简单的美丽范文

导语：如何才能写好一篇简单的美丽，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

梓琳展现给人们的不只是美丽容颜，还有她的聪慧和真实之美。她说，每个女孩子都有自己的闪光之处，无论从事什么职业，无论容颜什么样。内心定要自信。

Q：平时的工作那么繁忙，经常日夜颠倒吧?你是如何保持肌肤年轻状态的呢，让自己始终光彩奕奕?

A：我比较注重基础保养。每天晚上清洁肌肤的工作要认真完成，才能让肌肤有很好的状态来吸收保养品。我还比较重视保湿的工作，我觉得保湿是肌肤维持年轻状态的必要条件。另外，每日的头发护理也是不可或缺的一步。

Q：你会怎样挑选护肤品，以什么作为标准?

A：我会选择适合自己肤质的护肤品，以“不敏感、无负担”为标准。最喜欢怎样的妆容?如果只有3分钟时间化妆，你觉得必不可少的是什么?

A：我习惯根据场合选择妆容。三分钟可以画一个最简单的妆容，我觉得必不可少的就是：粉底、腮红、唇膏和睫毛膏。

Q　说说你的生活方式吧?比如饮食，运动等。

我喜欢清淡的饮食，也喜欢适当地吃些果仁来代替零食。平时也会保持运动的习惯，痛快地让身体出汗，出汗过后皮肤就会变得很好。

Q　我们都知道你得奖之后，几乎是在全世界范围内参加慈善活动，有些什么特别的经历和感想跟我们读者分享吗?

A：每一任的世界小姐都要在全球范围内参与各类慈善活动，当然我也不例外。以前我认为参与慈善活动是遥不可及的，但是我慢慢发现这些有时候只是举手之劳，其实世界真正需要的不是“一个人做很多”，而是“每个人奉献一点点”。虽然我已经卸任了，但是接下来我还是会积极参与慈善活动。

篇2

[关键词] 中性粒细胞弹性蛋白酶；α1-抗胰蛋白酶；慢性阻塞性肺疾病

吸烟能导致全身多种疾病，其中有24%的吸烟者能发生慢性阻塞性肺疾病（COPD）。由于大多数COPD患者早期没有症状，所以不能及早就诊，这些患者只能做肺功能检查才能确诊。对于没有肺功能仪的医院和不适宜做肺功能检查的患者是否可以通过血清酶学检测达到早期诊断的目的呢？我们的研究发现中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）和α1-抗胰蛋白酶（α1-AT）的血清含量在吸烟的COPD患者组、非患者组及健康组有明显不同，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2008年10月～2010年1月在我院体检者和呼吸科住院的COPD患者共86例。将其分成三组：A组33例是有吸烟史的住院治疗后处于稳定期的COPD患者；B组33例是有吸烟史但是没有COPD的健康体检者；C组20例是不吸烟的健康体检者。三组受检者的年龄和性别匹配，具有可比性。吸烟者吸烟指数均≥30包年，均进行吸入支气管扩张剂后的肺功能检查：B组一秒率>70%，排除COPD诊断，A组一秒率

1.2 方法

采集空腹静脉血5 mL，A组出院前采血，B组和C组在体检时留取血样，及时提取血清，每例取1 mL血清分装在2个待测管中，待测血清存于-70℃超低温冰箱保存。使用美国进口的原装试剂盒，用ELISA法检测血清中NE和α1-AT含量，具体步骤根据试剂盒操作说明书逐步进行。每组研究对象检测NE和α1-AT两种酶含量，然后比较每一种酶含量在两组间的差别有无显著性。

1.3 统计学处理

应用SPSS 18.0软件对数据结果进行统计学分析。六组数据有五组为非正态分布，所以各组数据取中位数进行组间秩和检验，P < 0.05为有统计学意义。

2 结果

见表1。NE血清含量以吸烟的COPD患者组最高，中位数为55.21 ng/mL，吸烟的非COPD患者组其次，中位数为25.76 ng/mL，两组比较差异有统计学意义（P < 0.01），吸烟的COPD患者组及吸烟的非COPD患者组均明显高于非吸烟的健康对照组（中位数为3.12 ng/mL）（P均< 0.01）。α1-AT血清含量以吸烟的非COPD患者组最高，中位数为627.72 ng/mL，吸烟的COPD患者组其次，中位数为421.08 ng/mL，吸烟的非COPD患者组和吸烟的COPD患者组均明显高于非吸烟的健康对照组（中位数为9.75 ng/mL），但是吸烟的两组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。

3 讨论

我国流行病学调查资料显示40岁以上成年人COPD患病率为8.2%。吸烟是COPD发病的主要环境因素，在国外约占90%以上，我国为71.6%。吸烟导致COPD的重要

损害机制是酶失衡，即NE升高，同时α1-AT减少。NE是重要的弹性蛋白酶之一，主要来自肺内的中性粒细胞和肺泡巨噬细胞。吸烟者由于烟雾及有害气体的作用，使肺泡巨噬细胞和肺内中性粒细胞聚集、活化，释出NE。NE能够降解构成肺泡壁的细胞外基质和上皮连接结构，造成肺泡间隔破坏，肺泡腔扩大，小气道在呼气时失去了周围组织支持而陷闭，导致COPD发生。NE能导致气道黏液高分泌，增强病原菌与气道上皮的黏附力，而且NE还能降解免疫球蛋白、补体，降低机体对病原菌的清除，因此导致感染发生或不易控制。NE能激活中性粒细胞释放更多的NE，形成NE的恶性循环[1]。本研究显示：血清中NE含量的中位数在吸烟的COPD稳定期患者组和吸烟的非患者组均明显高于健康对照组，且患者组明显高于非患者组，这一结果说明，只要是吸烟者无论是否患COPD，都始终存在下呼吸道慢性炎症，只是吸烟的患者组气道炎症程度更重，非患者组炎症程度较轻。提示：测定血清NE含量对吸烟者是否患有COPD有早期预测诊断价值。

α1-AT是一种糖蛋白，主要由肝细胞合成，分泌入血后作用于肺脏。α1-AT也能产生于肺局部巨噬细胞和支气管上皮细胞，这些肝外合成的α1-AT在肺局部组织损伤的调节中起重要作用。α1-AT是活性最强的蛋白酶抑制剂，占NE抑制作用的92%，α1-AT可与NE 1∶1结合，使NE失活，拮抗NE对弹性蛋白的水解作用，体内NE增加时，α1-AT的产生也会相应增加。先天性的α1-AT缺乏（AATD）是一种遗传性疾病，发生COPD的风险显著增加，主要见于欧美国家的白种人，在东亚人群中较为少见。AATD的不吸烟者，呼吸困难发生在44～51岁，吸烟者呼吸困难发生在32～35岁，而且AATD的吸烟者中，仅30%女性、18%男性生存到55岁[2]。后天的α1-AT缺乏不是绝对值下降，而是相对不足。本研究发现，吸烟伴COPD稳定期患者α1-AT的含量高于健康对照组，与国内多个研究结果一致[3]，但低于吸烟的非患者组，即α1-AT的含量：非患者组>患者组>对照组，而对应的NE含量是患者组>非患者组>对照组。这一研究结果提示：①α1-AT的含量在患者组没有与NE平行增高，出现了相对缺乏。分析原因是α1-AT产生不足，破坏增多。正常人呼吸道中的α1-AT的含量远远大于NE的含量，所以肺组织不易遭到NE的破坏，但是α1-AT极易被氧化，吸烟时产生的烟雾中的自由基有很强的氧化作用，从而破坏肺组织中的α1-AT，因此，烟龄越长、吸烟量越大的老年人COPD发病率越高。②α1-AT的含量在非患者组高于患者组，由于非患者组的个体具有很强的产生α1-AT的能力，使非患者组的NE和α1-AT两种酶处于高水平的平衡，一旦平衡被打破，将导致COPD的发生。这也提示我们，在COPD的防治过程中可考虑应用促使肝细胞产生α1-AT的药物或补充α1-AT制剂。

总之，NE在吸烟的COPD患者中明显高于吸烟的非COPD患者，而α1-AT却没有出现相应的变化，因此，对吸烟者是否发生了COPD的早期诊断除了查肺功能以外，测定血清中NE含量有一定的意义，具体的参考值范围有待进一步研究。

[参考文献]

[1] 赵华，赵瑾. 蛋白酶/抗蛋白酶系统与慢性阻塞性肺疾病[J]. 临床肺科杂志，2010，15（8）：1149-1151.

[2] 田和平，徐金枝. α1-抗胰蛋白酶缺乏与疾病关系的研究进展[J]. 中华医学杂志，2006，30（5）：439-440.

篇3

[关键词]单一煤种；数学模型；质量控制

中图分类号：G633.6 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）25-0232-02

1 序言

煤炭是数以吨计的大宗商品，其检验项目很多，其中发热量是最重要的一项指标。它关系到锅炉热效率、燃烧热平衡及发电标准煤耗的计算，并且在煤炭贸易中，发热量也是重要的煤质验收指标和计价指标。因此，煤质发热量检验的准确性至关重要。对于以汽车煤为主的电厂，入厂煤化验人员相对工作量比较大，要在当天完成所有煤种的化验、计算、审核、上报、数据录入等工作，时间紧任务大，容易在长期疲惫情况下出现工作失误。为此利用Qb，ad与Mad、Aad、Vad之间的密切关系，应用统计学中的多元线性方程，对其建立数学模型，作为单一品种煤质的质量控制审核校验的重要工具。

2 采用相关数据进行分析

2.1 数据采集情况

根据怀安电厂近些年来煤种采购工作可知，每月来煤约十万吨，近40多个矿点，煤种较多；有时出现三十多户煤，每户每月的来煤情况大体稳定，因此选用某一矿点的煤种做数据分析，有实际指导意义。下面选取某一矿点的煤质检验数据进行分析。

2.2 数据相关性分析

多元线性回归的计算需要用到线性代数中矩阵的计算，计算难度及计算量比较大，应用excel或者应用统计学中的eviews软件分析，完成计算就非常容易。

首先需要对 对该单一煤种的发热量与空干基水分、灰分、挥发分之间的关系做相关性分析如表2所示。

通过查相关系数r检验表可知，当自由度（n-m-1）=100-3-1=96，α=0.05时，r=0.19460。根据表2中数据可知，三个相关系数-0. 90229、 -0. 562796的绝对值均大于 0.19460，所以弹筒发热量与空干基水分、挥发分均具有相关性；与空干基水分弱相关。

3 建立回归方程

在统计中研究一个因变量与两个或两个以上自变量之间的相互关系的理论和方法称为多元线性回归。多元线性回归的一般方程式为：

= b0+b1X1+b2X2+……+ bkXk

该数学模型即利用弹筒发热量Qb，ad与空干基水分Mad、空干基灰分、空干基挥发分Vad之间的关系，建立熟数学模型。

3.1 单一煤种回归方程的建立

由表3中的回归分析可以得出该煤种的回归方程为：

Qb，ad=31.8402-0.3257Mad-0.3522Aad-0.0312Vad

Qb，ad：空干基弹筒发热量

Mad：空干基水分

Aad：空干基灰分

Vad：空干基挥发分

3.2 判定系数的确定

SSR：回归平方和

SSE：残差平方和

由表4可知，拟合优度： 第一组中R12=0.9494，修正的可决系数Adjusted R Square为0.9478，并且大于第二的R22=0.8396，更接近1，说明挥发分在一定程度上影响弹筒发热量，通过对比可以得出：用Qb，ad与Mad、Aad、Vad建立的数学回归方程的拟合度要优于用Qb，ad与Mad、Vad建立的数学回归方程；公式中只有5.06%是由其他因素引起的。

3.3 标准偏差

由表4可知，标准偏差为0.2705，说明相关点离散程度小，估计值准确度较高。

3.4 F检验

针对E0：b1=b2=b3=0，在给定的显著性水平α=0.05，在F分布表中查出自由度为k-1=3，n-k=96的临界值F0.05（3，96）=2.699，由表5中数据可知F=600.127>2.699，应决绝原假设H0，说明回归方程显著，即空干基水分、空干基灰分、空干基挥发分对弹筒发热量有显著影响。

3.5 T检验

针对E0：b1=b2=b3=0，在给定的显著性水平α=0.05，在T分布表中查出自由度为k-1=3，n-k=96 的临界值T0.05（3，96）=1.662。由统计数据可知：b1、b2、b3对应的统计量分别为-33.7123、-14.4278、-1.8489，其绝对值均大于1.662，这说明分别都应当拒绝假设E0，即当其他变量不变的情况下，解释变量空干基水分、空干基灰分、空干基挥发分分别对被解释变量弹筒发热量都有显著影响。

4 回归校核数学模型的应用

对该煤种某个月的化验结果带入多元线性方程进行验证。

由表6中数据可知，表中试验样品的计算值与实际测量的差值全部小于国标中规定的再现性临界值0.3MJ/kg。

应用该多元线性方程只能作为校核使用，不能代替煤质化验过程。并且要求在实验的过程中应该严格按照国标操作，任何一项出现错误都会直接导致结果偏差。回归校核的多元线性方程使用于单一煤种，在煤种多的情况下，需要建立多个方程。

5 结论

面对目前多变的煤炭市场，单一煤种回归校核数学模型的建立与推广应用在火电厂具有很高的利用价值，尤其适合煤种多，人员少的入厂煤化验中。利用该回归方程可以及时的发现实验中的误差，纠正实际工作的错误，提高工作效率，是燃料化验质量控制体系的重要工具；同时能够应用与入炉煤质检验分析中，为锅炉优化掺烧配及煤耗计算提供依据；供煤商也可以用其对化验结果进行核对；也能为缺乏检验条件的小型用煤企业提供一定的应用价值。

参考文献

[1] 林力.关于进口煤炭高位发热量计算公式的探讨[J].宁波化工.

[2] 郑旭振，康红生等.煤炭发热量与灰分回归计算方程的建立与应用[J].机械管理开发.2001，27-28.

篇4

【关键词】 丙型肝炎病毒

Establishment of stably transfected HepG2 cell line expressing HCV scNS4A/NS3 protease

【Abstract】 AIM: To construct a eukaryotic expression vector of HCV single chain serine protease (scNS4A/NS3) and to obtain its stably transfected HepG2 cell line. METHODS: According to the sequence of HCV scNS4A/NS3 gene from the literature， the primers amplifying the gene coding scNS4A/NS3 protease were designed. HCV RNA was extracted from the HCV positive serum and the gene coding scNS4A/NS3 protease was amplified via RTPCR. The PCR product was digested by BamHⅠ/HindⅢ and purified by gel extraction. This fragment was inserted into pcDNA3.1(-) with T4 ligase and transformed into E.coli JM109. The positive recombinant plasmid was selected and identified via sequence assay and restrictive enzyme digestion. The recombinant plasmid was then transfected into HepG2 cell by LipofectAMINE2000. The cells containing stable transformants were selected by the ability of resistance to G418. The stably transfected cell line was identified by RTPCR and IFA and Westernblot. RESULTS: The eukaryotic expression vector named pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3 was successfully constructed and the stably transfected HepG2 cell line which expressed scNS4A/NS3 protease was obtained. CONCLUSION: The stably transfected HepG2 cell line expressing single chain serine protease facilitates the establishment of cellbased system in evaluating antiHCV serine protease drug.

【Keywords】 hepatitis C virus; single chain serine protease; lipofectamine， transfection; colone cells

【摘要】 目的：构建丙型肝炎病毒单链丝氨酸蛋白酶（scNS4A/NS3）的真核表达载体；建立重组质粒稳定转染的HepG2细胞克隆. 方法：根据文献报道设计扩增scNS4A/NS3编码基因的引物，从HCV阳性患者血清中提取病毒RNA，RTPCR方法扩增出scNS4A/NS3基因片段， BamHⅠ/HindⅢ双酶切后连接到经同样酶切的真核表达载体pcDNA3.1(-)，转化菌株JM109感受态细胞，获得重组质粒pcDNA3.1(-)～scNS4A/NS3，经酶切鉴定及序列测定. 将阳性重组质粒用脂质体法转染HepG2细胞，经持续G418压力选择和克隆化获得稳定转染的细胞系，用RTPCR，IFA，Westernblot证实该稳定细胞系可以表达单链丝氨酸蛋白. 结果：成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3；建立了稳定转染的HepG2细胞克隆，命名为scpHepG2. 结论：获得稳定的scpHepG2细胞克隆可表达单链丝氨酸蛋白，为下一步建立以细胞为基础的评价抗HCV丝氨酸蛋白酶药物系统奠定基础.

【关键词】 丙型肝炎病毒；单链丝氨酸蛋白酶；转染，脂质体法；细胞克隆

0引言

稳定、可靠的细胞培养系统和小动物实验模型的缺乏极大地制约着抗丙型肝炎病毒(HCV)研究的深入和发展［1］. 因此以在HCV RNA复制和蛋白前体加工成熟中起着关键作用的酶分子为靶位的测定系统常被用于抗HCV 药物的筛选. 酶抑制剂作为一个有潜力的药物分子，它不仅需要有效，也需要有良好的药物动力学等特征，如易进入细胞、结构稳定. 所以建立一种可以在细胞水平上评价酶活性的细胞系统非常关键. NS3丝氨酸蛋白酶在HCV多聚蛋白前体加工成熟中起关键作用，是抗HCV研究的主要靶标分子［2］. 我们通过构建HCV单链丝氨酸蛋白酶（scNS4A/NS3）的真核表达载体，获得重组质粒稳定转染的HepG2细胞克隆，为下一步建立以细胞为基础的评价抗HCV丝氨酸蛋白酶药物的系统奠定基础.

1材料和方法

1.1材料

E.coli. JM109菌株、pcDNA3.1(-)质粒由本室保存. Taq DNA聚合酶、限制性内切酶BamHI，HindⅢ等购自TaKaRa公司，胶回收试剂盒购自Vgene公司，T4 DNA连接酶购自上海生物工程公司，FITC和HRP标记羊抗鼠IgG， DNA分子标准、低分子蛋白质标准分别购自华美生物工程公司. 反转录试剂盒SuperscriptⅡ，Trizol，Lipofecatmine2000，G418购自Gibco公司. NS3mAb由本室制备［3］.

1.2方法

1.2.1HCV RNA的提取与cDNA第一链的合成以HCV阳性患者的血清为材料提取病毒RNA，方法参照Trizol说明书，将RNA沉淀溶于20 μL不含RNase的去离子水. 反转录按SuperscriptⅡ说明书进行，模板为病毒RNA，反转录引物为scNS4A/NS3基因下游引物，最后获得cDNA第一链.

1.2.2scNS4A/NS3基因的PCR扩增参考文献［4］，设计扩增scNS4ANS3基因的引物: P1，5′ CGGATCCATGGCGCCTATCGGCTCAGTAGTAATCGTAG

GCAGAATCATCCTGTCCGGCCGTGGTGGCCCTATTA

CGGCCTACTCCCAAC 3′; P2， 5′ CGCGGTACCTAGGCAAAACCAGAACCAGC 3′. 上述引物均由上海生工公司合成. 以病毒cDNA第一链为模板扩增scNS4A/NS3基因，体系为：模板5 μL，10×Buffer 5 μL ，10 mmol/L dNTPs 4 μL，p1，p2各2 μL，Taq 2 μL，用超纯水补至终体积50 μL. 条件: 预变性94℃ 5 min，94℃ 1 min，60℃ 50 s，72℃ 1 min共 30个循环， 72℃延伸10 min. 质粒构建按参考文献［5］进行，获得pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3重组质粒. 酶切进行鉴定并交由上海生工公司测序.

1.2.3细胞培养和G418工作浓度的确定常规培养HepG2细胞于12孔板中，50 mL/L CO2，37℃，培养基为RPMI 1640 (100 mL/L胎牛血清，100 mg/L青、链霉素，2 mmol/L谷氨酰胺)，至细胞密度达90%布满时，加入含G418的培养液1 mL/孔（G418终浓度分别为200～1000 mg/L，8孔）. 换液时保持G418浓度稳定不变，持续培养3～4 wk.

1.2.4细胞转染与筛选稳定细胞克隆①质粒制备：将pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3质粒转化大肠杆菌感受态细胞JM109，挑取菌落接种5 mL LB，37℃振摇，12 h后离心收菌. 用去内毒素超纯质粒提取试剂盒（博大泰克公司）提取质粒，紫外分光光度法测定DNA含量和纯度. ②细胞转染：将HepG2细胞培养于24孔板，待细胞90%铺满，采用脂质体法转染pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3，具体操作按LipofectAMINE 2000说明书进行. ③建立稳定的细胞克隆：采用G418压力选择. 上述转染48 h后，通过G418压力筛选2 wk后，细胞成团，用枪头挑取单个细胞团种在96孔板，继续加G418压力选择，直到最后获得单独稳定生长的细胞克隆，扩大培养后检测并冻存. 获得的细胞克隆冻存2 mo后复苏，检测细胞克隆的稳定性.

1.2.5稳定转染细胞系的检测①RTPCR检测稳定转染细胞中目的基因的mRNA： 将稳定生长的细胞用PBS清洗一次后，参照说明书用Trizol试剂盒提取细胞总RNA，然后反转录合成cDNA，按SuperScriptTM II反转录试剂盒（Gibco公司）操作说明进行. 用P1和P2对反转录产物进行PCR. PCR反应体系及反应条件同前. ②免疫荧光检测：用胰蛋白酶消化稳定生长的细胞，吹匀，将之加入镀膜片小孔中，每孔15 μL，置于湿盒中，37℃， 50 mL/L CO2培养箱培养12 h，40 g/L多聚甲醛固定，NS3 mAb作为一抗，FITC标记的羊抗鼠IgG作为二抗，500 g/L的甘油封闭后在荧光显微镜下观察. 同时以转染空质粒pcDNA3.1（-）的HepG2做为对照. ③Westernblot检测目的蛋白的表达:在六孔板中培养稳定转染的细胞，待细胞铺满后，用PBS清洗细胞3次，然后每孔加入100 μL 2×SDS上样缓冲液，用细胞刮刀将细胞分离置于离心管中. 用细胞超声粉碎仪破碎细胞，煮沸5 min，离心收集上清备用，同时用空质粒转染的HepG2做对照. 按Biorad垂直电泳仪说明书，配置40 g/L浓缩胶和120 g/L分离胶，取20 μL细胞处理液上样，电压120 V，1.5 h后将蛋白转移至醋酸纤维素膜（NC），NS3 mAb作为一抗，HRP标记的羊抗鼠IgG作为二抗，DAB显色.

2结果

2.1PCR产物和重组质粒的鉴定结果取PCR产物5 μL行10 g/L琼脂糖电泳结果显示扩增出约590 bp的片段，大小与目的片段相符. 重组质粒经BamHⅠ/HindⅢ酶切后，酶切产物大小与预期相符（图1），说明重组真核表达载体构建正确. 序列测定结果与文献报道相同.

2.2G418工作浓度的确定可观察到1000，900，800 mg/L孔于第2日，700和600 mg/L孔于第3日，500，400，300 mg/L孔于第5日，200 mg/L孔于第6日开始出现生长抑制现象，细胞开始溶解. 20 d后，G418浓度≤700 mg/L的各孔细胞稳定生长，而1000，900，800 mg/L的3孔相继全部死亡. 可以认为在本实验条件下G418的最佳工作浓度为800 mg/L.

2.3稳定转染HepG2细胞系检测

2.3.1RTPCR检测稳定转染细胞的目的基因RTPCR产物行10 g/L琼脂糖电泳. 可见在预期大小处（590 bp）有一条亮带(图2).

2.3.2免疫荧光检测稳定转染细胞的目的蛋白在荧光显微镜下可以观察到绿色荧光主要分布在细胞质. 而转染空质粒pcDNA3.1(-)的HepG2细胞绿色荧光为阴性(图略).

2.3.3蛋白印迹检测目的蛋白DAB显色后可见在预期大小（Mr 22 000）处有一特异条带. 而转染空质粒pcDNA3.1(-)的HepG2细胞没有染出条带(图3).

3讨论

HCV NS3蛋白编码基因全长共1893个核苷酸. NS3蛋白近N端1/3 (1～180aa)具有丝氨酸蛋白酶活性. 近C端2/3具有三磷酸核苷酶(NTPpase)和解旋酶(Helicase)活性［6］. NS3丝氨酸蛋白酶在四个连接区域切割多聚蛋白前体：NS3／NS4A，NS4A／NS4B，NS4B／NS5A，NS5A／NS5B. 随着NS3丝氨酸蛋白酶得到表达和纯化，1996年Kim等［7］分别利用晶体衍射获得了NS3蛋白及蛋白酶的晶体结构，明确了酶活性所需的必需条件和辅助因子，其中NS4A中间的12个氨基酸是丝氨酸活性发挥必需的. Dimasi等［8］将NS4A核心区域通过连接子与NS3丝氨酸蛋白酶区域构建为一条单链蛋白，经原核表达后获得的纯化蛋白具有NS3丝氨酸蛋白酶的活性.

本研究中，我们首先设计了扩增单链NS3丝氨酸蛋白酶的引物，上游引物中含有NS4A的核心区21～43aa的基因序列，两者之间设计了一个RGGP的连接序列，该序列可以形成β片层结构，从而使得NS4A能够起到辅助因子的作用，这样保证了单链蛋白具有良好的丝氨酸蛋白酶活性. 以HCV阳性患者的血清为材料，提取病毒RNA，将之反转录为cDNA模板，扩增出了单链丝氨酸蛋白酶的基因序列. 用构建的真核表达质粒pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3转染肝癌细胞系HepG2，获得单独稳定生长的细胞克隆，扩大培养后检测并冻存. 我们用RTPCR方法和间接免疫荧光、蛋白印迹的方法，从基因水平和蛋白水平上检测到单链丝氨酸蛋白酶在细胞获得表达.

本实验结果表明，我们成功地构建了包含HCV scNS4A/NS3基因序列的真核表达载体pcDNA3.1(-)scNS4A/NS3，建立了其稳定转染的HepG2细胞株，该细胞株能够稳定表达单链丝氨酸蛋白酶，为下一步建立以细胞为基础的评价抗HCV丝氨酸蛋白酶药物的系统奠定了基础.

【参考文献】

［1］ 张景霞，周红超，徐德忠，等. HCV C区基因在SP2/0细胞及荷瘤小鼠瘤内的表达［J］. 第四军医大学学报， 2002， 23(24):2236-2239.

［2］ Hugle T， Cerny A. Current therapy and new molecular approaches to antiviral treatment and prevention of hepatitis C［J］. Rev Med Virol， 2003， 13:361-371.

［3］ Yang J. Expression of HCV NS3 protein， preparation of its Mabs and determination of their bingding region ［D］. 第四军医大学研究生学位论文， 2005:56-58.

［4］ Berdichevsky Y， Zemel R， Barchmatov L， et al. A novel high throughput screening assay for HCV NS3 serine protease inhibitors ［J］. J Virol Methods， 2003，107:245-255.

［5］ 刘卫东，薛小平，雷迎峰，等. 丙型肝炎病毒ns5b基因的克隆、表达及鉴定［J］. 第四军医大学学报， 2003， 24(14):1265-1267.

［6］ Rosenberg S. Recent advances in the molecular biology of hepatitis C virus ［J］. J Mol Biol， 2001，313:451-464.

［7］ Kim JL， Morgenstern KA， Lin C， et al. Crystal structure of the hepatitis C virus NS3 protease domain complexed with a synthetic NS4A cofactor peptide［J］. Cell， 1996， 87:343-355.

篇5

关键词 胆碱酯酶活力快速测定盒 有机磷中毒 盐酸戊乙奎醚注射液

资料与方法

2005年1月～2006年12月收治有机磷农药中毒患者中随机抽样62例为A组，均符合文献的诊断及分级标准［1］；2007年1月～2010年1月收治有机磷农药中毒患者中随机抽样62例为B组，符合文献的诊断及分级标准，根据文献分级标准。A组用药方法及用量，见表1。

B组经胆碱酯酶活力快速测定盒检测。A、B两组患者在性别、年龄、中毒种类、中毒量及抢救时间、临床表现，中毒途径等方面比较差异无统计学意义（P＞0.05）。具有可比性，见表2。

治疗方法：两组患者均经急诊清除毒物、应用氯解磷定、阿托品及长托宁联合治疗等积极对症治疗。在此基础上A组未经胆碱酯酶活力快速测定盒检测，仅凭医生分级及临床经验用药；B组经胆碱酯酶活力快速测定盒检测后用药。首次给药后观察30分钟，若中毒症状未消失，经胆碱酯酶活力快速测定盒检测全血胆碱酯酶活力＜50%时，基于首次用药量的半量再次给药；中毒症状基本消失，全血胆碱酯酶活力＞50%可暂停药观察；若中毒症状消失，但全血胆碱酯酶活力仍＜50%时，则追加长托宁及阿托品1～2mg，至出现阿托品化或全血胆碱酯酶活力＞50%以上，依此方法两组各治疗3天。

观察指标：比较观察两组的用药次数、起效时间、中毒症状消失时间、平均住院时间，死亡率和不良反应率。

统计学方法：使用SPSS13.0软件进行数据分析，计数资料组建比较采用X2>/sup>检验；计量资料数据采用（X±s）表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异，有统计学意义。

结 果

A组治愈55例（88.7%），死亡7例（8.1%）；B组治愈61例（98.4%），死亡1例（1.6%），死亡患者均为服药量＞200ml、距救治时间>2h，反复给药未出现阿托品化，死因多为多器官功能衰竭。两组治愈率比较，有统计学意义（X2>/sup>4.8103，P0.0282）。B组用药次数、起效时间、中毒症状消失时间、平均住院时间均比A组减少（P均＜0.01），见表3。

不良反应：B组不良反应对比A组不良反应减少（P＜0.05），见表4。

讨 论

有机磷中毒是基层医院常见的急诊病之一，中毒机制为抑制胆碱酯酶活性，使乙酰胆碱大量堆积，作用于胆碱能受体造成中枢、呼吸、循环等系统功能紊乱，产生毒蕈碱、烟碱和中枢症状而引起死亡［2］。胆碱酯酶复能剂只能对中毒24～48小时内未老化的胆碱酯酶起作用，最长能用5～7天，超过此期限后作用微甚且加大不良反应［3］，因此强调早期、足量、科学的应用胆碱酯酶复能剂、阿托品及长托宁。

胆碱酯酶活力快速测定盒能快速、准确的检测出全血胆碱酯酶活力，为临床提供早期、准确、科学的用药依据，也可随时监测全血胆碱酯酶变化，随时追加给药。保证了早期、足量的氯解磷定、阿托品及长托宁的应用，避免了多次给药，使有机磷农药中毒患者得到了科学的治疗。胆碱酯酶活力快速测定盒在有机磷中毒治疗中，有着较高的指导价值。

参考文献

1 孟昭全,李芳,张春之,等.实用农药中毒急救［M］.北京:人民卫生出版社,2004:113-168.

2 孔令振,李爱霞,李杰,等.长托宁治疗急性有机磷农药中毒的疗效观察［J］.实用诊断与治疗杂志,2007,21（1）:63-64.

3 陆再英,钟南山.内科学［M］.北京:人民卫生出版社,2006:960-967.

表3 两组有机磷农药中毒患者治疗效果比较（X±S）

表4 两组有机磷农药中毒患者不良反应比较［例（%）］

表1 A组用药方法及用量

篇6

鸡蛋营养丰富，但不宜在发烧期间多吃，尤其是煎荷包蛋或炒鸡蛋。因为鸡蛋的主要成分是卵蛋白，卵蛋白是一种完全蛋白质，99．7％能被人体吸收。人摄入这种蛋白质后会产生一定的额外热量，使机体热量增高，加剧发烧症状。同理，发热时也不要吃太多瘦肉、鱼等高蛋白食物。

发烧病人的饮食应清淡、易消化，一般以流质或半流质食物为主，如米汤、稀饭、面条、藕粉等，并搭配一些新鲜水果。

退烧后，可以食用鸡汤面、菜泥粥等食物。到病情恢复后期可以多补充瘦肉、鱼、豆腐等高蛋白食物。

（文华）

鸭血是液体肉

鸭血也称“液体肉”，通常被制成血豆腐，是补血佳品。鸭血富含铁，且以血红素铁的形式存在，容易被人体吸收利用。多吃可以防治缺铁性贫血，并能有效地预防中老年人冠心病、动脉硬化等症。

鸭血还是人体污物的“清道夫”，可以利肠通便，清除肠腔的沉渣浊垢，对尘埃及金属微粒等有害物质具有净化作用。

因此，贫血患者、老人、妇女和从事粉尘、纺织、环卫、采掘等工作的人尤其应该常吃鸭血。

鸭血还含有维生素K，能促使血液凝固，有止血的功效。

鸭血中脂肪含量非常低，适合血脂高的人经常食用。

在日本和欧美食品市场上，鸭血多被做成香肠、点心等。在我国，人们则喜欢用鸭血制成血豆腐做菜，还可以做汤，不但味道鲜美，而且可以起到植物蛋白和动物蛋白营养互补的作用。（小康）

奶茶是女性心脏的杀手

多少年来，健康专家一直提醒，饮茶有益于人的心脏。但一项最新研究提出，向提神的茶水中加入牛奶，或茶与牛奶(奶茶)同饮，会破坏茶水中的所有健康成分，对心脏有很大危害。

统计显示，目前女性心血管疾病发病率已经是乳腺癌发病率的10倍，是直接威胁女性生命的“头号杀手”。德国研究人员在《欧洲心脏杂志》上发表的一份研究报告称，喝奶茶会让人的血管壁的收缩能力明显下降，对心脏十分有害。

目前，女性心血管疾病的发病情况并没有引起人们的重视。多数女性知道如何预防乳癌和皮肤癌，但很少有人担心自己会得心脏病。因此，对于疲倦、呼吸困难、恶心、身体不适、背痛和腹痛之类的症状，许多女性都会选择“挺一挺”。殊不知，这些看似普通的症状，很可能是你的心血管出现“疲态”的一个信号。在此提醒广大女性朋友注意呵护自己的心脏，尽量远离奶茶。 （小丽）

孕产妇不宜使用风油精

夏天，风油精是人们随身备用的物品，它具有提神醒脑、解暑避邪、祛风镇痛、驱蚊止痒等功效。而它的主要成分之一樟脑却具有一定的毒副作用。

风油精所含的樟脑进入人体后，正常情况下人体内的葡萄糖磷酸脱氢酶会很快地与之结合，使之变成无毒物质，然后随小便一起排出体外，所以不会发生不良反应。

然而由于生理上的变化，孕妇体内的葡萄糖磷酸脱氢酶的含量会降低，怀孕3个月内若过多地使用风油精，樟脑就会通过胎盘进入羊膜腔内作用于胎儿，严重时可导致胎儿死亡引起孕妇流产。

刚出生的新生儿体内也缺乏葡萄糖磷酸脱氢酶，产妇如大量使用风油精，樟脑会随气味透过新生儿娇嫩的皮肤和黏膜渗入血液，使红细胞破裂，溶解成胆红素。血液中的胆红素含量过高，就会透过脑膜与脑细胞结合，引起婴儿黄疸症，还可出现抽风、惊厥等神经症状，即使经过治疗也可能使婴儿脑功能受损。所以，孕产妇应慎用风油精。

（小美）

碱性食物提高智商

英国科学家发现，人体液的酸碱度与孩子的智力有关。在体液酸碱性允许的范围内，酸性时孩子智力低，碱性时智力高。科学家对6～13岁孩子的智力观察发现，大脑中的体液ph值大于7者比小于7者智商高一倍。科学家把这一发现称为智力水平的“化学标记”。

食品可分为碱性、中性和酸性三大类：

含钾、钠、钙、镁等元素的食品为碱性食品，如水果、蔬菜、豆制品、海带、碱性饮料等。

含磷、氯、硫、碘等元素的食品为酸性食品，如肉类、谷物、油脂、酒类等。

不过，具有酸味的食品不一定是酸性食品，以橘子为例，它含有丰富的钾，所以它不是酸性食品，而是碱性食品。

（大周）

牛奶加蜂蜜少女不痛经

相当数量的未婚女性，每次来月经前往往有下腹疼痛、腰膝酸软、全身倦怠乏力等不适感，这就是令人苦恼的痛经。

经期出现这类症状，主要原因是青春期女性的子宫颈比较细长，或未发育完好，经血流经子宫颈时会刺激子宫肌收缩引起疼痛。

虽然绝大多数女性痛经属于生理现象，但疼痛的恶性刺激常使人坐卧不宁、睡眠不安。

妇产科专家提出的方案可帮你减轻痛苦：每晚睡前喝一杯加一勺蜂蜜的热牛奶，即可缓解甚至消除痛经之苦。

牛奶含钾多，蜂蜜富含镁。研究表明，钾对于神经冲动的传导、血液的凝固过程以及人体所有细胞的机能都极为重要，它能缓和情绪，抑制疼痛，防止感染，并减少经期失血量；镁能帮助大脑中神经冲动传导，能让具有神经激素作用的活性物质维持在正常水平。在月经后期，镁元素还能起到心理调节作用，有助于身体放松，消除紧张心理，减轻压力。

另外，B族维生素对经前紧张症有显著疗效，特别是维生素B6最为重要。此种维生素能够稳定情绪，帮助睡眠，使人精力充沛，并能减轻腹部疼痛。香蕉中含维生素B6较多，痛经女性不妨多吃一些。 （小刘）

盐是女人美丽的天敌

1. 雀斑、黄褐斑吃盐过多，除了会使脸色黑黄外，脸颊还会长出雀斑。若同时摄取动物性脂肪和蛋白质过多，则会影响肝脏正常代谢而使雀斑更显眼。要想皮肤好，比较科学的方法是多喝水，帮助皮肤排毒，同时要把每天的食盐摄取量控制在6克以下。

2. 头发脱落、发质枯黄吃太咸不仅会造成代谢性脱发，还会让头发变得枯黄。中医理论上讲，肾气盛则头发乌黑有光泽，肾气虚则头发干涩而枯黄。

3. 面部浮肿浮肿的原因有很多，但吃太咸可能是其中之一。

摄入过量的盐会令水分代谢出现紊乱，水分滞留在体内，会出现浮肿。少吃盐、多吃利水的食物才能有所改善。

篇7

茧子的生活很简单，甚至乏味，偶尔一阵微风袭来，也只够撩撩发丝。但茧子不寂寞，白天有天上的云朵和她做伴，夜晚的虫鸣是她最好的摇篮曲。茧子每天都会做天真的梦。这一个又一个简单而又美丽的梦伴着茧子，让她微笑地成长。

茧子喜欢安静，呆在自己的世界里，做着自己的梦，时不时打个呼噜，说些梦话。有时茧子会梦见自己举着棒棒糖走在外面绿意充盈的阡陌上，风儿慈爱地抚过她的脸庞，草儿调皮地触着她的小手。还有美丽的蝴蝶，辛勤的蜜蜂……茧子认为这就是世间最美丽的事情了吧。每天做着世间最美丽的事，茧子感觉好快乐。

茧子很简单，但茧子有梦想。

茧子的梦想是化为梦中的蝴蝶，在花丛里为小草跳舞。茧子羡慕鸟儿，飞得那么高，那么远；茧子喜欢鱼儿，游得那么快，那么美；但茧子还是眷恋着那梦中美丽的蝶儿，小小的，上下翻飞，那么一大群，多美！有时，茧子还会由那些美丽天真的梦联想到外面的世界：那一定是如梦中一般很精彩的吧，如果有朝一日能飞出这个寂寞的沙丘，到外面去领略一下，那该多好啊……小小的茧子做着小小的梦，想着小小的心事，许着小小的愿望，入眠了……

茧子的前生是一只毛毛虫，她曾趴在菜叶上目睹过无数只闪烁着光芒的蝶群在阳光下无忧无虑地翩跹起舞，金色的阳光照亮了蝶儿的双翅，也照亮了虫虫的心房。自此，虫虫也开始不断地努力，成长，吐丝，结茧……变成了茧子。茧子是虫虫的梦，而化蝶是茧子的梦，茧子心中有这个梦，她要不断努力，实现这个梦。

篇8

COSPLAY，一个现在经常出现在各个媒体的词汇，是青春，是潮流，是一种不一样的生活方式，是一种与众不同的体验。

COSPLAY是英文Costume Play的简略写法，意思是指角色扮演。但因为这种译法与游戏中的Role Play Game（RPG）同为角色扮演之意，所以还存在另一种译法――服饰装扮。以现今的COSPLAY而言，其形式及内容一般是指利用服装、小饰品、道具以及化装来扮演ACG（anime，comic，game）中的角色或是一些日本视觉系乐队以及电影中的某些人物。

在南京市田家炳高级中学，有着一群热爱动漫的孩子。志同道合的他们，利用高中的课余时间开始了自己的COSPLAY活动。

也许在很多人眼中这样的生活很辛苦，也很浪费时间。毕竟作为一个高中生，主要任务是学习，尤其是在高考的独木桥上，每一分钟似乎都是如此的宝贵。但是因为他们真的很喜欢COSPLAY，所以就下定决心去做这件事了。

不是简单的美丽

在和孩子们聊天的时候，笔者翻阅着一张张充满活力笑脸的COSPLAY照片。照片里的孩子或者身穿日本漫画中的白衣蓝裙，或者化身“网球小子”，或者是《死亡笔记》的L……仿佛真的是从漫画里走下来的人，如此的美丽不禁让我惊叹。

COSPLAY社团的一名苏姓同学却认真的说：“每个人看到这些照片的时候都会羡慕和惊艳，其实COSPLAY 的美丽不是简单的美丽。每一次做COSPLAY，我们在幕后付出的努力也是你们所感受不到的。”

每一套服装都有自己的语言，它的语言会告诉你，什么样的布料、什么样的的色彩、什么样的配饰、什么样的现实背景，才是真正适合它的。“有时候为了找合适的布料，我会花上很长时间。但是等到最终效果出来的时候，那满心的欢悦是说不出来的。”，“可是很多人并不明白COSPLAY背后的辛苦，有很多人只看见表面的风光，只是喜欢那种表面的美丽，并不是喜欢它背后那种看不到的美丽。那样的COSPLAY，不是真正意义上的COSPLAY。”苏同学如是说。

理想与现实，一样的收获

通过和他们的聊天，笔者发现这群孩子其实都是努力而且现实的人。

处在高中阶段的他们，虽然很喜欢COSPLAY，但是并没有过于理想化。一名同学说，“爱好是爱好，现实是现实，我一直都分得很清。虽然我会一直把COSPLAY做下去，但那只是爱好而已，我还是会更注重高中课程的学习”。也许这就是他们一边学习一边游戏，却仍可以游刃有余的原因。也正因为如此，COSPLAY社团的他们在生活中也收获了“理想”和“现实”两颗不一样的果实。

“理想”的果实――与自己喜欢的漫画人物来一个亲密约会。每一次穿上不同的衣服，你就是那个人，这样你就可以体味到不同的人生。有了COSPLAY，你也就有了一个与众不同的人生。

篇9

你的世界是什么颜色？是否已经像纸一样苍白？

合上书，我重重的叹息。海子呵！为什么我从你的诗句中看到了对生活的热爱，为什么你眼中的世界是阳光明媚，处处是金色的麦田，飞驰的骏马。可现实的你却是让人绝望的悲凉……

是什么让麦田枯萎，让骏马夭折，让原本灿烂的阳光连笑容都有阴霾？

现在，请为我点灯。

你的世界不应该随着你的离去而消散。

我想，我想继续那些美好，用一个个字符继续构建你想象中的童话。

一个个支离破碎的梦境。猜不透的，是你那颗简单的赤子之心；读不懂的，是你瞳孔中映射的美丽篇章。

为什么要绝望？是现实抛弃了你，还是你选择了放弃？

现在，请为我点灯。

点亮我的虔诚心——美好的东西，值得人去信仰。

你是一个有信仰的人对吗？

让我猜猜，你是因为信仰的破碎才选择放弃，选择离去对吗？

世界对你来说已经不再值得留恋。

海子，你是一个可怜的孩子。

不止因为无奈的现实，更因为你迷茫的心……

你后悔过吗？不，生命没有后悔。

有的，只是那份对美丽的渴望。死亡不是结束，而是一个新的开始。

现在，请为我点灯。让我学会歌颂，歌颂春天的到来，歌颂生命的美好，歌颂一切，歌颂一切简单的幸福。

篇10

不曾想到我还会这般的做过，骑着单车载着片片枫叶，寻找初夏时的幽静。虽然不是什么漫长的旅途，去的也不是什么名胜古迹，只是这座城市沉睡的简单记忆，记忆在斑驳的古城墙，在建春门下来往的马车铁骑！

一时的兴起换一下午的流连，载着简单心辗转在一条条小道，载一路的欢歌穿插在一个个亭榭。不知道怎么形容当时的心情，也许是繁杂的生活中简单的轻松！

慢慢的回忆，让每一片树叶都流进我梦里，打着旋儿颤抖着飘起，让五月的花香载着思念静静的弥漫，氤氲下的气息会更美丽。看大江东去，章贡相聚，奔涌的江水打乱了安静的思绪，让闲适中带满豪气，一个大大的水旋在我脚下不停转动，仿佛将我也卷入气势宏博的水流当中，或是卷进了当年战乱纷纷下的江河！

俯仰之间，在汀渚之上，风筝轻扬，稚气的孩子追逐玩笑。立鼎之下，间或有人之微而自然之大！看路人家和圆团，依偎在儿时温暖的胸怀！

停息在草坪边，看美丽的小花，排着各种形状，拍几张照片，只可惜我无法用画笔将其描绘。取道古城墙之下，沿着一条别致的小路，一边是江水流逝，一边是古墙巍峨。就像人生之路，一边的流逝不复回的时光，一边是深埋心底永不变更的回忆！而我们在这之间渐渐的走远…