黄芪的作用范文

时间:2023-03-27 17:50:31

导语:如何才能写好一篇黄芪的作用,这就需要搜集整理更多的资料和文献,欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文,供你借鉴。

黄芪的作用

篇1

1、作用。黄芪以其根入药,药用历史悠久。中国最早的《神农本草经》把黄耆列为“上品”。《药性歌诀》云:“黄耆入药,为强壮剂,具有益正气,壮脾胃,排脓止痛,活血医危的功效。对表虚自汗、气虚内伤、精神萎靡、四肢无力、脾虚泄泻、体虚多汗、气虚脱肛、子官脱垂、浮肿及痈疽等疾病疗效显著”。《名医别录》、《本草纲目》等古药书均认为它有益气补虚的作用

2、禁忌。很多人喜欢在日常生活中要黄芪泡水服用,特别是很多女性喜欢将黄芪和红枣、枸杞子一起浸泡,这样不仅能够增强体质,气色也会越来越好。但是每次使用的黄芪量最好不要超过15克,并且分为两三次服用,避免出现过量的情况。

(来源:文章屋网 )

篇2

黄芪在临床应用极为广泛。为豆科植物膜荚黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge·),蒙古黄芪(Astragalus mongholicus Bge·)的干燥根,是一种常用的补益中药,始载于《神农本草经》,列为上品,李时珍谓“耆,长也。黄耆色黄,为补药之长,故名”。其性微温,味甘,具有补气固表、益气活血、升阳止汗、利水消肿、托毒排脓等功效。主要成分为黄芪皂苷、黄芪多糖、氨基丁酸、微量元素(硒、锰、铁、锌、铜)和钙等.大量的临床研究证实,黄芪具有保护心脏及肾脏、双向调节血糖及血压、抗缺氧、抗自由基氧化、抗衰老、抗肿瘤及增强机体免疫力等功效.近年来对黄芪及其制剂的药理作用和临床应用研究日益深入,并取得了十分显著的进展,就此概述如下。

1增强免疫力和抗病毒

黄芪对正常机体的抗体生成功能有明显促进作用,可使抗体形成细胞数即溶血空斑数和溶血素测定值显著高于对照组,可使免疫后早期抗原结合细胞数明显升高。

黄芪有促进病毒诱生和自身诱生干扰素的能力,且黄芪能使脾脏内浆细胞增生,促进抗体合成。黄芪皂甙甲也能明显促进B细胞增殖分化和浆细胞抗体合成,经电镜观察发现不仅浆细胞数量增多,而且胞质内扩张的粗面内质网腔中含有大量的抗体蛋白质。

2对干扰素的作用

黄芪具有增强病毒诱生干扰素的能力。易感冒者在感冒流行季节服用黄芪,不仅可使感冒次数明显减少,而且可使感冒症状较轻,病程较短。

3增强机体耐缺氧及应激能力

黄芪多糖有明显的抗疲劳作用,能显著延长氢化可的松耗竭小鼠的游泳时间和增加肾上腺素重量,对小鼠多种缺氧模型均具有显著的耐受能力,可明显减少全身性耗氧以及增加组织耐缺氧能力。黄芪多糖有明显的耐低温作用,能使正常以及虚损鼠的抗生存时间明显延长。

4促进机体代谢

黄芪可使细胞的生理代谢增强,这可能是通过细胞内cAMP, cGMP的调节作用来完成的。黄芪还能促进血清和肝脏的蛋白质更新,对蛋白质代谢有促进作用,这可能是黄芪扶正作用的另一个重要方面。

5 强心作用

黄芪总皂苷小剂量(2mg)可加重心力衰竭,而中等剂量(4mg)和大剂量(8mg)则有抗心力衰竭作用 .黄芪苷Ⅳ是黄芪正性肌力作用的主要活性成分,在质量浓度为20~50g/mL时对可离体豚鼠肌标本产生正性肌力作用 ,其机理是黄芪抑制心肌细胞内磷酸二酯酶(PDE)的活性剂钙调蛋白,从而抑制PDE活性。

6双向调节血压作用

黄芪对血压具有双向调节作用,具有利尿降压,降低肺动脉压及右心前负荷,扩张周围血管,降低动脉压,从而改善心功能的作用,同时对冠状动脉有直接扩张作用 .黄芪可增加人体总蛋白和白蛋白量,降低尿蛋白,并通过强心增加心脏搏出量或扩张血管而达到升高血压或降低血压的作用.

7降低血糖作用

据报道,黄芪可降低正常大鼠血糖,改善糖耐量,促进血清胰岛素释放,但对正常小鼠血糖无降低作用,对链脲霉素所致实验性糖尿病大鼠有明显的降低血糖作用,可改善糖耐量,提高血清胰岛素含量,并可调节实验性糖尿病大鼠的血糖代谢 .

8对肾脏、肝脏的影响

黄芪通过调节肾小球疾病蛋白质代谢紊乱,提高血浆白蛋白水平,降低尿蛋白量,在肾小球疾病中发挥积极作用。黄芪可保护并增加肝脏粗面内质网,增加细胞内rRNA和mRNA的含量,抑制核糖核酸的活性,促进蛋白合成。

9抗癌作用

黄芪有对抗毒素B1诱发癌变的作用,可增强环磷酰胺(CT X) 的抗癌活性,并促进因CTX所致机体造血功能损伤的恢复。

10抗氧化、抗衰老及免疫调节作用

金若敏等通过口服给药,观察了黄芪毛状根对D-半乳糖所致衰老小鼠记忆力的影响及抗氧化作用;制备大鼠肾缺血-再灌注模型,测定黄芪毛状根对肾组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响;测定CTX所致免疫功能低下小鼠口服黄芪毛状根后自然杀伤(NK)细胞活性。结果表明,黄芪毛状根能改善衰老小鼠记忆力,提高脑、肝细胞SOD活性并降低肝脏MDA含量,能降低缺血-再灌注大鼠肾MDA含量及血肌酐浓度,还能提高免疫功能低下小鼠NK细胞活性。说明黄芪毛状根具有抗衰老、抗氧化及免疫调节作用。

11美容作用

添加黄芪提取物的化妆品因含有甜菜碱,故性质柔和,又含有微量元素,适合儿童和婴幼儿使用.将黄芪提取物制成沐浴露,可营养皮肤,增强皮肤对疾病的抵抗能力;与蒲公英提取物合用,可治疗儿童及婴幼儿的湿疹及尿布疹.

从中医临床看,黄芪是一味好药,作用强大且独特,一般临床使用数十克后患者的脉象马上就会有反应,精神和体力会有改善,正确合理地使用则收效明显。但必须注意的是,它的副作用同样强大。

篇3

1、降血糖、促进机体新陈代谢、治外感风寒等。黄芪泡水喝可以有很多功效,可以降低血糖、促进机体的新陈代谢、治疗外感风寒等等。

2、另外黄芪也可以与党参泡水,用来补气、提高免疫力。与山楂一同泡水喝可以补气健脾、益气活血,与红枣一同泡水喝可以补气养血等等。

3、但是黄芪泡水也有一定的禁忌,比如一些阴虚体质的人不可以用黄芪泡水喝,可能会加重阴虚的症状。另外感冒、经期女性也不宜用黄芪泡水喝。

(来源:文章屋网 )

篇4

1、补气升阳、固表止汗。 黄芪具有补气升阳、固表止汗、托毒生肌、利水消肿的作用。

2、茯苓具有健脾除湿、利水消肿、除烦安神的作用,二者配伍煮水喝,作用相互协调补充,其作用明显增强。

3、黄芪通过补气而利水,茯苓通过健脾而利水,主要用于治疗神疲乏力、气短懒言、下肢浮肿、面目浮肿、水肿、咳嗽痰多、心悸气短、腹泻便溏并伴有不消化食物、头晕目眩、舌淡胖且有齿痕、脉沉或弱,可用于治疗慢性肾炎、肾病综合征、水肿辨证为气虚者,可以增加尿量、减轻水肿、减少尿蛋白、提高免疫功能。

(来源:文章屋网 )

篇5

[关键词] 黄芪注射液; 胰腺纤维化; 层粘连蛋白; 超氧化物歧化酶

[中图分类号] R255.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)03-03-03

Therapeutic Effect of Astragalus Injection on Chronic Pancreatitis

GUO Qiang ZHANG Bingtai LI Maolan REN Hui

Department of General Surgery,the Second Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China

[Abstract] ObjectiveTo investigate the therapeutic effect of Astragalus injection on rat chronic pancreatitis. MethodsThe laminin(LN)level and the superoxide dismutase(SOD) activity were detected in normal pancreas group(pancreas fibrosis group),control group and intervention group by using enzyme immunoassay(ELISA) and colorimetric method,and the pancreatic tissue was stained by using HE and its pathological change was observed. ResultsThe serum LN level was significantly higher and the SOD activity was decreased in the pancreas fibrosis group. The serum LN level was lower and the SOD activity was higher in the intervention group compared with the control group. ConclusionAstragalus injection has the role in the improvement of rat pancreatic fibrosis.

[Key words]Astragalus injection; Pancreatic fibrosis;Laminin;Superoxide dismutase

慢性胰腺炎是由于胆道疾病或酒精中毒等因素导致的胰腺实质进行性损害和纤维化,常伴钙化、假性囊肿及胰岛细胞减少或萎缩。主要表现为腹痛、消瘦、营养不良、腹泻或脂肪痢,后期可出现腹部包块、黄疸和糖尿病等。其病理生理过程复杂,以胰腺内成纤维细胞和细胞外基质(ECM)在胰腺组织内过多沉积为其特征[1]。传统的胰腺纤维化指标是LN的含量升高及SOD活性降低。我们采用光度酶联免疫分析法(ELISA)检测胰腺正常组、对照组、黄芪注射液小剂量组、中剂量组、大剂量组中的LN的含量及SOD的活性进行比较分析,以初步探讨其对胰腺纤维化的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选用雄性Spraque-Dawley大鼠50只,清洁级,体重200~250g,由上海斯莱克实验动物有限公司提供,饲养于山西医科大学动物实验中心。

1.2 主要试剂与药物

三硝基苯磺酸(TNBS)为Sigma公司产品(批号:107K5008)。黄芪注射液购于成都地奥九泓制药厂。LN试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。SOD试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.3 方法

1.3.1 模型建立 SD大鼠随机方法等分成5组,每组10只,分别为正常组、模型正常组、低剂量黄芪干预组(400mg/kg)、中剂量黄芪干预组(800mg/kg)、大剂量黄芪干预组(1600mg/kg)。除正常组外,其余4组大鼠术前禁食12h,胺碘酮(100mg/kg体重)腹腔注射麻醉,沿腹白线做正中切口,夹闭胰胆管近肝门端,通过恒流泵向十二指肠注射2%TNBS乙醇磷酸盐缓冲液0.4mL,1h注完,关闭恒流泵后维持压力10min,以防药物回流,手术过程严格无菌操作[2]。为防止大鼠脱水,每天皮下注射生理盐水2次,每次6mL,直至大鼠能自由饮水。术后禁食72h后给予常规饮食。于术后72h用不同剂量的黄芪肌肉注射至术后28d。

1.3.2 检测指标和方法 所有所有观察对象抽取静脉血,分离血清,置于-20℃低温冰箱中备用。实验前将血清置室温复溶,转离心,取上清液进行测定。采用光度酶联免疫分析法(ELISA)检测胰腺正常组、对照组、干预组中的LN的含量。SOD试剂盒采用黄嘌呤氧化酶法测其总活力。

1.4 统计学处理

实验数据应用SPSS11.0统计软件系统分析处理。各组间计量资料均采用(χ±s)表示。含量正常组和黄芪处理组的比较采用Dunnet t检验,各个黄芪处理组之间的比较采用LSD-t检验。

2 结果

2.1 胰腺组织病理学改变

对照组大鼠胰腺明显病理变化。模型组大鼠造模4周后,可见胰腺间质炎性细胞浸润,管周纤维组织增生,胰管增生扩张,管周及胰腺小叶间和小叶内纤维化伴炎症细胞浸润,局部腺体萎缩坏死,腺泡空泡样变。干预组较模型组纤维化程度明显减少。见图1、表1。将五组大鼠胰腺组织病理切片进行纤维化评分,发现模型组大鼠胰腺纤维化程度远远高于干预组,有显著差异。

2.2 胰腺血清中LN含量与SOD活性的变化

SD大鼠正常组与对照组比较,对照组发生明显的胰腺纤维化,LN的含量明显升高,SOD活性明显降低。黄芪干预组中胰腺纤维化程度减轻,小中大剂量组均使LN含量降低(P

2.3 黄芪干预组中各剂量组的疗效

见图2、3。

由图2可以看出,小、中、大剂量组的干预均有疗效,其中以大剂量组疗效最为明显。

3 讨论

近年来,随着胆道疾病发病率的上升,慢性胰腺炎的发病率亦呈现出上升的趋势。目前,虽然我们对于胆道疾病的治疗取得了很大的进展,但对于慢性胰腺炎依旧缺乏有效的治疗措施。慢性胰腺炎的临床结果是胰腺外分泌和内分泌功能的降低,但其病理生理基础却是胰腺的不断纤维化[3]。胰腺纤维化的形成有多种细胞因素的参与,与氧自由基、脂质过氧化产物等密切相关,黄芪有抗脂质过氧化、抗氧自由基的作用[4-5]。目前我们已经通过动物实验证实,黄芪对肝脏的纤维化具有治疗作用,而肝脏纤维化与胰腺纤维化在发病机制上类似,这为对慢性胰腺炎的治疗提供了理论依据[6]。

LN属结构性蛋白,存在于基底膜的透明层中,在胰腺纤维化时沉积于胰腺血窦,使胰腺血窦毛细血管化,增加胰腺窦阻力,使胰腺血清中LN含量增高[7],与胰腺纤维化密切相关。SOD是机体中抗氧自由基的关键酶类,对机体的氧化与抗氧化起着至关重要的作用,在胰腺中含量丰富,对胰腺抗氧自由基损伤有重要作用。

黄芪是扶正补气的中药,其主要成分是黄芪皂甙、黄芪多糖等,具有提高免疫功能,抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性,亦有报道黄芪有抗肝、肾、肺纤维化作用[8-9]。黄芪主要成份是黄芪总黄酮(TFA)、黄芪总皂甙(TPA)和黄芪总多糖(TSA)。有报道表明黄酮类物质抗氧化清除自由基的主要机理是酚轻基类基团在与过氧化物作用时,通过提供氢原子,发生氧化还原反应而发挥作用[10]。从Kitagawa等测定黄芪总皂甙的几种分子结构式可以看出,黄芪中的皂贰类成分为含有一个以上的酚轻基基团的多环状化合物,其结构与黄酮类化合物类似,黄芪中总黄酮和总皂甙类成分清除自由基,是其结构中的酚经基基团与自由基反应而发挥功效。我国学者刘星谐等认为黄芪总皂甙清除自由基作用的机理是由于含有以环黄芪醇为甙元的糖甙,这些糖甙与自由基发生反应,阻止了新的自由基生成,从而抑制机体氧化应激的作用,提高SOD活性抑制机体纤维化。

本实验通过研究不同浓度的黄芪注射液对大鼠慢性胰腺炎的干预,从而探讨黄芪注射液对慢性胰腺炎的治疗作用。大鼠胰腺组织病理形态学改变和胶原纤维染色分析结果均支持黄芪具有改善胰腺纤维化的作用。血清LN、SOD是反应胰腺纤维化的重要指标。大鼠慢性胰腺炎模型组中LN含量明显增高,SOD活性明显降低。分别用大、中、小三种剂量的黄芪对大鼠慢性胰腺模型进行治疗,经治疗后,三组均有疗效,均使LN含量降低,SOD活性升高。其中以大剂量组疗效最为明显,使LN含量、SOD活性最为接近正常水平。以上均进一步说明黄芪注射液可通过多途径延缓胰腺纤维化的发生,有较好的预防效果,临床应用能较好地防止胰腺纤维化的发生发展,对慢性胰腺炎有较好的治疗作用。

[参考文献]

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[9] 杨映雪,陈建业,王亚. 黄芪总黄酮的抗氧化作用[J]. 川北医学院报,2007,6(22):606-608.

篇6

目的观察黄芪党参蘑菇煎在大肠癌患者化疗时的协同作用。方法将51例大肠癌病人随机分为实验组(黄芪党参蘑菇煎加lfp方案)和对照组(单纯lfp方案),将两组的疗效、毒性、对化疗的耐受性、生活质量改善情况进行对比。结果提高生存质量,提高kps评分,提高率、稳定以上率分别是55.6%,92.6%。一般症状改善,尤其食欲增加、睡眠改善实验组更为明显。增加化疗药物的疗效,受益率(cr+pr+sd)比较有意义。保护骨髓,维护造血功能,治疗后白细胞的数量为(4.19±0.45)×109/l,治疗前后白细胞的数量增长的比较有意义。结论黄芪党参蘑菇煎治疗大肠癌,可以抵御化疗的副作用,增加食欲改善体质、保护脏器功能,缓解肿瘤的不适症状等。 【关键词】  黄芪党参蘑菇煎; 植物多糖; 大肠癌; 中西医结合

黄芪党参蘑菇煎剂是多种植物多糖复合物,多糖是水溶性的葡聚糖,属于免疫增强剂或称生物反应调节剂,参与免疫多环节活动,能抵御许多损伤因子对机体的破坏,有双向免疫调节的作用,促使因癌症或感染引起的体内平衡失调的恢复,并增强患者对化疗的敏感性、耐受性,减低化疗的毒副反应[1]。我们对51例大肠癌术后患者,进行随机对照研究,以比较植物多糖复合物加lfp方案与单纯lfp方案的疗效、毒性、对化疗的耐受性、生活质量改善情况。现报道如下。

1  材料与方法

1.1  病例选择

200401~200605我们将收治的大肠癌术后病人(均有病理学证实)随机分成实验组(黄芪党参蘑菇煎剂辅助化疗)和对照组(单纯化疗);术后15~40 d开始首次化疗;肝肾功能及血常规正常;karnofsky评分:>60分。实验组27例,男15例,女12例;年龄20~72岁,平均年龄50岁。组织学类型:状腺瘤3例,管状腺瘤4例,粘液腺癌3例,未分化癌7例,腺鳞癌8例,鳞状细胞癌2例;临床分期:a期8例,b期11例,c期8例。对照组24例,男13例,女11例;年龄30~68岁,平均45岁。组织学类型:状腺瘤 3例,管状腺瘤4例,粘液腺癌3例,未分化癌5例,腺鳞癌6例,鳞状细胞癌3例;临床病理分期:a期5例,b期10例,c期9例[2]。

1.2  给药方法

对照组全部采用lfp方案:cf 150 mg,1次/d,连用5 d;5-fu 500 mg/m2,1次/d,连用5 d;pdd 30 mg/m2 ,1次/d,连用3 d。此方案为每4周为1周期,重复2个周期。实验、对照两组均用上述相同方案,实验组另加黄芪党参蘑菇煎。以1 000 ml开水浸泡250 g普通蘑菇30 min浸泡液,煎煮黄芪50 g,党参30 g,茯苓20 g,枸杞20 g,女贞子20 g,40 min取汁口服,1/d,连用两个月。两组均于每日输注能量合剂+门冬氨酸钾镁,化疗前15 min静脉注射恩丹西酮。

1.3  近期观察

主要观察治疗效果(以自我感觉为主),化疗毒副反应的程度,患者对化疗的耐受情况。每次化疗前后记录症状、体征、大小便的改变,查血尿常规和肝肾功能心肌酶、心电图,毒副反应根据who制定的常见抗癌药物急性评及亚急性评分标准进行分度。

1.4  可行性分析

年龄、临床分期、病理类型,两组间差异均无显著性(p>0.05)。结果见表1~3。表1  性别与年龄分布情况例(略)表2  肿瘤种类、肿瘤病理类型及临床分期例(略)表3  卡氏评分例(略)

2  治疗效果

2.1  近期效果

2.1.1  一般状况见表4。表4  一般状况改善情况例(略)

2.1.2  kps的评分 见表5。表5  kps的评分(略)

2.1.3  两组化疗结果见表6。表6  两组化疗结果(略)

2.2  毒副反应以患者各疗程前后血常规结果作为观察依据,结果见表7。可见减轻白细胞的降低程度,耐受化疗损伤,完成化疗。表7  周围血细胞计数(略)

3  讨论

    大肠癌病人的生存期是诸多肿瘤类型较长的,但是患者大肠癌术后复发和转移是治疗失败、病人死亡的主要原因,化疗是预防复发和转移的主要手段,据中医药的文献报道的治疗效果,中医药不仅限于生物调节范畴,中医药在治疗机理有着积极的一方面,寄托着治愈肿瘤的希望。为求延长肿瘤患者的生存期限、生存质量的目的,设计实验观察治疗组采用黄芪党参蘑菇煎联合lfp;对照组单纯应用lfp[3,4]进行研究。

    我们的组方是按照中西医结合原则,针对肿瘤的病机脾胃阳虚、气血不足,选择温补脾胃、益气血的中药,且富含有多糖的药物如黄芪、党参、枸杞、女贞子、茯苓、麦冬,加含多糖类食用菌蘑菇,这样组方相得益彰,共同发挥疗效。

    黄芪党参蘑菇煎剂是多种植物多糖复合物,本研究临床观察结果表明,在大肠癌术后临床辅助治疗中,口服黄芪党参蘑菇煎剂配合化疗试验结果具有以下优点:

    ①提高生存质量,kps提高、稳定例数分别是15,10例,提高率、稳定以上率分别是55.6%,92.6%。神疲乏力、恶心呕吐、食欲不佳、肿瘤引起的不适缓解、睡眠改善,黄芪党参蘑菇煎组较化疗组为好,尤其食欲增加、睡眠改善更为明显。

    ②增加化疗药物的疗效,经比较cr(完全缓解)、pr(部分缓解)、sd(无效)、pd(恶化),有效率(cr+pr)达到44%,受益率(cr+pr+sd)达到80%。

    ③保护骨髓,维护造血功能。治疗前白细胞的数量为(4.81±0.47)×109/l,治疗后白细胞的数量为(4.19 ± 0.45)×109/l,治疗前后白细胞的数量比较有意义。治疗过程中外周血红细胞、白细胞、血小板皆在化疗后下降,粒系细胞周期短易受细胞毒性药物影响而抑制表现下降出现时间早,回升速度快,联合使用黄芪党参蘑菇煎具有促进、保护骨髓、减少细胞毒性药物的损伤,可以在短期内回升见效明显快。

   

从中医角度分析,大肠癌患者属中医“癥瘕”“肠癖”病范畴,辨证多是邪毒内蕴、脾胃两伤虚实夹杂状态,因此在手术后择期化疗攻邪为主治疗的基础上,加用补益(免疫调节剂)辅助治疗获收裨益,黄芪党参蘑菇煎具有益气养阴的作用,气虚得以补充脾气则健而胃肠消化功能、免疫功能得以调整、逆转免疫抑制状态,调节机体对肿瘤反应性,表现乏力气短缓解、食欲食量改善,体重增加,阴液得以滋润则夜间睡眠延长、低热消除、肿瘤的不舒适状况如大便次数性状趋于正常、改变手术放疗造成机体虚弱,显示了中西医结合扶正祛邪在肿瘤化疗中具有一定的辅助作用[5~8]。

    治疗肿瘤以扶正祛邪为总纲贯穿始终:补要择时,即重在早用;补要守法,长期用药;补要勿滞,少加理气药,使补中有通;补忌实实,选用祛邪药物,使正气得以辅助,邪气得以驱除。

    抗转移、抗复发有待以后研究长远疗效的观察。

4  结论

    中药包括黄芪党参蘑菇煎治疗肿瘤,可以增加食欲改善体质、保护脏器功能,改善肿瘤的不适症状等,故笔者建议肿瘤专家,从中医治疗肿瘤扶正祛邪两方面机理进行多方面、多层次研究,将研究成果综合应用,选择治疗效果相同、所含有效成分不相同的药物,按中医理法方药组成方剂,应用于肿瘤病人的治疗,以取得更佳治疗效果。

【参考文献】

 

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[6]潘明继,李永辉,刘景荣,等.中西医结合治疗260例中晚期大肠癌的疗效观察[j].中医杂志,1996,37(4):218.

篇7

[关键词] 黄芪;乳鼠心肌细胞;组织化学;生化检测;透射电镜

[中图分类号] R282.71[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2008)12(b)-011-03

Experimental study of Astragalus on protective effect of in vitro cultured myocardial cells

LI Hong-zhe1 ,JIN Xiang-zi2

(1.Yanbian Tumour Hospital, Yanji133000, China; 2.Yanbian University College of Medicine, Yanji133000, China)

[Abstract] Objective: To observe the protective effect of Astragalus on in vitro cultured myocardial cells suffering hypoxia-hypoglycemia-induced injury. Methods: Myocardial cells were performed by primary monolayer culture, then the morphological changes, biochemical data change and ultrastructural morphology change of the myocardial cells were observed. Results: The cell injury of the myocardial cells in drug group and control group of drugs significantly recovered. Conclusion: Astragalu shows a marked protective effect on in vitro cultured myocardial cells suffering hypoxia-hypoglycemia-induced injury.

[Key words] Astragalus; Rat myocardial cells; Histochemistry; Biochemistry detection; Transmission electron microscope

黄芪为豆科植物膜荚黄芪[Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge]、蒙古黄芪[Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.var.mongholicus(Bge).Hsiao]的干燥根,又称北芪、元芪或黄耆。豆科,多年生草本。味甘,微温,具有补气固表、托疮生肌、利水的功效,主治气血虚弱、自汗、久泻脱肛、子宫脱垂、肾炎水肿、蛋白尿、糖尿病、慢性溃疡等症。近年来临床用来治疗高血压和急慢性肾炎。被历代医家认为是补药之长。近代研究表明,黄芪具有增强免疫功能、抗衰老等作用[1,2]。

本实验从细胞生物学水平探讨了黄芪水提物对培养乳鼠心肌细胞的保护作用及其作用机制,为开发黄芪提供科学实验及科学理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

Wistar大白鼠乳鼠1~5日龄,雌、雄兼用,由延边大学医学部实验动物科提供;黄芪:由延边大学医学部植物化学教研室提供,用RPMI 1640培养基配成大剂量1 000 μg/ml,中剂量800 μg/ml,小剂量600 μg/ml,经过筛选,800 μg/ml为本实验适宜剂量浓度,过滤除菌,用于实验;人参皂苷:由延边大学医学部天然药物学教研室提取的白色粉末,纯度为85%,用RPMI 1640培养基配成300 μg/ml,过滤除菌,用于实验;RPMI 1640培养基:日本株式会社产品;超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒:南京建成生物工程研究所提供;丙二醛(MDA)试剂盒:南京建成生物工程研究所提供;胶原酶:美国Sigma化学公司产品;胰蛋白酶:美国DIFCO公司产品;四氯化碳:北京化学试剂厂产品;小牛血清:长春生物制品厂产品;CO2培养箱:美国产;超净工作台:上海净化设备厂制造;德国 Leica820型组织切片机;日本Olympus VANOX型万能显微镜;722光栅分光光度仪:厦门分析仪器厂LKB2088型超薄切片机:瑞典JEM-1200 EX型透射电镜:日本产ZK 15低温高速离心机:Sigma产品;MK-3酶标仪:芬兰雷勃集团;TD-2000型真彩病理细胞显微分析系统:北京天地百年科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 原代单层乳鼠心肌细胞培养方法乳鼠心肌细胞培养方法:采用姜玉顺等[3]的方法。取1~5日龄Wistar大白鼠乳鼠,在无菌条件下取心脏,0.06%胰蛋白酶进行冷消化,经过离心制成细胞悬液,接种后,原代单层培养至5~7 d用于实验。

1.2.2 实验分组取细胞生长良好的培养瓶40瓶,分为4组,即正常对照组:每隔3 d更换一次培养液;模型组:制备的缺糖缺氧损伤模型组;实验组:缺糖缺氧组内加入800 μg/ml黄芪;药物对照组:缺糖缺氧损伤模型组内加入0.5%人参总皂苷2滴(相当于生药0.5 mg)。

1.2.3 缺糖缺氧损伤模型的制备将生长良好的培养心肌细胞按上述分组以后,去掉培养液,放入自制缺氧盒中持续通入高纯氮气(99%)40 min,然后取高纯氮气饱和的培养基加入培养瓶中,同时向瓶内充氮气30 s,置换瓶内空气,在37℃恒温培养箱中密闭培养12 h后备用。

1.2.4 组织化学观察培养5~7 d,取生长良好的培养瓶40瓶分为4组。然后将各组在37℃恒温箱内继续培养60 min,取出生长盖玻片,显示琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、PAS法显示糖原等。酶组织化学反应按酶反应的着色深浅、颗粒的多少分为阴性、弱阳性、阳性、中等阳性、强阳性,用Olympus相差显微镜观察并摄片。

1.2.5 生化检测

1.2.5.1 培养液中LDH活性测定取生长良好的肝细胞培养瓶40瓶,分为正常对照组、模型组、实验组及药物对照组。将生长在培养瓶中的肝细胞用滴管吹打的方法取下来,1 000×g离心5 min,取上清液,按试剂盒说明测定各管吸光度。LDH活力=[(测定管-测定空白管)/(标准管-标准空白管)]×2 000(U/L)。

1.2.5.2 SOD活性及MDA含量测定轻轻吹打并刮脱生长在培养瓶壁的细胞,制成细胞悬液,用超声波粉碎机打碎细胞,每次10 s,4次,2 500×g离心15 min,取上清液,用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,用TAB法测定MDA含量。

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1.2.6 电镜标本制备取生长良好的培养瓶分为正常对照组、模型组、实验组、实验对照组。先将培养的心肌细胞用0.1 mol/L磷酸缓冲液洗3次,2.5%戊二醛、1%锇酸分别固定30 min,取生长盖玻片以递增浓度的丙酮脱水,EPON定向包埋,37℃、45℃、60℃分别聚合12、24、36 h,用LKB 2088型切片机切成60 nm的超薄切片,醋酸铀和枸橼酸铅染色,JEM-1200 EX型透射电镜观察并摄片。

1.3 统计学方法

数据以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS 11.5统计软件,利用方差分析及t检验进行数据分析处理。P<0.05表示差异有统计学意义,P<0.01表示差异有高度统计学意义。

2 结果

2.1 心肌细胞形态学观察

在倒置相差显微镜下观察各组心肌细胞。正常心肌细胞生长良好,心肌细胞数量多,细胞饱满,细胞突起较长,相邻细胞相互交织成簇生长,可见规律搏动。缺糖缺氧心肌细胞数量明显减少,细胞皱缩,细胞足突消失,细胞间耦联被破坏,出现微弱不规律的搏动。实验组与药物对照组和模型组比较,心肌细胞数量明显增多,细胞突起较长,可见相互交织成簇生长的心肌细胞团,搏动有规律且有力。

2.2 SOD活性及MDA含量的影响

实验组及药物对照组心肌细胞的SOD活性明显高于缺糖缺氧组(P<0.01),MDA含量明显低于缺糖缺氧组(P<0.01)。

2.3 LDH活性的影响

模型组的培养液中LDH活性比正常对照组显著增高(P<0.01),而实验组与药物对照组的LDH活性均较模型组明显降低,差异有高度统计学意义(P<0.01)。

2.4 黄芪对缺糖缺氧培养心肌细胞糖原含量的影响

用PAS法显示心肌细胞糖原,正常对照组心肌细胞胞质内充满深紫红色糖原颗粒,染色深,为强阳性。模型组心肌细胞胞质内几乎无糖原颗粒,染色浅,为弱阳性。实验组与药物对照组心肌细胞PAS反应均较模型组明显增强,胞质内糖原颗粒明显增多,染色深,呈强阳性。

2.5 黄芪对缺糖缺氧培养心肌细胞SDH活性的影响

正常对照组心肌细胞SDH活性为强阳性,染色深,蓝紫色沉淀颗粒分布均匀;模型组心肌细胞SDH活性明显减弱,为弱阳性,染色浅,蓝紫色沉淀颗粒明显减少;实验组与药物对照组心肌细胞SDH活性与模型组相比,其活性明显增强,呈强阳性,染色深,胞质内蓝紫色沉淀颗粒明显增多。

2.6 黄芪对缺糖缺氧培养心肌细胞LDH活性的影响

正常对照组心肌细胞 LDH活性为阳性,染色浅,胞质内棕黄色颗粒分布均匀。模型组心肌细胞 LDH活性明显增强,染色深,为强阳性,胞质内有大量棕黄色沉淀颗粒堆积。药物对照组及实验组心肌细胞ACP活性明显减弱,染色较浅,为阳性,胞质内棕黄色颗粒比模型组明显减少。

2.7 透射电镜观察

正常对照组心肌细胞,线粒体呈圆形或杆状,双层膜及嵴清楚可见,高尔基复合体可见,模型组心肌细胞质内,线粒体肿胀,嵴断裂,双层膜结构不清,高尔基复合体囊腔塌陷、变细。但是,实验组与药物对照组心肌细胞内上述变化均明显恢复,线粒体双层膜与内膜嵴清楚可见,高尔基复合体呈扁平囊状。

3 讨论

黄芪及其衍生物具有广泛的药理活性,临床上常用于防治脑溢血、高血压、视网膜出血、紫瘢、急性出血性肾炎、慢性气管炎、血管发脆、血管渗透压不正常等病症,同时还可预防和治疗糖尿病及合并高脂血症,对心、肾、脑等器官的缺血再灌注损伤具有保护作用,其治疗慢性支气管炎总有效率为84.4%。在食品工业中可作为抗氧化剂和天然食用黄色素[4,5]。SOD为直接清除自由基的酶,可阻断自由基促使产生LPO的链式反应,从而保护细胞不受自由基的损害。黄芪能增强SOD的活性,降低MDA含量,提高清除自由基的能力,减缓培养心肌细胞受自由基的攻击。而本实验用生化检测的方法检测出的SOD活性及MDA含量说明,黄芪可提高心肌细胞SOD的活性,清除自由基,并抑制脂质过氧化作用,保护心肌细胞免受缺氧损害[6,7]。

由本实验结果可见,黄芪能促进糖原合成,抑制糖酵解,从而减少糖原分解。它能抑制心肌细胞的糖酵解,减少糖原分解,促进糖原合成,并且纠正糖酵解过剩导致的细胞内酸中毒,阻碍细胞膜和膜性结构的过氧化作用,使损伤的心肌细胞也能在一定程度上纠正缺氧心肌细胞糖酵解过盛造成的细胞内酸中毒。

黄芪中的黄酮类能使受损的心肌细胞从结构和功能得以恢复的机制,与其具有抗脂质过氧化损伤和清除自由基能力及有稳定细胞膜和膜性结构的作用有关。因而对黄芪的生物活性有待于进一步深入研究。

[参考文献]

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[3]姜玉顺,金美善,吴耕书,等.乳鼠肝细胞的体外培养及组织化学观察[J].延边医学院学报,1988,11(4):253.

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[7]曹春梅,张雄,陈莹莹,等.不同用途的心室肌细胞的分离[J].浙江大学学报(医学版),2003,32(1):51-55.

篇8

【关键词】 黄芪总苷/药理学;,,受体,胃肠激素;,,脾虚;,,疾病模型,动物;,,大鼠

摘要:【目的】观察黄芪总苷(AST)对脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数变化的调控作用。【方法】SD大鼠采用胃饲大黄液(10?g/kg)方法复制脾虚模型;采用Lewin胃袋法及Percoll密度梯度纯化法分离与纯化大鼠胃粘膜壁细胞;按10、20、30?g/L设AST低、中、高剂量组,在每2?mL脾虚模型大鼠胃壁细胞悬液中加入AST 20?μL体外孵育,并设正常对照组与模型组;采用放射配基结合法检测壁细胞胃泌素受体结合位点数。【结果】模型组壁细胞胃泌素受体结合位点数下降,与正常对照组比较具有显著性差异(P<005);AST高剂量组可上调胃泌素受体结合位点数,与模型组比较具有显著性差异(P<005)。【结论】黄芪总苷可增加脾虚模型大鼠因脾虚而降低的胃壁细胞胃泌素受体结合位点数,可能是黄芪发挥益气健脾作用的主要有效成分(部位)。

关键词:黄芪总苷/药理学; 受体,胃肠激素; 脾虚; 疾病模型,动物; 大鼠

黄芪是补中益气汤中的君药。既往研究显示补中益气汤对大黄所致“脾虚”大鼠低下的泌酸功能有一定的提升作用[1];采用黄芪注射液腹腔注射对大黄、利血平所致的“脾虚”大鼠降低的胃壁细胞胃泌素受体结合位点数有提升作用[2-3]。作为黄芪主要有效部位的黄芪总苷(astragalosides,AST),是否也能调节胃壁细胞的胃泌素受体结合位点数尚未见相关报道,本实验试图观察AST的这一作用。

1 材料与方法

11 动物

SD大鼠,雄性,体质量190?g~230?g,购自广东省卫生厅实验动物中心,合格证号:0005609。

12 主要仪器和设备

3K30高速冷冻离心机(Sigma);XDS1倒置生物学显微镜(重庆光学仪器厂);HYS4型多头细胞收集器(上海跃进医疗器械厂);2XZ05型旋片真空泵(浙江临海市精工真空设备厂);DP5500型γ计数器(Beckman)等。

13 主要试剂与药品

链霉蛋白酶(Pronase,Boehringer Mannheim);牛血清白蛋白(BSA,华美生物工程公司);乙二胺四乙酸(EDTA,汕头市化学试剂厂);羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES,Pharmacia);二硫苏糖醇(DTT,华美生物工程公司);硅化聚乙酰胺吡咯烷酮(Percoll,Pharmacia);胃泌素标准品(纯度为97%,Sigma);125I胃泌素(比活度为629×108?Bq・mol-1・L-1,放化纯度为963%,批号为200503,中国原子能科学研究院同位素室提供);黄芪总苷由上海沪丰生物科技有限公司研究所提供,批号为20041021,含黄芪甲苷1021%;大黄由广州中医药大学第一附属医院药剂科提供,经鉴定为唐古特大黄;其他化学品均为国产分析纯。

14 动物分组与造模[4]

SD大鼠随机分成正常对照组、脾虚模型组。模型组以大鼠1?kg/L大黄液灌胃(10?g/kg),2次/d,连续14?d;各组动物常规喂养,自由饮水。第15天上午处死,实验前不禁食。

15 大鼠胃壁细胞的分离与纯化[5]

采用胃袋法分离大鼠胃壁细胞,经Percoll纯化后,台盼兰排除试验鉴定,细胞活率可达到95%,细胞涂片苏木素―伊红(HE)染色后鉴定细胞纯度可达70%~75%,调整细胞浓度为?2×106/L。

16 黄芪总苷的体外孵育

设AST高、中、低3个剂量组,用9?g/L生理盐水配成浓度分别为10、20、30?g/L,在每2?mL脾虚模型大鼠胃壁细胞悬液中加入AST?20?μL,正常对照组及模型对照组则加入PBS?20?μL;37℃孵育30?min,并振荡100?r/min,1?000?r/min离心5?min,弃去上清,用Medium?C(MC)液重新混悬,并保持2?mL的体积,进行放射配基结合实验。 转贴于 17 放射配合结合实验[6]

根据既往基础试验确定125I?胃泌素饱和终浓度为100?pmol/L,并以此为基础进行单点结合实验,求出各组大鼠胃壁细胞特异结合位点数。每样品均做总结合管(TB)、非特异性结合管(NSB)两组复管,加样后37℃孵育30?min,加冷MC液720?μL中止反应,迅速用多头细胞收集器抽滤至玻璃纤维滤膜,并用冷MC液每管2?mL淋洗滤膜3次。烘干滤膜后,用统一打孔器将滤膜打孔,并置于一次性塑料测定管中进行γ计数。胃泌素受体放射配基结合实验中总结合管(TB)、非特异性结合管(NSB)的加样顺序见表1。

18 壁细胞胃泌素受体结合位点数(n)的检测

根据放射配基结合实验所检测nTB与nNSB之差计算特异性结合nSB,再以nSB与仪器计数效率(70%)之比计算n蜕变,以n蜕变与标记物放射性比活度α之比与ncell之积计算结合容量,然后根据结合容量进一步计算得出壁细胞结合位点数,计算公式如下:nSB=nTB-nNSB,n蜕变=nSB/07,结合容量=(n蜕变/α)×222×106×ncell,壁细胞结合位点数n=结合容量×602×1014。

19 统计分析

采用SPSS?110统计软件,以Compare Means:oneWay ANOVA(multiple compare)方法进行统计。 表1 胃泌素受体放射配基结合实验的加样顺序

2 结果

21 一般表现

造模结束后,大黄“脾虚”模型大鼠出现如下表现:腹泻明显,大便稀软不成形,带黄色黏液,扎堆,活动减少,进食减少,被毛枯黄无光泽,眼部分泌物多,喜欢闭眼;但体质量减轻不明显。

22 胃泌素受体放射配基结合实验测定的结果

大黄“脾虚”大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数低于正常对照组;采用黄芪总苷体外孵育,对其具有上调作用,并呈现剂量依赖趋势。结果见表2。 表2 AST对大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数(n)的作用

3 讨论

胃泌素(gastrin)是一类能引起胃酸分泌的胃肠道多肽激素。胃泌素通过与壁细胞膜上的胃泌素受体结合发挥生理活性,在胃肠黏膜疾病中起着双重作用:它既能刺激胃酸的分泌,又能刺激胃黏膜细胞的生长,维持黏膜的完整性。胃泌素与其受体的正常结合是壁细胞发挥泌酸功能的前提,而胃泌素受体的活化又是胞内信号传递的直接前提[7]。因此,对胃泌素受体结合位点数的影响可能是药物作用的一个重要中间环节。

脾虚证主要表现为消化系统为主的多系统、多器官的功能低下。作为胃黏膜泌酸、营养及生长的主要激素,胃泌素与受体及受体后的信号传递与脾虚证关系密切,两者可能为脾虚证在消化系统的一个重要的病理表现。不少健脾益气、调理脾胃方药对胃泌素有明显的调节作用[7]。因此,推测胃泌素及其受体很可能是一些健脾益气方药对消化系统病证发挥药理作用的重要靶点之一。

已有的研究显示,黄芪在体外对125I标记胃泌素与受体的结合具有促进作用,在体内对脾虚证胃泌素受体具有向上调节作用[8]。还有研究表明[2],大黄脾虚模型大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数低于正常大鼠,经黄芪注射液治疗后,其外观症状得到一定程度恢复的同时,壁细胞胃泌素受体结合位点数也增加。

近年来,人们对AST的药理作用及其机制做了大量研究,发现AST具有抗病毒、肝保护、改善心脏功能、抗炎镇痛等方面的作用[7]。本实验对大黄脾虚大鼠模型胃壁细胞采用AST不同浓度体外孵育,结果显示AST对因脾虚降低的胃泌素受体结合位点数有上调作用,并呈现剂量依赖趋势。

综上所述,黄芪和AST均能增加因脾虚而降低的壁细胞胃泌素受体结合位点数,推测胃泌素受体可能参与了脾虚证的病理过程,而黄芪的作用是通过调节胃泌素受体结合位点数,并通过胃泌素受体所介导的分泌、营养和促生长效应而实现的,其中黄芪总苷则可能是黄芪这一作用的主要有效成分(部位),该结论有待进一步研究证实。

参考文献

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[2]聂克,王汝俊,王建华,等.脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合容量及黄芪对其调控作用[J].中药药理与临床,2000,16(Suppl):39.

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[6]徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].第2版.北京:人民卫生出版社,1991:349,277.

篇9

【Abstract】 AIM: To investigate the protective effects of Astragalus (AS) on cardiomyocytes against hydrogen peroxide (H2O2)induced injury. METHODS: Cultured neonatal cardiomyocytes were pided into three groups: ① Normal group; ② H2O2 group, in which cells were treated with H2O2(0.2 mmol/L) for 1 h; ③ AS+ H2O2 group, in which cells were pretreated with AS(with final concentration of 200 mg/mL)30 min before H2O2 treatment. Colorimetric assay was used to detect the mitochondrion activity, lactate dehydrogenase (LDH) activity, superoxide dismutase (SOD) activity and malonaldehyde (MDA) content. RESULTS: After treatment with H2O2, the mitochondrion activity was significantly reduced to 0.36±0.04 compared with that of normal group while the LDH activity was (27.4±3.2)μkat/L, significantly higher than that of normal group. SA pretreatment markedly increased the mitochondrion activity to 0.50±0.05 and reduced LDH activity to (16.4±1.8)μkat/L. Cells treated with H2O2 had a lower SOD activity of (231±22) μkat/L and a higher MDA content of(16.1±3.0)μmol/L compared with those of normal cells. Cells of SA+H2O2 group had a higher SOD activity of (331±40)μkat/L and a lower MDA content of (10.7±2.4)μmol/L compared with those of H2O2 group. CONCLUSION: SA can protect cardiomyocytes from H2O2 injury by improving cell antioxidant ability.

【Keywords】 Astragalus membranaceus, myocardium/cytology; hydrogen peroxide

【摘要】 目的: 探讨中药黄芪(Astragalus, AS)对培养的心肌细胞氧化性损伤的保护作用及其机制. 方法: 体外培养的新生大鼠心肌细胞,分为3组: ① 对照组(Normal组);② H2O2组: H2O2 (0.2 mmol/L)与心肌细胞共育1 h;③ 黄芪+H2O2组: 黄芪处理心肌细胞30 min后,加入H2O2与心肌细胞共育1 h. 心肌细胞损伤以细胞线粒体活性和乳酸脱氢酶(LDH)活性来表示,同时检测心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,均以比色法检测. 结果: H2O2处理细胞后可使细胞LDH活性显著增高(27±3) μkat/L,细胞线粒体活性明显下降0.36±0.04,SOD 活性较正常细胞显著下降(231±22)μkat/L,MDA含量显著增高(16±3)μmol/L. 黄芪处理细胞后可显著提高心肌细胞线粒体活性0.50±0.05,降低LDH活性(16.4±1.8) μkat/L;并提高细胞抗氧化能力,表现为较H2O2处理组,SOD活性增高(331±40) μkat/L,MDA含量下降(10.7±2.4)μmol/L. 结论: 黄芪可对抗H2O2对心肌细胞的损伤,其机制与提高心肌细胞抗氧化损伤能力有关.

【关键词】 黄芪;心肌/细胞学;过氧化氢

0引言

黄芪(Astragalus,AS)自古以来就被《神农本草经》列为上品,它含有多糖、甙、黄酮和微量元素等多种成分,近来的研究表明黄芪对肾病、心脑血管疾病和免疫系统疾病均有较好的疗效,尤其广泛用于心肌缺血时的辅助治疗,但其作用机制尚不明确. 心肌缺血再灌注是治疗缺血性心脏时不可避免的损伤,其中氧化自由基损伤是一个主要的原因. 本实验中我们以体外培养的大鼠乳鼠心肌细胞为基础,以过氧化氢造成氧化自由基损伤模型[1],观察黄芪处理细胞后对H2O2损伤的抵抗作用.

1材料和方法

1.1材料

1~3 d龄新生SD大鼠仔鼠购于第四军医大学实验动物中心. 四甲基偶氮唑蓝(MTT)购于Sigma公司. 黄芪注射液(2 g/mL, 970806)购于上海福达制药有限公司. 胎牛血清、高糖Dulbecco 最低必需培养液(DMEM)购于Hyclone公司. LDH, SOD, MDA检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所.

1.2方法

1.2.1心肌细胞培养取1~3 d SD仔鼠,在其剑突下剪开十字切口,取下心脏,磷酸缓冲液(PBS)冲洗后,将心肌组织剪碎经1 g/L胶原酶消化,收集消化后的悬液,加入少量含100 mL/L胎牛血清(FCS)的高糖DMEM,1000 r /min离心5 min,弃去上清,以高糖DMEM悬浮,接种于10 cm培养皿中,用差速贴壁法于37℃, 50 mL /L CO2孵箱中培养45 min. 将培养液离心,再次接种于含100 mL/L胎牛血清的DMEM中,细胞密度约为5×105/L. 24 h后,换为不含血清的高糖DMEM培养液. 取生长72 h的心肌细胞进行实验研究.

1.2.2实验分组心肌细胞分别接种于24孔板和96孔板,每组6孔. 实验分为: ① 正常对照组(Normal组):心肌细胞不做任何处理; ② H2O2组: H2O2(0.2 mmol/L)与心肌细胞共育1 h;③ 黄芪+H2O2组: 心肌细胞加入终浓度为200 g/L的黄芪注射液孵育30 min,再加入H2O2孵育1 h.

1.2.3检测指标① 心肌细胞形态学变化: 在倒置显微镜下观察细胞生长状态、细胞形状及收缩性. ② MTT比色法检测心肌细胞线粒体活性: 与实验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照孔,比色时以空白孔调零. 心肌细胞线粒体活性以570 nm处(A)值表示. ③ 心肌细胞培养上清LDH(乳酸脱氢酶)活性检测: 取细胞培养上清50 μL,按照试剂盒说明操作,反应后440 nm处测各管吸光度A值. ④ 心肌细胞培养上清SOD(超氧化物歧化酶)活性和MDA(丙二醛)含量检测: SOD活力测定采用黄嘌呤氧化酶法;MDA测定采用硫代巴比妥酸比色法. 取心肌细胞培养上清50 μL,按照试剂盒说明进行. 转贴于

统计学处理: 所有数据均以x±s表示,应用非参数秩和检验法进行组间比较,P

2结果

2.1心肌细胞形态学改变倒置显微镜下观察正常心肌细胞生长融合成片状,有规律搏动. 而H2O2组心肌细胞部分细胞皱缩,搏动减慢,幅度减弱,并且不规则. 黄芪注射液+H2O2组心肌细胞在细胞形状、搏动方面与正常组心肌细胞无明显差别.

2.2心肌细胞线粒体活性和LDH活性H2O2处理心肌细胞后其线粒体活性较正常心肌细胞下降,但其培养上清LDH活性显著增高(P

2.3心肌细胞SOD和MDA活性H2O2处理心肌细胞后其SOD活性较正常心肌细胞下降,但其MDA活性显著增高(P

3讨论

过氧化自由基对心肌细胞的损伤已越来越引起人们的重视. 心肌缺血再灌注损伤是心血管内外科常见的而又不可避免的心肌损伤,目前尚无有效的防治措施,而心肌缺血再灌注时氧自由基损伤起了主要作用[2]. 心肌细胞缺氧时,ATP生成减少,分解增多,导致ADP、AMP增加,后者降解为次黄嘌呤,而次黄嘌呤正是产生氧自由基(oxygen derived free radical,ODFR)的底物. 在氧供不足时,黄嘌呤脱氢酶可在钙依赖蛋白酶的作用下迅速转化为黄嘌呤氧化酶. 因此细胞已具备了产生ODFR的底物(次黄嘌呤)和催化底物产生ODFR的酶(黄嘌呤氧化酶),为氧自由基的产生准备好了条件,一旦细胞通过复氧或再灌注得到氧供,就会触发和促进ODFR的生成. 氧自由基具有强烈引发脂质过氧化作用,可引发链式脂质过氧化反应,它们几乎可以同任何细胞成份发生反应,从而达到损伤细胞的目的. 因此,ODFR具有相当高的生物毒性. 在正常情况下有少量ODFR生成并无关大局,因为细胞内存在有SOD[3],过氧化氢酶(catalase, CAT),以及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSHps),这些酶能及时将体内过剩的ODFR还原成水而被清除. 但是当ODFR的产生量超过了其清除能力时就会引发自由基损伤[4]. 因此,如何提高心肌细胞抗氧化自由基损伤能力是防治心肌缺血再灌注损伤的关键.

实验中观察到H2O2处理细胞后,LDH活性明显升高,心肌细胞线粒体活性显著降低,表明H2O2有显著的心肌细胞毒性作用. 而预先给予黄芪注射液则可显著减轻H2O2对心肌细胞的损伤作用. 同时观察到H2O2处理细胞后MDA活性增高,而SOD活性下降,表明心肌细胞抗氧化自由基损伤能力下降,细胞发生了氧自由基损伤,而黄芪注射液可显著降低心肌细胞MDA含量,升高SOD活性,而提高心肌细胞抗氧化损伤能力.

综上所述,黄芪注射液可以通过提高心肌细胞抗氧化损伤能力,而对抗H2O2活性氧自由基对心肌细胞的损伤作用. 为临床上应用黄芪注射液辅助治疗缺血性心脏病提供了理论依据.

【参考文献】

[1] 郑延松,李源,张珊红,等. 用低浓度过氧化氢建立心肌细胞氧化损伤模型[J]. 第四军医大学学报,2001; 22(20):1849-1851.

Zheng YS, Li Y, Zhang SH, et al. Experimental model of H2O2 induced oxidative injury in cardiomyocytes [J]. J Fourth Mil Med Univ, 2001; 22(20):1849-1851.

[2] 顾炳权,孙绪德,刘树林,等. 高氧液对家兔希冀缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 第四军医大学学报,2001; 22(4):325.

Gu BQ, Sun XD, Liu SL, et al. Protective effects of hyperoxic liquid on myocardial ischemia and reperfusion injury in rats [J]. J Fourth Mil Med Univ, 2001; 22(4):325.

[3] 孙立江,李玉军,石景森. 川芎嗪对缺血再灌注损伤肾脏细胞凋亡的影响[J]. 第四军医大学学报,2002; 23(18):1683-1685.

篇10

【摘要】

目的观察黄芪党参蘑菇煎在大肠癌患者化疗时的协同作用。方法将51例大肠癌病人随机分为实验组(黄芪党参蘑菇煎加LFP方案)和对照组(单纯LFP方案),将两组的疗效、毒性、对化疗的耐受性、生活质量改善情况进行对比。结果提高生存质量,提高KPS评分,提高率、稳定以上率分别是55.6%,92.6%。一般症状改善,尤其食欲增加、睡眠改善实验组更为明显。增加化疗药物的疗效,受益率(CR+PR+SD)比较有意义。保护骨髓,维护造血功能,治疗后白细胞的数量为(4.19±0.45)×109/L,治疗前后白细胞的数量增长的比较有意义。结论黄芪党参蘑菇煎治疗大肠癌,可以抵御化疗的副作用,增加食欲改善体质、保护脏器功能,缓解肿瘤的不适症状等。

【关键词】 黄芪党参蘑菇煎; 植物多糖; 大肠癌; 中西医结合

黄芪党参蘑菇煎剂是多种植物多糖复合物,多糖是水溶性的葡聚糖,属于免疫增强剂或称生物反应调节剂,参与免疫多环节活动,能抵御许多损伤因子对机体的破坏,有双向免疫调节的作用,促使因癌症或感染引起的体内平衡失调的恢复,并增强患者对化疗的敏感性、耐受性,减低化疗的毒副反应[1]。我们对51例大肠癌术后患者,进行随机对照研究,以比较植物多糖复合物加LFP方案与单纯LFP方案的疗效、毒性、对化疗的耐受性、生活质量改善情况。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 病例选择

200401~200605我们将收治的大肠癌术后病人(均有病理学证实)随机分成实验组(黄芪党参蘑菇煎剂辅助化疗)和对照组(单纯化疗);术后15~40 d开始首次化疗;肝肾功能及血常规正常;Karnofsky评分:>60分。实验组27例,男15例,女12例;年龄20~72岁,平均年龄50岁。组织学类型:状腺瘤3例,管状腺瘤4例,粘液腺癌3例,未分化癌7例,腺鳞癌8例,鳞状细胞癌2例;临床分期:A期8例,B期11例,C期8例。对照组24例,男13例,女11例;年龄30~68岁,平均45岁。组织学类型:状腺瘤 3例,管状腺瘤4例,粘液腺癌3例,未分化癌5例,腺鳞癌6例,鳞状细胞癌3例;临床病理分期:A期5例,B期10例,C期9例[2]。

1.2 给药方法

对照组全部采用LFP方案:CF 150 mg,1次/d,连用5 d;5-FU 500 mg/m2,1次/d,连用5 d;PDD 30 mg/m2 ,1次/d,连用3 d。此方案为每4周为1周期,重复2个周期。实验、对照两组均用上述相同方案,实验组另加黄芪党参蘑菇煎。以1 000 ml开水浸泡250 g普通蘑菇30 min浸泡液,煎煮黄芪50 g,党参30 g,茯苓20 g,枸杞20 g,女贞子20 g,40 min取汁口服,1/d,连用两个月。两组均于每日输注能量合剂+门冬氨酸钾镁,化疗前15 min静脉注射恩丹西酮。

1.3 近期观察

主要观察治疗效果(以自我感觉为主),化疗毒副反应的程度,患者对化疗的耐受情况。每次化疗前后记录症状、体征、大小便的改变,查血尿常规和肝肾功能心肌酶、心电图,毒副反应根据WHO制定的常见抗癌药物急性评及亚急性评分标准进行分度。

1.4 可行性分析

年龄、临床分期、病理类型,两组间差异均无显著性(P>0.05)。结果见表1~3。表1 性别与年龄分布情况例(略)表2 肿瘤种类、肿瘤病理类型及临床分期例(略)表3 卡氏评分例(略)

2 治疗效果

2.1 近期效果

2.1.1 一般状况见表4。表4 一般状况改善情况例(略)

2.1.2 KPS的评分 见表5。表5 KPS的评分(略)

2.1.3 两组化疗结果见表6。表6 两组化疗结果(略)

2.2 毒副反应以患者各疗程前后血常规结果作为观察依据,结果见表7。可见减轻白细胞的降低程度,耐受化疗损伤,完成化疗。表7 周围血细胞计数(略)

3 讨论

大肠癌病人的生存期是诸多肿瘤类型较长的,但是患者大肠癌术后复发和转移是治疗失败、病人死亡的主要原因,化疗是预防复发和转移的主要手段,据中医药的文献报道的治疗效果,中医药不仅限于生物调节范畴,中医药在治疗机理有着积极的一方面,寄托着治愈肿瘤的希望。为求延长肿瘤患者的生存期限、生存质量的目的,设计实验观察治疗组采用黄芪党参蘑菇煎联合LFP;对照组单纯应用LFP[3,4]进行研究。

我们的组方是按照中西医结合原则,针对肿瘤的病机脾胃阳虚、气血不足,选择温补脾胃、益气血的中药,且富含有多糖的药物如黄芪、党参、枸杞、女贞子、茯苓、麦冬,加含多糖类食用菌蘑菇,这样组方相得益彰,共同发挥疗效。

黄芪党参蘑菇煎剂是多种植物多糖复合物,本研究临床观察结果表明,在大肠癌术后临床辅助治疗中,口服黄芪党参蘑菇煎剂配合化疗试验结果具有以下优点:

①提高生存质量,KPS提高、稳定例数分别是15,10例,提高率、稳定以上率分别是55.6%,92.6%。神疲乏力、恶心呕吐、食欲不佳、肿瘤引起的不适缓解、睡眠改善,黄芪党参蘑菇煎组较化疗组为好,尤其食欲增加、睡眠改善更为明显。

②增加化疗药物的疗效,经比较CR(完全缓解)、PR(部分缓解)、SD(无效)、PD(恶化),有效率(CR+PR)达到44%,受益率(CR+PR+SD)达到80%。

③保护骨髓,维护造血功能。治疗前白细胞的数量为(4.81±0.47)×109/L,治疗后白细胞的数量为(4.19 ± 0.45)×109/L,治疗前后白细胞的数量比较有意义。治疗过程中外周血红细胞、白细胞、血小板皆在化疗后下降,粒系细胞周期短易受细胞毒性药物影响而抑制表现下降出现时间早,回升速度快,联合使用黄芪党参蘑菇煎具有促进、保护骨髓、减少细胞毒性药物的损伤,可以在短期内回升见效明显快。

从中医角度分析,大肠癌患者属中医“癥瘕”“肠癖”病范畴,辨证多是邪毒内蕴、脾胃两伤虚实夹杂状态,因此在手术后择期化疗攻邪为主治疗的基础上,加用补益(免疫调节剂)辅助治疗获收裨益,黄芪党参蘑菇煎具有益气养阴的作用,气虚得以补充脾气则健而胃肠消化功能、免疫功能得以调整、逆转免疫抑制状态,调节机体对肿瘤反应性,表现乏力气短缓解、食欲食量改善,体重增加,阴液得以滋润则夜间睡眠延长、低热消除、肿瘤的不舒适状况如大便次数性状趋于正常、改变手术放疗造成机体虚弱,显示了中西医结合扶正祛邪在肿瘤化疗中具有一定的辅助作用[5~8]。

治疗肿瘤以扶正祛邪为总纲贯穿始终:补要择时,即重在早用;补要守法,长期用药;补要勿滞,少加理气药,使补中有通;补忌实实,选用祛邪药物,使正气得以辅助,邪气得以驱除。

抗转移、抗复发有待以后研究长远疗效的观察。

4 结论

中药包括黄芪党参蘑菇煎治疗肿瘤,可以增加食欲改善体质、保护脏器功能,改善肿瘤的不适症状等,故笔者建议肿瘤专家,从中医治疗肿瘤扶正祛邪两方面机理进行多方面、多层次研究,将研究成果综合应用,选择治疗效果相同、所含有效成分不相同的药物,按中医理法方药组成方剂,应用于肿瘤病人的治疗,以取得更佳治疗效果。

【参考文献】

[1]耿建芳,肖月升.食用菌多糖抗肿瘤的免疫调节作用[J].时珍国医国药,2006,17(5):855.

[2]中华人民共和国卫生部医政司.中国常见恶性肿瘤诊治规范(大肠癌分册)[S].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1991.

[3]汪建平,杨祖立,王 磊,等.结直肠癌临床病理特征与预后的多因素回归分析[J].中华肿瘤杂志,2003,25(1):59.

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