保健室情人范文
时间:2023-03-18 07:10:45
导语:如何才能写好一篇保健室情人,这就需要搜集整理更多的资料和文献,欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文,供你借鉴。
篇1
人们对服用药物一般都十分谨慎,但是对于接纳保健品就宽容多了。西地那非(万艾可、伟哥)为处方药成分,不能随意服用,许多人都知道,也非常注意,于是每感力不从心时,便径直投入了性保健品的怀抱。孰不知,这很可能是“自入虎穴”。
滥加处方成分显效
为了显示效果、抢占市场,许多不法厂商会偷偷地将处方药成分西地那非、罂粟硷、性激素等加入性保健品之中。不知情的男性朋友们放心服用后,很可能会出现不良反应。
据权威专家透露,目前国内声称能提高的保健食品中,80%~90%都非法掺有西地那非。西地那非可促使海绵体充血、膨胀,坚硬,从而改善障碍。但它也存有副作用,如影响血压,诱发心脏异常,引起一过性的视觉异常,等。因此,临床上患有视网膜病变、青光眼等眼疾的男性不能使用。不能与硝酸盐等药物同时使用。有严重心脏病、心力衰竭、心梗或脑中风(半年内曾发生过)、血压忽高忽低的患者,本身就不适宜过性生活,擅自服用,会引起心肌梗死甚至死亡。
万能保健品多无能
不少性保健品都冠以“壮阳养肾”“延时”等奇效,甚至称“有病治病,无病保养”,怂恿患者长期食用,如此“万能”的宣传着实是无稽之谈。
笔者总结了一下,“万能”保健品通常有如下特点:国外研制进口,欧美家喻户晓,市场占领额庞大,等。客观地说,这些保健品加入中药成分以滋阴补肾,还是有一定功效的,有些朋友服用后确实性能力有所提高。但追根溯源,这些患者可能原本就是有些肾虚,若到医院请专业医生对症用药,往往十多元就可药到病除。除此以外,若谈“万能”,谅它也没多大“能耐”。
盲目进补于事无补
在医院男科中,有这样一个发人深思的现象:许多患者在进补后,病情反而越来越严重。这是因为男性障碍分阳虚阴虚,而目前市场所售的男性保健品中,几乎清一色都只强调壮阳的功效。如不分青红皂白,擅自购买服用,危害极大。男性障碍属阴虚者,需服用六味地黄丸等滋阴药物来调养,一味壮阳只能是“拔苗助长”。对于心血管病、糖尿病、抑郁症患者,未经医生指导乱用壮阳药,则可能出现生命危险。
另外,民间流传“吃啥补啥”的说法,认为吃“鞭”能提高男性性能力,但事实上,盲目喝鹿鞭酒或者虎鞭酒并不都能解决问题。有资料称,活体雄性动物的性器官的确含有相当数量的雄性荷尔蒙,但经过加热烹煮和胃液消化等程序后,这些物质几乎遗失殆尽,不会对身体产生哪怕是一丁点儿的影响。
使用需由医生指导
面对目前部分厂商大玩“批准文号”游戏,以假文号、无文号糊弄消费者,或者是虽有正规文号却非法宣传等现象,消费者必须清醒地认识:性保健品具有特定保健功能,适宜于特定人群,具调节机体功能,不具有治疗疾病的作用。
在选用上也需极其慎重:首先了解自己的身体情况,到正规医院全面体检,明确减退的原因,由医生决定该采用什么方法治疗,绝不可偏听广告。如果需要服用保健品,应该在医生指导下在正规医院药房或药店选购。服用时要从小剂量开始,服用过程中严密观察,发现异常反应(包括那些“欣快异常”的变化),要及时告知医生,避免成瘾和盲目加量。此外,购买任何保健品都要索取正规发票,服用后要保留一定的样品,以备必要时送检化验,作为法律依据。
新闻链接:
篇2
一、报名时间
1.网上报名时间:8月29日—9月12日;
2.现场确认时间:9月6—14日(周六、日除外)。
二、报名方式
2018年我市成人高考的报名方式为网上预报名和现场确认,网上报名网址:
⑴重庆市教育考试院网站(cqksy.cn);
⑵重庆招考信息网(cqzk.com.cn)。
三、网上预报名
网上报名考生须首先登录报名网页,进入预报名流程:
1.如实、准确填报本人基本信息;
2.上传本人第二代《身份证》正反面图片和近期免冠正面照片;
3.慎重、准确完成志愿信息填报;
4.考生预报名信息提交审核;
5.考生预报名信息审核合格后,完成网上缴纳报名费。
各区县招考机构要高度重视和积极应对网上审核预报名信息,要指派专人对网上报名考生提交的信息进行审核。网上审核的审结时间为24小时,审核内容如下:
⑴考生正面免冠登记照,是否清晰可辨;
⑵考生《身份证》正、反面图片,是否清晰可辨;
⑶以上两项是否为同一人;
⑷网上填报的个人基本信息与身份证信息是否一致。
若审核结果不合格,则须注明理由并发回,由考生重新提交,直至审核合格;区县招生考试机构必须及时、准确完成审核,确保考生在提交信息后24小时之内,获得网上审核结果。
考生信息审核合格,方可进行网上交纳报名考试费。网上缴费仅限使用“支付宝”,考生须按系统提示完成有关缴费操作。
篇3
根据《自治区质监局办公室关于开展 2013年认证行政执法专项监督检查的通知》文件要求,在市局系统认真组织开展了认证行政执法自查工作,现将自查情况报告如下:
一、加强组织领导、科学筹划部署
接到开展认证行政执法自查工作通知后,我局高度重视,及时召开了专题会议,组织法制与监察科、计量与认证监管科和稽查队相关人员认真学习文件要求,组织成立了认证行政执法检查小组,安排部署自查工作。自查工作中,紧紧围绕认证执法监管体系、认证行政执法和认证行政处罚案卷重点内容,认真进行自查。通过全面自查,有力排查我市在认证执法中存在的不足和问题,规范认证行政执法行为,提高依法监管和行政执法水平,推动认证行政执法责任制的落实。
二、健全认证执法体系,完善执法工作机制
(一)认证监管机构设置规范完善
__市局认证行政执法工作涉及法制与监察科、计量与认证监管科和稽查队三个工作部门,法制与监察科负责认证执法案卷审理审查、认证执法人员管理培训和执法监督工作。计量与认证监管科负责获证企业的日常监管。稽查队负责认证违法行为的查处工作。三部门联动做到监管信息畅通、运行缜密和权责分明。三县(市)局认证行政执法工作设置在稽查队,由专人负责,办公室法制监督,有力的保障了认证监管中规范执法、严格执法,责任执法。
(二)强化部门联动,做到职责明确。
__市局与三县(市)局建立了区域合作机制,案件查处通报制度,重大处罚案件备案制度和行政执法责任制等制度。在监管中充分利用认证执法监管信息系统,建立和更新辖区认证获证企业信息。对获证企业实行巡查制度,计量与认证监管科对市区获证企业进行日常监管,发现企业认证违法行为,及时通报稽查队,并配合做好查处工作。对于群众举报的案源,稽查队均能做到实地核查、及时查处。在监管中执行《__市行政执法监督与行政执法过错责任追究办法》,将执法监管责任分解落实到每个岗位和执法人员,严格规范行政执法行为,保证按照统一尺度开展执法工作。
篇4
一、报名时间
1.网上报名时间:8月29日—9月12日;
2.现场确认时间:9月6—14日(周六、日除外)。
二、报名方式
2018年我市成人高考的报名方式为网上预报名和现场确认,网上报名网址:
⑴重庆市教育考试院网站(cqksy.cn);
⑵重庆招考信息网(cqzk.com.cn)。
三、网上预报名
网上报名考生须首先登录报名网页,进入预报名流程:
1.如实、准确填报本人基本信息;
2.上传本人第二代《身份证》正反面图片和近期免冠正面照片;
3.慎重、准确完成志愿信息填报;
4.考生预报名信息提交审核;
5.考生预报名信息审核合格后,完成网上缴纳报名费。
各区县招考机构要高度重视和积极应对网上审核预报名信息,要指派专人对网上报名考生提交的信息进行审核。网上审核的审结时间为24小时,审核内容如下:
⑴考生正面免冠登记照,是否清晰可辨;
⑵考生《身份证》正、反面图片,是否清晰可辨;
⑶以上两项是否为同一人;
⑷网上填报的个人基本信息与身份证信息是否一致。
若审核结果不合格,则须注明理由并发回,由考生重新提交,直至审核合格;区县招生考试机构必须及时、准确完成审核,确保考生在提交信息后24小时之内,获得网上审核结果。
考生信息审核合格,方可进行网上交纳报名考试费。网上缴费仅限使用“支付宝”,考生须按系统提示完成有关缴费操作。
篇5
当前主流观点认为必须建立专门的情报部门与情报人员。但是,如何设置没有形成统一的意见,最高检也没有规范性或政策性指导意见。有的认为应当将情报部门设置在举报中心;有的认为在反贪部门设置专职情报人员;有的则认为抽调反贪、举报中心、预防科人员,新成立情报中心等等。笔者认为,对情报中心设置问题制定规范性指导文件是当务之急。信息情报部门最适宜设置在举报中心。现行举报中心职能存在诸多弊端:工作内容简单,现行职能以受理群众举报控告和线索移交为主要内容,任务和职能十分单纯;工作方式僵化,以接受举报和来信、来访为主要工作方式,基本上是坐堂接报,工作比较被动,对于获得的举报线索往往是一转了之,基本上没有进行情报信息的“深加工”;工作成效欠佳,由于举报线索资源管理和使用脱节,流转环节多, 责任分散,处理周期长,导致办案成本增加,办案效率降低,现行有限的线索资源并没有被最大限度地开发利用。设置专门情报部门,应当充分考虑到我国检察机关内部职能部门设置的实情况。显然,在反贪内部或抽调反贪、举报、预防人员新成立情报中心不太切合实际。举报中心对外是一个接报部门,但对内在一定程度上实际是一个情报部门,它是目前检察机关储存职务犯罪情报相对集中的地方。赋予举报中心情报收集、管理功能,与目前举报中心的任务是相一致的,这种举报中心和情报中心的整合,可以为侦查部门提供更多的情报支持。
二、情报资源应充分共享
1 、内部情报传递不畅。 这是普遍存在的情况。先不说那些保密的情报资料,单就已经办理的案件来说,在同一地区内,几个兄弟单位之间几乎不知道对方办了多少案,办过哪些案,大都只顾自己办案。如某基层院查办案件中查到了某行贿人行贿的事实,而之前其他兄弟单位早已经查过,而且还很详细,但对该情况这个单位并不了解,所以浪费了不少工作量。又如,某院查办贪污贿赂案件中,牵出属他院管辖的案件,但对该情况,多数单位都只是一放了之,不会主动将此情况转达他院,造成情报短路。情报资料没能共享,实际上造成了大量人力物力财力的浪费,也降低了办案效率和质量。因此,必须紧紧依靠计算机网络的发展,通过单位内部局域网以及专线网建设,将情报资料实现资源共享,建立职务犯罪情报网络系统。同时,检察机关可以制定必要的考核机制和奖励措施,制定院内设机构之间线索移送制度。
2 、外部信息没有共享。 反贪案件的成功办理,需要收集许多有价值的外部信息,往往会涉及到对有关信息资料的利用,如工商登记资料、电讯信息资料、人口信息管理资料、车辆管理资料、出入境管理资料、房产信息资料、税务登记资料等等。但由于长期以来检察机关不够重视与相关单位建立信息共享机制,导致目前各项信息没有通过网络实现共享,因此,反贪案件初查中往往疲于奔波各部门查询信息,造成司法资源的浪费,影响工作效率和案件保密。因此,检察机关必须加强与审计机关、纪委等有关部门建立案件线索移送制度,进一步拓宽案源。应充分利用网络这个便捷的通道,建立与有关部门(公安、银行、工商、税务、海关等)行业电脑资料库联网的专线网,及时获取所需信息资料。
三、部门区域间要加强协作
对纪检、监察机关查办的重大违法违纪案件,积极介入,不出具法律文书不动用刑事手段,掌握案件侦查的主动权。建立提前介入审计及个案协查制度,通过提前介入审计发现贪污渎职犯罪;办理个案中必要时可以商请审计部门审计查证。对有些成案价值比较大,但线索比较粗的举报线索,可以请求工商税务等部门的密切配合,以这些部门的名义进行查帐查税审计秘密获取证据,请技术监督工商税务稽查物价仲裁等部门的专业人员协助办案。有必要以法律形式将检察机关与其他职能部门如纪委、审计机关之间,在反腐败信息资源管理上的关系进行界定,赋予检察机关优先处理案件情报信息的权力。
四、加大科技装备在信息情报建设中的应用
自侦部门情报的收集手段比较单一,落后,电话监听、电子远程跟踪等科技手段也运用很少。情报的收集主要集中在线索的收集,对线索之外的情报则很少顾及,且线索的收集渠道还是固定在以传统的举报为主。由于职务犯罪的隐蔽性极强,仅凭举报查处的案件也较少,且举报的情报也很多是道听途说,线索情报质量不高,成案率低。情报收集手段的落后和科技含量的过低,已严重限制了情报工作的开展。
在情报资料库的建设方面,检察机关同其他机关相比是比较滞后的。各地公安机关大都建立了常住人口信息、暂住人口管理系统、刑事案件信息系统等众多情报管理系统,有些还建成了区域或全国信息网络系统。同时,工商行政执法部门、税务缉查部门等也建立了相应的情报信息资料库。但我们情报资料库数量较少且相对落后。因此,我们要依托科技力量,积极设计、开发更多的信息情报数据库软件。
五、大力培养社会基础资源依托
篇6
院审判委员会:
在目前的审理案件中,我们发现检察院向我院移送起诉了处于取保候审状态的被告人,检察院亦提出了缓刑的量刑建议,但司法局出具了不同意社区矫正的报告,依照刑事诉讼法及相关司法解释的规定,我院应当下发逮捕决定书给公安机关,由公安机关执行逮捕,但现实情况是,公安机关却以疫情原因为由没有执行,由此影响结案。经刑事审判团队讨论,现提出如下方案:
一、等公安机关执行收监后再开庭。该方案中我们需要考虑到的是,一方面等待公安机关执行的时间是不确定的,同案中被关押的被告人将会一直关押下去,甚至超出检察院量刑建议的最高刑期限度;另一方面司法局出具不同意社区矫正报告的被告人与其他可判缓刑的同案被告人在案件中地位作用相当,根据罪责刑相适应原则,也应当实现同案同判,即全部判决实刑。
二、我们先下逮捕决定书,开庭判决实刑,待能收监时,再送达收监决定书、执行通知书给公安机关,督促及时收监。
刑事审判团队倾向于第二种方案,以上方案请审委会予以讨论决定。
篇7
一、瑞安市人大贯彻落实监督法的实践和成效
(1)健全制度,促进监督工作规范化。切实抓好制度建设,规范有序开展监督工作。一是全面梳理有关规范性文件,及时修改常委会议事规则、主任会议议事规则、常委会组成人员守则、常委会组成人员联系代表、常委会审议意见办理办法、议案处理办法、工作规则等制度。二是每年都制定监督计划,明确监督议题、总体要求、进度安排和责任单位,并及时通过新闻媒体向社会公开,确保年度监督工作依法有序进行。
(2)突出重点,提高监督工作实效性。一是围绕发展大局抓监督。及时把脉“十二五”规划纲,认真审议关于沿海产业带建设、政府投资、统筹城乡发展等专项工作报告,并依法就乡镇行政区划调整、市域总体规划等重大事项作出决定。做好计划、财政预算执行和重点项目资金安排情况的监督。二是围绕民生改善抓监督。开展食品安全、镇街卫生院运行、保障房建设、电网建设、民办教育、社会治安、环境资源保护等民生热点的监督,听取和审议完善和规范房地产市场、优先发展公交事业、温瑞塘河综合整治、民间借贷及非法集资类案件处理等专项工作。三是围绕法律实施抓监督。先后就行政许可法、科技进步法、律师法、农业机械化促进法、归侨侨眷权益保护法、矿山安全法等17部法律法规的贯彻落实情况开展执法检查活动,促进了市政府及其职能部门依法行政。四是围绕司法公正抓监督。开展职务犯罪查处与审判、行政审判、未成年人犯罪审判、刑事立功等专项检查,促进司法公正,保障社会正义。
(3)创新方法,增强监督工作针对性。一是在监督环节上,强化跟踪监督。注重监督议题的后续跟踪工作,使人大监督有始、有终、有效。如针对市十四届人大的关于加快实施饮用水安全工程的议案,坚持不懈开展跟踪督办,督促市政府连续5年将饮用水工程建设列为为民办实事的重点项目来抓,解决和改善了253个村的饮水难题。二是在监督方式上,开展专题询问和整改情况满意度测评。在明查暗访、执法检查、听取报告的基础上,召开食品安全工作专题询问会,督促市政府解决食品安全监管机制、风险监测和执法体系建设等方面存在的问题。三是在监督时效上,推行限时督办。明确要求“一府两院”在规定时间内先向常委会相关工委提交落实审议意见的实施方案,并按规定时间向常委会提交整改报告,从而使人大监督的时效大为提高。
二、存在的主要问题与不足
(1)从监督意识上看,认识有待深化。一方面,作为监督主体,部分常委会组成人员和人大干部缺乏主动监督的意识,还存在“党委不点头,不能监督;政府不高兴,不想监督”的顾虑,以及人大监督发挥多大作用,权力用到什么程度才合适的困惑,特别是受制于人情关系而“犹抱琵琶半遮面”,未能理直气壮开展监督。个别组成人员也由于受传统思维和社会舆论的影响,存在“船到码头车到站”的消极心态。另一方面,作为被监督者还缺乏自觉接受监督的观念,认为人大监督是挑刺找茬、是给添麻烦,对人大监督的法定地位和权力认识不清,对人大提出的建议意见没有引起足够的重视。
(2)从监督体制上看,关系有待理顺。县级人大常委会的监督对象是“一府两院”,但实践中,由于党政职能难以分清,许多工作都是党委和政府联合行文部署。作为接受党委领导、监督政府工作的人大常委会就容易陷入“两难”境地。公、检、法等司法机关也要接受党委所属政法委的直接领导,牵涉的监督层次和关系复杂,给人大监督带来一定难度。此外,工商、国土、税务、质监、食药监等垂直管理部门,从行政关系上基本脱离了地方政府,但这些部门的工作仍是地方政府工作的重要内容,人大如何开展对垂管部门的监督,也需要体制上的理顺。
(3)从监督手段上看,刚性有待强化。目前,地方人大监督基本上是听取和审议工作报告或专项工作汇报、审查与批准计划及预算等程序性的监督,也探索实行了满意度测评、专题询问等方式,但监督法规定的质询、特定问题调查、罢免和撤职等刚性的监督方式基本上没用过,对存在和发现的问题基本都用意见和建议的方式督促解决。对一些事关全局的重大问题、敏感问题、焦点问题,缺乏深层次的了解及相关的处置措施。总体而言,实际的监督工作中还是弹性监督多、刚性监督少,程序性监督多、实质性监督少,建议性监督多、强制性监督少,导致被监督者觉得人大只是来虚的、不会来硬的,使监督体现不出应有的权威性。
(4)从监督实效上看,质量有待提高。首先是调查研究不够深入。对例会确定的重点议题或作出的一些决策,深入调研也不够,没有真正掌握大量的第一手资料,以致人大开展工作不能有的放矢。其次是审议质量不够高。审议“一府两院”的工作是人大监督的重要形式,审议质量的高低很大程度上决定了人大监督工作水平的高低。有的审议意见过于原则笼统,缺乏具体的整改要求和量化指标,针对性和操作性不够强。再次是跟踪落实不够有力。人大与“一府两院”的沟通协调需要加强,有的工委没有及时跟踪督查,“重审议、轻办理”的现象仍较普遍。
三、进一步提高人大监督工作水平的几点思考
党的十为人大工作指明了方向,也为我们做好新时期人大监督工作提出了新的更高的要求。通过调研,我们深切体会到提高人大监督水平,关键要按照坚持党的领导、依法办事、民主公开、务求实效的原则,进一步完善监督工作机制,增强监督工作实效,重点要研究解决以下几个问题:
篇8
烹饪设施设备月度安全检查情况汇报表
实训室名称
设备
数量
检查结果
情况说明
西餐实训室
炉灶
2
正常
扒炉
2
正常
煎锅
2
正常
宝仔炉
8
正常
鲜风机
1
正常
油烟机
1
正常
运水设备
1
正常
冰箱
1
正常
水管设备
不正常
中餐演示室
炉灶
2
正常
油烟机
1
正常
冰箱
1
正常
水管设备
正常
中餐实训室
炉灶
16
正常
鲜风机
1
正常
油烟机
2
正常
运水设备
1
正常
水管设备
正常
面点实训室
炉灶
1
正常
蒸炉
2
正常
搅面机
2
正常
压面机
2
正常
冰箱
1
正常
油烟机
1
正常
水管设备
正常
刀工实训室
水管设备
不正常
总煤气房
总开关
2
篇9
[关键词] 人参皂苷Rb1; 阿霉素; 自噬; H9c2细胞
Protective effect of ginsenoside Rb1 on doxorubicin
induced myocardial autophagy
LI Longfei, MA Zengchun*, WANG Yuguang, TANG Xianglin, TAN Hongling, XIAO Chengrong, GAO Yue*
(Institute of Radiation Medicine Science, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China)
[Abstract] Ginsenoside Rb1(Rb1), which is one of the main ingredients derived from Panax ginseng, has been found to have extensive pharmacological activities including antioxidant, antiinflammatory, anticancer properties. In this study, the effect of Rb1 on doxorubicininduced myocardial autophagy was studied with H9c2 as the study object. CCK8 method, transmission electron microscope observation, fluorescence staining observation and Western blot were used to detect changes in H9c2 cell proliferation and autophagy after treatment. According to the results, doxorubicin could cause cell viability decrease, significant increase in the LC3Ⅱ/LC3I ratio and downregulation of the expression of p62. Pretreatment with ginsenoside Rb1 inhibited cell viability decrease and increase in doxorubicininduced autophagic structure and LC3Ⅱ/LC3I ratio, and downregulation of the expression of p62. In conclusion, doxorubicin could induce H9c2 cell death and induce autophagy, and ginsenoside Rb1 showed a protective effect on DOXinduced cardiotoxicity, which may be correlated with suppression of DOXinduced autophagy.
[Key words] ginsenoside Rb1; doxorubicin; autophagy; H9c2 cell
自噬是细胞受到刺激后产生双层膜囊泡包裹胞内物质运送到溶酶体降解的过程,是真核生物所特有的进化保守过程,其主要功能是清除和降解细胞内受损的细胞结构和衰老的细胞器以及外来物,保持细胞稳态[1]。近年研究发现,自噬不但参与心血管系统稳态的调控,而且在心肌肥大、心肌纤维化、心肌缺血再灌注损伤、心力衰竭等多种病理过程中发挥重要作用[25]。人参为五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根和根茎,是我国传统名贵中药材,在我国药用历史悠久,对多种疾病具有防治效果。人参皂苷Rb1是人参的主要有效成分之一[6]。现代药理研究证明,人参皂苷Rb1可明显改善缺血性心脏病、各型心律失常、急性或慢性心力衰竭等心脏疾病[7]。阿霉素属于周期非特异性抗肿瘤药。文献报道,其具有心脏毒性并且会导致心肌细胞自噬性死亡[810]。因此,本研究拟用阿霉素建立心肌细胞自噬损伤模型,探讨人参皂苷Rb1对阿霉素诱导心肌自噬的影响。
1 材料
1.1 药品与试剂 人参皂苷Rb1购于上海一飞生物科技有限公司(批号E049517,纯度98%);阿霉素(doxorubicine,DOX)、3MA购自美国Selleck Chemicals公司;DMEM高糖培养基、青霉素链霉素双抗溶液购于GE医疗公司;胎牛血清(FBS)购自天津康源生物技术有限公司;磷酸盐缓冲液(PBS)、PremoTM Autophagy Tandem Sensor RFPGFPLC3B Kit购于美国赛默飞世尔科技公司;CCK8试剂盒购于日本同仁化学研究所;AntiSQSTM1/p62抗体购自英国Abcam公司;LC3B抗体购自美国CST公司;实验用水为超纯水;其他试剂均为国产分析纯。
1.2 仪器 VICTOR X型多标记酶标仪(美国Perkin Elmer公司);SM 510 META激光扫描共聚焦显微镜(德国Zeiss公司);日立透射扫描电子显微镜H7650(日本日立集团);Microfuge 22R型离心机(美国Beckman公司);CO2培养箱(美国Thermo公司);Millipore SimplicityTM185超纯水机(德国Merck集团);VIBS223S电子天平(德国Sartorious公司)。
1.3 细胞系 本研究采用大鼠胚胎心肌细胞系H9c2(21)作为实验对象,此细胞系购自北京协和细胞资源中心(Cell Resource Center,IBMS,CAMS/PUMC)。
2 方法
2.1 细胞培养 H9c2细胞培养于含10%FBS的DMEM高糖培养液中(含青霉素钠100 units・mL-1,链霉素100 mg・L-1),放入37 ℃,5%CO2培养箱中培养。2 d更换1次培养液,待细胞生长至约80%时用0.25%胰蛋白酶消化传代。取对数生长期细胞进行实验。
2.2 细胞活力检测 取对数生长期细胞接种于96孔板中,每孔1×104个细胞,置于培养箱中培养。实验设置调零孔(只加培养基不加细胞)、细胞对照孔和实验孔,每组设置3个复孔。待细胞培养24 h后弃去上清培养液,加入用含2%FBS的DMEM培养基配成的各浓度受试药物,在培养箱中培养适当时间后,每孔加入CCK8试剂10 μL,培养箱内孵育约1~2 h,使用酶标仪在450 nm处测定吸光度。细胞存活率=(A给药组CA调零孔)/(A对照组CA调零孔)×100%。
2.3 电镜观察自噬体 细胞给药处理后采用刮刀法收集细胞,经过前固定、漂洗、后固定、漂洗、脱水、浸透、包埋、切片等步骤制成超薄切片进行透射电镜观察。
2.4 RFPGFPLC3B融合蛋白示踪自噬形成 按照PremoTM Autophagy Tandem Sensor RFPGFPLC3B Kit说明书,每1万细胞中加入2 μL转染试剂,孵育16 h,将RFPGFPLC3B融合蛋白转染至H9c2细胞。转染成功后进行给药处理,采用激光共聚焦显微镜进行观察。
2.5 Western blot 法检测自噬相关蛋白 取对数生长期细胞接种于25 cm2细胞培养瓶中,每瓶约5×104个细胞。进行给药处理后,收集各培养瓶细胞,离心,PBS漂洗,加入细胞裂解液,提取细胞总蛋白。经BCA法测定蛋白浓度及变性后,进行SDSPAGE电泳,转膜,5%脱脂奶粉或BSA封闭,分别加入LC3B,p62和GAPDH抗体,4 ℃孵育过夜。次日,TBST洗膜3次,加入HRP标记的二抗室温孵育90 min,TBST洗膜3次后用化学发光法显影,采用Image J软件进行条带分析。
2.6 稻莘治 数据用±s表示,计量资料组间比较采用单因素方差分析;统计分析软件使用GraphPad Prism 5.0,以P
3 结果
3.1 人参皂苷Rb1减轻阿霉素引起的细胞损伤 阿霉素0,0.5,1,2.5,5,10,20 μmol・L-1处理24 h后,采用CCK8法检测H9c2细胞活力的变化。结果显示,阿霉素在1~20 μmol・L-1对H9c2细胞活力具有显著的抑制作用,且呈明显的量效关系(图1)。不同浓度的人参皂苷Rb1预处理6 h后加入5 μmol・L-1DOX共孵育24 h,采用CCK8法检测细胞活力。结果显示,人参皂苷Rb1可以逆转阿霉素导致的H9c2细胞活力下降,表明人参皂苷Rb1可以抑制阿霉素诱导的H9c2细胞死亡(图2)。
3.2 阿霉素诱导H9c2细胞自噬活化模型的建立 为了选择合适的浓度以及时间进行阿霉素自噬模型的建立,分别采用0,0.5,1,2.5,5,10,20 μmol・L-1 DOX处理细胞12 h和1 μmol・L-1DOX处理细胞0,3,6,12,24,48 h后提取细胞蛋白,采用Western blot法检测自噬相关蛋白的变化。结果显示,阿霉素可剂量依赖性(0~10 μmol・L-1)以及时间依赖性(0~48 h)地导致LC3BⅡ/ LC3BⅠ升高并使p62蛋白含量降低,表明阿霉素可导致H9c2细胞自噬活化。根据数据分析结果,选择1 μmol・L-1DOX处理细胞12 h进行造模(图3)。
3.3 人参皂苷Rb1抑制阿霉素诱导的H9c2自噬活化 50 μmol・L-1人参皂苷Rb1预处理6 h加入1 μmol・L-1DOX共孵育12 h后,收集细胞,制备超薄切片,采用透射电镜观察自噬体。与对照组相比,DOX组可以明显观察到自噬结构,人参皂苷Rb1预处理组自噬结构则不明显(图4)。
将RFPGFPLC3B融合蛋白转染至H9c2细胞后,50 μmol・L-1人参皂苷Rb1和5 mmol・L-13MA分别预处理6 h加入1 μmol・L-1DOX共孵育12 h后,进行荧光观察。与对照组相比,DOX组merge后红色荧光明显增强,提示RFPGFPLC3B融合蛋白多定位于溶酶体或自噬溶酶体内,即自噬流活化(图5)。人参皂苷Rb1预处理与自噬抑制剂3MA预处理组merge后红色荧光减弱,提示其抑制DOX诱导的自噬活化(图5)。
50 μmol・L-1人参皂苷Rb1和5 mmol・L-13MA分别预处理6 h加入1 μmol・L-1DOX共孵育12 h后,采用Western blot法检测自噬相关蛋白的变化。结果显示,人参皂苷Rb1预处理与自噬抑制剂3MA预处理组LC3BⅡ/LC3BⅠ明显低于DOX组,同时p62蛋白表达亦有部分升高,但无统计学差异。提示人参皂苷Rb1可以抑制DOX诱导的自噬活化(图6)。
4 讨论
[16] Orogo A M, Gustafsson B. Therapeutic targeting of autophagy: potential and concerns in treating cardiovascular disease[J]. Circ Res, 2015, 116(3): 489.
[17] Klionsky D J, Abdelmohsen K, Abe A, et al. Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (3rd edition)[J]. Autophagy, 2016, 12(1): 1.
[18] Wang R X, He R L, Jiao H X, et al. Ginsenoside Rb1 attenuates agonistinduced contractile response via inhibition of storeoperated calcium entry in pulmonary arteries of normal and pulmonary hypertensive rats[J]. Cell Physiol Biochem, 2015, 35(4): 1467.
[19] Wang X F, Liu X J, Zhou Q M, et al. Ginsenoside Rb1 reduces isoproterenolinduced cardiomyocytes apoptosis in vitro and in vivo[J]. Evid Based Complement Alternat Med, 2013, 2013: 454389.
篇10
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索!
下乡前有事耽搁本没有做好充分的准备,甚至没看清自己支教的第一天就已有课了。原本想好好讲一门语文阅读导引课程,计划从一份精心挑选的材料中折射出多方面的语文学习方法以及写作方法,乃至把握生活中的灵感,想把自己的思想以及认识知会给孩子们。但是出发前的空洞以及第一天的紧凑已经宣告了我的失败。没有材料的支撑和充分的例子,注定任何理论都是空洞的。在事实的面前,我既不博览群书,胸中也无信手拈来的材料,离开了现成的材料,我的知识储备少得可怜,作为中文人真是莫大的悲哀。失落中改变了所有的计划,把语文课都改成了音乐课。每晚当别人在埋头备课的时候,我却一个人在树底下听歌,无尽的失望和失落。有两个孩子见了我说:“这个是唱歌老师!”我想我不能只是唱歌,尽管它是那样地轻松和愉快!后来就准备了一门英语诗歌学习的课程,通过自己临时总结的一招“偷师法”,教了孩子们一种学习英语的方法,才像是真正上了一门课,听到了他们说开始有一种“感觉”,我心里第一次有了安慰,也只有这节课是完完整整地融合我真正的心得和初衷,九天以来第一次哭是为我自己。
但我不是学唱歌的,也不是教英文的,以后面对的是语文,它所要求的文化修养是我远远不及的。如果说备好课可以提供我们更好展示自己的舞台,但是有一天也是这样临时上阵,而我可以给我的学生带来什么?也许我们都有自己的方法可以“糊弄”过去,但是永远也蒙骗不了自己。路漫漫其修远兮,吾将上下而求索!
安然处之的平凡
当我们自小耳熟能详与“老师是太阳底下最光辉的事业,是人类灵魂的工程师”诸种关于教师职业之神圣的标语时,而在孩子们的眼中,老师的位置并不能得到百分百的认同和肯定,甚至有人厌恶老师都成了一种习惯。做好一位老师真的不容易,并不是说我们加载于“老师”有多少层伟大神圣的含义,所谓的“伟大、神圣”,乃是教师作为千万种普通职业中的一种,它应具备的职业道德和规则而已!正如一位工程师把一栋房子盖好而不至于使它倒塌残害无辜生命并非是多么光荣伟大的事情。