设计方法对融合蛋白VVP在工程菌中的诱导表达条件进行优化，旨在获得稳定高效表达的VVP蛋白，从而为VVP的致病机理研究以及Vv免疫检测试剂盒制备奠定基础。
目的基因在大肠杆菌中的诱导培养方式主要有两种，即化学物质诱导和温度诱导，pET32a载体带有启动子T7lac，可采用化学物质IPTG进行化学诱导［11］。要实现蛋白产物的高表达，需要考虑重组菌生长和产物表达的最适环境条件，包括诱导时间、诱导温度、摇菌的转数及最适诱导剂浓度等。细菌在诱导后，大量能量会消耗在外源蛋白的表达上，使细菌的生长提前进入衰亡期，过度诱导会造成溶菌。因此需要对诱导时间进行控制，找到能使外源蛋白充分表达而又不会导致溶菌的适当诱导时间，我们在实验中设计了3个连续的时间水平1h、2h、3h。在诱导温度上，不同的蛋白对温度有不同的要求。有研究表明，有些外源蛋白在低温下才能大量表达［12］；而本实验中的工程菌大肠杆菌的最适生长温度是37℃。考虑到这两方面的要求，我们在实验中设计了3个温度水平：20℃、30℃、37℃。摇菌的转数对细菌的生长也是极为重要的。体系溶解氧是影响菌体代谢的重要参数，外源基因在高效转录和翻译时需要大量能量，及时给予饱和需氧量对高效表达有意义［13］。加入诱导剂后通过改变搅拌转数(r/min)来改变氧传递推动力和液相体积氧传递系数，以达到调节体系溶解氧的目的。通常搅拌转数愈大液相体积氧传递系数愈大，但当r/min 很大时，体系产生不可避免的泡沫而阻止了氧的传递;同时r/min过大则产生较大的剪切力，亦对菌体生长不利［11］。我们在实验中设计了3个r/min水平：100、180、250。诱导剂IPTG的浓度对外源蛋白的表达水平有较大影响，浓度过高会对宿主菌造成损害，过低则影响诱导剂的效用。因此实验中设计了4个浓度水平:0.1mmom/L、0.5mmom/L、1mmom/L、2mmom/L。
本实验设计的因素水平不等，因此在对正交设计资料进行直观分析时，我们运用平均蛋白表达量K1、K2、K3值的大小来反映各因素的不同水平对实验结果(蛋白表达量)影响的大小，并以此确定实验的最佳搭配。用各因素各个水平蛋白平均表达量的极差R来反映各因素的水平变动时对实验结果影响的大小。极差大的就表示该因素的水平变动时对实验结果的影响大，极差小的就表示该因素的水平变动时对实验结果的影响小。本实验中，我们得到因素的主次顺序为诱导摇菌转数、诱导时间、诱导温度、诱导剂IPTG浓度。主要因素应取较好的水平，而次要因素，则可根据对成本、时间、收益等方面的统筹考虑而选取适当的水平。正交试验的直观分析法简便、直观、计算量小，但不能估计试验误差，即不能区分是由于各因素的水平变化而导致试验结果的差异，还是由于试验的随机波动而导致试验结果的差异。为解决此问题，可对试验结果做方差分析。由表3可知，摇菌转数的P值小于0.05，而时间、温度及IPTG浓度的P 值均大于0.05。按方差分析法的观点，只须对有显著意义的因素确定好水平，而其它对试验结果没有什么影响的因素，则可按实际需要来确定适当的水平。方差分析的结果与直观分析方法得到的结果相同。并且这一结果也通过VVP的高表达(表达浓度达到了40.67％)得到了验证。由此得本研究的试验最佳组合为摇菌转数250rpm、诱导时间4h、诱导温度37℃、诱导剂IPTG浓度1mmol/L。
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11 pET系统操作手册 Novagen.
篇4
【关键词】 多药耐药相关蛋白质类·抗药性， 肿瘤·抗肿瘤联合化学治疗方案
耐药蛋白是耐药相关基因表达产物，主要包括P糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MDR-associated protein，MRP）、肺耐药蛋白（lung resistance-related protein， LRP）、拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）、谷胱甘肽S转移酶π（GSTπ）等。多药耐药基因及其表达产物通过介导药物外排，细胞内解毒酶活性的改变等机制在肿瘤细胞多药耐药（multiple drug resistance，MDR）机制中发挥重要作用。
耐药蛋白的表达具有差异性，耐药蛋白表达特征是判断恶性肿瘤化疗敏感性的一个极重要的指标。早期明确耐药蛋白在不同个体的肿瘤组织中的表达差异，是选择适宜的个体化治疗方案、避免化疗失败、提高患者生存率的重要环节。
1 耐药蛋白在肿瘤组织中的表达
研究证实，目前已发现的耐药蛋白在肝癌组织中均呈高表达状态，在肝癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达往往呈现逐渐减低的梯度趋势。Tsuda 等［1］研究结果表明P-gp在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中的阳性表达率为53.6％，在癌旁组织中的表达率为33.9％，均高于正常肝组织。我中心的研究也显示，MRP和LRP在肝硬化、癌旁肝组织及术前未化疗的HCC组织中均有不同程度的表达，且HCC组织中表达的明显高于肝硬化、癌旁肝组织［2-3］。TopoⅡ与GST-π均参与肝癌化疗耐药。研究报道，GST-π在肝癌组织中的阳性率为71.4%，TopoⅡ阳性率为31.4%，且门脉癌栓患者TopoⅡ的阳性表达率高于无门脉栓者（P
P-gp表达水平与肺癌耐药性关系尚存在争议。多数学者认为P-gp与肺癌多药耐药无关，也有学者认为二者间存在明显的关系［5-6］。研究发现LRP在肺癌组织中广泛高水平表达，而在正常肺组织内表达水平却很低，形成很大的表达差异，从而使LRP成为肺癌化疗中判别个体敏感度的理想指标［7］。MRP基因在肺癌组织中的表达水平较高，且在肺鳞癌中的阳性表达率明显低于腺鳞癌和腺癌［8］。
P-gp是目前与胃癌化疗敏感性关系最密切的耐药因子之一，其表达与胃癌的组织学类型相关。P-gp和LRP在高、中分化腺癌中的表达要高于低分化腺癌，与临床胃低分化腺癌化学治疗效果较好相符合［9］。GST-π、TopoII在胃癌组织中的表达显著高于其周围正常黏膜组织［10-11］，提示二者均是参与胃癌化学治疗耐药的重要因子。
耐药蛋白在乳腺癌组织中的表达水平普遍较高。Tsukamoto等［12］检测了94例乳腺癌标本，发现P-gp阳性表达率为37. 2%；Lacave等［13］ 的研究结果显示，MRP1在乳腺癌患者的表达率为94.6％；而 Izquierdo等［14］报道LRP在乳腺癌组织中表达率为83％。
GSTπ、P-gp和TopoⅡ的高表达与肿瘤转移潜能、化学治疗效果差、低缓解率、高复发率、生存期短等有关，可作为评价肿瘤患者预后的指标［15］；而LRP、MRP则可能与乳腺癌的淋巴结转移有关［16-17］。
2 耐药蛋白的检测
如何获知肿瘤患者体内耐药蛋白的表达情况是关系到能否将耐药蛋白研究应用于临床的关键问题。针对不同类型的患者，采用不同的方法。
2.1 手术患者耐药蛋白的测定 对于可以获取肿瘤组织的临床手术患者，检测MDR基因的手段较多，主要是分子、蛋白质和细胞三个水平。
分子水平方面主要是检测MDR1 mRNA的表达水平。常用的方法包括：RT-PCR、原位杂交、Slot—blot（SB），Northern blot（NB）、Rnase保护实验等。其中因RT-PCR操作简便安全，特异性及敏感性高而在临床应用较多，是目前检测肿瘤多药耐药性的一种较理想的检测方法。蛋白质水平临床上主要应用的是免疫组织化学法直接检测组织中耐药蛋白表达量。此外，流式细胞仪在监测肿瘤细胞耐药基因表达产物水平的应用日趋广泛。细胞水平上可采用荧光染料如若丹明123或具有天然荧光的柔红霉素与细胞共同培养，用荧光分光度计测定单个细胞内药物浓度，帮助判定细胞的耐药程度。
了解手术患者耐药基因表达检测方法有多种，各具其优缺点。对于高表达的P-gp，各种检测方法所得的结果基本一致；对于低表达的P-gp，采用RT-PCR检测所得的结果较可信。
2.2 非手术患者耐药蛋白的测定
术后化学治疗患者的耐药蛋白的测定依赖于手术中肿瘤标本的获取。对术前化学治疗的患者以及不能、不需或不愿手术的患者，耐药蛋白的检测成为临床亟待解决的问题。
研究发现，患者体内耐药蛋白的表达，不仅局限于肿瘤原发灶，在与原发灶相关的淋巴结、转移灶、癌栓中均有表达，且与原发灶中的表达具有极强的相关性与一致性。这一发现为临床间接检测耐药蛋白的表达提供了新的思路与理论依据。杨盛力等［18］通过对比肝癌原发灶与门静脉癌栓中的P-gp表达情况发现，肝癌原发灶中P-gp的平均吸光度为（0.247±0.060），癌栓中为（0.251±0.071），两者比较差异无统计学意义，认为可以通过检测门静脉癌栓中P-gp表达情况，间接预测未切除的原发灶及其他转移灶对化学治疗药物的耐药程度。侍作亮等［19］利用荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）检测原发性肝癌外周血有核细胞与术后肿瘤标本中MDR1基因的表达，结果显示外周血MDR1基因表达的结果与肝癌细胞MDR1的表达明显相关，提示FQ-PCR可用于原发性肝癌病例多药耐药性的临床检测。徐敏等［20］研究发现，乳腺癌原发灶和转移灶之间P-gp在蛋白水平表达差异无统计学意义，因而可以通过检测乳腺癌患者浅表的转移灶或转移的淋巴结中P-gp的表达，了解原发灶中P-gp的表达情况，指导临床化学治疗药物的选择。
3 肿瘤个体化化学治疗方案的确定
3.1 化学治疗药物的合理选择 要提高肿瘤的化学治疗效果，药物的选择、配伍至关重要。了解肿瘤患者耐药基因的表达情况，参照耐药蛋白的耐药谱（表1），可以预测肿瘤对化学治疗药物的反应程度，制定个性化的联合化学治疗方案。
3.2 多种药物联合化学治疗 将作用于细胞不同增殖时相的药物联合使用，有助于提高肿瘤化学治疗敏感性而增加疗效。并且多种药物联合化学治疗可避免单一药物使用所导致的耐药。
3.3 体外药敏试验 随着体外抗肿瘤药敏试验技术的提高，体内外药敏结果符合率增加。根据体外药敏试验结果指导化学治疗，可减少化学治疗的盲目性，提高疗效，避免耐药。
3.4 合用化学治疗逆转剂 化学治疗逆转剂又称化学治疗增敏剂，是一类增加肿瘤细胞对化学治疗药物敏感性，逆转耐药性的药物。化学治疗药物与逆转剂合用是临床上解决耐药问题的新途径。
4 结语
耐药蛋白在肿瘤组织中的个体差异性表达是临床个体性化学治疗的重要理论基础之一，其理论研究及临床实践作用尚存在巨大的发展空间。一方面，对于耐药基因差异性表达的分子机制及内在联系有待深入研究，特别是直接影响耐药基因表达水平及对耐药基因启动因子调控起作用的转录因子、癌基因或抑癌基因（如P53）的研究，能够进一步揭示耐药基因差异性表达的实质，为治疗多药耐药肿瘤提供新的策略。另一方面，先进科学技术在临床上的应用，可以大大提高个体耐药蛋白表达的检测水平。如近年来迅速发展的基因芯片技术，不仅克服了效率低、难以定量检测的问题，还有助于新耐药基因的发现。
参考文献
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篇5
【关键词】 老年； 急性髓系白血病； 阿柔比星； 阿糖胞苷； 粒细胞集落刺激因子； 柔红霉素
中图分类号 R733.73 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2014）16-0048-02
急性髓系白血病（acute myeloid leukemia， AML）是很常见的一种白血病，有统计学显示，AML约占白血病总发病人数的70%[1]。对其治疗较经典的化疗方案为标准DA方案。但是对于老年患者而言，一般化疗的疗效并不显著，且并发症较多，较多患者根本无法耐受，这与老年患者身体一般情况和生理情况有着重要的关系[2]。提高疗效并减少并发症是老年AML患者治疗的关键，如今预激方案备受关注。本文以笔者所在医院63例AML患者为对象，比较分析预激方案与标准化疗的疗效和安全性。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
以2006年1月-2011年5月在笔者所在医院进行治疗的63例AML患者为观察分析对象。63例患者入院时经过骨髓细胞形态学检查以及免疫组化检查，并参照诊断标准[3]确诊。男33例，女30例，患者年龄61～74岁，平均（69.7±5.2）岁。M1 3例，M2 11例，M4 18例，M5 26例，M6 5例。患者接受治疗前明确治疗的具体事宜及可能出现的不良反应，全面系统的检查排除患者心、肝、肺、肾等重要脏器功能障碍。63例患者按照随机数字表法分为治疗组和对照组，治疗组36例患者接受预激方案治疗，具体为CAG预激方案（阿柔比星，阿糖胞苷，粒细胞集落刺激因子）；对照组27例患者采用标准DA方案（柔红霉素，阿糖胞苷）治疗。两组患者年龄、性别等一般资料比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法
治疗组患者接受CAG预激方案治疗，具体为ACR 7 mg/m2静脉滴注，第1～4天，1次/d；Ara-c总量为20 mg/d，于每12小时10 mg皮下注射，每天2次，第1～14天；G-CSF 200μg/（m2・d），为皮下注射，第1～14天。G-CSF首次运用在Ara-c运用的前一天，最后一次运用在Ara-c前半天。治疗的全过程中应密切监视患者的身体一般情况和不良反应，当血细胞的检测示白细胞大于20×109/L时就应停用G-CSF。对照组患者接受DA标准化疗方案，具体为DNR 45 mg/（m2・d）静脉注射，第1～3天；Ara-c总量为20 mg/d，于每12小时10 mg皮下注射，每天2次，第1～7天。完成一个周期后按照疗效评定标准评定，对未达到部分缓解的患者进行第2疗程的治疗，仍未达到部分缓解的停止该方案的治疗。
1.3 疗效评定标准
疗效评定参照文献标准，共分为缓解（CR）、良效（PR）和无效（NR）[3]。不良反应参照世界卫生组织标准。生存情况分析以患者治疗后随访进行客观评价。
1.4 统计学处理
采用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用字2检验，P
2 结果
治疗组总有效率为80.56%，对照组为51.85%，两组比较差异有统计学意义（字2=5.867，P=0.015
3 讨论
随着医疗技术的发展，AML的治疗能取得一定的疗效。但是治疗过程中出现较多和严重的不良反应使得患者不能耐受，这也是导致失败的主要原因之一。特别是对于老年患者，由于其身体素质一般较差，使得治疗过程中难于耐受。诸多研究也证实，AM老年患者治疗时身体一般情况较差，并且与预后不良相关因素较多，药物的敏感性也较弱以及耐药基因的高表达使得治疗疗效并不显著[4-5]。因此寻求一种能提高疗效并能使老年患者耐受的治疗方案是研究和发展的重点。
以前的经典治疗方案为DA方案，其治疗的缓解率在60%～80%，但是其不良反应对于老年患者来说难于耐受[6]。近年来研究和运用的预激方案对于老年患者的治疗取得较为一致的认同。其主要作用机制为：G-CSF受体广泛分布在AML细胞，这就使得S期细胞增多而使其他药物对其毒性作用加强[7]。另外，G-CSF可促使Ara-c与细胞DNA结合，使得小剂量的Ara-c作用加强，相应不良反应也就降低，其具体机制目前研究还有很多[8]。通过上述机制，使得治疗的疗效有较大的提升。
DA标准化疗对AML有一定的疗效，但其对于老年患者而言不易耐受而使得治疗失败较多。预激方案的运用，不仅提高了治疗的疗效，相对而言还降低了不良反应率，对于老年AML患者的治疗有诸多的好处，很大程度提高了治疗的成功率，值得临床借鉴运用。
参考文献
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篇6
【关键词】 肠上皮化生 CDX2 PTEN 胃肿瘤
【ABSTRACT】 Objective: To study the relationship of expression of CDX2 and PTEN proteins and gastric metaplasia. Methods: Immunohistochemistry Envision method was used to detect the expression of CDX2 and PTEN proteins in simple intestinal metaplasia (SIM)， atypical intestinal metaplasia (AIM) and gastric adenocarcinoma. Results: The positive rates of CDX2 in SIM， AIM and gastric adenocarcinoma was 82.6%， 51.5% and 36.4% respectively. The expression of CDX2 in gastric adenocarcinoma was significantly lower than that in SIM(P0.05). The positive rates of PTEN in SIM， AIM and gastric adenocarcinoma were 86.9％，75.8％and 47.7％ respectively and the difference between SIM and gastric adenocarcinoma was significant (P
【KEY WORDS】 Intestinal metaplasia·CDX2·PTEN·Stomach neoplasms
胃黏膜肠上皮化生（简称肠化）和胃癌的关系一直存在争议，1955年Morson发现胃癌可以在肠化的胃黏膜处发生，提出肠化和胃癌有关［1］。但ECTOR等随访171例肠化患者8～9年，只有3例发生癌变［2］。CDX2是肠道特异性转录因子， 对肠上皮细胞的分化、增殖、凋亡和肠道特定基因的转录起调控作用。PTEN基因为具有磷酸酶活性抑癌基因，可以通过刺激CDX2启动子转录活性增强CDX2的表达。张建平等［3］根据上皮细胞形态及上皮结构将肠化分为两型：单纯肠化 （simple intestinal metaplasia，SIM）和不典型肠化（atypical intestinal metaplasia，AIM），本研究应用免疫组织化学方法检测胃黏膜肠化和胃癌组织中CDX2与PTEN蛋白的表达，探讨肠化与胃癌的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集2005年1月—2006年12月山东大学齐鲁医院普外科收治胃黏膜肠化患者100例。其中SIM 23例，男16例，女7例，年龄32～73岁，平均年龄49.4岁；AIM 33例，男22例，女11例，年龄34～70岁，平均年龄53.2岁；胃癌44例（其中肠型胃癌26例，弥漫型胃癌18例），男30例，女14例，年龄32～77岁，平均年龄55.5岁。
1.2 方法 单克隆抗体CDX2与PTEN（即用型）及PV9000检测试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。取所有患者胃镜活组织检查或手术切除的组织标本蜡块行4 μm 连续切片，作HE和免疫组织化学染色。免疫组织化学染色采用EnVision法［4］；CDX2蛋白阳性染色表现为细胞核或细胞质出现清晰的棕黄色颗粒，PTEN蛋白阳性染色表现为细胞质出现棕黄色颗粒。
1.3 统计学处理 采用SPSS 12.0统计软件进行统计学处理。不同胃黏膜病变组织中CDX2与PTEN阳性率的比较采用χ2检验， P≤0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 胃黏膜病变组织形态学观察 SIM组织由柱状细胞和杯状细胞组成，杯状细胞及腺体形态规则，上皮无假复层改变；AIM组织杯状细胞常呈扁卵圆形，极性紊乱，核仁明显，上皮细胞可呈假复层，细胞核泡沫状呈腺瘤样竖起，胃小凹呈锯齿状（表1，图1）。
2.2 胃黏膜病变组织中CDX2蛋白的表达 5例SIM组织和6例AIM组织细胞质CDX2阳性染色，其他为细胞核阳性染色，未发现细胞核与细胞质同时染色病例；CDX2蛋白在SIM组织的阳性表达率82.6%（19/23），在AIM组织中的阳性表达率为51.5%（17/33），在胃癌组织中的阳性表达率为36.4%（16/44），其中12例为肠型胃癌，4例为弥漫性胃癌；SIM组织中CDX2的表达显著高于AIM组织（χ2=5.707 4，P
2.3 胃黏膜病变组织中PTEN蛋白的表达 SIM组织中PTEN蛋白的阳性表达率为86.9%（20/23），AIM组织中的阳性表达率为75.8%（25/33），胃癌组织中的阳性表达率为47.7%（21/44）。PTEN蛋白在SIM组织中的表达显著高于胃癌组织（χ2=9.788 5，P0.05），AIM组织与胃癌组织的表达差异亦无统计学意义（χ2=2.701 0，P>0.05）。
3 讨论
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均居恶性肿瘤前列。早诊断、早治疗是目前提高胃癌患者生存率的唯一有效措施。临床胃镜活组织检查的广泛应用使早期胃癌的诊断成为可能。但临床实践发现，胃镜活组织检查技术对早期胃癌的检出率并无很大提高，大部分胃癌患者确诊时已属于晚期胃癌，其主要原因可能与对胃癌前期变化认识不够充分、不明确胃黏膜肠化的类型和胃癌的关系、不能为临床提供可靠的胃黏膜癌前病变随访资料有关。
胃黏膜肠化是指正常胃黏膜上皮细胞在一定条件下（如炎症等）转化为肠型上皮细胞，是胃黏膜的常见病变，部分肠化病变与胃癌的发生发展关系密切，形成正常胃黏膜浅表性胃炎萎缩性胃炎肠化异型性增生胃癌（肠型）的多步骤发展过程。临床胃镜活组织检查中发现在胃黏膜良、恶性病变中有大量的肠上皮化生，几乎所有萎缩性胃炎均有肠化病变。但事实上并不是所有类型的肠化均有转化成胃癌的风险，这为临床医师对随访患者行早期胃癌监测带来了困难。目前肠化按化生上皮的形态及黏液成分主要分为3型：完全肠化型（Ⅰ型）、不完全小肠型（Ⅱ型）和不完全结肠型（Ⅲ型）。但由于黏液成分复杂，且肠化病变常常以多种黏液分泌为主，难以通过黏液染色分类。现代分子生物学证实在肠化病变中均有大肠及小肠分化，病灶之间大肠或小肠分化并无显著差异。
本研究对胃黏膜肠化的病理切片进行观察分析，根据组织形态学把胃黏膜肠化分为SIM和AIM两种类型，结果显示AIM与胃癌关系密切，属胃黏膜癌前病变范畴。
CDX2基因属同源盒基因家族的一类，其编码的CDX2蛋白包含311个单氨基酸，通过螺旋－环－螺旋的方式结合于DNA的相应区域，以转录因子的形式调节DNA的表达。成年人CDX2蛋白主要表达于小肠和结肠， 对肠上皮细胞的分化、增殖、凋亡和肠道特定基因的转录起调控作用，而正常胃黏膜组织中无表达。目前研究认为CDX2蛋白具有诱导胃黏膜细胞向肠上皮分化的作用，启动了胃黏膜肠化［5］。
本研究结果显示CDX2蛋白在SIM、AIM和胃癌组织中的表达逐渐下降，CDX2蛋白阳性表达见于82.6%的SIM、51.5%的AIM及46.2%的肠型胃癌组织中，提示CDX2蛋白在胃黏膜肠化到癌变的过程中起重要作用，其表达水平随着恶性程度的增加而下降。但CDX2蛋白在AIM与胃癌组织中的表达差异无统计学意义（P>0.05），提示AIM与胃癌的关系密切，这与组织形态观察结果一致。因而推测SIM多为炎症等因素造成胃黏膜上皮损伤后增生修复的适应性改变；AIM为上皮适应性改变的同时伴有基因改变如某些基因表达异常等，在此基础上进一步发生癌变。
本研究还发现有少数病例CDX2蛋白表达部位不在细胞核，而在核周细胞质中，且呈块状分布而非弥漫分布，推测为某一细胞器内的CDX2蛋白，与刘贵生等［6］发现类似，其发生机制需要进一步研究。也有学者认为CDX2在细胞质的表达与幽门螺杆菌引起的炎症有关［7］。
Bai等［8］发现CDX2蛋白的表达与胃癌组织类型相关， 肠型胃癌高于弥漫型。但也有学者认为CDX2蛋白在两种类型胃癌中表达并无差异［9］。本研究发现， CDX2蛋白表达于36.4%（16/44）的胃癌组织中， 其中46.2%（12/26）的肠型胃癌病例CDX2蛋白表达阳性，而弥漫型胃癌中CDX2蛋白表达阳性的病例仅占22.2%（4/18），与Bai等［8］的结果类似。分析原因可能与胃癌细胞来源不同有关，肠型胃癌起源于胃黏膜肠化生灶，而弥漫型胃癌则可能来源于非肠化生细胞。因此CDX2蛋白在肠型胃癌组织中较弥漫型胃癌组织表达增加［6］。
PTEN基因为具有磷酸酶活性抑癌基因， 编码酪氨酸磷酸酶，抑制酪氨酸磷酸化，对细胞增殖和细胞周期起调控作用。有研究认为启动子异常甲基化是PTEN基因失活的主要机制［10］，从而导致其磷酸酶活性明显下降，细胞恶性增殖能力增强，细胞游走性增加并抑制细胞凋亡，促进肿瘤进行性生长和肿瘤细胞增殖活性增加。Sunghoon等［11］发现在结肠癌细胞系中抑癌基因PTEN可以通过刺激CDX2启动子转录活性来增强CDX2的表达，提示在肠化中PTEN对CDX2的表达可能起到一定的调节作用。与CDX2相似，PTEN编码产物在SIM、AIM和胃癌组织中表达逐渐下降。但与CDX2不同的是PTEN在SIM与AIM的表达差异无统计学意义（P>0.05），提示CDX2的表达存在着复杂的调节机制，PTEN只是影响因素之一。
在胃黏膜肠化及癌变的过程中，CDX2蛋白的异常表达是重要因素之一。AIM与胃癌的关系密切，其具体的癌变机制有待于进一步研究。目前共聚焦激光显微内镜已能较准确的诊断胃癌，其敏感性为84％，特异性为95％，准确性为80％，可以对胃癌做出在体的诊断［12］。如果将肠化分类方法与共聚焦显微内镜技术相结合，应用于AIM患者的初步筛选，有望提高早期胃癌的检出率。
参考文献
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篇7
【摘要】 【目的】探讨乳腺癌患者的乳腺癌耐药蛋白(bcrp)基因表达及其与化疗疗效的关系。【方法】采用半定量逆转录—聚合酶链反应(rtpcr)的方法检测60例行新辅助化疗cef方案的女性乳腺癌患者乳腺癌组织的bcrp基因，根据化疗前bcrp基因表达情况，将60例患者分为阳性组及阴性组，比较2组间的疗效，观察bcrp基因表达与化疗疗效的关系。【结果】60例乳腺癌患者中bcrp基因阳性表达17例，阳性表达率为283%(17/60)。bcrp基因阳性组患者总缓解11例，缓解率(647%)明显低于阴性组(930%),两组比较差异有显著性意义(p<005)。【结论】bcrp 基因高表达患者采用cef方案化疗效果较差，bcrp基因的表达水平可以作为预测化疗效果的一个重要参考指标。
【关键词】 乳腺肿瘤/药物疗法;乳腺癌耐药蛋白基因;半定量逆转录一聚合酶链反应
多药耐药是影响乳腺癌化疗效果的重要因素之一，乳腺癌耐药蛋白(bcrp)是1998年被发现的又一与耐药有关的糖蛋白，其在肿瘤耐药中的作用日益受到关注。133229.coM本研究应用半定量逆转录—聚合酶链反应(rtpcr)的方法检测60例行新辅助化疗患者乳腺癌组织的bcrp基因表达，并观察其与化疗疗效的关系，现将结果报道如下。
1材料与方法
11病例选择60例均为我院乳腺科2005~2008年住院行新辅助化疗的女性乳腺癌患者,年龄30～65岁,中位年龄45岁。所有病例均经巴德枪粗针穿刺病理确诊，均未接受过手术、放疗、化疗、内分泌治疗等抗癌治疗的原发乳腺癌患者，并排除其他肿瘤。按照国际抗癌联盟(uicc)2002年tnm分期标准:ⅱ期27例，ⅲ期29例，ⅳ期4例。其中ⅳ期患者中1例胸椎转移，1例胸骨转移，1例肺转移，1例肝转移(以临床ct/mr诊断为标准)。按照世界卫生组织(who)乳腺肿瘤组织学类型分类标准:浸润性导管癌53例，浸润性小叶癌3例，黏液腺癌3例，髓样癌1例。
12试剂trizol试剂(invitrogen公司)，takars rna pcr kit(amv)ver30试剂盒(大连宝生物有限公司)，depc(大连宝生物有限公司)。引物光探针合成(上海生工公司)：bcrp上游引物序列为5ttaggattgaagccaaagg3’,下游引物序列为5taggcaattgtgaggaaaata3’;βactin上游引物序列为5ctcgcgc tactctctctttc3’，下游引物序列为5catgtctcgatcccacttaac3’。
13药物疗效判断标准根据化疗前bcrp基因表达情况，将60例患者分为阳性组及阴性组，并采用cef方案[环磷酰胺05 g/m2 ,第1天(d1)+法玛新80 mg/m2 ,d1+5氟脲嘧啶05 g/m2 ,d1]。21d为1个疗程，3个疗程后，按who实体瘤的近期疗效标准评定疗效，分为完全缓解(cr)、部分缓解(pr)、疾病稳定(sd)、进展(pd)。
14乳腺癌耐药基因的检测采用半定量逆转录—聚合酶链反应(rtpcr)的方法。
141rna提取肿瘤组织总rna提取采用异硫氰酸胍、酚、氯仿抽提“一步法”[1]。紫外光分光光度计准确定量，沉淀于无rnaase水中，-80℃保存备用。
142cdna合成按one step rtpcr 试剂盒(日本takara 公司) 说明书配制rtpcr 反应体系10μl, 含总rna 1μg、mgcl2 2μl、10倍rt buffer 1μl、dntp液体 1μl、rnase抑制酶 025μl、oligodt 05μl、amv酶 05μl、加入depc处理水至10μl，30℃、10min，42℃、30min，99℃、5min，5℃、5min。
143pcr反应rt产物10μl，5倍pcr buffer 10μl，ex taq酶 025μl，bcrp上、下游引物1μl(125pmol)，βactin上、下游引物1μl(125pmol)，灭菌蒸馏水2775μl置于pcr扩增仪上，反应条件为94℃、2min 预变性，然后按94℃、40s，55℃、60s，72℃、60s，共35个循环;72℃延伸10min。
144电泳取10μl pcr产物进行电泳，用20g/l琼脂糖凝胶电泳，eb染色，以5v/cm电泳60min，经凝胶成像分析系统分析扫描定量并照相，以bcrp/β2mg的比值作为bcrp基因的相对表达水平。bcrp基因电泳结果有2个条带，即bcrp 446bp及βactin 330bp，以bcrp/βactin的比值<05为bcrp表达阴性，以bcrp/βactin的比值≥05为bcrp表达阳性[1]。
15统计学方法将实验数据输入spss 100统计软件包，采用χ2检验分析阳性表达率，p<005为具有统计学意义。
2结果
21乳腺组织中bcrp mrna表达乳腺组织中bcrp mrna表达的pcr产物凝胶电泳结果见图1。60例原发乳腺癌中bcrp基因阳性表达17例，阳性表达率为283%(17/60)。
① 为marker dl2000(dna分子量标准);②为bcrp mrna表达阴性;③为bcrp mrna表达阳性
22bcrp基因表达与化疗疗效的关系表1结果显示，60例原发乳腺癌患者中，bcrp基因阳性组患者总缓解11例，缓解率(647%)明显低于阴性组(930%)，两组比较差异有显著性意义(p<005)。表12组疗效比较
3讨论
bcrp是与多药耐药相关的膜转运蛋白，主要参与膜内、外药物转运而改变药物在胞内的分布，在转运细胞毒化疗药物中以“半—转运”方式排出药物，属于atp转运蛋白的超家族成员。bcrp基因在乳腺癌中的表达情况报道结果尚不一致。本研究结果显示，60例乳腺癌中bcrp基因阳性表达17例，阳性表达率为283%。与kanzaki等[2]采用ptpcr方法检测43例初治乳腺癌患者手术切除肿瘤组织中发现9例标本有较高水平的bcrp基因表达基本相近。
肿瘤耐药是多基因参与的结果，了解耐药基因的表达，对于选择合适的治疗方案和实施有效的逆转措施具有重要的指导意义。bcrp是abc转运子编码基因家族的成员之一，该基因产物的过表达常伴有乳腺癌化疗耐药，并呈现出多药耐药性。耐药蛋白bcrp的底物广泛，bcrp表现型的耐药细胞对包括蒽环类药物、拓扑替肯(tpt)、氨甲蝶呤(mtx)、vp16等许多抗肿瘤药物耐药[3]。本研究结果表明，bcrp mrna高表达者对cef方案化疗效果较差，bcrp mrna的表达水平可以作为预测化疗效果的一个重要参考指标。因此，本项目研究的完成对临床合理地制定化疗方案、选择化疗药物的种类、避免不必要的化疗药物副作用，具有一定的指导意义。
【参考文献】
[1] 管俊，盛瑞兰，顾健急性非淋巴细胞性白血病患者乳腺癌耐药蛋白基因表达及其临床意义[j].白血病·淋巴瘤，2002，11(3)：139
篇8
【关键词】 高敏C反应蛋白 动脉粥样硬化 气虚血淤
Abstract：AS is an inflammatory disease which exists in "healthy" people as a dormant syndrome. Qideficiency and Blood-stagnation is the main pathogenesis of AS. Creactive protein (CRP) participates in the occurrence and progress of AS. It is the independent risk factor and prognostic index of AS. We propose that high sensitivity CRP (hsCRP) should be the screen marker of pathogenesis of Qideficiency and Bloodstagnation. If the high hsCRP case have abnormality in routine examination of AS， We suggest that use the treatment based on syndrome differentiation based on replenishing Qi and activating blood circulation which combined with the pathogenesis and the physic of the patient. This work would help to prevent and therapy AS with TCM and deepen the principle of "preventive treatment before the occurrence of diseases".
Key words：hsCRP; Atherosclerosis; Qideficiency and Bloodstagnation
辨证施治是根据传统的阴阳五行等中医基本理论来认识疾病，并指导诊断、立法、处方、用药的法则，是中医防治疾病的核心和准则。它主要运用司外揣内的方法，将内在机能系统失调的机制整合为外观的相关生命现象的改变，以此作为论治的基础。然而，疾病初期常常会无证可辨，如动脉粥样硬化（atherosclerosis， AS），在出现严重的心脑血管事件之前，会长期存在一种“病已形成于内、证尚未见于外”的状态，面对这种“已病未证”的情况，如何进行中医药的防治呢？
1 AS炎症是一种潜证
1.1 AS是一种炎症1999年，Ross提出AS是一种炎性疾病［1］。炎症在动脉粥样硬化发生、发展和演变过程中起着重要作用，贯穿于AS从起始发病到出现临件的整个过程：炎症是动脉粥样硬化的始动因子，炎症导致血管局部中性粒细胞和单核细胞浸润，促进脂质沉积，导致动脉粥样硬化脂纹等早期病变的发生。从内皮功能障碍到脂质条纹形成，从纤维斑块和粥样斑块到不稳定斑块的生成、破裂和血栓形成，动脉粥样硬化易损斑块最显著特征之一是为炎症反应。这种炎症反应中，有单核细胞、巨噬细胞和淋巴细胞参与，并产生许多细胞因子、黏附分子和炎症介质等。AS斑块的破裂或脱落最终引起心肌梗塞、一过性脑缺血发作、中风等严重疾病。因此，AS是一种慢性炎症。
1.2 AS炎症是潜证AS炎症始于胎儿期，孩童和青少年时期缓慢发展。尸检研究证实，在年轻和“健康”的个体上存在严重和阻塞性损害；冠状动脉内超声显示，20～29岁的健康心脏志愿者中AS的罹患率为37%，30～39岁的罹患率为60%，而超过50岁人群的罹患率为85%［2］。从AS的自然发展过程来看，当致病因子刚作用于机体尚未引起严重的临件之前，AS处于病理生理变化缓慢积累的量变过程，其本质特性尚未显露，外在表现是健康状态，此时，AS处于“有诸内”尚未“形诸外”的“潜证”阶段。
2 气虚血淤是AS潜证的病机辨证特征
气虚血淤倾向是现代人群一个突出的体质病理学特征［3］，是人体衰老的主要机制［4］，同时现代人罹患AS的几率非常高，冠心病的病机关键是气虚血淤［5］，而冠心病的发病基础是AS；气虚血淤证的病理生理基础主要表现在内皮功能障碍［6］，这同时也是AS的启动步骤［2］，我们因此推断，气虚血淤是AS潜证的病机关键。
气虚血瘀的“气虚”之气主要是指宗气［7］，《灵枢·邪客》指出：“宗气积于胸中，出于喉咙，以贯心脉”，宗气“不但为全身诸气之纲领，并可为全身血脉之纲领（张锡纯）”，在AS发生过程中，宗气维系脉管的正常功能，具体就是维持内皮功能，抑制或延缓AS的发生发展。《灵枢·刺节真邪篇》曰“宗气不下，脉中之血凝而留止”，《诸病源候论》说“血之在身，随气而行，常无停积，若因堕落损伤，血行失度……皆成淤血”，说明了气是血液运行的动力，气的推动作用对维持血液正常运行的重要性；宗气虚弱不足，气的推动作用减弱，运血无力，可致血液流行缓慢，单核细胞黏附于内皮，释放致炎因子，导致了炎症的发生，是淤血形成的前提。
一旦内皮功能障碍，出现气虚血淤的病机变化，可表现为内皮表达和分泌血管活性物质异常，如凝血、抗凝、纤溶等功能异常：一氧化氮、组织因子途径抑制物、组织型纤溶酶原激活物等抑炎物分泌减少；内皮素、组织因子、纤溶酶原激活物抑制因子等致炎因子分泌增高［6］，单核细胞浸润，炎症细胞募集，表明气虚血淤的本质是一种基于血管内皮和炎症细胞的低度、慢性炎症。气的防御作用减弱，是发生低度炎症的重要条件；淤血是低度炎症的主要病理产物。因此，AS炎症的病机辨证当属气虚血淤。
3 CRP是AS气虚血淤病机的辨证标记
3.1 CRP是AS炎症的参与者C反应蛋白（Creactive protein， CRP）参与了AS发生、稳定斑块向不稳定斑块的转化乃至斑块破裂的全过程：①CRP调节巨噬细胞摄入低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol， LDL-C）有助于泡沫细胞的形成；②诱导黏附分子如血管细胞黏附因子1、细胞间黏附因子-1、E选择素和单核趋化蛋白-1的表达；③抑制内皮型一氧化氮合酶活性，降低血管反应性；④激活粥样斑块内的补体系统、致敏内皮细胞，产生CD4+ T细胞介导的细胞毒作用造成损坏，促进AS的进展［8］。
3.2 hs-CRP是AS的标记物CRP是炎症的非特异标志物，但与其它炎症标记物不同，CRP水平长期稳定性高，昼夜差异小，且检测费用低廉，因此是检测AS炎症病机变化的重要标志。许多前瞻性的流行病学研究结果均证实，在稳定的个体中采用高敏方法测定的高敏CRP（high sensitivity CRP， hsCRP），不管LDLC水平如何，Framingham危险性评分怎样，代谢综合征严重程度处于何种水平，hsCRP都是一个预测未来心血管事件发生危险性的有效指标［9］。RidkerPM等［10］研究结果表明，hsCRP和LDLC各自基线水平与心血管事件发生高度线性相关，hsCRP有独立预示作用，是一个比LDLC更好的心血管事件预示指标。hsCRP值甚至在血样检测的20年后仍有预测价值，是一个很好的危险性预测标志物。2003年，AHA/CDC专家组在Circulation上撰文提出要把hsCRP应用于临床及公共卫生实践。
3.3 hsCRP作为AS气虚血淤潜证的标记物hsCRP与腹部肥胖，高甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇水平降低、高血压及空腹高血糖有关，而且与胰岛素敏感性，内皮细胞功能减退及纤维蛋白溶解降低等因素相关，上述代谢综合征的因素越多，hs-CRP水平越高，AS发生的几率越大，AS的严重程度越高。
以hsCRP作为AS潜证病机辨证标记的逻辑是，AS是一种潜证，其主要病机是气虚血淤；CRP是AS炎症的参与者，并且hsCRP是AS相关心血管事件的标记物；因此，hsCRP可以作为AS气虚血淤病机的标记物。
用hsCRP作为气虚血淤病机的标记尽管具有较大的可行性，但事实上，没有一个指标能说明所有问题，特别是AS这样一个复杂的疾病潜证。因此，在临床中要既要考虑Framingham 危险性评分，LCLC水平等现代水平检测，又要注意体重、肥胖、运动、糖尿病等传统因素。应用早期、灵敏的标志物来监测AS将有助于指导传统中医理论从疾病早期防治AS；中医几千年积累的经验也将有助于在AS的潜证阶段进行防治。
最有可能从hsCRP评价中受益的人群是低或正常LDLC的人群。从高脂蛋白血症的分类来看，高LDLC属于II型高脂蛋白血症，与AS发生关系密切，应进行调脂治疗。大规模的临床试验证实，大部分病人会从他汀类药物干预中受益。而对于“低LDLC、高hsCRP”的“健康个体”来说，虽然其未来发生血管事件的危险性明显高于“高LDLC、低hsCRP”个体［10］，但目前尚无公认的干预方案。这些病人不能被诊断为高脂蛋白血症，因此不需要进行调脂治疗；由于LDLC水平低于130 mg/dl的一级预防标准，病人很少会冒险采用他汀类药物治疗，因为他汀类药物能引起明显的肝功下降、肌肉疼痛，并曾在欧美国家导致30多人死亡（国家药品监督管理局为此停用西立伐他汀钠）。因此，针对hsCRP的气虚血淤病机辨证，给予益气活血的中医药调治可能是填补这个“空白”的方案之一，中医几千年积累的经验也将有助于在AS的潜证阶段进行防治。
用于AS病机筛查目的的CRP检测，必须使用高敏法，免疫浊度法较为合适。一些方法如ELISA、免疫发光法和化学发光法虽然灵敏度和精确度都较高，但其成本也较高，故不是进行筛查的首选方法。近年来，胶乳增强免疫透射比浊法已被证实可作为测定CRP的常规高敏方法。
在健康人群，建立hsCRP水平与AS气虚血淤病机之间的联系，结合LDLC水平、内皮功能障碍水平、超声多普勒检查的斑块形成情况，使AS气虚血淤的hsCRP筛查包含更丰富的内涵，以此为基础，建立以益气活血为主的干预方案，可能会有效地预防AS。
4 结语
随着社会的发展，医学目的已经调整为以预防为主，依靠科技进步，动员全社会参与，中西医并重，为人民健康服务的方针。《素问·四气调神大论》明确提出：“是故圣人不治已病治未病，不治已乱治未乱，此之谓也。夫病已成而后药之，乱已成而后治之，譬犹渴而穿井，斗而铸锥，不亦晚乎”?因此，运用疾病早期标志物诊查疾病潜证阶段的病机变化，并以此作为病机辨证的参考和疗效判断的标准，则将有助于“消未起之患，治未病之疾，医之于无事之前”。
中医具有良好的群众基础，国人在出现明显的疾病之前多不愿服用西药，因此，利用国人喜用中药调理的特点，充分发挥中医的治未病优势预防AS，具有极大的理论价值和社会效益。
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篇9
[关键词] 新生儿；动脉导管未闭；肌钙蛋白；心肌酶谱
[中图分类号] R722.19 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）09（b）-084-04
[Abstract] Objective To measure the different levels of cardiac troponin I （cTnI） and creatine kinase （CK）， creatine kinase MB （CK-MB） in the patent ductus arteriosus （PDA） infants. Methods Thirty-seven neonates who were admitted to Department of neonatology， Shanghai Children's medical Center， School of Medicine， Shanghai Jiao Tong University from January 2014 to January 2016 were recruited. Neonates with PDA were assigned to observation group. The observation group was further divided into different subgroups （NRDS group and non-NRDS group， mechanical ventilation group and non-mechanical ventilation group， use Dopamine group and not use Dopamine group） according to whether combination with NRDS， whether the use of mechanical ventilation and Dopamine. Thirty-seven neonates had the same gestational age and the same gender with the observation group and no severe congenital heart disease and asphyxia admitted at the same period were selected as the control group. Levels of cTnI， CK and CK-MB of patients in 3-7 days after birth were tested and compared. Results The cTnI level of observation group was significantly higher than those of the control group （P < 0.05）. There was no significant difference in CK and CK-MB level between the observation group and the control group. The cTnI level of the use Dopamine group was significantly higher than that of the not use Dopamine group （P < 0.05）. There was no significant difference in cTnI， CK and CK-MB level between NRDS group and non-NRDS group， mechanical ventilation group and non-mechanical ventilation group in the observation group. Conclusion It is needed to be pay close attention to whether there is open PDA for 3-7 days newborn with high level of serum cTnI. cTnI is more sensitive than CK and CK-MB in the myocardial damage of neonates with PDA. Higher cTnI level of neonates with PDA is more likely to occur the circulatory problems of Dopamine medicinal indication.
[Key words] Neonate； Patent ducts arteriosus； Cardiac Troponin； Serum myocardial enzyme
新生儿动脉导管未闭（Patent ductus arteriosus，PDA）是指主动脉与肺动脉之间的通道在新生儿出生后未能及时关闭。在足月活产新生儿中PDA的发生率为57/10万[1]，而体重位于501～1500 g的早产儿中，有1/3患有持续性PDA[2]。PDA是造成新生儿心力衰竭的主要原因之一，重者出现支气管肺发育不良、坏死性小肠结肠炎等严重并发症[3-5]。血清肌钙蛋白I（cTnI）与磷酸肌酸激酶（CK）、磷酸肌酸激酶杂化型（CK-MB）均是心肌损伤的标志物。PDA时心肌细胞受到损伤，cTnI与CK、CK-MB水平上升。观察患儿cTnI与CK、CK-MB水平有助于早期判断PDA患儿是否存在早期心肌损伤。本文回顾性分析了74例新生儿的临床资料，旨在比较PDA新生儿cTnI与CK、CK-MB的表达水平，为进一步帮助临床早期干预PDA提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2014年1月～2016年1月在上海儿童医学中心新生儿科住院患儿74例。其中心脏超声诊断为PDA，并排除合并其他先天性心脏病及重度窒息的新生儿37例为观察组。根据是否合并新生儿呼吸窘迫综合征（Neonatal respiratory distress syndrome，NRDS）将观察组分为合并NRDS组（8例）和无NRDS组（29例）。NRDS诊断标准：①早产儿生后出现进行性呼吸困难；②胸部X线特征性改变：两肺透亮度降低、支气管充气征、白肺。根据是否使用过呼吸机分为使用呼吸机组（16例）和未使用呼吸机组（21例）；根据有无使用多巴胺分为使用多巴胺组（8例）和未使用多巴胺组（29例）。将其中具有同样性别分布、胎龄的新生儿37例作为对照组，排除合并先天性心脏病及重度窒息者，其中早产儿23例，新生儿高胆红素血症6例，肺炎8例。
1.2 观察指标
1.2.1 资料收集 建立病例资料表，记录患儿性别、分娩方式、胎龄、出生体重；记录NRDS、机械通气及多巴胺使用情况；记录患儿PDA的转归。
1.2.2 床旁超声心动图检查 使用飞利浦SONOS 5500超声仪器，超声探头8 MHz。在生后7 d内对有心脏杂音或者皮肤青紫的新生儿进行床旁超声心动图检查。记录PDA内径大小、分流方向。
1.2.3 cTnI与CK、CK-MB 所有研究对象均于生后3～7 d抽取静脉血3 mL检测cTnI与CK、CK-MB。cTnI采用化学发光法，正常参考值：
1.3 统计学方法
采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析，对各项指标进行正态性检验，不符合正态分布的计量资料改用中位数M，四分位数间距Q（P25，P75），两组间比较采用Wilcoxon秩和检验。计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 总体资料及分组情况
观察组与对照组胎龄、出生体重比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。两组出生方式、合并NRDS、使用机械通气、使用多巴胺者所占比较比较差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。观察组中PDA自愈10例；使用布洛芬关闭成功2例、失败1例；未处理24例。
2.2 观察组与对照组cTnI、CK、CK-MB的比较
观察组和对照组cTnI的比较差异有统计学意义（P < 0.05）；观察组和对照组CK、CK-MB的比较差异无统计学意义（P > 0.05）。
2.3 观察组亚组的cTnI、CK、CK-MB的比较：
观察组中使用多巴胺组与未使用多巴胺组cTnI比较差异有统计学意义（P < 0.05）；CK、CK-MB比较差异无统计学意义（P > 0.05），见表3。观察组中合并NRDS组与未合并NRDS组cTnI、CK、CK-MB比较差异均无统计学意义（P > 0.05），见表4。观察组中使用机械通气组与未使用机械通气组cTnI、CK、CK-MB比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。
3 讨论
PDA是新生儿较为常见的疾病之一，近年来新生儿PDA可通过手术结扎、导管介入、口服布洛芬、输富含血小板的血浆等多种手段得到治疗[6-8]。但多项研究指出，新生儿PDA存在很高的自愈率，故新生儿PDA是否需要干预以及何时需要干预都存在较大分歧[9-10]。有意见指出血流动力学显著改变PDA（hsPDA）需要进行临床干预，而诊断hsPDA需要较为复杂的临床及心脏超声标准[11]。肌钙蛋白及CK、CK-MB是心肌损害的很好的标志物，这些标志物与hsPDA之间存在显著相关性[12]。
血清生物标志物如肌钙蛋白、CK、CK-MB最早应用于成人心肌梗死的诊断[13]。肌钙蛋白是肌钙蛋白T、I、C组成的复合物。其中cTnI具有较高的特异性和灵敏度。Trevisanuto等[14]研究显示在新生儿脐血中可检测到cTnT，但检测不到cTnI，说明新生儿体内的cTnI均来自于自身，不受孕母的干扰。McNamara等[15]提出由于PDA时降主动脉内血流窃向肺动脉，引起降主动脉内血流减少，全身动脉包括冠状动脉灌注不足，造成心肌缺血和cTnT水平上升。本研究中观察组与对照组在cTnI上的差异有统计学意义，观察组cTnI水平明显高于对照组，说明PDA会导致心肌损伤，造成cTnI水平明显升高。临床上，若新生儿生后3～7 d内cTnI水平升高，则需密切关注患儿是否存在PDA开放。
目前已有许多研究提示肌钙蛋白诊断心肌损伤的特异性和敏感性均高于CK、CK-MB[16]。推测原因是其不仅存在于心肌中，也存在于骨骼肌、脑组织和胃肠道平滑肌等处，其受到多种因素干扰。而cTnI是心肌唯一特异的心肌蛋白。故在心肌损伤时cTnI较CK、CK-MB更为敏感。本研究显示在观察组cTnI水平明显高于对照组的同时，两组之间CK、CK-MB水平无显著差异，也说明了这一点。
多巴胺可提高新生儿肺血管阻力和肺动脉压力，从而减少主动脉内血流窃向肺动脉，提高主动脉血压[17]。新生儿PDA由于左向右分流，使得全身动脉血流减少，可导致患儿动脉收缩压、舒张压下降，临床上使用多巴胺的概率增大[18-19]。本研究显示在观察组中，多巴胺组与未使用多巴胺组在cTnI水平上差异具有统计学意义。推测由于临床上PDA患儿应用多巴胺的原因大多是由于患儿动脉血压降低难以维持循环，而动脉血压下降则可导致冠状动脉内血流减少，进而造成心肌损害引起cTnI水平上升。多巴胺组肌钙蛋白水平更高，说明肌钙蛋白与心肌损害明显相关，更易出现多巴胺用药指征下的循环问题。
观察组中合并NRDS组与未合并NRDS组、使用机械通气组和未使用机械通气组的cTnI、CK、CK-MB水平差异均无统计学意义。NRDS导致低氧血症，而使用机械通气的新生儿往往也是临床上出现低氧血症的患儿。低氧血症可直接损害心肌细胞。Trevisanuto等[20]的研究发现NRDS早产儿的cTnT水平明显增高。Distefano等[21]的研究也有同样的结论。推测本研究由于病例数目较少未能得出阳性统计学结论。
综上所述，PDA可造成新生儿心肌细胞损伤，导致血清中cTnI及CK、CK-MB水平上升，而cTnI较CK、CK-MB更为敏感，更能反映新生儿PDA患儿的心肌损害情况。新生儿早期cTnI水平高的PDA患儿更易出现多巴胺用药指征下的循环问题。
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篇10
【关键词】 逐淤化痰汤 脑出血 细胞凋亡 Bcl-2蛋白 Bax蛋白
Abstract: Objective To probe into the effect of edaravone on the cell apoptosis and the expression of Bcl-2 and Bax protein following intracerebral hemorrhage(ICH) in rats， and explore the protective effect of edaravone on the cerebral injury induced by hemorrhage. Methods Ninety SD rats were randomly pided into 3 groups: Zhuyuhuatan oral liquid group， ICH group and sham group(n=30).The rat model of ICH was established by injection of autologous blood into the caudate nucleus. At different time separately neuronal apoptosis and the expression of Bcl-2 and Bax protein were monitored by Hoechst and immunohistochemistry，respectively. Results Apoptosis and the expression of Bcl-2 and Bax protein were significantly increased in the ICH group as compared with the sham group(P＜0.01). Treatment of Zhuyuhuatan oral liquid markedly reduced apoptosis ahd the expression of Bax protein in comparison to the ICH group(P＜0.05 or ＜0.01)，while the expression of Bcl-2 was obviously higher in the Zhuyuhuatan oral liquid group than that in the ICH group(P＜0.05 or P＜0.01). Conclusions Zhuyuhuatan oral liquid inhibits the neuronal apoptosis following intracerebral hemorrhage which might be relative to the alleviated oxidative stress， up regulated Bcl-2 protein and down regulated expression of Bax protein.
Key words:Zhuyuhuatan oral liquid; cerebral hemorrhage; apoptosis; Bcl-2 protein; Bax protein
脑出血（intracerebral hemorrhage，ICH）是神经系统常见病和多发病。研究表明，细胞凋亡机制参与了脑出血继发性神经细胞损伤［1，2］。现阶段中药方剂在脑出血的治疗中仍然发挥着重要作用，但传统观念认为有引起出血加重危险，故多应用于脑出血恢复期。最新研究表明，脑出血急性期应用逐淤化痰药物疗效更好［3］。逐淤化痰汤（Zhuyuhuatan oral liquid）治疗脑出血疗效确切，一般用于脑出血恢复期。本实验观察大鼠脑出血急性期应用逐淤化痰汤后血肿周围脑组织内细胞凋亡及Bcl-2（B细胞淋巴瘤/白血病-2）、Bax蛋白的表达情况，为逐淤化痰汤治疗急性期脑出血提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物
健康雄性SD大鼠共90只，体重200～300 g，3～4月龄，（由辽宁医学院实验动物中心提供）。
1.1.2 药品和试剂
逐淤化痰汤（钩藤、生大黄各15 g，水蛭、三七、郁金各10 g，红参12 g，丹参20 g）由锦州医药公司购进，取液250 mL按1∶1浓度水煎，于辽宁医学院中药制剂室制成含生药1 g/mL，冰箱冷藏备用。Bcl-2，Bax测定试剂盒（购自武汉博士德公司），细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒（购自碧云天生物技术研究所）
1.1.3 主要实验仪器
立体定位仪：（美国STOELTING公司），微量进样器（上海安亨微量进样器厂）。
1.2 实验方法
1.2.1 分组及给药
随机分为假手术组、脑出血模型（ICH）组及逐淤化痰汤治疗组，每组30只。每组又分为术后1、2、3、5、7d，5个时间点，每个时间点各6只。逐淤化痰汤治疗组于造模后6 h开始灌喂给药，用量为每次1 g/kg，2次/日（用量相当于70 kg人相同体表面积用量的3 倍）。脑出血组：造模后1 d开始灌喂等量生理盐水，2次/日。假手术组：除不注入自体血外，其余条件同ICH组。
1.2.2 脑出血模型的制备
参照Xue［4］和Yang［5］方法将大鼠称重后给予10%水合氯醛（3.3 mL/kg）腹腔注射麻醉，大鼠俯卧位，头部固定在脑立体定位仪上。脑立体定位仪定位大鼠右侧尾状核（前囟后0.2 mm，矢状缝向右旁开3.0 mm，深度6.0 mm）［6］；切开顶部中线皮肤，以前囟后0.2 mm，中线右侧旁开3 mm处，在颅骨表面钻孔，将微量注射器调整至钻孔处。取血前将鼠尾放在40 ℃温水中5 min，消毒后距末端0.5 cm处剪断，让鼠尾血自然滴下取血，用微量注射器取大鼠自体不凝血50 μL，在立体定位仪引导下向尾状核注入自体不凝血；缓慢进针6 mm，以25 μL/min速度2 min内注入50 μL血液；留针10 min，缓慢出针，用骨蜡封闭颅骨上的钻孔，缝合皮肤。以上均按无菌操作原则进行。假手术组除不注血外，其余操作同ICH组。
1.2.3 取材
各组大鼠分别按实验设计于造模后1、2、3、5、7d取材。每组动物每个时间点各取2只大鼠麻醉处死后迅速打开胸腔，暴露心脏，剪开右心房，于心尖部剪开左心室，插管至主动脉，快速注100 mL生理盐水冲洗后，再以4%多聚甲醛灌注固定，断头取血肿周围直径5 mm厚脑组织，以4%多聚甲醛固定24 h。常规脱水、透明、石蜡包埋、连续冠状切片，切片厚度5 um，切片贴附于预处理的载玻片上，用前脱蜡至水，行细胞凋亡检测、Bcl-2与Bax蛋白免疫组化染色。
1.2.4 指标测定
在高倍物镜下， 每张切片中随机选取出血灶边缘相互不重叠的5个视野，计数高倍（400×）镜下细胞凋亡、Bcl-2和Bax蛋白的阳性细胞数。
1.2.4.1 细胞凋亡检测
采用细胞凋亡-Hoechst［7，8］ ，具体操作步骤按试剂盒说明书进行，试剂由碧云天生物技术研究所提供。荧光显微镜下正常细胞呈正常蓝色，而凋亡细胞为细胞核呈致密浓染，或呈碎快状致密浓染，颜色有些发白。
1.2.4.2 Bcl-2及Bax蛋白检测
采用免疫组化SP法，具体操作步骤按试剂盒说明书进行，鼠抗Bcl-2和Bax多克隆抗体，工作浓度分别为1∶100和1∶75，均为公司武汉博士德公司产品。Bcl-2和Bax蛋白以细胞胞质呈棕黄色着色为阳性细胞。
1.2.5 数据处理
实验数据用±s表示，组间比较均采用方差分析及q检验。全部统计学处理采用SPSS13.0统计分析软件完成。
2 结果
2.1 细胞凋亡
假手术组凋亡细胞在各时间点均有少量表达，ICH组凋亡细胞第1 天开始明显增多，第2天达到高峰，之后逐渐减少，第7天仍有凋亡细胞存在，逐淤化痰汤组与ICH组比较凋亡细胞数各时间点均有显著降低(P
2.2 Bcl-2与Bax蛋白表达的变化
在假手术组Bcl-2与Bax蛋白表达阳性细胞数较低；ICH组与假手术组相比，Bcl-2、Bax蛋白表达阳性细胞数均明显增加（P
3 讨论
细胞凋亡是不同于细胞坏死的一种细胞死亡形式，其过程受一系列相关基因的调控。其中Bcl-2家族在凋亡调控基因中位于重要地位，Bcl-2蛋白是一种膜合蛋白，为中枢神经系统主要的神经保护性蛋白，它存在于细胞的线粒体、核膜等处，主要生理功能抑制细胞凋亡、延长细胞寿命；通过阻止细胞凋亡的早期环节而发挥作用，能够阻止或降低染色质浓缩和DNA裂解的发生，它的表达是抑制细胞凋亡的关键步骤；Bax蛋白是Bcl-2的同源蛋白，具有促进细胞凋亡的作用，并具有抑制Bcl-2的效应。在正常细胞中存在着Bax与Bcl-2微量表达，细胞胞浆中Bax- Bax同源二聚体可促进细胞凋亡，Bcl-2- Bax异源二聚体则抑制细胞凋亡，细胞是否发生凋亡，依赖于这些分子的相对浓度。Bax/Bcl-2比值增大促进凋亡，而Bax/Bcl-2比值减小抑制凋亡。
本实验结果显示：ICH组Bcl-2、Bax蛋白表达均比较高，这可能是出血过程中损伤和抗损伤作用相互拮抗的一种表现，Bcl-2受到某种抑制因素的作用，使Bax促凋亡作用最终占优势而导致细胞凋亡。而在逐淤化痰汤组Bcl-2蛋白表达显著增加，Bax蛋白表达显著降低，说明逐淤化痰汤有上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达的作用，并因此而减少脑出血后神经细胞凋亡的发生。研究表明，脑出血后细胞凋亡的高峰在48～72 h，这种高峰与临床上病情的继发性加重的过程一致，故认为凋亡可能是脑出血后血肿周围神经细胞迟发性损伤的重要机制。
综上所述，逐淤化痰汤作为中药制剂在脑出血急性期应用具有上调Bcl-2、下调Bax蛋白表达以减少细胞凋亡的作用。本实验再次证明实验性脑出血大鼠在脑出血急性期应用活血化淤中药是安全、有效的，为今后临床上在脑出血急性期应用活血化淤中药提供实验依据。
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