报的组词范文

导语：如何才能写好一篇报的组词，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

外人见到祖父祖母，总以为他们的爱情很美满。确实做了五十年的夫妻，并不是一件容易的事，于是想当然地认为他们之间一定很和睦。但事实却大相径庭：其实，祖父与祖母间的吵嘴是每天都少不了的。祖父比较随和，祖母则有些严肃，两人总会为一个鸡毛蒜皮的小事吵起来，吵不了几句就停下，然后又为新的事斗嘴，如此循环，永不间断。不过，吵架归吵架，祖父祖母同样深深关怀着对方。祖父时不时要到老年大学去听讲座，若天色晚了还未回家，祖母便会搬把小凳子到下街去等，而祖父回来后也只是笑着说她傻。

一次偶然的机会，我在祖父家的电脑上发现了一个名为《金婚》的文件夹。好奇心驱使我打开，才发现是祖父与祖母为纪念结婚五十周年而特地拍的婚纱照，其中有一张还模仿《泰坦尼克号》中的场景，两人相拥在一起，脸上都洋溢着幸福的笑容，颇具美感。我不禁放声大笑，笑声招来了祖母。当得知我发现他们的“秘密”时，祖母笑着把我叫到一边，跟我说：“想知道幕后的故事吗？”我使劲点头。她看了看窗外，便开始讲起了他们拍照的故事来。

原来，这照片不是两人主动去拍的，而是社区里组织的。开始他们俩还死活不愿意去呢，说是这么大的人了还去拍什么婚纱照。后来好说歹说是同意了，但是拍照时也很不顺利，这对老夫妻连手都没有怎么牵过，“可恶”的摄影师居然要求他们拥抱在一起。“反正我是死活不同意，你祖父倒无所谓。”祖母说这话时，无不带有一丝自豪的情感，我偷笑。最后，两人在拍摄组的劝说下，终于同意“抱一下”。于是就有了这张照片。“可真不简单哪！”我感叹道。“可不是嘛，唉，你祖父怎么还不回来”，祖母起身，眼睛盯着窗外。

第二天，我帮祖父看店，祖父在一旁下棋。街坊正好谈到拍照一事，我便竖起了耳朵。

篇2

【关键词】刺绣 首饰 艺术魅力 应用

传统首饰工艺的萎缩在根本上是产品式样与市场需求的脱节，迫切需要解决传承与创新的问题，并积极应对传统首饰工艺的转型。对于学校中的首饰专业来讲，艺术首饰的发展不是唯一，对于传统技艺的学习、新型材料的开发以及设计符合市场规律的作品是齐头并进的。我们在首饰教学实践中除了学习基础工艺外，还专注学习传统技艺，努力寻求新的材质，以期完善首饰工艺技法、丰富首饰的内涵。

一、首饰中的拾来物――刺绣

1.首饰刺绣

现代艺术首饰中纤维是使用较为普遍的一种材质，很多优秀的作品都是用纯纤维材质来制作。而刺绣是纤维艺术中很重要的一个部分，它是针线在织物上绣制的各种装饰图案的总称。

对本文所谈及的刺绣首饰的感动来源于笔者一次带学生的云南首饰技术考察之旅，这种白族、苗族等少数民族妇女在农忙闲暇之余所绣的衣物上的刺绣，色彩华丽、技法多样，非常有特色。女孩们会用5年甚至更久的时间为自己绣制一套嫁衣，配上代代相传的苗银华丽出嫁。唯一遗憾的是，嫁娶婚俗渐渐西化，妈妈的嫁衣渐渐老旧，而这种代代相传的技艺也正在逐渐衰退。这种拾来的破旧老嫁衣上的一块衣领、一个绣章对于我们来说却是无价之宝。（图1）在感动于这些小刺绣的精美时，不由自主地想起了如何运用这些残破刺绣做成首饰，以最大程度保留这些散落在尘埃的“珍珠”。

2.刺绣在首饰中的价值

这些刺绣不是传统意义上的一般纤维材质，而是残破的拾来物，是有瑕疵的、不完整的、废弃的。现代首饰中的拾来物是囊括的说法，多采用一些廉价的、非传统的，甚至是拾来的物件组合制作首饰，探索首饰与人的各种关系。这种现代艺术首饰在一定程度上只借鉴首饰外形的哲学表达，因此往往在精神层面上更容易让现代人接受。

很多有纪念意义的首饰，例如把出生宝宝的胎发、旅行纪念物等放入首饰中，佩戴者往往对此种首饰融入更加深刻的感情。刺绣首饰更多的是人文思想与内涵，包含着中国人的民俗、精神，甚至是绘画成就。因此，刺绣首饰不再是一个冷冰冰的物件，而是充满了感情和温度。

打上现代艺术标签的首饰在绝大多数人看来是晦涩难懂的，很难得到的认同。我们需要找到一种新的材质，但又价格适中、又能受到普通大众的喜爱。因此，这些破旧的衣物上的绣片已经没有实际用途，但其本身确像宝石一样闪闪发光。岁月静好，一件刺绣作品就是一个绣娘的一段岁月，是记录一个女人的悲哀喜怒的镜子。笔者相信，把这些绣片与首饰相结合，把绣片代替宝石做镶嵌，一定会化腐朽为神奇，并用首饰的方式把绣片的美继承下来。

二、现代刺绣首饰的艺术魅力

1.艺术美

绣片的不可复制决定了每一款刺绣饰品都是绝对的孤品，每位绣娘不同的人格特质为每片绣片带来了不一样的审美情趣，自由组合的图案、跳跃的色彩使之成为首饰中的亮点。而选用苏绣，则典雅隽秀显得首饰素雅大方，成为旗袍或者改良中国风服饰的首选，这些刺绣作品以另一种方式获得了重生。

学生设计并自己动手制作的刺绣首饰作品中（图4、5），柔软的刺绣与银白的贵金属的搭配，一柔一硬，产生了一种强烈的对比。（图4）的苗绣绣片上承载的苗族历史，又使佩戴它的人可以瞬间近距离接触这个民族，把描绘苗族祖先蝴蝶妈妈传说的绣片镶嵌在一个美丽的项坠中，可以让没有去过苗族的人得到另一种无形的经历，满足了人们想要猎奇与独特的心态。刺绣在首饰中的突出地位，主要是由其丰富的色彩决定的，另外，丝质的光泽和金属的强烈对比也是吸引人注意的地方。（图5）刺绣首饰在制作上用到了簪刻、花丝、镂空、镶嵌、珐琅，但最重要的色彩都是由刺绣提供，是第一眼关注的重点。这套作品工艺上虽然稚嫩，但贵在新颖独特、舒适大方，在搭配上没有特定倾向，任何衣服都能配出独特的味道。

2.民族美

任何一个人回到了母文化的环境中都是最舒适的，这些刺绣作品给了我们启发点的同时也愉悦了我们自身。刺绣首饰就刺绣本身而言，就已经带有强烈的中国风格，佩戴着会不由自主地联想到东方风味。

一方面，我们需要的东方风味是可以让我们自己品之有味、体现中国人精神的首饰作品。我们应该是用中国的意境美取代西方形式美对我们的束缚，而不是在现代艺术首饰与现代珠宝首饰中都简单地模仿西方，反而让西方标榜我们的中国风；另一方面，刺绣作为中国人比较常见的一种艺术，能够为国人所接受与喜爱。因此，刺绣首饰的开发不仅符合国人的喜爱，最主要的是价格合理，比较适合平时佩戴。

现代首饰艺术虽然属于最前沿的艺术门类，但它的受众范围也是小众，因此，简单款式的刺绣首饰成为我们赴云南课程总结的首选目标。简单的设计使这些刺绣首饰可以作为日常佩戴，也可以穿着中式旗袍或礼服时佩戴，浓重的中国风格使之成为服饰中的点睛之笔。

3.简洁美

简洁不是简单，新兴的银饰品牌《SU素》推出过一套刺绣首饰，独特的刺绣配合中式风格的衣服，把清风明月的禅风突出到极致，一种中国女人成熟的婉约之美最大程度地表现出来（图6）。这才是中国骨子里的内涵风格，中国风的最好阐述。这套首饰虽然款式简单，但受到了许多白领阶层的喜爱。

学生作品《镜花缘》（图7）元素选取同名小说，用花丝与绣片结合为主体，配合花丝工艺的外形，营造一种花非花、蝶非蝶状态缥缈的虚无世界，绣片的使用仿佛留住了本体与实质，拉开了现实与虚幻，是一款比较婉约细腻的刺绣首饰，精致小巧的造型很容易赢得人的好感。《相应》（图8）的款式相对简单，用梅、兰、竹、菊以及牡丹映衬吊坠里镶嵌的花卉刺绣，颜色艳丽大方，两种花卉交相辉映，是十分大气的商业款式。这几款刺绣首饰均轻巧秀丽，而且成本控制较低，无论是素雅的，还是艳丽的服装都可以随意配搭，一经推出便被首饰设计师收用。

三、刺绣在包镶设计中的手法运用

1.工艺

包镶在首饰制作中是最重要的也是最基本的手法，要代替宝石把刺绣镶嵌在首饰上，技术上只能选用包镶，有了金属做托底的镶嵌，绣片的使用寿命会长很多，金属元素的加入也使刺绣的日常佩戴使用更加突出。唯一有所区别的是，要在包镶的圈口之上再封一层随形口沿，这样可以隐藏刺绣的边缘，比较利于收口。

唯一要注意的就是，那些比较薄的刺绣，比如在薄真丝上绣的苏绣就不太适合直接裱在银子的托底上，而需要在里面裹一层同色系的棉布或者棉花，因为时间一长会透底。

2.布局

刺绣首饰中刺绣的布局应该根据不同的主题元素采取不同的对应方法，但都逃不出首饰设计美的法则：1.点线面的处理；2.整体与局部的关系；3.对比与协调关系；4.对称和平衡。在这些法则上，刺绣首饰还有个优势，就是在色彩和肌理这方面与金属天然就会产生鲜明的视觉冲击力。

总之，一件优秀的首饰设计的特质不单一指艺术，也不单一指技术，而是艺术与审美以及工艺的结合。

四、市场分析

笔者所在的城市是刺绣极为繁荣的苏州，苏州在明清时期技术达到顶峰，各种刺绣衍生品在历史上屡见不鲜，但在当今的苏绣市场，苏绣艺术品种相对单一。笔者曾经考察过苏州的刺绣市场，刺绣作品主要以屏风、画为主的平面作品，以及一些低端的韩国的订单小香包、名片夹、流苏等饰物，只有一两家比较高端的刺绣大师工作室会承接一点高端服饰的定制订单。如此单链条的营销模式导致大量的价格竞争。

在当今社会中，只有创新才能生存，只有跨界才能出彩。刺绣与服饰本来就是密不可分的，我们完全可以把只能远观的刺绣融入到我们的生活中。但需要解决两个问题：一个是设计问题，这个毋庸置疑，与服饰相关的任何装饰品都可以设计利用，包括很多更广泛的衍生品；还有一个是技术问题，就是可以让刺绣作品减少摩擦减少受污染机会的技术，据笔者所知，这项技术是材料工程专业已经研发的项目，完全可以广泛使用，使刺绣这个行业更上一层楼。笔者相信，在这样的条件下，刺绣的服饰、刺绣的首饰是完全可以打动消费者的。

结语

老绣片首饰的制作无疑在这种美上增添了另一种奢侈的美，这种奢侈不是首饰本身的价值，而是作品上融入的时光以及人们无尽的想象。绣片这种材质的使用，使刺绣首饰成为日常佩戴首饰的一种可能。成本低廉、色彩丰富，可以随意搭配服装并赋有民族风味是刺绣首饰的最大特点，可以在一定程度上小批量生产，作为商业首饰的刺绣首饰肯定会受到人们喜爱。

参考文献：

[1]张妮.材料的革命.现代艺术首饰中的拾来品[C].第五届中国现代手工艺学院展论文集，山东美术出版社，2009.

[2]郭新.珠宝首饰设计[M].上海：人民美术出版社，2009.

篇3

【关键词】 脑出血;重组人粒细胞集落刺激因子;骨髓干细胞;大鼠

干细胞移植治疗脑血管病及变性疾病已取得一定成效。但临床上因移植操作存在有创性，同时干细胞来源困难，体外培养、分离纯化技术尚未成熟及存在移植排斥等难题，使干细胞移植治疗脑血管病在短期内难以推广应用。重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)动员的骨髓干细胞(BMSC)既有干细胞的部分优点，又能克服干细胞移植的技术难题，理论上成为治疗脑血管病的理想方法之一。rhGCSF对脑出血(ICH)是否具有神经保护作用目前国内尚无研究，本实验拟用rhGCSF治疗脑出血大鼠，探讨rhGCSF是否对脑出血有神经保护作用及可能的机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 Wistar大鼠72只，鼠龄3～4个月，雌雄不拘，体重250～300 g，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供。

1.2 药物与试剂 重组人粒细胞刺激因子注射液(rhGCSF，商品名金磊赛强)，购自长春金赛药业有限责任公司;溴脱氧尿苷(Brdu)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3抗体(兔抗caspase3)和溴脱氧尿苷单克隆抗体(兔抗Brdu)购自北京博奥森生物技术有限公司;SP试剂盒、加强型DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 方法

1.3.1 动物分组及处理 实验动物随机分为假手术组、治疗组、ICH组。ICH组和治疗组均用断尾取自体血方法制备ICH模型，假手术组仅经注射点注入生理盐水。ICH后治疗组在术后1 h开始每天腹部皮下注射GCSF(50 μg·g-1·d-1)，另两组腹部皮下注射等量生理盐水。各组分别在术后1、3、7、14 d时间点行神经功能缺损(NSS)评分后处死动物。取脑。各组各时间点各取6只动物。各组大鼠在处死前1 d，腹腔注射Brdu(50 mg/kg)3次，间隔2 h，以标记分裂的骨髓干细胞。

1.3.2 免疫组织化学染色 各组大鼠在不同时间点行10%水合氯醛麻醉后(2 ml/kg)，行心脏灌注及固定，脑组织石蜡包埋切片，分别行Brdu、caspase3抗体免疫组化染色，检测免疫阳性细胞，严格按照试剂盒说明书操作。对Brdu、caspase3免疫阳性细胞进行计数，出血灶周边区随机选取5个高倍视野，计算阳性细胞数，取其平均数。

1.4 统计学处理 用SPSS 15.0统计软件包进行两样本均数间的t检验，结果用x±s表示。

2 结 果

2.1 神经功能缺损评分结果 ICH组和治疗组均产生不同程度的神经功能缺损，假手术组无神经功能缺损。术后1 d时ICH组与治疗组评分没有显著差别(P>0.05)，3、7、14 d时治疗组评分明显低于ICH组(P

2.2 免疫组织化学染色结果

2.2.1 Brdu免疫组织化学染色结果 ICH后在出血灶周边可见Brdu阳性细胞，但Brdu阳性细胞数随出血时间的延长而逐渐减少。在同一时间点，治疗组的Brdu阳性细胞均多于ICH组，但只有第1周的差别有显著性(P

2.2.2 caspase3免疫组织化学染色结果 ICH后，各时间点治疗组及ICH组表达均增高，但ICH组均较治疗组增高明显。见表3。表3 rhGCSF对ICH后caspase3阳性细胞数的影响

3 讨 论

以往认为成熟神经系统的神经细胞是终极细胞，受损后不能再生，而目前越来越多的证据表明脑有自身修复功能，成年脑的脑室下区、海马齿状回、室管膜区等区域存在自我更新和多种分化潜能的神经干细胞〔1〕。脑出血可诱导内源性干细胞的增殖、分化，但因数量少，因此诱导的自身修复能力有限。神经干细胞移殖虽然为脑损伤的治疗带来生机，但伦理、来源、移殖损伤和排斥反应等因素限制了其临床应用。

BMSC动员是新兴的细胞移殖方法，利用细胞因子使主要位于骨髓中的干细胞进入外周血，通过血液循环到达损伤组织以达到细胞移殖的目的。GCSF是BMSC强有力的动员剂，可以提高外周血干细胞数量，且可向脑损伤部位迁移，在脑损伤的特定病理环境中向神经细胞分化，以修复受损脑组织，从而起到神经保护作用。

Mezey等〔2〕研究认为，骨髓间充质干细胞能够迁移到受损的脑组织区域并分化成不同的脑组织，包括神经细胞和胶质细胞。Shuy等〔3〕用大鼠模型证实rhGCSF能动员骨髓间充质干细胞归巢至脑缺血损伤区，促进神经修复和功能康复，缺血大鼠用rhGCSF后MRI检查可见病灶明显缩小，并用免疫双标记染色证实rhGCSF能动员骨髓间充质干细胞在脑内分化为神经元和胶质细胞。这些研究为中枢神经系统移植BMSC，促进神经再生，改善中枢神经系统损伤后的生物学行为成为可能。

rhGCSF是BMSC强有力的动员剂，它动员的BMSC包括造血干细胞和骨髓间充质干细胞〔4〕。骨髓间充质干细胞能产生碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、神经生长因子、脑源性神经营养因子及血管内皮生长因子等，使分化的祖细胞向着生成神经细胞的方向分化。造血干细胞具有多向分化潜能，它在病理情况下可以“自发”地向损伤组织趋化，并在组织微环境作用下分化为受损脑组织特性的细胞，但确切机制尚不明确，可能和BMSC能够表达众多趋化因子受体和各种细胞黏附因子，以及促进出血区各种炎症介质的释放、脑细胞黏附因子的表达，调控BMSC的趋化有关。

本研究用断尾取自体血方法制备ICH模型，治疗组于术后1 h开始给予rhGCSF治疗，比较不同时间点对照组和治疗组的NSS评分发现，两组的NSS随出血时间延长而逐渐减轻，说明存在神经系统的自身修复，但ICH组NSS较治疗组更严重，说明仅靠神经系统代偿性的自身修复是不够的，会遗留较明显的NSS，而rhGCSF治疗可以减轻NSS。

Brdu是一种嘧啶类似物，可于细胞合成期(S期)替代胸腺嘧啶掺入到细胞核内，作为新生细胞的特异性标记〔5〕。近年来的研究发现，脑缺血后神经干细胞可增殖分化，参与缺血性脑损伤的修复过程。

研究发现，应用5溴尿嘧啶标记观察细胞增殖情况时，沙土鼠在短暂全脑缺血5 min再灌注后5 d、10 d，海马齿状回区Brdu标记的干细胞数目增加，提示有神经干细胞的增殖加速，缺血性脑损伤后自身神经干细胞具有自发活化作用〔6〕。本实验发现诸多证据支持Brdu染色阳性细胞为新生增殖细胞：如阳性细胞多分布于脑出血灶周围组织中;阳性细胞可呈丛集性，提示为诱导分化生成而非DNA修复等。这些现象均表明Brdu染色阳性细胞为新生增殖细胞。

本研究发现脑出血后ICH组和治疗组的出血灶周边区均可见Brdu阳性细胞，尤其是第1周，灶周存在较多的Brdu阳性细胞，提示细胞增殖活跃，rhGCSF治疗可促进脑出血损伤的细胞增殖，有促进干细胞性质的细胞转化为胶质细胞增生、修复脑出血损伤的作用。

天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白激酶家族(caspases)是细胞凋亡过程中最重要的蛋白酶，caspase3是哺乳动物细胞凋亡中的关键蛋白酶，处于级联反应的核心位置，发挥非常重要的作用，被称为死亡蛋白酶。如果在caspase3激活之前进行干预，可以有效抑制凋亡的发生〔7〕。

本实验中，ICH后各时间点治疗组及ICH组caspase3表达均增高，但ICH组均较治疗组增高明显，说明rhGCSF治疗可以减少脑出血后神经元凋亡的发生，促进脑损伤神经元的分化和再生，起到神经保护的作用。

GCSF的神经保护作用分析可能与以下机制有关：(1)抗炎症作用：GCSF有显著抗炎症作用，有研究证实在大鼠短暂和持久大脑中动脉闭塞模型中，GCSF治疗组IL1β mRNA较对照组明显减少，且GCSF能显著减轻水肿和减小梗死体积，促进神经功能恢复〔8〕。(2)抗凋亡作用：GCSF与脑内GCSFR结合引起STAT3上调，后者作用于神经元上的抗凋亡蛋白Bcl2〔9〕。(3)促进血管生成和神经发生：在损伤、缺血状态下，循环干细胞选择性迁移至缺血部位，支持受损组织的重塑和功能重建〔10〕。Shuy等〔3〕用大鼠模型证实，GCSF以化学激活这种方式动员足量的BMSC并归巢至脑损伤区，在脑内分化为神经元和胶质细胞，并促进血管再生，促进神经修复和功能康复。这个作用能增加营养因子的产生，如神经胶质细胞源性神经营养因子和脑源性神经营养因子，促进损伤实质细胞的修复，提示损伤脑组织可能特异性地吸引骨髓源性细胞。因此，进一步的探索GCSF的作用机制，对于开发新的脑卒中治疗方案有重要的意义。

综上所述，rhGCSF可动员BMSC到外周血，在脑出血时，循环中的干细胞可以透过血脑屏障，进入脑实质并迁移至受损脑组织，释放某种营养因子并分化为神经元和神经胶质细胞，从而增加神经细胞数量，增强其代偿修复的能力。大鼠ICH后，给予rhGCSF治疗可以有效促进神经细胞分化，改善神经功能评分，具有神经保护作用，为探索干细胞治疗脑出血更加简便有效的方法提供了实验依据。

参考文献

1 Gound E，Reeves AJ，Grazano MS，et al.Neurogenesis in the neocortex of adult primates〔J〕.Science，1999;286(27)：54852.

2 Mezey E，Key S，Vogelsang G，et al.Transplanted bone marrow generates new neurons in human brains〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA，2003;100(3)：13649.

3 Shuy WC，Lin SZ，Yang HI，et al.Functional recovery of stroke rats induced by granulocyte colonystimulating factorstimulated stem cells〔J〕. Circularion，2004;28：184754.

4 Kocher AA，Schuster MD，Szabolcs MJ，et al.Neovascularization of ischemic myocardium by human bonemarrowderived angioblasts prevents cardiomyocyte apoptosis，reduces remodeling and improves cardiac function〔J〕.Nat Med，2001;7(4)：4306.

5 Kuhn HG，DickinsonAnson H，Gage FH.Neurogenesis in the dentate gyrus of the adult rat：agerelated decrease of neuronal progenitor proliferation〔J〕.J Neurosci，1996;16(6)：202733.

6 Jiang YH，Balkrishna N，Jahagirdar，et al.Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow〔J〕.Nature，2002;20(1)：37.

7 Sharma S，Ravichandran V，Jain PK.Prediction of caspase3 inhibitory activity of 1，3dioxo4methyl2，3dihydro1hpyrrolo〔3，4c〕quinolines:QSAR study〔J〕.Enzyme Inhib Med Chem，2008;23(3):42431.

8 Gibson CL，Jones NC，Prior MJ，et al.GCSF suppresses edema formation and reduces interleukin1β expression after cerebral ischemia in mice〔J〕. Neuropathol Exp Neurol，2005;64(7):7639.

篇4

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（recombinant humangranulocyte-macrophage colony stimulating factor，rhGM-CSF）是一种能调节造血祖细胞增殖分化的细胞因子，主要用于防治恶性肿瘤放疗和化疗所引起的白细胞减少症，已用于临床近许多年，取得了很好的临床效果，但也伴有不少不同程度的不良反应，如发热、寒颤、疼痛、皮疹、胸痛、注射部位硬结等[1]。我院化疗科1例左乳腺癌术后化疗患者使用该药后出现心律失常反应，经积极治疗及护理，患者病情得到缓解，现报道如下。

1 病例简介

患者，女，58岁，右乳腺癌术后5月，化疗5疗程后1月，因再次化疗于2011年12月13日入院。入院时，查体：体温36.8℃，脉搏72次/分，呼吸18次/分，血压14.6/9.3KP。双肺呼吸音略粗，未闻及干湿啰音；心脏无扩大，心率72次/分，心律齐，各瓣膜听诊区未闻及杂音。腹平软，无压痛，肝、脾肋下未扪及。无药物过敏史，无高血压、心脏病和糖尿病史。查血常规：白细胞计数2.6×109/L，中性粒细胞记数40%，红细胞计数3.68×1012/L，血小板计数163×109/L。由于白细胞计数和中性粒细胞计数偏低，入院后当日开始给予患者皮下注射重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-GSF，由北京北医联合药业有限公司生产，商品名健白，国药准字S20063097，规格为200μg/支，无菌冻干粉剂，批号20110801） ，一日一次，一次400μg，共7次。首次皮下注射后无任何异常，第三次注射15min后，患者出现轻微的胸部不适、呼吸加快等现象，静坐休息15min后症状完全消失，随后减量为一日一次，一次200μg，用药第5日晨查房时，体格检查发现脉搏75次/分，节律不整齐；心脏听诊：心率75次/分，心律不整齐，频发期前收缩；各瓣膜听诊区未闻及杂音；查心电图示频发房性早搏（二联律），病人诉每次用药后可有短暂性胸闷、头晕、心悸等现象，当即考虑可能为应用重组人粒细胞巨噬细胞集落因子所引起的不良反应，于是立即停药并给予相应抗心律失常处理，升白细胞药物改为口服升白细胞药物（如维生素B4、鲨肝醇、利血生），同时密切观察病人生命体征及病情变化；预防快速性室上性心律失常及心功能衰竭。病人休养1周后体格检查发现脉搏72次/分，律齐；心脏听诊：心率72次/分，律齐，各瓣膜听诊区未闻及杂音；心电图示恢复窦性正常心律。复查血常规：白细胞记数4.8×109/L，中性粒细胞记数68%，顺利完成此次化疗。

2 讨论

rhGM-GSF作用于造血祖细胞促进其增殖和分化，其重要作用是刺激粒细胞、单核巨噬细胞成熟，促进成熟细胞向外周血释放，为解决肿瘤化疗后的骨髓抑制这一难题提供了有效手段[3]。rhGM-GSF的安全性与剂量和给药途径有关，其不良反应主要为少数病人有发热、皮疹、骨痛、胸痛、寒战、流涕和腹泻及注射局部反应（如红肿、硬结等）。有报道称此药引起罕见的不良反应有变态反应、支气管痉挛、心力衰竭等。

本例患者无高血压、冠心病、心肌病、风湿性心脏病病史，询问近期内也无感冒、发热、腹泻病史及患急性病毒性心肌炎和应用洋地黄类药物、抗心律失常药物及利尿剂等药物。本例患者给药途径是按照正规给药途径，使用该药物时经多人核对后未发现药物过期，制剂中无杂质，与剂量无关，患者在以前化疗过程中均是采用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）来提升白细胞。综合考虑认为，本例患者在使用rhGM-CSF第五天出现房性早搏应是一例罕见不良反应，但是否与rhGM-CSF引起的变态反应有关，需要做进一步研究。房性早搏的治疗大多不需特殊治疗，只需密切观察病情变化即可，有症状者宜解除顾虑及紧张过度情绪或试用镇静剂和β-受体阻滞剂以减少运动可，快速心室率者可选用抗心律失常药物治疗，房性和房室交接处早搏大多选作用于心房和房室交接处的Ⅰa、Ⅰc、Ⅱ、Ⅳ类药，而室性早搏则多选用作用于心室的Ⅰ类和Ⅲ类药[4]。

综合文献，关于rhGM-CSF导致的不良反应的报道，现总结如下：.肌肉骨骼系统，偶有肌肉酸痛、骨痛、腰痛、胸痛、关节痛；消化系统，偶会出现恶心、呕吐、食欲不振和腹泻的现象，或肝脏谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高、偶见血清白蛋白水平低下；神经系统，偶有头疼、精神失常、脑血管疾病、惊厥甚至癫痫；其他，部分患者出现发热、寒战、流涕、心悸、胸闷、乏力及皮疹，血清尿酸、乳酸脱氢酶及碱性磷酸酶增高升高；罕见的反应有变态反应、呼吸困难、肺水肿、晕厥、间质性肺炎和幼稚细胞增加等。严重者可见支气管痉挛、成人呼吸窘迫综合征、室上性心律失常、心力衰竭、休克、心包炎、血栓形成[5]。

参考文献

[1] 梅其炳，蒋永培.临床新药手册[M].北京：清华大学出版社，2006：496.

[2] 李焕德，赵绪元，张超.临床实用新药[M].北京人民卫生出版社，2007：389-399.

[3] 董梅、冯奉仪，综述，肿瘤化疗辅助药研究进展. 国外医学，肿瘤学分册，2002， 29（1）： 22.

篇5

[关键词] 金属烤瓷冠；镍铬合金；钴铬合金；钛合金；牙周组织

[中图分类号] R783.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）02（a）-0054-04

Effect of different porcelain fused metal crown on periodontal tissues and cytokines in gingival crevicular fluid

XU Xiaoxia1 LI Lifeng2

1.Department of Stomatology， Armed Police Force Hospital of Jiaxing City， Zhejiang Province， Jiaxing 314000，China； 2.Department of Stomatology， People's Hospital of Fuyang City， Zhejiang Province， Fuyang 311400， China

[Abstract] Objective To explore the effect of different porcelain fused metal crown on periodontal tissues and cytokines in gingival crevicular fluid. Methods 90 patients with 90 teeth according to different porcelain crowns metallic materials were divided into three groups： Ni-Cr alloy porcelain fused metal crown group， Co-Cr alloy group and Ti-Lite alloy porcelain fused metal crown group， each group had 30 patients， while their own side of the same name healthy natural teeth were taken as benchmark for comparison. The effect of three porcelain fused metal crowns on gum and the PLI， SBI， PD， VEGF， IL-1β， TNF-α of offending teeth and healthy teeth in three groups were compared after repaired for 12 months. Results The repaired teeth in the three groups had higher PLI， SBI and PD than healthy teeth after 12 months （P < 0.05）； SBI and PD in Ni-Cr alloy group and Co-Cr alloy group were higher than Ti-Lite alloy group （P

[Key words] Porcelain fused metal crown； Ni-Cr alloy； Co-Cr alloy； Ti-Lite alloy； Periodontal tissue

金属烤瓷冠（PFM）在口腔修复学中是烤瓷熔附金属也称金属烤瓷全冠。1887年Land发现把陶瓷熔结在铂上的方法，首先制作了原始形式的金属烤瓷。烤瓷熔附金属全冠（简称“烤瓷冠”）已经成为目前牙冠修复的重要方式[1]，它是用低熔瓷与金属底层材料联合制成的修复体，能较好恢复牙体形态、功能。烤瓷冠是有着强度高、外观逼真、色泽稳定、表面光滑、不易磨损、耐酸碱、生物相容性好等优点的永久性修复体，兼有金属的强度和烤瓷的美观，所以深受医师和患者的欢迎和青睐。不同的烤瓷材料会对牙周组织产生不同的影响，这些影响反映在修复之后，出现牙龈出血、龈缘黑线牙龈红肿、牙周损伤等现象[2]。这种症状严重地影响了牙冠修复治疗的长期效果。近年来烤瓷冠修复之后可能引起的牙周组织炎症问题，越来越被临床医师重视。本文探究不同金属烤瓷冠修复对牙周组织及牙龈沟周围细胞因子的影响，为临床修复工作提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年4月于浙江省嘉兴市武警医院（以下简称“我院”）就诊并且准备进行烤瓷冠修复治疗的90例患者共90颗牙齿为研究对象，其中，男43例，女47例；年龄20～55岁，平均（32.5±8.9）岁。根据烤瓷冠金属材料不同将患者分为镍铬合金组、钴铬合金组和钛合金组。镍铬合金组30例患者中，男17例，女13例；年龄16～67 岁，平均（35.8±4.6）岁。钴铬合金组30例患者中，男16例，女14例；年龄13～66岁，平均（35.4±4.7）岁。钛合金组30例患者中，男19例，女11例；年龄17～69 岁，平均（36.1±5.1）岁。各组年龄及性别比较，差异均无统计学意义（P> 0.05），具有可比性。所有患者符合以下条件：患牙位置均分布在上颌的前牙区部分；患者无牙龈红肿现象；牙周组织健康，没有先天畸形；患者的前牙区能基本保证正常咬合关系；患者患牙的对侧同名牙均为健康天然牙齿；在进行烤瓷冠修复后一直到标本采集前半年内，不能服用抗生素累药品；进行过牙周治疗并要求进行牙冠修复的患者；全身没有系统性疾病，如心血管疾病、糖尿病、肝炎和血液性疾病等；有较好的口腔卫生状况，无牙龈炎等口腔疾病。烤瓷冠近唇一侧、近中边缘深入到龈下0.5 mm左右，大概位于龈沟深的一半，舌侧与龈缘保持平整对齐，佩戴烤瓷冠以后，进行边缘适合性检查，采用改良技术Ryge标准[3]，本研究所有烤瓷冠修复体的边缘适合度均为Α级。本研究从计划到实施均由笔者严格按照统一标准进行临床牙体准备、修复、试冠、黏固以及调整并整形，保证了技术方面的标准的统一。所有患者均了解手术过程及风险，并且在清醒和知情的情况下同意并且签署了烤瓷冠修复同意书。

1.2 方法

1.2.1 烤瓷冠修复 按烤瓷冠要求制备牙体，避免损伤牙龈，颈缘位置为龈下0.5 mm，肩台宽度为0.5～1.0 mm，排龈后用硅橡胶印模材取模，临时冠修复。根据分组分别采用镍铬合金、钴铬合金和钛合金制作PFM全冠。密合性、牙冠轴面外形等可能影响基牙牙周健康，所有操作均由同一医师及同一组技工完成。

1.2.2 牙周临床检查 修复完成后12个月对患者的修复牙齿进行临床检查。患牙和对照牙的菌斑指数（plaque index，PLI）检测采用Quigley-Hein法，龈沟出血指数（sulcus bleeding index，SBI）检测采用Loe和Silness法，记录探诊深度（probing depth，PD）。上述检查指标中，除菌斑指数外，每牙检查唇舌侧近中、中央、远中，取6个位点的平均值作为最终检查结果。

1.2.3 牙齿龈沟液标本的提取 烤瓷冠修复的前后，提取牙齿龈沟液：由口腔内科专业医师，在提取牙齿牙龈液之前，对患者进行口腔清理，用清水漱口3次，每次30 s。清理完毕以后，等待15～20 min后再行取液，使用滤纸条进行龈沟液采集，每例患者每颗牙取液3次，每次使用1张滤纸条，并且每次取液间隔时间为5 min。将取好龈沟液的滤纸条放置在龈沟液仪中进行数据读取并记录示数。

1.2.4 龈沟液血管内皮生长因子（VEGF）浓度检测 使用ELISA法对样本的VEGF浓度进行检测，将2000 ng/L的VEGF标准品使用二倍稀释法稀释成浓度分别为1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625 ng/L，将浓度样本依次加入到VEGF试剂盒的多孔板中，37℃恒温箱中孵育3 h，洗板5次，然后加入少量抗工作液孵育2 h，洗板5次，并且向其中加入酶标抗体工作液再孵育1 h，此时要注意洗板6次，然后进行清洗，洗净以后加入少量底物工作酶，样本避光孵育5～15 min，最后加入终止反应液，终止反应。终止后即可在HTS 7000 Plus多孔板上进行测量，使用高效分析仪测量并记录数据，波长为492 nm。

1.2.5 龈沟液中白介素（IL）- 1β和肿瘤坏死因子（TNF）-α水平检测 采用双抗体夹心ELISA法对龈沟液中IL-1β及TNF-α水平进行检测。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三种烤瓷冠修复后12个月牙周检查结果

修复后12个月三组修复牙PLI、SBI、龈沟PD与对照牙比较，差异均有统计学意义（均P < 0.05），修复后三组PLI差异无统计学意义（P > 0.05），钛合金组SBI和PD与镍铬合金组、钴铬合金组比较差异均有统计学意义（均P < 0.05）。见表1。

2.2 三种烤瓷冠修复后12个月龈沟液细胞因子比较

三种烤瓷冠修复牙VEGF、IL-1β、TNF-α水平较对照牙显著增高，差异有统计学意义（P < 0.05）；钛合金组修复牙VEGF、IL-1β、TNF-α水平低于镍铬合金组和钴铬合金组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。见表2。

3 讨论

金属烤瓷冠是镶牙的一种，将牙齿的外表面根据设计要求磨除一层后，选用金属作为内层牙冠，然后用牙科专用瓷性材料高温烧结在金属的表面，达到恢复牙齿的外形、功能和美观的目的，也被称为金属烤瓷全冠，它是用低熔瓷与金属底层材料联合制成的修复体，兼有金属的强度和瓷的美观，而且能较好恢复牙体形态、功能，是强度高、外观逼真、色泽稳定、表面光滑、不易磨损、耐酸碱、生物相容性好的永久性修复体。现代牙科中镍铬合金是口腔重要的修复材料，而且在临床上广泛应用。由于铸造所需的成本低，价格便宜，技术成熟，更容易被绝大多数患者所接受。有研究发现，口腔中的唾液会使镍铬合金析出的离子产生毒性作用，这会危害到口腔组织的细胞活性，进而影响牙周组织的正常健康和代谢[4-5]。

临床上进行治疗的过程中，对于口腔中需要使用烤瓷冠的患者，医生会根据患者的要求及条件挑选具有一定的抗腐蚀性的金属材料，由于人类的口腔环境比较复杂，所以烤瓷内冠在口腔的环境中会发生腐蚀作用，牙齿的腐蚀不但会影响烤瓷的美观，而且还会对牙周组织及基牙产生刺激[6-7]。烤瓷冠的修复效果主要依靠于患者牙周组织的健康情况[8-9]。有研究表明，金属烤瓷全冠中的合金材料浸入到唾液中会发生电化学腐蚀，进而会导致金属离子的解离并且析出，而金属离子的析出则会引起人体牙周组织的免疫反应，进而会使一些炎症因子以及酶等从牙龈沟中被释放出来，从而引发局部的发炎症状[10-11]。测定龈沟液中IL-1β和TNF-α水平，可作为检测牙龈炎和牙周炎进展的有效而无创性方法。VEGF是强而有力的血管生成剂，一旦血管密度变高，VEGF的表达也随之增加[12]。龈沟液分泌增多是牙龈炎症早期的主要表现之一。牙龈状况的改变会通过龈沟液量的变化而发生改变，因此通过准确检测龈沟液量就可以正确地判断牙龈的健康状况是否发生改变。

本研究牙周检查中，镍铬合金烤瓷冠修复的患牙指标有不同程度的增加（PD、SBI），可作为辅助判断牙周组织破坏的依据；不同金属烤瓷冠修复后，龈沟液中的细胞因子VEGF、IL-1β及TNF-α的水平发生变化，提示牙龈健康状况有改变。研究结果显示，修复后12个月患牙PLI、SBI、龈沟PD明显升高，与对照牙比较差异均有统计学意义（均P < 0.05），修复后三组PLI无明显差异，钛合金组SBI和龈沟PD与镍铬合金组、钴铬合金组比较差异均有统计学意义（均P < 0.05）。三种烤瓷冠修复牙VEGF、IL-1β及TNF-α水平较对照牙显著增多，差异有统计学意义（P < 0.05）。 而钛合金组修复牙VEGF、IL-1β及TNF-α水平低于镍铬合金组和钴铬合金组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。提示钛合金对患者具有更好的疗效。孙平等[13]认为，钴铬合金具有较好的生物相容性。从本研究数据可以对比看出，在修复作用钴铬合金优于镍铬合金，但是相比钛合金来说，仍较差。钛合金作为惰性金属，其电解发生较慢，对人体的排斥性、危害性较低。

综上所述，本实验探究了不同金属烤瓷冠修复对牙周组织及龈沟周围细胞因子的影响，并进行了简单评价，若广泛应用于临床推广还需更深一步的研究。

[参考文献]

[1] 巢永烈.口腔修复学[M].北京：人民卫生出版社，2006：58-70.

[2] 刘梦桃， 贾安琦.镍铬合金烤瓷修复体对局部牙龈组织损伤的机制[J].国外医学：口腔医学分册，2004，31（1）：44-45.

[3] Ryge G. Clinical criteria [J]. Int Dent J，1981，30（3）：347.

[4] Yfantis C，Yfantis D，Anastasso J，et al. Analytical and lector chemical evaluation of thein vitrocorrosion behavior of nickel-chiomeand cobalt-chrome casting alloys for metal ceramic restorations [J]. Eur J Prosthodont Restor Dent，2007， 15（1）：33-40.

[5] Lin HY，Bowers B，Wolan JT，et al. Metallurgica，l surface and corrosion analysis of Ni-Cr dental casting alloys before and after porcelainfiring [J]. Dent Mater，2008，24（3）：378-385.

[6] Grimanudo NJ. Biocompatibility of nickel and cobalt dental alloys [J]. Gen Dent，2001，49（5）：498-503.

[7] Berzins DW，Kawashima I，Graves R，et al. Electrochemical characteristics of high-Pd-alloys in relation to Pd-allergy [J]. Dent Mater，2000，16（4）：266-273.

[8] Gallucci GO，Grütter L，Nedir R，et al. Esthetic outcomes with porcelain-fused-to-ceramic and all-ceramic single-implant crowns：a randomized clinical trial [J]. Clin Oral Impl Res，2011，11（1）：62-69.

[9] Naumann M，Ernst J，Reich S，et al. Galvano-vs. metal-ceramic crowns：up to 5 -year results of a randomized split -mouth study [J]. Clinical Oral Investigations，2011，15（5）：657-660.

[10] Sjogren G，Sletten G，Dahl JE. Cytoxicity of dental alloys，metals，and ceramics assessed by Millipore filter，agar over lay，and MTT tests[J]. Prosthet Dent，2000，84（2）：229-236.

[11] López JF，Martinez GJ，Anglada JM，et al. Ion release from dental casting alloys as assessed by a continuous flow system：Nutritional and toxicological implications [J]. Dent Ma ter，2006，22（9）：832-837.

[12] Kiselyov A，Balakin KV，Tkachenko SE. VEGF/VEGFR signallingas a targel for inhibiting angiogenesis [J]. Expert opin Investing Drugs，2007，16（1）：83-107.

篇6

[关键词]重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子；冻干粉针剂；高效液相色谱法

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）05（c）-0104-04

[Abstract]Objective To establish the method of the main active ingredients in recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor freeze-dried powder injection （rhGM-CSF） by HPLC.Methods The chromatographic condition of HPLC was chromatographic column （TSK gel G3000SW，300.0 mm×7.5 mm，5 μm），Mobile phase was 0.1 mol/L phosphate buffer，Flow rate was 1 ml / min，automatic sampling was 20-40 μl and detection wavelength was 280 nm.Analyzing the ingredients of rhGM-CSF freeze dried powder injection，reproducibility and linear relationship between different sample volume and peak area of each component under this chromatographic condition were studied in this experiment.Results The main components of rhGM-CSF freeze dried powder injection were rhGM-CSF protein and human albumin.The rhGM-CSF protein sample volume and peak area were good linear （R2>0.99） and the percentage content of RSD values was less than 3%.Conclusion This method could be used to detect the active component content of the rhGM-CSF lyophilized powder for injection protein with 10-20 μg scope.

[Key words]Recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor；Freeze-dried powder injection；High performance liquid chromatography

重M人粒细胞巨噬细胞刺激因子冻干粉针剂（rhGM-CSF）是使用重组基因工程技术生产的重组蛋白药物[1]343-344，是一种细胞因子，主要用于治疗因放、化疗引起的白细胞减少[2-5]，并且临床上可以治疗溃疡、烫伤、烧伤等创面疾病[6-9]，其活性成分为重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子，该品种已被《中国药典》三部收载[1]343-344。《中国药典》未规定其成品的含量测定方法，只要求测定生物学活性（效价），采用的是TF-1依赖细胞株，用MTT染色法进行测定，合格范围是标示活性的80%～150%[10]96-98，277-279。由于活性测定方法本身的稳定性较差，难以实现精确的控制，因此，为更好地控制产品质量，宜尽早建立其主药成分含量测定方法。

高效液相色谱法（HPLC）中收载rhGM-CSF原液纯度的检测方法，是采用凝胶色谱柱为固定相，磷酸盐缓冲液为流动相，在波长280 nm处进行检测，使用面积归一化法计算目的蛋白百分比含量[10]59-63。目前，高效液相用于药品的定性、定量的分析应用已经很广泛[11-15]，但是用于检测rhGM-CSF冻干粉针剂主药含量的方法尚罕见报道，故本研究通过参考药典中rhGM-CSF原液纯度检测的方法，确认该法检测rhGM-CSF冻干粉针剂主药含量的可行性。

1材料与试药

1.1仪器

Agilent 1100高效液相色谱仪（配有G1315B DAD 检测器、G1311A四元梯度泵、G1322A在线脱气装置、G1316A柱温箱，德国安捷伦科技有限公司）；化学工作站（ChemStation，版本号：Rev.A.10.01[1635]，美国安捷伦科技有限公司）；BS124S型电子天平（德国赛多利斯科学仪器有限公司）；TSK gel G3000 SWXL色谱柱（7.8 mm×300 mm，粒径5 μm，日本东曹株式会社公司）。

1.2主要试剂

二水磷酸氢二钠（AR，西陇化工股份有限公司）；氯化钠（AR，广州化学试剂厂）；十二水合磷酸二氢钠（AR，西陇化工股份有限公司）；甲醇（色谱级，Merck KGaA）；人血白蛋白（注射级，上海莱士血液制品股份有限公司）；甘露醇注射液（注射级，华润双鹤药业股份有限公司）；PEG4000（药用级，南京威尔化工有限公司）。

rhGM-CSF原液（批号20151003，广州白云山拜迪生物医药有限公司自制）。rhGM-CSF冻干粉针剂（批号20130201，规格100 μg/瓶，广州白云山拜迪生物医药有限公司自制）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：TSK gel G3000 SWXL（十二水磷酸二氢钠6.08 g、十二水合磷酸氢二钠21.85 g、氯化钠5.844 g，三者定容至1000 ml，摇匀。经0.45 μm的滤膜过滤后备用；检测波长：280 nm；流速：1 ml/min；柱温：25℃。

2.2样品准备

用流动相将rhGM-CSF冻干粉针剂和人血白蛋白配制成浓度为0.5 mg/ml的溶液；将rhGM-CSF原液制备成浓度为1.0 mg/ml的溶液；甘露醇注射液稀释成20%的浓度后备用。以上样品进样前需经过离心（10 000 r/min，5 min）后，取上清液适量体积加入进样小瓶备用。

2.3 rhGM-CSF冻干粉针剂中的各组分HPLC分析

rhGM-CSF冻干粉针剂主要由rhGM-CSF原液（主成分为rhGM-CSF蛋白）、人血白蛋白、甘露醇注射液组成。分别取1.0 mg/ml rhGM-CSF原液、0.5 mg/ml人血白蛋白、20%的甘露醇注射液单组分以及0.5 mg/ml rHGM-CSF冻干粉针剂进行HPLC分析，进样体积分别为20 μl。根据HPLC图谱确立rhGM-CSF冻干粉针剂中各组分对应的峰及其保留时间，试验结果详见图1～图4。

检测结果显示，rhGM-CSF原液于11.072 min出现吸收峰，人血白蛋白于5.824、8.296、9.399、14.756、15.021 min出现吸收峰，甘露醇注射液于12～13 min出现了倒峰。RHGM-CSF冻干粉针剂则在5.843、8.274、9.396、10.999、14.900 min出现吸收峰，在12～13 min也出现了倒峰。结合HPLC分析方法自身的系统误差，推测rhGM-CSF冻干粉针剂中保留时间为5.843、8.274、9.396、14.900 min的吸收峰是人血白蛋白的不同聚合体的样品峰。人血白蛋白单组分在保留时间为14.756、15.021 min时出现了两个吸收峰，推测以液体和冻干粉状态贮存的人血白蛋白的稳定性存在差异，导致其注射液经长期存放后出现了分裂峰。12～13 min的倒峰推测为甘露醇，由于甘露醇吸光度小于流动相导致了倒峰的产生，表明该体系不适用于甘露醇的分析。rhGM-CSF冻干粉针剂中保留时间为10.999 min的单峰推测为rhGM-CSF目的蛋白。

2.4 rhGM-CSF冻干粉针剂结果的重现性

取0.5 mg/ml的rhGM-CSF冻干粉针剂（批号20130201），平行进样3次，进样体积40 μl（对应rhGM-CSF蛋白的含量为20 μg），根据面积归一化法计算各组分的峰面积（area）及相应的百分含量（area%），并计算其RSD（%）。结果显示，该法分析rhGM-CSF冻干粉针剂，各峰的平行性较好，峰面积及峰面积百分比RSD均

2.5不同进样体积与各组分峰面积的线性关系

取制备好的0.5 mg/ml rhGM-CSF冻干粉针剂（批号20161201），根据不同进样体积的分析结果，如不同进样量的各峰的保留时间、峰面积、百分含量及相应的RSD值，研究不同进样量与相应峰面积的线性关系（进样量为20～40 μl，对应10～20 μg的rhGM-CSF蛋白）。

2.5.1 rhGM-CSF冻干粉针剂中第1个峰（人血白蛋白）的HPLC分析 保留时间约为5.8 min的HPLC分析数据见表2，不同的进样体积与各组分的百分含量进行拟合线性回归，R2值为0.9999。

2.5.2 rhGM-CSF冻干粉针剂中第2个峰（人血白蛋白）的HPLC分析 保留时间约为8.2 min的HPLC分析数据见表3，不同的进样体积与各组分的百分含量进行M合线性回归，R2值为0.9979。

2.5.3 rhGM-CSF冻干粉针剂第3个峰（人血白蛋白）的HPLC分析 保留时间为9.3 min的HPLC分析数据见表4，不同的进样体积与各组分的百分含量进行拟合线性回归，R2值为1。

2.5.4 rhGM-CSF冻干粉针剂第4个峰（rhGM-CSF蛋白）的HPLC分析 保留时间约为11.0 min的HPLC分析数据见表5，不同的进样体积与各组分的百分含量进行拟合线性回归，R2值为0.9999。

2.5.5 rhGM-CSF冻干粉针剂第5个峰（人血白蛋白）的HPLC分析 保留时间为14.9 min的HPLC分析数据见表6，不同的进样体积与各组分的百分含量进行拟合线性回归，R2值为0.9964。

3讨论

3.1蛋白质含量测定方法比较

蛋白质含量测定法[10]96-98主要有凯氏定氮法、lowry法、双缩脲法、考马斯亮蓝（Brandford）法、BCA法、紫外-可见分光光度法等，其中凯氏定氮法与双缩脲法需要较大量的蛋白样品，并且双缩脲法需要蛋白浓度也较高；紫外吸收法测定低浓度的蛋白时准确度较差；考马斯亮蓝G-250染色（Brandford）法一般只用于蛋白粗略定量。上述蛋白测定方法属于非特异性的反应，当产品有蛋白类添加剂（比如人血白蛋白）时就完全不适用。并且重组蛋白药物剂量很小，一般为微克级，需要应用更灵敏的检测方法。

3.2 HPLC检测法对混合组分的适用性

本文采用HPLC法对rhGM-CSF 冻干粉针剂及其单组分进行检测，结果表明，该法可检测出rhGM-CSF冻干粉针剂中的主成分rhGM-CSF蛋白和人血白蛋白，各峰之间的分离度较好；HPLC方法的重现性较好，相同进样体积条件下，其峰面积及峰面积百分比的RSD均0.99，故该法可用于检测rhGM-CSF冻干粉针剂中的活性成分的含量百分比。另外，由于不同样品的峰面积与其进样量呈一定的线性关系，还可在一定范围内根据rhGM-CSF蛋白峰面积的变化，推测其对应的含量。

应用HPLC法检测rhGM-CSF冻干粉针剂中rhGM-CSF含量，是原液评价的一种直观、合理、有效的技术手段，具有重现性好和操作简便等优点，能很好地满足质控的要求，对完善该品种的质量标准提供了参考。

[参考文献]

[1]国家药典委员会.中国药典[M].三部.北京：中国医药科技出版社，2015：343-344.

[2]陈玉林，杨长福，韦华军，等.重组人粒细胞刺激因子、重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子对肿瘤患者化疗后升高白细胞、中性粒细胞效果的比较[J].吉林医学，2016，37（2）：323-324.

[3]雷双根，余小芬，谢春伟，等.重组人粒细胞集落刺激因子治疗乳腺癌术后化疗后骨髓抑制的疗效[J].实用临床医学，2014，15（7）：28-30.

[4]秦凌阳，晁占湖，闫怀莲.短期应用重组人粒细胞刺激因子注射液治疗儿童中性粒细胞减少症的临床研究[J].中国现代药物应用，2014，8（4）：153-154.

[5]李北兵，白明，杨莹.重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的研究进展综述[J].黑龙江医药，2010，23（3）：407-408.

[6]易吉秀.重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子治疗早期糖尿病足溃疡疗效观察[J].中国药房，2011，22（10）：909-911.

[7]蔡景宁，孙玉静，谢晓繁，等.重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子凝胶对深Ⅱ度烧伤创面溶痂的效果分析[J].中国临床医生杂志，2017，45（1）：39-42.

[8]邱学文，盛颖萍，王甲汉，等.联合应用rhGM-CSF和莫匹罗星于烧伤后残余创面的疗效观察[J].中国医院药学杂志，2016，36（9）：748-784.

[9]李霞，杨文芳.重组人粒细胞集落刺激因子联合护理治疗放射性口腔炎疗效观察[J].现代中西医结合杂志，2013， 22（2）：209-210.

[10]国家药典委员会.中国药典[M].四部.北京：中国医药科技出版社，2015.

[11]赵辉，李增礼，周乐春，等.HPLC法测定重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量[J].中国生物制品W杂志，2012，25（5）：623-629.

[12]刘璐，蔡峰，王公孝，等.A群C群脑膜炎球菌结合疫苗游离蛋白含量HPLC检测方法的建立[J].中国生物制品学杂志，2016，29（11）：1200-1204.

[13]田宇柔，甄亚钦，王鑫国，等.半枝莲配方颗粒HPLC指纹图谱及含量测定方法研究中国药学杂志[J].中国生物制品学杂志，2016，29（20）：1795-1799.

[14]毕嘉益，芦红代，程思谟，等.HPLC法测定枸橼酸西地那非原料药的含量及有关物质[J].沈阳药科大学学报，2015， 32（7）：527-530.

篇7

[关键词]骨髓间充质干细胞；骨组织工程；细胞膜片；磷酸三钙

[中图分类号]R318[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2011）03-0408-03

Engineering bone tissue using bone marrow mesenchymal stem cell sheet and β-tricalcium phosphate ceramic

MA Dong-yang1,MA Jing2,JIANG Dong-hong3,WANG Jian-feng3

(1.Department of Oral and Maxillofacial Surgery,2. Department of Otolaryngology,3. Department of Medical Administration，Lanzhou General Hospital,Lanzhou Command,PLA,730052,Gansu,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the feasibility of constructing bone tissue using bone marrow mesenchymal stem cell (BMSC) sheet and β-tricalcium phosphate ceramic (TCP).MethodsWe first harvested a cell sheet from rabbit BMSCs using a continuous culture method and a scraping technique. The cell sheet was then wraped around a cylinder of β-TCP. Finally,the constructs were implanted into the subcutaneous pockets of nude mice for in vivo experiments. Gross view and histological examinations were performed to evaluate the harvested specimens. Results The cell sheet, with an average thickness of 158 mm, was composed of multi-layered cells separated in the extracellular matrix. Six weeks after implantation, the new bone tissue was present both on the edge and at the center of the TCP in sheet-TCP group. A layer of woven bone formed in the cell-sheet group. In contrast, the TCP was filled only with fibrous tissue in the TCP group,without evidence of bone formation.ConclusionThe study indicates that the combination of osteogenic BMSC sheet and β-TCP ceramic can engineer bone tissue and the engineered construct might be considered as a promising substitute for bone repair.

Key words:bone mesenchymal stem cell; bone tissue engineering; cell sheet; β-tricalcium phosphate

近年来，随着再生医学的迅速发展，组织工程有望为骨缺损提供理想的修复方法[1]。组织工程骨的传统构建方法是将具有成骨分化功能的种子细胞与三维支架材料复合[1-2]。细胞在体外扩增后常用胰蛋白酶消化成离散细胞悬液，在此过程中，细胞自分泌的细胞外基质、细胞-基质连接、以及细胞-细胞连接等结构都被破坏，而这些结构对于细胞分化、特异性表型维持、分泌、组织形成等功能非常重要[3]。再者，细胞与支架材料直接复合的方法存在细胞利用率低的缺点[4]。为了解决上述问题，我们提出新的组织工程构建策略，即应用细胞膜片与可降解的外源性支架材料复合来构建工程化骨组织。为验证这一构想，本研究选用来源丰富、容易获取、体外扩增速度快、安全实用性、无伦理学争议的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell, BMSC)作为种子细胞来构建细胞膜片，同时选择具有良好的生物相容性、可降解性、与松质骨的结构类似的多孔样磷酸三钙(β-tricalcium phosphate, TCP)作为支架材料。

1材料和方法

1.1 材料：3月龄成年新西兰大耳白兔，体重2.6～3.0kg，雌雄不限，由总医院动物中心提供。6周龄裸鼠(NIH strain, outbred) 购自中国科学院上海实验动物中心。DMEM培养基（购自Gibco, Invitrogen Corp）；L－谷胺酰胺、地塞米松、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠、胰蛋白酶（均购自美国Sigma公司，胎牛血清(杭州四季青公司)，CO2细胞培养箱(Forma公司3110Ⅱ，美国)，倒置显微镜及照相系统(Olympas IX71. A21PH, 日本)，离心机(Heraens Cryofuge 8000, 德国)，一型超净工作台（苏州净化设备厂）。

1.2 方法

1.2.1 兔BMSCs分离、培养、及细胞膜片构建：氯胺酮（10 mg/kg）肌内注射麻醉下，切取兔双侧髂骨并劈开，用含200 U/ml肝素的低糖DMEM冲洗髓腔、过滤骨髓、离心、弃上清、加入含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液，轻轻吹打成单细胞悬液，接种到直径为10cm的普通培养皿里。加入含100 U/ml 青霉素、10%胎牛血清、50mg/L抗坏血酸、0.27g/L L-谷胺酰胺的低糖DMEM，置于37℃、5% CO2的孵箱内培养，每隔2天更换培养液一次。当细胞达90%融合时，用0.25%胰酶消化后按1:3 传代，换成含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液，90%融合时再消化，按密度1×105个/cm2接种到直径为10cm的培养皿。细胞融合后，更换为含10%胎牛血清，1×10-7mol/L地塞水松，50mg/L抗坏血酸，10mmol/L β-甘油磷酸钠的高糖DMEM条件培养液，每隔2 天换培养液1次，经2周的连续培养，用细胞刮刀由外周向中心沿底壁仔细刮起，获得完整的细胞膜片[5]。

1.2.2 细胞膜片显微结构观察：随机选取所获细胞膜片，4%多聚甲醛固定，梯度乙醇脱水，常规石蜡包埋，切成5μm厚切片，苏木精－伊红染色（H&E）光镜下观察组织结构。部分膜片样本经丙酮固定，钙钴法进行碱性磷酸酶染色。部分膜片经2.5% 戊二醛固定，梯度乙醇脱水，干燥，喷金，扫描电子显微镜观察标本表面形貌及层面结构。

1.2.3 体内试验：实验组将单层细胞膜片剪切成10mm×25mm的长方形状（图1A），并由一端卷起包裹预制成的TCP圆柱体（直径0.8cm，高度1.0cm，70%孔隙率，平均孔径450± 50μm，图2A、B），静置孵育24h后移植到裸鼠背部皮下。作为对照，相同大小的细胞膜片和同规格经成骨培养基孵育24h的单纯材料也进行皮下移植。术后6周处死动物取材，进行大体观察及组织形态学分析：①组织学定性分析：各样本经石蜡包埋、切片后HE及Mallory 三色染色光镜观察；②组织学半定量分析：每组每例样本连续4张5μm厚切片，横贯整个样本，Mallory 三色染色后由独立的观察者采用NIH Image J图像分析系统在10倍镜下分析切片中骨样组织（砖红色）与纤维组织（淡蓝色）所占的面积百分比。每张切片随机选取4个视野，计量后收集各组数据，取其平均值。

2结果

2.1 膜片的构建：融合BMSCs经过2周连续培养，皿底有透明乳白色薄膜样物质形成，表面散在多个白色结节。用细胞刮沿皿底轻刮即可使其与培养皿底分离，刮起后膜片自行收缩，具有弹性和较稳定的机械性能，可以用镊子或血管钳进行钳夹操作。HE染色，所获膜片具有类似三维结构，由约8～10层细胞及细胞外基质组成，厚度平均158μm （图1B）。扫描电镜下观察：膜片中细胞被细胞外基质包埋，基质表面可见矿化结节聚集（图2C）。

2.2 体内实验

2.2.1 移植6周后：实验组和TCP组取材标本的形状与移植前无明显变化，但前者表面较硬，容易与周围软组织分离，后者表面被覆一层质软的纤维组织，不易分离。膜片组见纸片状硬质组织形成。

2.2.2 组织学结果：实验组的外周表现为矿化程度较高的板层状骨组织，可见致密骨基质、骨陷窝、骨细胞、成骨细胞等结构，材料内部的孔隙中央为纤维组织，周边见低度矿化的小梁骨（图3A、B、C）。组织定量学分析，骨与纤维组织的所占面积分别为22.5%和59.6%。单一TCP组孔隙内为纤维组织（面积比为76.1%），未见骨或软骨样组织。单纯膜片组见片状编织骨形成，致密的骨基质中可见类髓腔样结构（图3D）。

3讨论

本研究证实了BMSC膜片与多孔TCP支架材料复合构建组织工程骨的可行性。与传统方法相比，本研究应用的构建方法具有以下优点：①采用物理刮治的方法将体外扩增的细胞连同培养过程中自分泌的细胞外基质、形成的细胞基质连接一同收集，避免了传统用胰蛋白酶消化的有创收集方法；②具有较高的细胞利用率。

细胞膜片技术由日科学家Okano等[6]发明，他们将温度敏感性聚合物凝胶涂层于普通培养皿底壁制备出了温敏性培养皿，在37℃时聚合物对其表面扩增融合的单层细胞膜片有绝对亲和性，但降至其临界溶液温度32℃以下时，此聚合物对单层细胞膜片的亲和性消失，使细胞膜片自动从培养皿底壁释放。该培养技术避免了对细胞进行传统胰蛋白酶消化等处理，进而保留了细胞自分泌的细胞外基质以及一些重要的细胞表面蛋白如离子通道、生长因子受体、细胞-细胞连接蛋白。利用此技术，角膜、皮肤、心肌、肝组织等多种细胞密集型软组织已被成功构建[3]，但在用于骨组织方面的研究较少。2007年，Zhou等[4]首先报道用细胞膜片技术与复合离散细胞悬液的聚合物-陶瓷材料（磷酸三钙-聚已酸内酯复合物）构建出组织工程骨；Gao等[7]则用多层细胞膜片与管状珊瑚构建出管型骨。Okano等获取膜片的技术操作程序较复杂，而且应用温敏聚合物，可能会影响细胞的增殖分化。同时该技术获得的膜片为单层细胞组成，厚度只有约10μm[8]。相比之下，我们的细胞膜片获取方法简单易行，无需特殊材料或者设备，而且由多层细胞及细胞外基质组成，厚度可达158μm，更像三维结构的组织。另外，一定的厚度赋予了膜片相应的弹性和较稳定的机械性能，增加了可操作性。本研究则用单层膜片与已用于临床的人工骨替代材料TCP复合。

有趣的是，实验组中，不仅在支架材料的外周有矿化程度较高的骨组织形成，而且在材料内部也可见相当数量的骨小梁。这一结果表明：作为细胞释放载体系统，细胞膜片可赋予无机材料以生物活性。另一个有趣的结果是，与单纯材料组相比，实验组材料孔隙结构内的纤维组织量较少，意味着细胞膜片在促进成骨的同时阻止了纤维组织的张入，有望成为新型的具有生物活性的组织引导再生膜。

组织工程骨要取代自体骨移植大范围应用于临床，首先需要解决大体积支架内部细胞的氧气、营养供应以及代谢产物排泄。种子细胞在体外依赖于培养介质提供营养，而植入到体内后，如同非血管化的游离骨移植，则需依靠受区组织液的弥散渗透作用获得营养。然而，理论上体内环境通常所能提供的最大弥散距离是150～200μm，因此大体积复合物内相当数量的细胞因为无法获取营养物质并排泄代谢产物而死亡[9-10]。尽管已有诸多方法可促进组织工程植入物与宿主血管网的紧密联系，提高细胞成活率和组织修复功能，但目前为止，任何促进血管生长的方法都需要5～7天以上时间才能使植入细胞获得血液供应，在这段时间内，细胞需从组织液中获得足够营养[10]。本实验所应用的BMSC膜片厚度为 158μm左右，在有效组织弥散范围内。我们推测将其植入体内后易于成活，有利于提高细胞治疗的效率。

[参考文献]

[1]Meijer GJ,de Bruijn JD,Koole R,et al. Cell-based bone tissue engineering[J]. PLoS Med,2007,4(2):e9.

[2]Quarto R,Mastrogiacomo M,Cancedda R,et al. Repair of large bone defects with the use of autologous bone marrow stromal cells[J].N Engl J Med,2001,344(5):385-386.

[3]Yang J,Yamato M, Shimizu T, et al. Reconstruction of functional tissues with cell sheet engineering[J]. Biomaterials,2007,28(34):5033-5043.

[4]Zhou Y,Chen F,Ho ST,et al. Combined marrow stromal cell-sheet techniques and high-strength biodegradable composite scaffolds for engineered functional bone grafts[J]. Biomaterials,2007,28(5):814-824.

[5]Ma D,Ren L,Liu Y,et al. Engineering scaffold-free bone tissue using bone marrow strom cell sheets[J].J Orthop Res,2010,28(5):697-702.

[6]Okano T,Yamada N,Sakai H,et al. A novel recovery system for cultured cells using plasma-treated polystyrene dishes grafted with poly (N-isopropylacrylamide)[J].J Biomed Mater Res,1993,27(10):1243-1251.

[7]Gao Z,Chen F,Zhang J,et al. Vitalisation of tubular coral scaffolds with cell sheets for regeneration of long bones: a preliminary study in nude mice[J].Br J Oral Maxillofac Surg,2009,47:116-122.

[8]Iwata T,Yamato M,Tsuchioka H,et al. Periodontal regeneration with multi-layered periodontal ligament-derived cell sheets in a canine model[J].Biomaterials,2009,14:2716-2723.

[9]Ren LL,Ma DY,Feng X,et al. A novel strategy for prefabrication of large and axially vascularized tissue engineered bone by using an arteriovenous loop[J].Med Hypotheses,2008,71(5):737-740.

篇8

[关键词] 重组粒细胞集落刺激因子；再生障碍性贫血；感染；免疫功能

[中图分类号] R556 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）09（b）-0060-04

[Abstract] Objective To explore the effects of recombinant human granulocyte colony stimulating factor （rhG-CSF） on immune function in patients with aplastic anemia （AA） complicted with infection. Methods The data of 140 cases of patients with AA complicted with infection in Hainan Provincial People's Hospital from January 2011 to June 2014 were retrospective analyzed. There were 72 patients treated with rhG-CSF combined with Cyclopsorin， taken as the experimetal group； and the other 68 cases of patients only treated with Cyclopsorin were taken as the control group. The therapeutic effect， mortality related to infection， rates of clonal evolution and changes of peripheral blood cells and T cell subsets levels of the two groups after treatment were compared. Results The total effective rate of the experimetal group wa significantly higher than that of the control group （P < 0.05）. The mortality related to infection of the experimetal group was lower and the rate of clonal evolution was higher than those of the control group， but there were no significant differences between the two groups （P > 0.05）. In the experimetal group， after treatment the WBC， PLT， Hb levles increased， CD3+and CD4+ levels decreased and CD8+ level increased than those of before treatment， with statistically significant differences （P < 0.05）； while those indexes of the experimetal group were all significantly improved than the control group （P < 0.05）. Conclusion The treatment effect of rhG-CSF in patients with AA complicted with infection is remarkable， with low infection rate， which can promote the recovery of immune function， safe and reliable， and it is worthy of clinical reference.

[Key words] Recombinant human granulocyte colony stimulating factor； Aplastic anemia； Infection； Immune function

再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA）是血液系统较为常见的恶性疾病，多见于儿童群体，主要是由于多种因素引起的骨髓造血功能障碍，其特征为外周血全血细胞减少，故AA多合并感染的发生，会进一步对造血功能产生较大损害[1]。主要临床表现为贫血、感染、出血、发热等，若不及时治疗，对患者健康造成严重影响，甚至危及其生命。因此，采取合理有效的治疗措施，以防治感染、促进造血功能恢复显得尤为重要。重组人粒细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte colony stimulating factor，rhG-CSF）是机体的造血因子之一，对增强中性细胞功能及促进造血干细胞增殖具有重要作用[2-3]。为探讨rhG-CSF对AA并感染患者免疫功能的影响，本研究将海南省人民医院（以下简称“我院”）收治的AA并感染患者140例作为研究对象，对其进行rhG-CSF治疗，取得满意效果，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性调查分析2011年1月～2014年6月我院收治的140例再生障碍性贫血并感染患者资料。入选标准：①符合《内科学》中关于AA的临床诊断标准[4]；②由临床症状、病理检查等确诊；③无精神疾病史。排除标准：①对免疫抑制剂或激素过敏者；②合并有高血压、糖尿病等其他非感染性疾病者；③有严重肝肾功能障碍者；④妊娠及哺乳期妇女。将140例患者按治疗方式分为实验组（72例）和对照组（68例），实验组男43例，女29例；年龄23～49岁，平均（32.6±7.8）岁；上呼吸道感染19例，肺部感染14例，口腔黏膜感染13例，胃肠道感染12例，败血症14例。对照组男41例，女27例；年龄21～46岁，平均（31.8±7.6）岁；上呼吸道感染17例，肺部感染12例，口腔黏膜感染13例，胃肠道感染11例，败血症15例。两组性别、年龄、感染情况比较差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.2治疗方法

两组患者均采用营养支持、抗感染等常规对症治疗。对照组采用环孢霉素（天津市中央药业有限公司，批准文号：20093879）治疗，5 mg/kg，2次/d，维持血药浓度为150～300 mg/mL，持续外周血细胞计数升高达平台期后逐渐减量；泼尼松龙片（上海信谊药厂有限公司，批准文号：20150906）每天1 mg/mL，连续治疗15 d后逐渐减量，至1个月后停用。实验组采用刺激因子联合环孢霉素治疗，给予rhG-CSF5（上海三维生物技术有限公司，批准文号：20150629），每天5 μg/kg，同时服用环孢霉素，5 mg/kg，2次/d，连续治疗3个月。

1.3 观察指标和判断标准

外周血象及T细胞亚群变化分别于治疗前和治疗后3个月进行检测，血常规检查采集2 mL静脉血，用EDTA管抗凝，T细胞亚群检查采用流式细胞仪。

比较两组感染相关死亡率、克隆性演变发生率，其中，克隆性演变包括骨髓增生异常综合征、夜间阵发性血红蛋白尿及急性髓系白血病等。

临床疗效根据1987年第四届全国再障学术会议修订的《再生障碍性贫血诊断标准与疗效标准》[5]。基本治愈：贫血、出血等临床症状完全消失，白细胞（WBC）水平达到4×109/L左右，血小板（PLT）达80×109/L，随访1年以上没有复发者；②显效：临床症状显著改善，PLT比治疗前有明显增加，WBC达3.5×109/L，随访3个月病情稳定或继续进步者；③有效：出血及贫血症状明显好转且基本稳定，在不输血情况下血红蛋白（Hb）较治疗前1个月增长30 g/L以上，并维持3个月不变；④无效：临床症状未见明显好转或加重。总有效=基本治愈+显效+有效。两组均在治疗1年后评定疗效。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验；等级资料采用秩和检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗1年后临床疗效比较

实验组总有效率为95.83%，对照组总有效率为76.47%，实验组明显优于对照组（P < 0.05）。

2.2 两组感染相关死亡率比较

治疗后实验组感染相关死亡率为4.17%，对照组感染相关死亡率为14.71%，实验组低于对照组，但两组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。

2.3 两组克隆性演变发生率比较

治疗后实验组克隆性演变发生率为9.72%，对照组克隆性演变发生率为2.94%，实验组高于对照组，但两组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。

2.4 两组外周血象及T细胞亚群变化比较

治疗前两组外周血WBC、PLT、Hb及T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+水平差异均无统计学意义（P > 0.05）；治疗后两组WBC、PLT、Hb较治疗前升高，T细胞亚群CD3+、CD4+较治疗前下降，而CD8+较治疗前显著升高，差异均有统计学意义（P < 0.05）；实验组治疗后WBC、PLT、Hb、CD8+水平明显高于对照组，CD3+、CD4+明显低于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表4。

3 讨论

AA是恶性血液疾病常见的类型之一，AA的发病机制较复杂，主要与以下三点有关：①“种子”学说[6]，即骨骼中造血干细胞缺陷；②“土壤”学说[7]，即骨髓造血微环境出现异常；③“虫子”学说[8]，即机体的免疫功能异常。其中，免疫功能异常被临床认为是AA主要的发病机制，因此，目前临床多采用免疫抑制疗法（immuno suppressive therapy，IST）和造血干细胞移植（hema-topoietic stem cell transplantation，HSCT）作为最佳的治疗方法，但由于HSCT费用较高及来源困难等，使得IST成为临床主要的治疗手段[9-10]。

抗胸腺球蛋白主要是通过T淋巴细胞促进造血干细胞生长，增强造血生长因子的敏感性[11]。环孢霉素A属免疫抑制剂，主要通过抑制T淋巴细胞的增殖，从而降低γ干扰素（IFN-）及白介素-2（IL-2）的产生[12]。采用rhG-CSF联合环孢霉素治疗，较单一采用环孢霉素治疗效果更为显著，可加强T淋巴细胞毒性，最大程度提高药物疗效，对AA的临床治疗效果具有极为重要的作用[13]。但是由于AA患者具有中性粒细胞缺乏的特点，因而机体自身抵抗力低下，极易发生感染[14]。因此，感染发生后，应在短时间内及时控制感染，以促进造血功能恢复，是AA治疗的关键。

rhG-CSF是一种造血生长因子，能有效促进造血干细胞的增殖、分化及成熟，从而促进骨髓造血功能恢复[15-16]。本研究显示，rhG-CSF具有以下几点作用机制：①促进中性粒细胞释放花生四烯酸及白细胞碱性磷酸酶，从而产生中性粒细胞超氧阴离子；②刺激中性粒细胞增殖和分化，从而增强成熟粒细胞吞噬作用；③增加白细胞数量的同时，增加白细胞的黏附性，发挥抗感染作用。故rhG-CSF对AA并感染患者的治疗具有极为重要的意义[17]。相关研究认为，将rhG-CSF应用于AA合并感染患者治疗中不仅效果显著，同时安全性和可行性也较好[18-19]。

本研究结果显示，实验组总有效率明显高于对照组，表明rhG-CSF联合免疫抑制法较单一采用免疫抑制法治疗效果显著。实验组感染相关死亡率低于对照组，但两组比较无显著差异（P > 0.05），这可能与样本量较小有关。rhG-CSF具有一定的不良反应，本研究显示，实验组克隆演变发生率高于对照组，两组比较无显著差异（P > 0.05），说明本研究结果不支持rhG-CSF与免疫抑制法联用时增加克隆性疾病发生率的观点。另外在本研究中，治疗后，实验组外周血象WBC、PLT、Hb升高幅度优于对照组，且T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+改善幅度优于对照组，与相关研究结果一致[20-21]。进一步表明，rhG-CSF联合环孢霉素较单独采用环孢霉素治疗效果更为显著，更能有效提高AA并感染患者的免疫力，这可能与rhG-CSF加快造血功能恢复有关。

综上所述，采用免疫抑制法联合rhG-CSF对AA并感染患者进行治疗，能有效提高治疗效果，降低感染导致死亡的发生率，且克隆性疾病的发生率增高不明显，从而促进免疫功能恢复，对临床进一步推广使用具有一定价值。

[参考文献]

[1] 刘晓明，邹尧，王书春，等.强化免疫抑制治疗联合不同方案重组粒细胞集落刺激因子治疗儿童重型再生障碍性贫血的临床研究[J].中华儿科杂志，2014，52（2）：84-89.

[2] 梁彩平，刘俏敏，钟燕玲.重组粒细胞集落刺激因子在再生障碍性贫血中的应用[J].中国临床研究，2015，28（4）：439-441.

[3] Sivgin S，Karakus E，Keklik M，et al. Evaluation of the efficacy and safety of original filgrastim（NeupogenR），biosimilar filgrastim（LeucostimR）and Lenograstim（GranocyteR）in CD34（+）peripheral hematopoietic stem cell mobilization procedures for allogeneic hematopoietic stem cell transplant donors [J]. Transfus Apher Sci，2016，54（3）：410-415.

[4] 葛均波，徐永健.内科学[M].北京人民卫生出版社，2013：

[5] 中华医学会血液学分会红细胞疾病（贫血）学组.再生障碍性贫血诊断治疗专家共识[J].中华血液学杂志，2010， 31（11）：790-792.

[6] Sasaki K，Popat U，Jain P，et al. Successful treatment of aplastic anemia-paroxysmal nocturnal hemoglobinuria associated with eosinophilic fasciitis with matched unrelated donor allogeneic peripheral blood stem cell transplantation [J]. Clinical Case Reports，2016，4（8）：765-767.

[7] 徐黎，张倩乔，张征，等.再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征及急性髓系白血病患者骨髓基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4的表达水平和意义[J].诊断学理论与实践，2010，9（5）：498-502.

[8] 唐文珏.免疫调节T细胞在再生障碍性贫血细胞免疫功能紊乱中的作用[J].当代医学，2015，21（16）：87-88.

[9] 刘英，唐锁勤，黄文荣，等.单倍体造血干细胞移植治疗儿童重型再生障碍性贫血[J].中国实验血液学杂志，2013， 21（4）：985-989.

[10] 左书凝，许兰平.单倍体相合造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血的现状与进展[J].中华血液学杂志，2015，36（8）：707-710.

[11] 吴新华，王立伟，袁丞达.抗胸腺细胞球蛋白联合环孢素治疗重型再生障碍性贫血的疗效观察[J].中国基层医药，2016，23（1）：71-73.

[12] Shetty M，Narendra AM，Adiraju KP，et al. Study of aplastic anaemia with cyclosporine in resource poor setting [J]. J Clin Diagn Res，2016，10（6）：OC15-18.

[13] Ankit P，Harsha P，Asha A，et al. Acquired severe aplastic anemia treated with antithymocyte globulin and cyclos-porine： An experience of regional cancer center，Western India [J]. Journal of Applied Hematology，2015，6（2）：53-57.

[14] 田卫平，张琳.再生障碍性贫血患者的T淋巴细胞亚群与病毒感染关系的探究[J].中国当代医药，2012，19（20）：24-25.

[15] Kononova NV，Yakovlev AV，Zhuravko AM，et al. Recombinant granulocyte colony stimulating factor（filgrastim）of prolonged action： Optimization of conditions for extraction and purification from inclusion bodies [J]. Russian Journal of Bioorganic Chemistry，2014，40（5）：507-515.

[16] Baertling F，Meissner T，Troeger A，et al. Granulocyte colony stimulating factor for treatment of neutropenia-associated infection in Pearson syndrome [J]. Klinische Pdiatrie，2014，226（3）：190-191.

[17] 陆亚岚，高清平.造血生长因子治疗成人再生障碍性贫血伴严重感染的疗效观察[J].临床和实验医学杂志，2014， 13（18）：1529-1531.

[18] 蔡洪，李捷萌，李毅俊.促红细胞生成素治疗肿瘤相关性贫血临床效果研究[J].中国医药科学，2015，5（21）：113-115.

[19] 王莉，孙立荣.rhG-CSF对儿童慢性再生障碍性贫血促造血及抗感染作用[J].齐鲁医学杂志，2011，26（4）：333-335.

[20] 钟青，许业栋.骨髓形态检验在难治性贫血与巨幼细胞性贫血鉴别诊断中的临床价值[J]. 中国医药科学，2016， 6（7）：172-174.

篇9

寒假学习计划内容

一、阅读计划

一个寒假有30天，那么30天读2-3本书就可以了。当然，也可以选择读一个系列的书。

读书笔记和读后感是一个方面，另一方面，可以把读过的书籍做一个总结，以思维导图或者画报的形式呈现出来。

二、复习计划

每科都是满分的忽略此条。

期末考试了，为什么还要复习?

期末考试，是一次总结性的考试。不少学校考完试之后，还要校对试卷才能放寒假。不过，大部分的学校并没有这样做。

通过考试，能够发现孩子知识掌握得不牢固的地方。如果期末考试考得不太好，那寒假的时候，就很有必要对薄弱的地方进行巩固和提高。

一二三年级的内容，我们更新得比较全面了。

只要找到不会的点，回去看看视频，做做对应的练习就可以了。

三、预习计划

一二年级的语文数学视频和一课一练都已经更新完了，如果孩子的基础比较扎实，完全可以自学。

在预习的时候，语文以生字的学习为主，包括生字的读音、字形、部首、笔画数、组词、造句。三年级的还要自己查字典，分不同的字义组词，再造句。

除此之外，还可以先背诵古诗。

寒假的时候，我们还会同时更新三年级的语文数学同步学习视频。

四、写作

一年级的小朋友，下学期就要正式开始学习看图写话了。那么，在寒假的时候，先接触一下，到时候就不会说跟不上教学进度。

二年级的小朋友，看图写话不能满足于写2-3句话。需要学习一些写作的方法，把内容写得更加充实。

我们陆续更新了不少看图写话，有需要的家长可以打印出来给孩子练习。

三年级的小朋友，我们建议一周写2-3篇日记，可以把春节里的习俗都写下来。

学习计划实施方式：

合理制定大目标和小目标

学习规划首先要制定学习目标，大目标是整个学期所要达到的成果，小目标可以具体到一周，每个周末回顾一下本周的学习规划是否完成，再定下新的目标。一个看得见的目标能给孩子提供源源不断的动力。另外，家长不要拿自己的孩子和别人家的孩子比较，如果真的要比较，就拿本周的孩子和上一周的孩子作比较吧。

篇10

一、活动目的：

1、中秋节是中国的传统节日，通过中秋节让学生初步理解中国传统节日中所蕴涵的文化内核，真正了解节日，了解中国传统文化，帮助青少年增强科学节日文化理念，弘扬创新节日文化。

2、介绍中秋节的来历，了解中国各地过中秋的风俗。

3、增强学生爱父母爱家乡爱祖国的感情，让节日真正给我们带来快乐与幸福。

二、活动时间：2012年9月25日

三、活动准备：苏轼的《水调歌头》ok带、中秋灯谜、图画、月饼

四、活动地点：八(7)班教室

五、活动过程：

老师导入：中秋节，是中国的传统节日。从去年开始，国家把这个节日定为法定节日，休息一天。从而可以看出，中国逐渐对传统文化和民俗越来越重视。今天我们一起来走进中秋佳节，一起来感受中秋佳节。

一 、中秋节的来历和风俗

1、 中秋节的由来

(1)老师：同学们，每当天气晴朗的夜晚，天空上有什么?月亮像什么?(有月亮。月亮像玉盘、像圆饼。)

(2)、出示圆形月饼，让学生比较。

老师：月亮在最圆的时候是什么日子?(每个月的十五日左右。)

(3)、说中秋节的由来。

老师：谁知道中秋节的来历?

(4)、小结：同学们都说得很好，八月十五中秋节的时候月亮圆满，象征团圆，所以也叫团圆节。它起源于魏晋时期，在唐朝初年成为我们国家固定的节日，这也是我国仅次于春节的第二传统节日。中秋的另一个说法是：农历八月十五这一天刚好是稻子成熟的时刻，每家都拜土地神，中秋可能是秋报的遗俗。

2、中秋节的传说与民间故事

(1)老师引：中秋节在我们中国人眼里，可是非常重要的佳节。“月圆人团圆”，

那是一个温馨和谐、及富诗情画意的节日。中秋节最有名的传说故事就是嫦娥奔月了

老师：有谁能来讲讲有关中秋节的传说，中秋节的起源及一些民间故事? 生：嫦娥奔月(后羿射日)：

(2)指名讲述嫦娥奔月的故事。

(3)引导学生讲述不同版本的传说，吴刚伐桂;玉兔捣药等等。

老师(小结)：看来中秋节是最有人情味、最诗情画意的一个节日。

3、学生介绍中秋节的习俗

老师引：好，听了我给你们讲的故事，你们一定意犹未尽吧。现在我们请嫦娥姑娘来给我们介绍中秋节有趣的传统习俗。(《拜月娘》、《拜土地公》)

二、中秋诗词佳句知多少

老师：有人说，每逢佳节倍思亲，团圆节这份思念当然会更密切，尤其是一轮明月高高挂的时期，诗人就会用诗词来表达对家乡、亲人的思念。

(1)、出示图片1

老师问： 我们来看这幅画，同学们脑中有没有最佳的诗句来配这幅画中的情景。 ——(李白的《静夜思》)

学生齐背《静夜思》。

(2)、老师：中国画诗书画印融为一体，这幅中国画书画印都有，惟独缺诗，我们给它题首诗，使它变得更完整。

(学生发言)(举杯邀明月，对影成三人。选自李白《月下独酌》)(你们知道 “但愿人长久，千里共婵娟” 这句话出自谁人之口吗?

(3)对了，几百年前丙辰中秋的一个夜晚，正是大文豪东坡先生写下了著名的中秋词《水调歌头?明月几时有》，“但愿人长久，千里共婵娟”就出自这首词。老师：今天，我们就一起来欣赏这首绝妙好词。

(4)有感情朗读：苏轼的《水调歌头》，刘禹锡的《八月十五夜桃源玩月》

(5)学唱苏轼的《水调歌头》

我国的诗人大多是忧国忧民的，又大多是命运坎坷的，他们经常流浪在外，客居他乡，思乡成了他们生活中重要的一部分，因此有了许多以思念故乡为题材的诗作，你还知道哪些呢?

(6)指名背诵《泊船瓜洲》、《九月九日忆山东兄弟》等。

三、 中秋佳节话月饼

1、品尝月饼，感受月饼的香甜。

老师：学生们每年是怎样过中秋的呢?(队员讲出各种贺中秋的民俗活动)

(1) 引出——吃月饼、送月饼

月饼的外形——圆，象征团圆，表达合家团圆。

饼中有馅，表面有花纹，花纹主要有月亮、桂树、玉兔等在圆中表达美好的愿望。现代的花纹设计更是各异，别致。(欣赏月饼图片若干张)

老师：展示月饼事物，并简单介绍圆形设计的格式。(对称、均衡)

(2) 动动手，设计一个别致、精美的月饼图案。(背景播放轻快的音乐)

(3)学生作品欣赏。由学生讲解自己的设计意图。

2、举办月饼宴

老师：中秋节，为什么要和家人一起吃月饼?往年你和谁一起吃月饼?(吃月饼表示团圆;和家里人一起吃;还和好朋友一起吃。)

师：你吃的月饼是买的呢，还是别人送的?谁送的?

老师：为什么要送月饼?(过团圆节，送月饼表示和家人团圆。)咱们班级也是一个大家庭，我们都是这个家庭的成员，你们愿不愿意和全体同学一起过这个中秋节?(板书课题)

① 送月饼：

② 吃月饼(大家一起吃月饼，体验班级大家庭的温暖和团圆)

四、中秋灯谜

1、老师：在许多地方八月十五这天会有灯会，其中一项就是猜灯谜。得月楼前先得月。猜一字(棚)

2、重逢。猜一字(观)

3、举杯询包拯。打一句宋词(把酒问青天)

4、十五的月亮。打一成语(正大光明)

五、游戏：“月”字组词接龙。

要求：以“月”字开头组词，以“中秋节”收尾。

优胜：组词过程短者获胜。 六、老师总结

同学们了解了那么多关于中秋节的知识，又为过今年的中秋节出了那么多好主