青春啊青春范文

导语：如何才能写好一篇青春啊青春，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

各大论坛都流行着一句话，韩剧核心理念是闪闪发光的我在你眼里闪闪发光，日剧的理念是我平凡又渺小，好比一块黑面包，可这样的我，在你眼里依旧能够闪闪发光。

这部《对不起，青春》也秉承着日剧一向的核心理念，关键词是青春、热血、有趣。男主角是近年有着超高人气，并且和女神新桓结衣有过一段情的锦户亮，帅气的外表也为整部剧添色不少，被称为耷拉眼版本的陈坤。

男主角恋上气质女神，却不幸被好友撬了墙脚，一气之下，怒放烟花，却导致了隔壁女校的火灾。这场火灾导致两所学校之人一直彼此憎恶着对方，十四年后，女高面临破产，不得不尝试与隔壁男高合并。

合并前的试点班级班主任，便是十四年前引发那场火灾的男主角。十四年前的火灾一直是男主角心中无法释怀的原罪，他想要尽自己最大的努力弥补自己的过错。

整部剧的人设就是：女主角是神经病一样的存在，气场暴烈，能瞬间手撕鸡；男主角软萌可爱，每集耍一次嘴皮，爱说教；保守的大嫂以前拍过热辣写真集；神神道道的妈妈会常常扮成各种卧姿奇怪的佛像。

总有人呵斥国产青春剧不属于我们这一代人，又穷又丑的人没有青春，只有堆满课桌的试卷和习题册。其实青春里点点滴滴的快乐如同被海浪冲上沙滩的贝壳，缤纷且多彩，关键是看你是否有心采撷。

剧中每个人物都诠释着自己在青春时面临的种种问题，男主角为自己十四年前犯下的错耿耿于怀，女主角不明白自己为什么会喜欢上完全不是理想型的男主角。有人因为压力一直压抑着自己，有人因为自卑一直不敢向喜欢的人表白心迹。

可身为男主角的班主任鼓励他们勇敢去做――

“喜欢一个人，就应该让他（她）知道，否则不是白白喜欢了吗？”

“青春只有一次，贪婪点有何不可？”

置身事外的人永远最轻松，停顿在原地的人永远不用担心未来，可是不努力迈出一步，就永远不知道前面等待着自己的是什么，是他（她）的“我也喜欢你”抑或是“对不起”？无论答案是哪一个，只有迈出这一步的人才有权利知道。

青春不是一条一通到底的大道，它是一条有着无数岔道的小路，每一个岔路口，我们都要选择往哪里走。偶尔走了错误的路，绕了远一点的路，又有什么关系呢？或许这条小路有更美丽的风景，或许你在这条小路上能碰到志同道合的好朋友。

我们每个人都有权利犯错误，也都有权利说对不起，年轻的时候，要勇敢地去走那条自己向往的路。

我读书的时候喜欢一个人，我觉得他有一点傻，像横道世之介，也像堂吉诃德，勇敢到莽撞，善良到蠢笨。可年轻时的骄傲总是阻止我告诉他自己的心意。后来我跌跌撞撞长大了，我喜欢的那个人却早已经有了一个对他好、喜欢他的姑娘。

所以我一度认为自己是一个很糟糕的人，年少时候的虚荣让我不敢承认自己的心思，后来又成了一个胆小鬼，总也不敢说自己那点忐忑的念想。

因着这点经历，我看这部剧时，几乎哭成了泪人。

篇2

“女硬汉”VS“小娇羞”

小时候坚信妇女能顶半边天，长大了后才发现不对劲，但凡顶天立地的女子们都变成了一群会痛经的“女硬汉”，有些甚至还引以为荣。这让人挺伤感的，女人哪能是这样的?

我们是该在超市掰碎袋装泡面报复社会?还是该痛骂男人不够争气?还是该诅咒那些不肯跟我们一起做一条真的汉子的“小娇羞”呢?一切的一切都只能无解，“女硬汉”和“小娇羞”的关系就好比刘三好与姚金铃、聂宝言与小唐菜、四眼衰女与金发啦啦队长、奥斯卡影后与杰西卡・阿尔芭。

如果你常看美式青春校园片，就会发现，片子里雷打不动会有啦啦队长与橄榄球四分卫或篮球队长的“官配”组合，要是啦啦队长恰好是不起眼女主角的死对头，那么橄榄球四分卫或篮球队长在影片最后必定会被猪油蒙了心，发现外在美虽重要，四眼衰女的内在美却更好。

那些骄纵任性、美丽动人的拉拉队长们，她们自小貌美优秀、充满自信、人见人爱，早上上学去，呼风唤雨带着小喽，双手叉腰猫步横行于休息区，众人如迎接公主驾临。这样的生活多么美好，直到被女主角使绊子、插足。然后，就没有然后了，你用脚趾头想都该知道，代表主流价值观的女主角彻底赢了，美女的命运再无人关心。

笔者年轻的时候很喜欢看这类灭美女威风的桥段，但是随着年龄的渐长，却越来越喜欢漂亮的人物，尤其是年轻的啦啦队长们都酷似杰西卡・阿尔芭的翻版。她可是全民宝贝啊，是自从《风度》杂志2000年开始设置“年度最性感100人”名单以来，唯一每年都榜上有名的女人。业界总有各种关于杰西卡的“神话”――《美国周刊》声称，杰西卡曾是汤姆・克鲁斯与凯蒂・霍尔姆斯交好之前的首选目标。而痞子阿姆则在歌曲《My Band》中念叨：“昨天Kuniva(说唱乐队D12成员之一)拿刀威胁我，因为我告诉他，杰西卡・阿尔芭会成为我的老婆。”《碧海追踪》的导演斯托克威尔则回忆道：“米高梅的主管们在后期监制过程中，都被杰西卡的美貌所分神。我会时不时地受到质问：‘为什么你把她游泳那段剪掉了?’”

少年记忆女主角

没错，能让观众几年来都忽略演技，只求一睹银幕上芳容的女星，似乎也只有杰西卡・阿尔芭一人。其实杰西卡并不是一个嚣张跋扈的姑娘，只是那样一张阳光明媚如五月天的脸庞，和如蜜糖裹身般的身段，就该是一个颠倒众生的校园尤物。

据美国IMDb电影网站的一项统计表明，杰西卡的美貌正好符合15-28岁常上电影院观影的男青年的审美标准。在他们心里，杰西卡是青春的影像，当历史背景褪色、记忆浑浊的时候，只有她的笑容和美好还是清晰的，定格在16岁暑假的海边假期里，鲜明在和死党的中――少年始终不敢冲上前去和她说声“嗨”，因为她身边已经有一个高大英俊的他，她是一个爱欺负人但本性不坏的17岁姑娘，并忠于爱情，即使他是一个人渣，少年也深知就算他和她分手了也没自己的事儿。于是漫漫长夜里，为情所困的少年撸完一管又一管。

于是杰西卡成了所有少年心事中的女神，是他们储藏柜深处的秘密，是从美国东海岸到西海岸天空上呼啸而过的飞机，是返校舞会皇后评选时斩钉截铁的选票，是再也回不去的高中时代里最后一丝忧郁。

如今已经是两个孩子妈妈的杰西卡，仍然保持着神奇的少女美态，仿佛从未走出过少年们的梦中。她一直站在原地，像个符号，指导大家完成青春必修课。虽然身边除了高大英俊的外，还多了两个小奶瓶，但这无损她爱情导师的形象。

龅牙妹都是潜力股

现实中的杰西卡并不是一路从美少女长成大美人的。小时候的她根本就不是学校里的风云人物，她在接受采访时表示：“我在学校时总是被欺负得很惨，爸爸不得不经常护送我进学校以免受到袭击。中午我要躲在护士的办公室吃午餐，这样就不必跟其他女孩坐在一起。总是蓬头垢面的我，上课时则得时刻保持警醒。这些遭遇除了因为我是混血人种外，还因为我的爸妈没钱。我既没有漂亮衣服，也没有酷酷的背包，你想，一个讲话带着浓厚得克萨斯州口音的龅牙妹，谁不想顺带欺负一下?”

杰西卡长到十五六岁的时候，才开始穿短裙和泳装，蜕变由此开始。她一步步地突破自我，摆脱拘束，重拾自信。拍摄电影《罪恶之城》时，导演罗德里格斯觉得她应该把头发染成金色，于是人生中第一次杰西卡上沙龙换了发色。那段时间，当她顶着金发出入比弗利山酒店或四季酒店的酒廊时，都不需要自己掏钱买酒。“酒店里挤满了王子或富有的老男人，每次都会有人请我喝一杯，我对自己说：‘噢，天啊，难道就是因为我的金发?!’那是我最大限度地卖弄自己了，仅此而已。我一直遵循妈妈教给的道德标准，自我尊重和尊重他人。我希望我的孩子也能学到这点。”

看看今时今日的杰西卡，不晓得当年欺负过她的男同学们作何感想。笔者不得不提醒大家，龅牙妹都是潜力股，好好珍惜吧。

表演自在街头

在国内即将上映的系列电影《非常小特工之时间大盗》中，杰西卡・阿尔巴饰演一个孩子的亲妈，两个孩子的后母，隐藏身份还是一个身手不凡的女特务。这是杰西卡第一次在大银幕上扮演母亲的角色，看似是个挑战，实际上是她最拿手的――去年杰西卡生下了第二个女儿海文・加纳・沃伦，辣妈春游的队伍又壮大了。

说到好莱坞的辣妈街拍，就必须得提杰西卡・阿尔芭，虽然她没有“精灵嫂”米兰达・可儿的模特身材，没有“贝嫂”维多利亚・贝克汉姆的大女人气场，也没有“阿汤嫂”凯蒂・霍尔姆斯的全身贵气名牌，但是杰西卡胜在温婉亲切，家常可人。更重要的是，她随身携带的最佳配饰――大女儿奥娜，实在是太古灵精怪了。被围观群众亲切称为“图娃”的奥娜，完全不是小苏瑞那样的小公主派头，你永远都想不到头戴各种莫名其妙、五彩斑斓发卡的娃，在面对狗仔镜头时的下一个表情和动作是什么，吐舌头还是斗鸡眼?猩猩步还是僵尸舞?萌得太刺激了。

比起演技时常被评论家诟病的妈妈来说，娃更有表演天分，这就叫上帝关上一扇门，又会为你打开一扇窗――辈子都可能无缘奥斯卡奖的杰西卡，收获了一个小表演艺术家。

一个能把孩子捌饬成这样的妈妈，也一定是个极天真和有趣的人。所以在街拍这件事情上，杰西卡也总给人一种“我很认真地想知道，你们到底喜欢我穿什么”的敬业态度。她的出镜率特别高，以至于街拍都快成了她的主业。在所有好莱坞辣妈中，杰西卡的穿着打扮有很高的学习价值。不拍戏时，她做的最多的事情就是把自己和孩子打扮得漂漂亮亮，挑一个光线最佳的时段出门，有意无意地配合着狗仔拍美照。

篇3

太阳是金梭，月亮是银梭，织出生活的灿烂，织出岁月的壮美。这是青春的主旋律，也道出了生命之于时光的意蕴。

光阴荏苒，转瞬离开共青团岗位已经十多年了，也许日常工作的琐屑渐次淡然，但青年工作朝气蓬勃、昂扬奋发的气息和精神，一直激励着我在不同的工作中进取。回首过往，那是一段深刻而美好的记忆。之所以深刻，是因为共青团工作让我感悟到，青年人敢作敢为的情怀只有与祖国和人民的念想紧紧拥抱在一起，才会显得那样的开阔和博大；之所以美好，是因为共青团工作让我从一种职责、一种使命的角度去透视赤橙黄绿青蓝紫，让我认识到青春是以奉献印证出自己最靓丽的本色。故此，我多有感慨：人生能有在共青团工作的经历，端的是一种缘分，一种精神的财富，它能让你跟随时代的走向一往无前，终身受益。

由青年工作我想到青年人，由青年人我想到青春。青春不属于某个年龄段的专利，青春是进取的标志，是创新者的宣言。青春是一种精神，是书山勤为径、学海苦作舟的追寻，是路漫漫其修远兮的求索，是苦其心志劳其筋骨的磨砺，是百尺竿头更进一步的跋涉。青春是一种使命，是成就伟业舍我其谁的气魄，是天下兴亡匹夫有责的胸襟，是我以我血荐轩辕的赤诚，是只问耕耘不问收获的超脱。

人生短暂，平凡而伟大；青春不朽，纯粹而灿烂。生命因奋斗而壮美，青春因追求而风流。朋友们，该是我们写下传说的时候了。

谨以此感言向《时代青年》创刊60周年暨复刊30周年表示热烈的祝贺。

(作者王新强系河南省西平县人民政府县长。曾任河南省直机关团委书记)

精彩的驿站，无悔的青春――写在《时代青年》创刊60周年复刊30周年之际

朱良才

六十甲子，岁月轮回，沧海桑田，流逝的是岁月，孕育的是希望；

三十而立，时光荏苒，峥嵘年华，留下的是足迹，收获的是辉煌。

《时代青年》，谱尽青春风华；《时代青年》，指引青春航向。

“聚是一团火，散作满天星。”正是这种生生不息的共青精神，感召我们奋斗在鲜艳的团旗下。有缘投身团的工作，是组织的信任，更是个人的光荣。

我从乡镇最基层的岗位上一步步走进共青团的大家庭，既经历了战天斗地的豪情、面朝黄土背朝天的艰辛，也感受了泥土芳香中播撒希望、欢庆收获的喜悦。回首美好难忘的流金岁月，五彩斑斓的广阔天地，浸润这片沃土的滋养，沐浴共青团工作洗礼，砥砺了自己的品性，坚定了自己的意志，陶冶了自己的情操，真正领会了“春夏秋冬共青路，东南西北共青情”的内涵。

我挚爱共青团工作，并荣幸能成为共青团大家庭的一员，先后两次团的工作经历，四年难忘的共青岁月，让我深切感受到共青团火一样的生命力和青年的热情、无畏、朝气与潜能。与青年志愿者一起支援四川灾区，和小朋友共值“红领巾交通岗”，为留守儿童送去发自内心的关爱，同周口青年英模倾情交流，帮外出务工青年撑起一片晴空……我正是在朝气蓬勃、实事求是的追求与挑战中感受着青春的魅力与永恒。

篇4

Sarah Jessica Parker五官塌陷的太过明显，法令纹特别突出，更可怖的是，她画了一个小烟熏，让她的眼睛像一只灵巧的猫或者豹子，头发乱糟糟的黄黑相间，这一切搭配着John Galliano的白色“军装”，在热爱SJP的粉丝眼中，无疑是一个车祸现场。

社交平台更加无情，把Sarah Jessica Parker的照片和《侠胆雄狮》中的狮子（其实是一个长着狮子脸的人）摆放在一起，狮子并没有显得太难看。

搜索了一下，Sarah Jessica Parker最近一直热衷的这款眼妆，也是有名有姓的造型师造型，并且是刻意为之的。

据说，这是Sarah Jessica Parker自己设计的造型，她希望在出席任何party和名人出现的事件中，这双小烟熏的猫眼是她的眼睛。

最近一直在哼唱这个曲子，“时光一逝永不回，往事只能回味，忆童年竹马青梅，两小无猜日夜相随。”

唱着唱着觉得是在讲我们爱过的女主角们。

记忆中的Sarah Jessica Parker是什么形象呢？

金黄色的波西米亚卷发，永远传递出半梦半醒的黏腻感，脸长，但是脖子也是颀长的，她是敢穿基本款出门仍然很美艳的人，就是因为那标志性的卷曲头发。

Carrie（《欲望都市》女主角）的长相大概是毁誉参半，有人甚至说，长这么难看还能当主角的，除了史莱克，也就只有她了。比长相更不招待见的，是她的神态，一遇到男人，就开始摇头晃脑，说话装可爱，像个情窦初开的loli，但是就是这种做作搭配她的脸她的大嘴她的眼睛，一切都合理很多。虽然个子矮，但是比例奇好，不跟别人站一起，都显不出她矮，腿尤其漂亮，又细又直又长。

她敏感脆弱，聪明幽默，有点小才情，有点矫情虚荣，诊断起别人的感情来一针见血，但轮到自己了就满脑袋浆糊，对朋友好，但也经常重色轻友……好多女人愿意成为她。

看豆瓣有一则提问――怎样才能过上这样的生活？回答一睡觉；回答二做梦。

可是时间都去哪里了？

好多人还是没有机会长大成为Carrie，Carrie就已经老了。

有人说，人的衰老就是细胞含水量的减少，我们看到的干干巴巴的欧美老人只是因为他们瘦啊，咱这儿五十来岁的瘦人也是干干巴巴的，再加上他们经常晒太阳什么的，紫外线对于皮肤的伤害其实还挺大的，于是看着就像干尸了……大写的一个遄帧

痛定思痛，打开一瓶高倍补水面霜，拯救自己，从现在开始吧。

TIPS！

寻找欲望的都市道路很长

刘瑜老师说了，“虽然我生活在纽约，虽然我也有几个死活嫁不出去的女朋友，但是我特别讨厌看《欲望都市》。讨厌的原因很简单：这些女人得到男人们怎么就那么容易？”

如果说年轻女子前往纽约是为了寻找两个“L”――品牌（Label）和爱情（Love），那么看罢该片我们不妨也扪心自问，你呢？

这个提问始于2000年初第一次看《欲望都市》的时候自己问自己的话。时间过去了十几年了，这个问题还是通用的，还是扪心自问。

现在说起《欲望都市》，真的有点朝花夕拾的感觉。

关于纽约，1979年，伍迪・艾伦曾在他的电影《曼哈顿》里这样饶舌

――无论季节如何流转，对他而言，纽约都是浸没在乔治・盖希文爵士乐之中的城市。

他恰是他所深爱的纽约的化身，黑边眼镜下是他丛林豹般不可抗拒的魅力，纽约是他的城市，并将永远如此。

Sarah Jessica Parker亦是纽约的形象代言人。只要有她在，即使失去了傲人高耸的双子塔，纽约依然是个充满致命诱惑的不夜城。

她是《人物》杂志全球25位最具吸引力人物之一，拿过三回金球奖喜剧和剧情类电视最佳女主角。她被人称做“纽约街头时尚风向标”，她自己更自称是时尚的“风眼”，她说：“一切流行的旋风都从我身边刮过去。”

女人们花一个晚上看她主演的电视剧，再花一整个白天研究她的包包和鞋子。从Carrie在1998年第一次用她微醺的嗓音，向她们发出“hello stranger”的召唤开始，她们观摩了关于她和她的三女友们落力出演的一场场关于爱和友谊的悲喜剧，其中Carrie擅长成人童话剧；Miranda熟捻金领讽刺剧；Charlotte担纲家庭轻喜剧，Samantha领衔情场传奇剧。

而这十年剧场人生，四女子除了脸上风云“皱”起外，其他一概未变，依然高唱着Love和Label的凯歌。而在现实生活中跌宕了十年的作为观众的她们，对爱和婚姻的认识却已经完全改变：那些曾经的爱大抵已经下落不明，而即使仍有残影，对于那些爱的纠缠，往往也是出于惯性。

Sarah Jessica Parker饰演的那个著名的时尚女Carrie Bradshaw甚至穿着很隆重的黑色Burberry和trilby款的帽子进超市，即使在家里也要扮富贵的Nina Ricci女郎，然而，以平均两分钟的速度更换的八十一件衫，终归还是不及最后那双Manolo Blahnik高跟鞋来得意味深长，不仅是代表了感受，也是爱的抉择。

如同她们和时断时续纠缠了十年的老情人的爱事一样，她们对《欲望都市》和与它有关的一切影像记忆，其实已经和热爱没有关系，她们只是在青春的影子里，和自己谈着一场一厢情愿的恋爱。

篇5

作者：梁英民　蒋姗姗　孙强　吴绒丽　陈萍　李荣　周鹏　王键　韩骅

【关键词】 基因表达

关键词: bcr/abl;基因表达;融合蛋白;抗血清

摘 要:目的 克隆并表达bcr/abl融合基因片段，并制备其抗血清. 方法 PCR扩增包含蛋白融合点的bcr/abl癌基因片段，序列测定后克隆入带有His标签的原核表达载体pET-16b，转化宿主菌BL21，IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析表达结果，Ni-NTA树脂亲和纯化，皮下多点注射免疫小鼠，ELISA确认抗血清的滴度. 结果 PCR扩增得到大小约523bp的目的片段，序列测定表明与发表序列完全一致;得到了一种新的癌基因bcr/abl片段的原核表达载体pET-16b-bcr/abl，在BL21中表达可见于Mr21×103 处有一蛋白新生带，表达的BCR/ABL蛋白免疫小鼠后，ELESA确认抗血清的滴度>1∶2000. 结论 成功的克隆、表达了bcr/abl融合基因片段，并制备了相应的抗血清.

Keywords:bcr/abl;gene expression;fusion protein;immune serum

Abstract:AIM To clone and to express bcr/abl fusion gene fragment and to produce immune serum against the expressed fusion protein.METHODS PCR-amplified bcr/abl gene fragment was inserted into plasmid pET-16b with His tag　to form a new plasmid pET-16-bcr/abl（pEb）.The BCR/ABL fusion protein was expressed in E.coli BL21trans-formed with pEb and induced with IPTG.The expressed pro-tein was purified by affinity resin-Ni-NTA and analyzed by SDS-PAGE.In order to produce anti-serum，Mice were im-munized by subcutaneously multi-site injection with BCR/ABL protein.The anti-serum was assayed by ELISA.RESULTS Molecular weight of the PCR-aimplified bcr/abl gene fragment which was consistent with the published se-quence was about523bp.Plasmid pEb was constructed.The molecular size of BCR/ABL protein expression was about Mr21×103 .The titer of the BCR/ABL protein anti-serum was more than1∶2000.CONCLUSION Fragment of bcr/abl fu-sion gene is successfully cloned and expressed.The antiserum of BCR/ABL protein fragment has been produced.

0 引言

慢性粒细胞白血病（Chronic myelogenous leukemia，CML）是起源于骨髓造血干细胞的恶性肿瘤.绝大多数CML患者的肿瘤细胞带有染色体异常，即9∶22号染色体易位，形成特征性的费城染色体（Pheladophia，ph染色体）［1，2］ .在分子水平，这一染色体易位造成bcr基因和abl基因的融合，表达的BCR/ABL融合蛋白具有持续性的激酶活性，引起细胞的转化［2］ .Bcr/abl融合蛋白被认为是CML特异性肿瘤抗原，可作为CML诊断和治疗的指标［3-6］ .我们用PCR扩增了BCR/ABL融合蛋白的基因片段，并在大肠杆菌中进行了表达.表达产物经纯化复性后，用于免疫小鼠，得到可识别该抗原的小鼠抗血清.

1 材料和方法

1.1 细菌和质粒 大肠杆菌XL-10gold由本室保存.质粒pET-16b及大肠杆菌BL21均来自Nav-agene公司.带有人bcr/abl（b3a2）融合基因的质粒pGD210由本校附属唐都医院血液科刘立博士提供.

1.2 引物设计与bcr/abl融合基因表达质粒的构建 DNA重组所用试剂来自Promega、宝生物工程公司及华美生物工程公司.以质粒pGD210为模板，用PCR扩增了bcr/abl基因跨越融合点的523bp基因片段（93aa-265aa）.PCR引物的序列为:上游引物:5’-CTCGAGACGTTCCTGATCTCCTCT;下游引物:5’-GGATCCTTAGTAGTTGCTTGGGACC-CA.PCR产物经电泳回收纯化后插入pGEM-T载体（Promega），进行DNA序列分析.从正确克隆的载体中，用Xho I和BamH I双酶切下含有bcr/abl融合基因插入片段，插入质粒pET-16b，得到表达BCR/ABL融合蛋白的质粒pET-bcr/abl（Fig1），以下简称pEb.

1.3 重组蛋白的诱导表达和纯化 用表达质粒pEb转化大肠杆菌BL21，加入IPTG至终浓度1mmol・L-1 ，诱导不同时间后，收集菌体.悬浮于PBS，超声裂菌，离心弃去上清.向沉淀中加入2mol・L-1 尿素，离心除去杂蛋白.再用8mol・L-1 尿素溶解沉淀的蛋白，在Ni-NTA-agarose柱（Vector公司）上进行亲和层析.用250mmol・L

-1 咪唑洗脱.收集洗脱的蛋白，透析后冻干保存.

图1 略

1.4 抗血清的制备 BALB/c小鼠由第四军医大学实验动物中心提供，用50μg基因重组的BCR/ABL融合蛋白与等量的福氏佐剂混后皮下多点注射，每周一次，第四周腹腔注射加强一次，加强免疫后14天取血，分离血清备用.

1.5 酶联免疫试验（ELISA） 向96孔板中加入纯化的BCR/ABL融合蛋白（5μg/μL）100μL，4℃包被过夜.加入稀释的经免疫小鼠的血清与未经免疫小鼠的血清，血清稀释度均为1∶500，1∶1000，1∶2000，1∶4000，1∶8000，1∶16000，设一阴性对照孔， 37℃水浴1h，加入酶标抗体，37℃1h，TMB显色15～30min，酶联免疫检测仪测定，测定波长为492nm.

1.6 DNA序列分析 按说明书用PE公司的荧光DNA序列测定试剂盒（Big-dye）进行序列测定反应，用310型DNA序列测定仪进行电泳及结果分析.

2 结果

2.1 bcr/abl基因的亚克隆 为表达BCR/ABL融合蛋白融合点两侧约200个氨基酸的片段.以全长bcr/abl基因为模板，用PCR扩增了这一片段的cD-NA.Fig2显示523bp的目的片段被扩增出来.将这一片段插入T载体后，进行DNA序列分析，但在5’和3’端分别插入了设计的Xho I和BamH I酶切位点.

图2 略

2.2 BCR/ABL融合蛋白的诱导表达 用bcr/abl表达质粒pEb转化大肠杆菌BL21，培养后用IPTG进行诱导.SDS-PAGE分析结果表明，与用pET-16b转化的BL21及未转化质粒的BL21裂解产物相比，在21kd处有一新生蛋白带，与预期的融合蛋白分子大小相同.灰度扫描显示IPTG诱导3h后融合蛋白的表达约占细菌总蛋白的20%.

2.3 BCR/ABL融合蛋白的纯化 用Ni-NTA-a-garose亲和层析柱进行BCR/ABL融合蛋白的纯化.收集蛋白峰，PBS透析后，进行SDS-PAGE分析（Fig3）.表达的融合蛋白被纯化为单一条带.

2.4 BCR/ABL融合蛋白在小鼠中的抗体应答 收集免疫小鼠的抗血清，ELISA检测结果见图4，与正常对照比较，接受融合蛋白免疫的小鼠产生了较高滴度的血清，说明基因重组的BCR/ABL融合蛋白对小鼠具有免疫原性.

图3 － 图4 略

3 讨论

bcr/abl融合基因是CML的分子标记，bcr/abl融合基因编码一个分子量为Mr21×104 的融合蛋白.由于融合蛋白连接区的氨基酸序列是其他任何正常蛋白质不具有的，被认为是CML细胞所特有的.BCR/ABL融合蛋白是一种胞浆内蛋白，研究bcr/abl融合蛋白在细胞表面的表达的类型和该融合蛋白的免疫学特点对开展CML的免疫治疗有重要意义［3-6］ .然而，由于融合蛋白很难从患者体内获得，而且在细胞内加工和提呈的效率也难以检测，为此，本文用体外基因重组的方法获得了bcr/abl融合蛋白的原核表达产物，经纯化复性后，用于免疫小鼠，得到了可识别该抗原的小鼠抗血清，为随后的单克隆抗体制备及免疫治疗的研究奠定了基础.

参考文献

［1］Kurzrock R，Gutterman JU，Talpaz M.The molecular genetics of Philadelphia chromosome-positive leukemias ［J］.N Engl J Med，1988;319（15）:990-998.

［2］Shtivelman E，Lifshitz B，Gale RP，Canaani E.Fused transcript of abl and bcr genes in chronic myelogenous leukaemia ［J］.Na-ture，1985;315（6020）:550-554.

［3］Liang Y M，Sun Q，Jiang S S，Cheng P，Wang J S，Liu L，Han H.Expression of PTD-bcr/abl fusion oncoprotein fragment carrying protein transduction domain and its transmembrane transportation ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2001;22（7）:Cover2.

［4］Feng Q，Sun BZ，Zhao YT，Sun K，Yan Z，Han W，Zhang YQ.Study on the cleavage ability of three ribozymes specific to the different sites of bcr-abl fusion gene ［J］.Di-si Junyi Dax-ue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1999;20（4）:284-287.

篇6

[关键词] 阿法骨化醇；IgA肾病；肿瘤坏死因子-α；白细胞介素-6；转化生长因子-β1

[中图分类号] R692.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）03（b）-0150-04

[Abstract] Objective To explore the effect of different doses of Alfacalcidol on serum levels of tumor necrosis factor alpha （TNF-α）， interleukin 6 （IL-6） and transforming growth factor beta 1 （TGF-β1） in patients with IgA nephropathy （IgAN）. Methods 52 patients with IgAN admitted to Three Gorges University People's Hospital from October 2012 to February 2015 were selected and randomly divided into group A and group B， with 26 cases in each group. While 30 healthy adults were selected as normal group. On the basis of routine RAS therapy plan， group B was treated with Alfacalcidol （0.5 μg， once a day） for 12 weeks， while group A was treated with Alfacalcidol （0.25 μg， once a day）. The changes of serum TNF-α， IL-6， TGF-β1， cystainCm（Cys-C）， blood urea nitrogen （BUN）， serum creatinine （Scr） and 24 hours urinary total protein （UTP） in two groups were compared before and after treatment. Results Compared with normal group， serum TNF-α， IL-6 and TGF-β1 levels were significantly higher than those in IgAN group （P < 0.01）. After 12 weeks of treatment， the level of TNF-α， IL-6， TGF-β1， Cys-C and 24 h UTP had obviously declined （P < 0.05）， compared with that before treatment in two groups， and the reduction of group B was higher than group A （P < 0.05）. There was no significant difference in BUN and Scr between the two groups before and after treatment （P > 0.05）. Conclusion Inflammation reaction exists in IgAN， Alfacalcidol can significantly reduce TNT-α， IL-6， TGF-β1 level in serum of IgAN patients， reduce albuminuria， improve renal function， and the dose of 0.5 μg/d is better than 0.25 μg/d.

[Key words] Alfacalcidol； IgA nephropathy； Tumor necrosis factor-α； Interleukin-6； Transforming growth factor-β1

IgA肾病（IgA nephropathy，IgAN）是导致我国终末期肾病的主要原因之一。尽管其病因与发病机制尚未完全阐明，但IgAN发病机制的中心环节与细胞炎性因子的分泌异常有关，且被认为是导致各种肾小球肾炎肾脏损伤的重要物质。既往已有研究报道在IgAN患者血清中炎性因子表达升高[1]，且临床研究证实活性维生素D能降低IgAN患者的蛋白尿，已作为IgAN治疗新的尝试[2-3]，但目前尚不清楚在不同的病理生理状态下，活性维生素D作用于维生素D受体，进而能产生抗炎性反应作用所需的合理剂量[4]。本研究旨在观察已应用双倍剂量肾素血管紧张素系统（RAS）阻断剂治疗3个月以上、但蛋白尿未降至0.5 g/24 h以下的IgAN患者血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和转化生长因子-β1（TGF-β1）水平的变化及探讨不同剂量阿法骨化醇对其的影响，现将结果报道如下：

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2012年10月～2015年2月在三峡大学人民医院（以下简称“我院”）随访的IgAN患者52例。纳入标准：①Lee分级Ⅱ级或Ⅲ级；②双倍剂量的RAS阻断剂治疗时间3个月以上，血压控制在130/80 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）以内；③24 h尿蛋白定量0.5～3.0 g伴或不伴血尿，估算肾小球滤过率（MDRD计算公式）>50 mL/（min・1.73 m2）。排除标准：①继发性IgAN患者；②阿法骨化醇过敏者；③计划妊娠者；④使用糖皮质激素或其他免疫抑制剂者；⑤合并严重心、脑、肝等慢性疾病者；⑥高钙血症者；⑦2周内应用过维生素、阿司匹林、调脂药及抗氧化剂药物者；⑧依从性差不能完成随访者。符合入选标准的IgAN患者52例，其中男29例，女23例，平均年龄（35.1±13.2）岁。按随机数字表法分为A组和B组，每组26例，两组患者在性别、年龄、病程、血压、肾脏病理及RAS阻断剂药物治疗方面比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。见表1。同期选取性别和年龄与患者相匹配的健康成年人30例为正常组，其中男16例，女14例，平均年龄（34.9±13.1）岁，均来源于我院健康体检者。本研究方案经我院医学伦理委员会通过，所有患者均签署了知情同意书。

1.2 方法

所有IgAN患者均维持原有双倍剂量RAS阻断剂等常规治疗，在此基础上，A组患者口服阿法骨化醇胶丸（中美合资昆明贝克诺顿制药公司生产，国药准字J20130162）0.25 μg，1粒/d，B组口服阿法骨化醇胶丸0.5 μg，1粒/d。两组疗程均为12周。

1.3 检测指标及方法

双抗体夹心酶联免疫吸附试验法检测外周血中TNF-α、IL-6和TGF-β1含量。日立7600型全自动生化分析仪检测血胱抑素-C（Cys-c）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）水平。双缩脲法测定24 h尿蛋白总量（UTP）。

1.4统计学方法

应用SPSS 20.0统计软件对本研究所得数据进行分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，同组内治疗前后比较采用配对t检验，两组间比较采用独立样本t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IgAN组和正常组血清TNF-α、IL-6和TGF-β1水平比较

与正常组比较，IgAN组患者血清TNF-α、IL-6和TGF-β1水平明显升高，差异均有高度统计学意义（P < 0.01）。见表2。

2.2 A组和B组Cys-c、BUN、Scr、24 h UTP比较

治疗前，A组和B组Cys-c、BUN、Scr、24 h UTP差异比较无统计学意义（P > 0.05）。12周后，A和B组患者Cys-c、24 h UTP均较本组治疗前显著下降（P < 0.05），且治疗B组患者Cys-c、24 h UTP均低于治疗A组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。两组患者BUN、Scr水平比较以及与本组治疗前相应指标水平比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）。见表3。

2.3 A组和B组血清TNF-α、IL-6和TGF-β1比较

治疗前，A组和B组患者血清TNF-α、IL-6和TGF-β1水平比较差异无统计学意义（P > 0.05）。12周后，A组患者血清TNF-α、IL-6、TGF-β1水平较治疗前明显下降，差异有统计学意义（P < 0.05）；B组血清TNF-α、IL-6、TGF-β1水平较本组治疗前及治疗A组治疗后明显下降，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表4。

3 讨论

IgAN是多因素参与的免疫相关性肾小球肾炎，现代分子生物学研究认为，免疫介导的炎症反应在IgAN发生、发展中起关键作用[5]，免疫反应为始动因素，IgAN患者体内的异常多聚IgA1沉积于肾系膜细胞（glomerular mesangial cells，GMC）后释放了多种炎性因子而致病，其中炎性因子TNF-α、IL-6、TGF-β1 在IgAN进程中的作用逐渐引起人们的广泛关注[6]。

TNF-α主要由活化的单核巨噬细胞产生，但肾脏固有细胞如GMC、上皮细胞均可分泌TNF-α。研究表明[7]，TNF-α可影响肾小球GMC功能，导致细胞形态和细胞骨架的改变，刺激GMC增殖及表达黏附分子，并能刺激成纤维细胞增生，促进肾脏纤维化。有报道显示[8]，IgAN患者血、尿及肾组织中TNF-α的浓度均明显增高，其升高程度与病情成正相关，随着病情的好转，TNF-α含量明显下降。IL-6既可作为各种肾脏病急性期反应的调节因子，又可通过自分泌或旁分泌方式与多种细胞炎性因子如TNF-α、TGF-β1等相互作用，参与免疫调节和炎症反应。目前有研究显示IgAN患者血清IL-6水平明显增高，IL-6可促进内皮细胞和巨噬细胞的促凝血活性、增加系膜细胞蛋白激酶的活性，加重肾脏损害[9]。马云霞等[10]研究表明，在系膜增殖性肾炎病变中，免疫复合物沉积刺激GMC分泌IL-6，IL-6又可以进一步刺激细胞外基质的增生，形成恶性循环，导致肾小球纤维化。有学者应用抗IL-6抗体，既可抑制GMC分泌IL-6，又可抑制系膜增殖[11]，进一步表明IL-6在IgAN的发生、发展及转归中的重要意义。TGF-β1在IgAN进展过程中起重要作用，其过度表达可通过多种途径促进GMC增殖及细胞外基质聚积[12]。多项对TGF-β1/Smad通路的研究发现，拮抗该通路的活化，可以抑制肾间质纤维化[13]。有学者报道中国华北地区IgAN患者的肾小球和血清中TGF-β1水平明显升高，且与病理级别、尿蛋白呈正相关[14]，提示可以通过抑制TGF-β1生成来防治IgAN的发生、发展。

阿法骨化醇主要成分是1α-羟基维生素D3，临床主要用于骨质疏松、甲状旁腺功能亢进、维生素D缺乏症和肾性骨病等。近期的动物实验发现活性维生素D具有抑制肾素活性、调节免疫功能，可以通过核因子κB信号通路及Toll样受体4路径抑制肾脏局部炎症反应[15-16]。Fishbane等[17]发现活性维生素D 治疗CKD患者，可抑制T淋巴细胞的增殖与活化，减少细胞因子及TGF-β1的产生，抑制粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子及树突状细胞的生长。Andress等[18]在CKD中的研究表明，活性维生素 D 可抑制炎症因子IL-1B、IL-6合成，促进IL-10、IL-4分泌，抑制巨噬细胞活性。以上研究提示，活性维生素D可以减轻CKD患者的免疫炎症，但在不同的病理生理状态下所需要的最佳剂量尚不明确。

本研究尝试在已使用双倍剂量RAS阻断剂治疗3个月以上、但尿蛋白水平未降至0.5 g/24 h以下的IgAN患者中，采用不同剂量阿法骨化醇探讨其对IgAN患者血清TNF-α、IL-6 、TGF-β1水平的影响，结果显示：与正常组比较，IgAN患者治疗前血清TNF-α、IL-6和TGF-β1水平明显升高，差异均有统计学意义，提示IgAN患者存在炎性反应，疾病处于进展状态。经12周治疗后，两组患者Cys-C及24 h UTP自身前后对照均明显降低（P < 0.05），组间比较差异有统计学意义（P < 0.05），说明两种治疗方法均有效，但是B组优于A组。有研究表明[19]，双倍剂量活性维生素D治疗糖尿病肾病，其降低尿蛋白程度与单倍剂量相比，有明显的增加，与本研究结果类似。表4结果显示：两组患者血清TNF-α、IL-6、TGF-β1水平较治疗前均明显下降，差异有统计学意义（P

综上所述，阿法骨化醇对IgAN患者具有减轻炎症反应、减少蛋白尿及保护肾功能的作用，本研究初步结果显示阿法骨化醇0.5 μg/d剂量效果优于0.25 μg/d剂量。当然，由于本研究纳入的样本量偏少、时间较短，阿法骨化醇对IgAN肾脏保护作用与剂量依赖性是否相关有待进一步探讨。

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篇7

青春期的烦恼，真的可能说不清吧。经历过青春期的人应该都知道那应该是最难熬的一段日子了，所有人都不理解你来的莫名其妙地小情绪，你脸上时不时冒出来的几颗红痘痘，又红又肿，更是让一些外协的人对你的印象不好了，痘痘在青春期简直算是家长便饭了吧……

青春期还有很多很多说不尽的烦躁啊，虽然青春期的时候身高会涨得更快一些，让你看上去很高挑，可是正因为身体激素分泌的太多，我们会发现自己的眼睛看东西也越来越模糊了啊？是的，青春期的时候眼睛度数也越长越快，给戴眼镜的小伙伴们造成了无限的烦躁，青春期有一段日子就是叛逆期了，那段时间你会遭受所有人的不理解， 会遭受各种冷嘲热讽，嘲讽你的为人态度，嘲讽你的脾气暴躁，嘲讽你最近一段时期的挫败，几乎你身上发生的所有的事情都会因为你对别人的态度而遭受别人的非议。想做一个没有青春期和叛逆期的人啊，可有时候我又想通了。谁没有经历青春期的时候呢？谁没有一段青涩稚嫩的青春呢？经历过青春期之后的我们那才是真的成熟了，如果一个人从头到尾都是成熟的话，那怎么可能呢？我们都不是圣人，谁都有七情六欲谁都有曾经懵懂无知的时候啊，我们不可能每一刻都保持住自己的理智啊，谁没有青春时候冲动过呢？多少人渴望青春的季节，可现在的我们正在青春的好时期，却总是不懂得珍惜，人生就是这样，你拥有的时候不懂得珍惜，等你失去的时候也就是你追悔莫及的时候了。人生充满了太多的惋惜和后悔了，可我们唯一能做的就是让我们自己的遗憾和后悔……

青春期，多少人想要回头再重新经历，可现在的我们又想抛弃青春期这个磨人的小妖精，是苦是乐一切尽在不言中，有人惋惜，有人后悔，有人留恋……

篇8

09年第二天我摔跤。

09年第三天我被OBAS骂。

……

难道这就是青春？

第四天我又会干什么？

青春啊，为什么你总是让我的运气这么损？为什么你总是让我的心受伤？

孩子啊，每个人都是这样走过青春的。

徐老大说，你一年的第一天认真写作业，你一年就都会认真写作业。一开始我不屑一顾，觉得我的IQ不会低到被老师骗的程度吧？可是现在我却好怕，好怕我这一年都会摔跤，都会挨骂。

哎，青春啊青春，为什么你总是这么喜欢捉弄人呢？

妈妈说，我已经长大了，懂事了，需要抵抗的诱惑也越来越多了。我知道。妈妈不准我晚上太晚回来，不可以去偏僻的地方，不可以和无所事事的人玩……好多好多的规定啊，搞的我好烦好烦。没办法，妈妈也是为了我好嘛，所以只好尽量去做妈妈心中的好女儿了。

哎，青春啊青春，为什么你总是有这么多束缚呢？

爸爸说，人不可以活的太张扬。我深深的记住了这句话，因为我觉得这话对我一定会有用的。“虚荣心是女孩子的弱点，也是致命的弱点。”爸爸的话我都记得很清楚。我上了中学，感觉世界也变得复杂了很多。以前在小学的时候，不用担心会有谁欺负我，因为在小学大家都是规规矩矩的。可是到了中学，我走路都是低着头的，而且见到穿着古怪的学生就赶紧绕道而行。有时候我都觉得自己有点太过敏感了，因为我生性就怕流氓，看到了总是躲的远远的，好像他们是老虎狮子似的。爸爸的话让我明白了，做人不可以太张扬，要学会低调做人，那样才不会有危险。

篇9

回首过去，展望未来，可能有太多值得思考和留恋的了，现在，正值青春期的我们，十二三四的年龄，我们是怎样的呢？

正值青春期的我们，是叛逆？是反感？曾一而再，再而三的与父母顶撞，一切都按照自己的意愿为所欲为。不曾再像小时一样，为父母捏腰捶背，关心父母，而是对他们冷眼相对吗？在那个充满温馨的母亲节中，你做了什么？这可能就是：青春期。我们。

正值青春期的我们，开始爱美，耍酷，这都是可以了解的个性，因为毕竟我们还都是一个个正拥有青春面容的孩子，更何况：爱美之心，人皆有之啊！可当我们在摆弄着那些衣橱中的爱衣时，爸爸妈妈呢？他们在为我们奔波，为我们这些所有的一切而奋斗啊！我们曾有想过他们吗？我们从来都是那样刁蛮任性吗？从来就没有为他人着想过吗？我想：这错了！也许，这就是：青春期。我们

现在，我们每一个孩子，可以说都在正值青春期，而祖国需要的是一个个可以建设我们国家的栋梁之才啊！青春期的我们，还会是那样吗？叛逆？强词夺理？我想：青春期。我们应该是另一个新面貌，另一个世界的我们……所有青春期的朋友，也许，我们的青春期应该是另一个面貌，不是吗？

四小，五一五年级：唐一鸣

篇10

斑驳在童年的梦上，

那绮丽的南柯一梦；

那嫣然的芳菲梦想；

那缥缈的真挚诺言。

可爱的青春，

倒映在母亲的摇篮上，

那绵绵的天籁絮语；

那迷人的温馨童话；

那惬意的摇篮曲音符。

莫名的青春，

相逢在十五岁的路上，

那壮阔的蓝天苍穹；

那轻柔的雀跃步履；

那点滴的容貌蜕变。

深邃的青春，

相约在陌生的欲望上，

那澎湃的人生舞台；

那素颜的青春伤疤；

那破茧的酸楚悲痛。

朋友啊！

别做昏庸的无知者，

一起拥护青春，

喝彩青春，

珍惜青春，

把握青春。

朋友啊！

用一颗无暇的心，