咏雪联句范文

导语：如何才能写好一篇咏雪联句，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

《义务教育语文课程标准》指出：“语文课程应致力于学生语文素养的形成与发展”“引导学生丰富语言的积累，培养语感，发展思维，初步掌握学习语文的基本方法，养成良好的学习习惯，使他们具有适应实际需要的识字写字能力、阅读能力、写作能力、口语交际能力”。语文教学中，词汇的积累、把句子说完整的训练等等，对学生将来的语言表达具有无可替代的作用。因此，一方面，我们教学时不可忽视这些“细节”；另一方面，我们应针对小学各个阶段学生的身心发展特点、知识储备和能力基础，进行相应的字、词、句、段、篇的训练，从整个小学阶段的高度把握训练的尺度，使这一要求呈现螺旋上升的良性态势。唯有如此，才能让语文工具性的训练具备序列化的特点。

当前小学语文课堂中，针对“学用字词句”练习部分的教学存在以下问题。

【存在问题】

一、 编者意图的“跳跃性空白”

“以学生为本，走综合之路，贴近学生实际，创设生活化场景，提高学生学用能力”是“学用字词句”练习编写的中心原则和特点。但是一道道练习题之间的联系由于文本平面性所固有的束缚、版面的限制以及编者思维的跳跃性，呈现出一种文本所特有的跳跃性空白。由于能力限制，这种空白对于一些执教者来说恰恰是备课过程中认识水平难以逾越的一道鸿沟，客观上造成了教师因为对文本理解的不到位而割裂项目训练之间的内在联系的、单一化的、以完成练习题为目的的课堂教学。以至于整节课呈现出一种“做题—核对答案—再做题—再核对答案”的单向循环，课堂效率极低。

二、 教师课堂教学的理解性缺失

1.对学生现有知识经验、生活经验了解不深入，盲目设定教学目标

这种在日常阅读教学中时常出现的问题，在看似简单的综合练习课上仍旧出现，并且执教者往往不自知，甚至因为学生的“不配合”而郁闷不已。比如，第三册练习8“看图写话·踢足球”，学生对此题目感到困难绝不是因为他们不爱这项运动，也不是因为他们不乐于表达，而是在于他们缺乏对这项运动的深入了解（比如运动规则、专业术语之类）。

2.缺乏细致的教学环节的预设与教学生成的处理机智，课堂教学受众单一

貌似平实的练习，实则环环相扣，“牵扯”众多。如果教师课前缺乏细致全面的预设，或在课堂上缺乏教学生成的处理机智，一不小心，课堂教学就会陷入被动。最终的处理结果，要么是教者抓过一名优秀生迅速“解决问题”，使课堂成为“展示台”“一言堂”；要么是教者“虚晃一枪”，以回家作业的形式“下放”权力给家长，让该项练习的课堂教学流于形式。这最终将造成学生对该练习存在的漠视，极大地浪费了教材资源。

三、 学生认知局限造成的浅尝辄止的缺憾

充满儿童情趣的“学用字词句”练习闪烁着“人文的关爱”，形成了学生“上手快，丢得更快”的尴尬。学生在轻易地成功面前迷失了自我，最终对于“学用字词句”的学习往往只是蜻蜓点水般浅尝辄止，既不深入也不持久，更遑论融会贯通，进而养成习惯了。

【教学策略】

一、“补白”，勾连项目，构建综合学习板块

针对教材的“跳跃性空白”，一方面我们应该内延相关概念，以期勾连各练习项目，达到引导学生领会其内在联系的目的；另一方面我们还应该适度拓展，努力构建综合学习的板块，让每次“学用字词句”练习的效益最大化。

教师要仔细研读课标、教参，广泛查阅相关文献资料，深入了解编者意图，理解教材编纂的目的，适度“补白”，为教材的二度开发奠定坚实的理论基础和正确的教学理念。

比如，第二册练习8“看图涂色·填词·说话”，如果仅仅就题做题，那么势必割裂该项三个练习题之间的内在联系，达不到1+1>2的预期目标。事实上，现行绝大多数教案都拘泥于教材表面所呈现出来的对于涂色、写字的练习，使得课堂教学“一片繁荣”。随后又花费大量时间在学生说话训练上，却又因为学生们各自根据图意编故事而难以逐一辅导，造成课堂上只有个别优秀生展示，绝大多数学生无话可说的现象。实际上，这恰恰是对本题按照“字—词—句—段”逐层递进的训练意图视若无睹的体现。

新课标要求第一学段的学生“乐于运用阅读和生活中学到的词语”“能较完整地讲述小故事”。显而易见，对于刚刚开始学习规范表达的一年级学生，应该以汉字的使用、词语的积累、完整句式的训练为主，帮助他们初步树立讲述完整故事的意识，并且做到“见好就收”。因此，面对完整体现了“表象—字—词—句—段”的语言形成过程的本篇教材，以下的教学设计，尤其是第三、第四层次的“补白”对于低年段学生不可或缺。

第一层次：涂色。激发兴趣的同时，自然地引导出学生细致的前期观察，解决对事物的认知问题，为后面深入的语言表达做准备。

第二层次：写字。在学生学会运用文字表达确切意思的同时，继续练习端端正正地写字。

第三层次：扩词。让学生在“填上合适的词”的练习中，积累能够把句子说具体的短语，初步形成运用形容词能够使事物描述得更加具体、生动的意识，为进一步的学习奠定基础。

第四层次：照样子补充句子、组合句子。由词到句，渗透使用形容词以及把句子说完整的概念，培养学生的语感，并且解决后面讲故事的素材问题。

第五层次：编故事。由句到段到篇，让学生运用刚刚练习所得的词句连缀成话，并且要言之有物。

层层推进、环环相扣的教学设计，很好地解决了学生语言表达的材料问题，使本节课清晰地呈现出“积累—简单运用—综合性运用”的层次感、梯度感，这足以引起我们对教材“留白”处的深思，以及如何“补白”的探究热情。

二、对话，巧设训练坡度，教学目标多元化

备课期间，教师认真与文本、编者及学生对话尤为重要。只有心中有教材、有编者、有学生，课堂教学才能立体起来，呈现出科学训练所特有的坡度，也正因为有了这样的多边对话，学生的语言学习才会呈现出异彩纷呈的多元化局面。

1.充分了解学生现有的知识经验及生活经验，及时解决学生面临的“无米之炊”的尴尬。

仍以第三册练习8“看图写话·踢足球”为例，教师教学时立足于学生知识经验、生活经验的欠缺，以适量提供词语及句式的方式弥补了学生关于足球运动的“知识盲点”和学生较少接触正式的足球运动造成的“生活盲点”，以及由于该运动过快造成的学生难以观察、描摹细致的“习作盲点”。教师适度地指导学生观察、叙述的视角，有效地解决了学生描写场面时叙述混乱无序的毛病。

教师提供关于足球运动的词、句：

生龙活虎、汗流浃背

传、带、飞奔而来、抬腿、绷直脚背、飞起一脚、划过一道优美的弧线

伸出双手、向上跃起、奋不顾身

紧张、狂喜、欢呼雀跃、嘘声一片、一蹦三尺高

有的……有的……还有的……

一会儿……一会儿……

可以想见，在这样的精心设计中，虽然每个学生最终的说话内容不尽相同，但是他们的语言能力都得到了稳步提高，而且基础扎实，很难出现语言不通，或者无话可说的状况。这种多元化的学习目标，才能够真正达成编者编撰“学用字词句”练习的目的，达到优化课堂教学效率的目标。

2.教学预设力求全面，细化教学实施步骤，面向全体落实训练

苏教版教材中“学用字词句”的练习尤其彰显了立足于“生本”的特色。比如，第三册练习1-3的“音序查字法”，第四册练习1-4的“部首查字法”，以及第四册练习8、第五册练习6的“选择正确读音”，第五册练习2的“选择正确义项”，还有第六册练习4的“学习查词典”等。这一系列教给学生如何使用工具书的方法的练习，浅显、实用，让学生在最短的时间里学会了最基本的语文学习技能，并能为学生终身发展服务。

但是实际操作中，却不乏把该项练习以回家作业的形式“布置”给家长的“聪明”教师。于是，学生们形形的不正确、不科学的查阅工具书的方法层出不穷，最后以家长埋怨、教师暴怒、学生迷糊结束。若问教师：为什么会把“权力下放”？答曰：这又不难，但是在课堂上，却很难整齐划一地教学，不如“化整为零”，还节省时间呢。

这样的答案归根结底是教师的惰性在作怪。如果我们动动脑筋，那么就不难把使用工具书的方法划分为几个清晰的步骤，进而利用课堂时间，由扶到放，给予学生充分的实际操作时间，有效引导学生学习正确的使用方法和思维模式，为今后的学习奠定坚实的基础。

当然，仅仅如此是远远不够的，教师还要长期坚持，以布置预习作业的方式要求学生查字典、选读音、选义项，从而引导学生熟练掌握使用工具书的方法。长此以往，学生就能形成良好的使用工具书的习惯，从长远看也奠定了学生全面发展和终身发展的基础。

事实上，不仅是如何使用工具书，对于语法学习的引导更需要教师的“垂直”指导和坚持。比如，第四册练习7、第六册练习8的“学用标点符号”，第七册练习1的“避免重复”等练习，课堂上的朗读、讨论和交流，可以有效地让学生在探究的过程中明白，不同的标点符号表示不同的停顿与语气，前后句子的主语应该避免重复，正确使用代词可以有效精炼语句等。教师如果能够坚持在课堂教学中不着痕迹地通过有重点地推敲一些标点符号来指导朗读，指导学生联系上下文理解一些关键性的代词的含义，必能为学生以后正确使用标点符号、流畅行文奠定基础。相对的，蜻蜓点水式的读过，由优秀生代替全体学生完成教师眼中简单至极的练习的做法，是肯定不能达到这样的效果的。

三、“留白”，创设情境实践，培养良好的学习习惯

基于“语文课程的多重功能和奠基作用”，我们需要在课堂教学之外留下“空白”，创设情境给予学生大量的实践语言的机会，最终达到培养学生良好学习习惯的目的。

“学用字词句”练习中有一批旨在拓宽学生视野，引导学生了解自然、了解祖国、了解生活，从而达到学语文、用语文的目的的题目。对于这样一批训练题，我们不能急于在课堂上结束任务，应该适度“留白”，给学生留下实践和持续发展的空间。

比如，第三册练习6的“小小气象站”，在学完相应的符号含义之后，我们可以在黑板的一角长期开辟一个“小小气象员”专栏，按学号每天更新，引导学生观察生活，知道气象预报的含义及意义，懂得一些气象专业术语，对一些地理名词形成初步概念。

篇2

关键词：西班牙语句子连词;虚拟式;非虚拟式

中图分类号：G648 文献标识码：B文章编号：1672-1578（2014）13-0008-01

实例分析讲解

1.使用虚拟式的情况

此次研究使用虚拟式的情况，所涉及的连词主要包括：como; como si ; por si(acaso); a no ser que/ a menos que/ excepto que/ salvo que; en caso de que; a condición de que/ con la condición de que/ con tal de que; con que/ a poco que/ a nada que; a cambio de que; siempre que/ mientras

1.1 Como si (ni que) 译为：仿佛好像Como si 无论主句动词是什么时态，从句中表未完成时用虚拟式过去未完成时; 完成时用虚拟式过去完成时。请看以下虚拟式未完成时(Ega,Egb)和虚拟式完成时(Egc,Egd)的例子。

Eg a : La mujer trata a los jóvenes como si fuera sus propios hijos. 译为：这女人对待这些年轻人像对待自己孩子一样（此时的时值相当于陈述式现在时）

b. Cuando entraron, no nos saludaron , como si no nos conocieran. （此时的时值相当于陈述式过去未完成时）译为：当他们进来时，没有和我们打招呼，仿佛不认识我们。

Egc: Nos contó lo ocurrido en detalle como si lo hubiera visto con sus propios ojos. (时值相当于简单过去时) 译为：他给我们很细致的讲述了所发生的一些仿佛他亲眼看到了。

d: Por qué gritas tanto a los presentes como si ellos te hubieran ofendido.(时值相当于一般现在时) 译为：你为什么冲在场的人大声喊叫仿佛他们侮辱了你一样。

1.2 como /si，译为"如果"

Eg: Como/si llegues tarde, no te esperaré. 译为：如果你到晚了，我就不等你了。

1.3. Por si / por si acaso 译为：以防万一

Eg: Lleva el paraguas por si llueve .

Lleva el paraguas por si lloviera.

这两句都可译为：你带着伞以防万一下雨。但有所不同的是llover这个词的虚拟式时态。用Llueve虚拟式现在时说话人倾向于很有可能下雨，而lloviera虚拟式过去未完成时说话人则倾向于下雨的可能性很小。

1.4 A no ser que/ a menos que/ excepto que/ salvo que 译为：除非

Eg: Iremos de excursión a menos que haga mal tiempo.

我们将要去远足除非天气不好。

1.5 En caso de que 译为：倘若

Eg: Creo que llegaré pronto, pero en caso de que no sea así, no me esperes.

我认为我很快会到的，但是倘若不是这样，你不要等我。

1.6 Con que/ a poco que/ a nada que 译为：虽然，尽管

Eg: Con que estudies un poco, aprobarás.

虽然他学的不多，但是他能过。

1.7 A cambio de que 译为：换取

Eg: Te ayudaré con el trabajo a cambio de que me invites a cenar.

我帮你工作（以换取）你请我吃饭。

1.8 A condición de que/ con la condición de que/ con tal de que 译为：只要

Eg: Te dejaré conducir a condición de que te calles.

只要你闭上嘴我就让你开车。

1.9 Siempre que/ mientras 译为:只要

Eg: Siempre que tengas dinero, tendrás amigos.

只要你有钱，你就会有朋。主要注意的是，"siempre que" 除了当"只要"讲时用虚拟式，"Siempre que"还可译为"每次，" 无需使用虚拟式。如: Siempre que vengo a verte, estás ocupado. 每次我来看你，你都在忙。

可以看得出来，除了como si 与虚拟式连用作为固定搭配外，其余的连词与虚拟式连用所表达的含义都是未来时，还未发生的。

2.使用非虚拟式的情况

2.1 Con/ sólo con/ con sólo + infinitivo(动词原形) 译为：虽然

Eg: Con estudiar un poco, aprobarás el examen. 虽然学的不多，但你会通过考试的。

2.2 Que.....que (si......si no....)译为：如果......否则(如果不)......

Eg: Que hace bueno, salimos, que no, nos quedamos en casa. 如果天气不错，我们就出门，如果不好，就留在家里。这句话也可以用si......si no来说，si hace bueno,salimos, si no，nos quedamos en casa.

参考文献：

篇3

【关键词】拓展训练；体育教学；应用实践；效果

为了加快现代化教育的进程，体育教学也成为了现代化教育中的一个重点，它能够更好的培养人才，引导他们向全面发展的方向前进。高职体育教学的发展也跟着时代的进程不断地前进，为了让高职的学生能够更好的适应社会，让他们能够提高自身的实践能力，高职院校就利用有多种教学模式的体育教学，来激发学生自身能力。

现在有一些职业学院体育教学就已经走在了前面，引入了拓展训练。拓展训练这个项目不仅仅是一个体育的教学方式，它还能够调动学生的思考能力。拓展训练的设计都是具有趣味性的，通过大家的合作来完成，例如其中的穿越火线、三米跳等活动项目既有对自身的能力训练，还有对社交能力和合作信任等方面进行训练，通过拓展训练这种非常富有刺激性的教学方式，能够引起学生的强烈的欲望。不但能够激发学生对体育锻炼的兴趣，还能够让学生的体质真正得到改善。

一、拓展训练在高职体育教学中应用的必要性

（一）满足现代教育发展的需要

现代的教育方式和教育的要求已经变化，和传统的教育相比较，现代教育更注重以人为本，并且教育的发展方向更人性化和个性化，教育要求学生“德智体美劳”全面发展。在体育发展中拓展训练是一个非常有效的活动，它具有一定的挑战性，通过实际的模拟，让学生能够亲身经历，引导学生自己经历磨难并克服困难，培养自己的思维能力、激发自己的潜能，学会团结合作等。在拓展训练的活动中，教师的角色就是一个导演，学生就是演员。在这个过程中，就不再是传统体育教学的模式，老师在上面示范动作，学生就依照葫芦画瓢。拓展训练更加注重的是：学生自身的学习和体验，通过这样的教学方式才能够真正的激发学生的学习兴趣，才能够让他们表现出自身的特点。

（二）高职体育教学改革需要拓展训练的融入

在原来的体育教学的定义中，体育教学内容主要以体育基本的知识和身体训练为主，针对于心灵上的教育根本没有进行深入的教学，不能全面均衡的培养学生。随着素质教育不断地推行，现在对学生的培养要求变得越来越高，在这种前提下，现在高职院校中就对现在的体育教学改革进行不断的深入研究和拓展。拓展训练就能够很好的将原来传统的体育教学方式和有趣的体育活动链接起来，不但能够从身体训练上提高学生的素质，而且还能够从心里上提高学生的素质，因此拓展训练必须要融入高职体育教学的改革中。

二、拓展训练在高职体育教学中的具体应用方式

在高职体育教学素质拓展训练中，训练的不仅仅只是身体方面，更多的是心理素质方面的训练。在身体素质方面的训练主要就是训练学生的耐力、爆发力和协调能力等，在心理素质方面就不仅仅是涉及到个人，相应的还有自身的团队。

（一）身体素质训练

1.耐力训练

耐力训练是锻炼一个人意志最好的方法。体育教学中的拓展训练和传统的体育教学中的耐力训练相比更加的有趣。传统的耐力训练就是让学生进行长跑训练，通过这样的方式既可以提高学生的心肺功能还能够让腿部肌肉得到良好的训练，利用这样的方法来训练学生的耐力。在拓展训练中：耐力训练不只是结合了传统的耐力训练方式而且还结合了学生自身的特色，比如耐力训练可以通过接龙比赛的方式进行，将学生分成几个组，在组与组之间进行一个接力比赛，比赛的时长要有一个科学的度，PK的形式让耐力训练更加的有意思。在学生都能够适应以后，在进行别的方式，可以在长跑的过程中加入一些新的元素，比如中间添加手臂的动作。

2.协调性训练

协调性的训练是一个非常基础的训练，因为在各项体育运动中，都必须要具有一定的协调性。协调性的训练可以采用比较常用的一些方式，例如跳绳，可以花式跳绳、也可以进行多人跳，或者是通过穿越火线的方式来训练协调性。用这两种方式都能够让学生发挥充分的想象能力，而且还能够激发学生的兴趣，使课堂的学习气氛变得活跃；不但如此在穿越火线中还需要团队的配合，这样能够培养学生的团队配合能力。

（二）心里素质训练

在拓展训练中，针对于心里素质训练不仅仅是训练个人自身的心里素质，还可以训练团队的团结力和整个团队人员的心里素质。心里素质训练能够让个人提高自身的信心，能够从容的面对以前自己有可能不敢应对的挑战，从交流和信任、心里素质等多方面促进学生和团队的关系，激发团队的力量。心里素质训练在高职的体育教学中用得最多的是场地训练，其中在场地上进行的一个项目非常能够考验心里素质，那就是三米跳。要跳的同学要面背着要接住她的同学向后倒，这就在训练自身的心里素质和是否信任团队，团队的力量。

在高职体育拓展训练教学将心里素质训练融合到每一节课中，例如同舟共济的游戏就能很好的培养学生的协调性和团结协作能力，所有的同学都踩着连接的报纸，大家要齐心协力才能够真正的能够将“报纸”舟运行起来，还可以采用其他的活动培养学生的的能力。

三、总结

综上所述：本文通过举例说明了拓展训练不但非常具有挑战能力，而且还非常的有趣，在高职教学中应用后能够从耐力、协调能力、团结能力等方面提高学生的素质，能够促进学生的全面发展。

参考文献：

[1]徐博.拓展训练在高职高专体育教学中的合理应用[J].才智，2014，03：128

[2]刘晓明.拓展训练在高职体育教学中的作用分析[J].华章，2013，13：241

[3]张丛林.探析拓展训练在高职体育教学中的作用[J].学园，2013，19：65-66

篇4

【关键词】游戏训练;戏剧表演教学;戏剧表演能力

中图分类号：J812 文献标志码：A 文章编号：1007-0125（2015）01-0020-01

艺术来源于生活，戏剧由实际生活改编而成，展现着生活中的各种细节和故事。单一的“灌输式”教学模式无法使学生深刻理解戏剧中的内涵，同时也会影响学生的戏剧表演学习热情，而游戏教学法在戏剧表演教学中的应用，能够在充分激发学生戏剧表演学习兴趣的基础上，使学生能够在轻松、愉快的氛围中掌握戏剧表演的技巧。

一、游戏训练在戏剧表演教学中应用的意义

游戏训练在戏剧表演教学中的应用，能够有效激发学生的戏剧表演学习兴趣，提升学生的戏剧表演综合素质，对学生的戏剧表演学习具有积极的影响。

（一）激发学生的戏剧表演学习兴趣。游戏训练在戏剧表演教学中的应用，通过精彩而有趣的游戏设计，能够有效丰富戏剧表演教学的内容，激发学生的戏剧表演学习兴趣和学习热情，让学生积极、主动地参与到戏剧表演学习的过程当中，使戏剧表演教学产生“事半功倍”的教学效果。

（二）提升学生的戏剧表演综合素质。游戏训练在戏剧表演教学中的应用，能够使没有戏剧表演学习基础的学生也爱上戏剧表演学习，通过游戏快速突破戏剧表演的心理障碍。同时，游戏训练在戏剧表演教学中的应用，也能够使学生在潜移默化中，形成一定的观察能力和创造能力，提升学生的戏剧表演综合素质。

二、游戏训练在戏剧表演教学中应用的策略

游戏训练在戏剧表演教学中的应用，可以通过灵活设计游戏情境，激发学生学习兴趣，合理借助游戏活动，提升学生表演能力等方式来开展。

（一）灵活设计游戏情境，激发学生学习兴趣。灵活的游戏情境设计能够有效激发学生的戏剧表演学习热情，使学生快速进入到游戏情境当中，感受戏剧表演的丰富魅力和乐趣，对戏剧表演中的人物产生浓厚的情感[1]。

例如在指导学生学习“京剧”这一项内容时，教师可以首先借助多媒体等信息技术软件，为学生展示不同的脸谱，组织学生进行脸谱的抢答游戏活动。这种游戏活动能够快速调动学生的“京剧”艺术学习热情，营造良好的课堂教学氛围。同时，这种游戏教学方式也能够有效检验学生对“京剧”的掌握程度，为教学活动的深入开展奠定良好的基础，使教师能够根据学生的实际知识掌握能力，灵活开展“京剧”教学。此外，教师可以借助游戏训练方法，为学生播放一小段京剧视频，组织学生自由选择“净”、“旦”等角色进行表演。教师可以为学生提供化妆等服务，增加课堂教学的乐趣，展现学生的学习质量。

（二）合理借助游戏活动，提升学生表演能力。戏剧和游戏在英语中都可以用“play”来表达，足可以看出，戏剧和游戏具有一定的共通性[2]。很多学生由于没有一定的戏剧表演学习基础，所以对戏剧表演的认知程度较低。教师可以借助游戏训练方法，指导学生进行戏剧表演学习。

在戏剧表演教学的过程中，教师要注意把握游戏训练的“趣味性”原则，恰当选择游戏，将学生的注意力吸引到游戏活动当中，并在游戏参与的过程中，使学生获得更多的情感体验[3]。比如在指导学生对“小品表演”这一项内容学习完成之后，教师可以通过组织学生进行小组合作，自行设计和编创游戏的方式，将学生所学习的戏剧表演知识和实践活动相结合。在学生设计和表演完成之后，由教师和学生共同评选出最富有内涵和趣味的小品，以及小品表演中最有表现能力的学生，给予鼓励和嘉奖，增加游戏训练的趣味性和竞技性。这种方式能够使学生感受到小组合作的乐趣，在合作中感受自编自创小品的趣味，使学生获得更多的情感体验，提升学生的戏剧表演实践能力。

三、结语

游戏训练在戏剧表演教学中的应用，能够激发学生的戏剧表演学习兴趣和学习热情，并使学生积极、主动地参与到戏剧表演学习的过程当中，快速突破学生在戏剧表演中的心理障碍，并使学生形成一定的观察能力和创造能力，提升学生的戏剧表演综合素质，不断提升戏剧表演教学的价值和效果，为学生未来的学习和发展奠定良好的基础。

参考文献：

[1]王.浅析山艺戏剧影视学院表演教学中的教学特色――从戏曲、说唱元素到戏剧表演[J].戏剧丛刊，2013，（10）：123-124.

[2]王彦波.聚焦教学本源特色深化教学方法改革――关于戏剧表演课程教学方法改革的思考[J].艺术学院学报，2010，（07）：156-157.

[3]张腾.传统・发展・创新――反思教学工作评价背景下的军艺戏剧表演教学[J].艺术学院学报，2011，（10）：167-168.

篇5

[关键词] 阿司匹林；氯吡格雷；糖尿病合并脑梗塞

[中图分类号] R587.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-4062（2016）10（a）-0095-02

糖尿病是一种比较常见的代谢性疾病，往往容易出现诸多并发症，尤其是脑梗塞，不仅损害脑组织，在一定程度上还增加了病死率[1]。当前临床上在治疗糖尿病合并脑梗塞时，主要为对症治疗，包括稳定斑块、降糖、营养神经、降脂以及改善循环等，但是疗效较差。因此，该文探讨了糖尿病合并脑梗塞治疗中运用双联抗血小板聚集疗法的临床价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择该院2015年5月―2016年5月期间收治的82例糖尿病合并脑梗塞患者为研究对象，糖尿病病程2～15年，平均（8.2±4.5）年，年龄42～79岁，平均年龄为（62.2±10.9）岁，其中45例为男性、37例为女性，按照数字随机法分组，每组41例。入选标准：①有糖尿病病史；②符合脑梗塞诊断标准，且经颅内MRI或者CT检查确诊；③年龄48 h者；②合并肝肾功能不全、恶性肿瘤、昏迷者；③药物禁忌证者。两组的病程、性别等资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 对照组 对照组患者入院后，主要接受常规治疗，包括清除自由基、营养神经、改善脑循环、稳定斑块、降脂、降糖以及营养支持等，对于合并水肿的患者，再运用甘露醇治疗，并且在此基础上，再运用阿司匹林联合治疗，即口服阿司匹林肠溶片（国药准字H43021814，规格50 mg），100 mg/次，3次/d，15 d为1个疗程，连续治疗2个疗程，共30 d。

1.2.2 观察组 观察组在对照组治疗的基础上，再运用氯吡格雷联合治疗，即硫酸氢氯吡格雷片（注册证号H20100750，规格75 mg）口服，75 mg/次，1次/d，1个疗程为15 d，连续治疗30 d，共2个疗程。

1.3 观察指标

于治疗前后运用神经功能缺损评分（NIHSS）分别评价两组的神经功能缺损情况，得分越低，说明神经功能损伤越小。同时，观察两组的血小板参数，包括血小板比率（P-LCR）、血小板分布宽（PDW）、平均血小板体积（MPV）以及血小板（PLT）。

1.4 疗效判定标准

根据NIHSS评分情况将治疗效果分为四个等级：①基本痊愈。病残程度为0级，且NIHSS评分较治疗前下降90%～100%；②显效。病残程度为1～3级，且与治疗前相比，NIHSS评分下降46%～89%；③有效。NIHSS评分较治疗前下降18%～45%；④无效。与治疗前相比，NIHSS评分下降

1.5 统计方法

运用SPSS16.0统计软件分析该次研究数据，其中计数资料采用百分率（%）表示，运用χ2检验组间治疗有效率对比，采用均数±标准差（x±s）表示计量资料，运用t对组间NIHSS、PLT、MPV等比较，P

2 结果

2.1 两组NIHSS评分治疗前后比较

两组NIHSS评分治疗前对比差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，相比较对照组而言，观察组的NIHSS评分明显下降，组间比较差异有统计学意义（P

2.2 两组治疗效果对比

与对照组相比，观察组的治疗有效率较高，组间对比差异有统计学意义（P

2.3 两组血小板参数比较

两组的P-LCR、PDW、MPV以及PLT等血小板参数比较差异有统计学意义（P

3 讨论

通常情况下，糖尿病合并脑梗塞患者往往容易出现弥漫性血管病变，再加上高血糖容易增加乳酸生成，增高血黏度，使脑水肿加重，从而升高致死率和致残率，所以在控制血糖的基础上，抗血小板治疗极其重要[3]。阿司匹林是比较常见的一种抗血小板聚集药物，在糖尿病心脑血管疾病的治疗和预防中得到广泛运用，其作用机制主要为通过对TXA2生成进行抑制，对血小板生成环氧酶进行抑制，避免体内形成前列腺素，从而发挥抗血小板聚集功效[4]。氯吡格雷作为新型的一种抗血小板聚集药物，其作用机制包括几点：①通过选择性结合ADP受体，对血小板聚集进行抑制，从而避免形成血栓；②通过将ADP诱发的血小板活化扩增阻断，对其他激动剂诱发的血小板聚集进行抑制；③使血小板膜糖蛋白的表达降低，使血液流变功能得到改善，对使脑部缺氧、缺血状态得到改善[5]；④使动脉粥样硬化斑块面积缩小，使血清C反应蛋白浓度降低；⑤使动脉粥样硬化斑块的组成成分发生改变，增加斑块的稳定性[6]。同时，阿司匹林还可以对前列腺素进行抑制，减轻机体炎症反应，发挥抗炎效果，对组胺、缓激肽释放进行抑制，减轻机体疼痛感，并且与氯吡格雷联合运用，能够减轻神经功能缺损，改善临床症状，从而达到治疗目的[7]。

综上所述，在糖尿病合并脑梗塞的临床治疗中，运用双联抗血小板聚集疗法，不仅可以使治疗效果提高，还能对血小板聚集进行抑制，改善患者神经功能，具有一定的推广价值。

[参考文献]

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篇6

［关键词］ 聚凝胺试验； 微柱凝胶试验； 不规则抗体； 交叉配合试验

［中图分类号］ R446.6 ［文献标识码］ B ［文章编号］ 1671-7562（2011）01-0093-03

doi:10.3969/j.issn.1671-7562.2011.01.省略

传统的盐水介质法只能检出相对分子质量大的IgM类抗体，对相对分子质量小的不规则抗体（主要是IgG类抗体）往往造成漏检。手工聚凝胺试验对Kell系统外的大多数血型系统均适用，且操作简便、快速、经济［1］，作为临床输血配合试验正在被国内许多基层医院所采用。微柱凝胶试验灵敏度高，结果直观，能定量自动化操作，最大限度减少人为误差［2-4］。为确保临床输血安全，有效防止急、慢性溶血性输血反应的发生，我院根据《临床输血技术规范》，对有妊娠史、输血史和短期内需大量输血的患者进行不规则抗体筛选，再根据筛选结果选择微柱凝胶试验或聚凝胺试验进行交叉配血，收到良好效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源

受血者系本院2010年1月至2010年6月住院和门诊输血患者共1 367例，其中男743例，女624例，年龄1 d～89岁。供血者血液全部来自江苏省血液中心。

1.2 试剂

红细胞血型抗体筛选细胞（瑞士达亚美公司产品），聚凝胺试剂盒（台湾Baso公司产品），单克隆抗A、B标准血清（长春博德生物技术有限责任公司），抗-D试剂（上海血液生物医药有限责任公司），微柱凝胶卡及配套离心机、孵育箱（瑞士达亚美公司产品）。

1.3 方法

对有妊娠史、输血史和短期内需大量输血的患者均进行不规则抗体筛选，不规则抗体阴性患者采用聚凝胺试验进行交叉配血，阳性患者采用微柱凝胶试验进行交叉配血。

1.3.1 不规则抗体筛查 采用微柱凝胶试验进行不规则抗体筛查，即将3种浓度为0.8%的普细胞悬液各50 μl加入微柱凝胶卡反应室，再各加入血清 25 μl，37 ℃孵育15 min，离心10 min。观察凝集情况，红细胞全部沉积在反应室底部判为阴性，悬浮于凝胶表面或散在分布于凝胶中则为阳性。

1.3.2 交叉配合试验 （1） 微柱凝胶试验：首先在微柱凝胶卡上注明受血者、供血者姓名及主、次侧,然后制备受血者、供血者0.8%～1.0%红细胞悬液。主侧加入50 μl供者细胞及25 μl受者血清,次侧加入50 μl受者细胞及25 μl供者血清，37 ℃孵育15 min,离心10 min。结果判断同上。（2） 聚凝胺试验：首先在试管上注明受血者、供血者姓名及主、次侧,主侧加入受血者血清2滴及供血者3%红细胞悬液1滴，次侧加入供血者血清2滴及受血者3%红细胞悬液1滴，然后主、次侧管各加低离子溶液0.6 ml，混匀，室温静置1 min后加入聚凝胺溶液2滴，混匀，室温静置15 s，离心15 s，倾去上清液，轻轻摇动试管，若观察到红细胞凝集，则加入2滴复悬液，轻轻混匀。观察结果，红细胞仍有凝集者判为阳性，红细胞均匀悬浮于溶液中则判为阴性。

2 结 果

1 367例患者中不规则抗体阳性者12例，采用微柱凝胶试验、聚凝胺试验同时做交叉配血试验。聚凝胺法交叉配血试验不相合7例，相合5例，相合率为41.7%;微柱凝胶法交叉配血试验不相合9例，相合3例，相合率为25%。由此可见，微柱凝胶法交叉配血试验不相合率高于聚凝胺法，即微柱凝胶法敏感性高于聚凝胺法。因此，不规则抗体阳性患者采用微柱凝胶法进行交叉配血提高了输血安全性。12例阳性标本的具体交叉配血结果见表1。

表1 12例抗体筛选阳性标本两种配血方法进行交叉配血的结果

3 讨 论

不规则抗体是指抗A、抗B以外的血型抗体［5-6］，多为IgG类抗体,主要是经输血或妊娠等免疫刺激而产生，在盐水介质中IgG类抗体不能引起红细胞凝集，只能使相应红细胞致敏。IgG类不规则抗体可引起受血者溶血性输血反应和新生儿溶血病［7］，对患者健康造成严重危害，甚至威胁生命。本研究对1 367例患者进行了不规则抗体筛查，阳性12例，阳性患者采用聚凝胺法交叉配血，相合率为41.7%（5/12），微柱凝胶法交叉配血相合率25%（3/12），交叉配合试验聚凝胺法相合率高于微柱凝胶法。对于微柱凝胶法交叉配血不相合的样本，再与其它献血者进行交叉配血，直至找到相合的供者。

聚凝胺试验对结果的观察是从凝集到无凝集的过程，对试管振摇的力度和解聚的时间需要严格掌握，弱凝集的标本由于用力振摇或放置时间稍长凝集也会消失。因此，聚凝胺法虽能检出IgG类不完全抗体，但其本质仍是介质法，且操作难以标准化、影响因素多、缺乏完善的质控体系，易造成假阴性结果，敏感性低于微柱凝胶试验［8］。微柱凝胶试验在操作程序上更加标准化，加样量精确到微升，孵育时间、离心速度和时间都进行了标准化设置，克服了许多人为因素造成的误差，因而大大提高了实验结果的可重复性，且具有灵敏度高、特异性强等优点［9］。因此，使用微柱凝胶法交叉配血能够减少输血反应的发生，保证临床输血安全。

在实际工作中建议选用微柱凝胶试验进行受血者不规则抗体筛选，不规则抗体阴性患者采用聚凝胺法进行交叉配合试验，阳性患者采用微柱凝胶法进行交叉配合试验。根据患者情况选择不同方法交叉配血既能更加快速、高效地为临床提供安全的血液制品，减轻患者的经济负担，同时能够确保患者的输血安全。

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篇7

2.阳光透过淡薄的云层，照耀着白茫茫的大地，反射出银色的光芒，耀得人眼睛发花。

3.寒风起，思念意；立冬至，长相忆；遥相寄，祝福你；变天气，多注意；冷添衣，顾身体；愿朋友，甜如蜜，书美丽。立冬快乐。

4.这个立冬的季节，我的祝福浸润每一个时光，耕耘出一方思念的热土，我把牵挂的情怀播种，用关怀浇灌，盛开出两朵美丽的花。一朵霜花绽放好运的笑脸，一朵雪花迎来如意的脚步，此刻我把这两朵美丽的花送给你，愿好运随着你，如意伴着你。

5.白雪纷纷何所似?撒盐空中差可拟。——谢安《咏雪联句》

6.又到立冬，飘零的落叶旋转随风，冰雪将大地封冻，愿你依然快乐轻松，带着好运携手成功，在我的祝福声里感受温暖向前冲，把身体保重，圆幸福美梦。

7.立冬啦，祝你：好运像雪花纷纷而落，烦恼像落叶深深埋藏，幸福像冰块坚不可摧，压力如蛇娃已然冬眠，情谊如松柏长青不萎，日子像炭火暖暖融融！

8.天冷了，他不会给你拥抱，你只能自已添外套。

9.风沙吹过，冻雨飘落，冬天的旋律谁载了我的相思?看这一盏盏灯，我独自烤着火，洁白的落幕在发稍，是痴情卷生的愁素。

10.立冬到了，天气渐凉，加强锻炼，身体健康。今晚到明天：晴到少云，东北风到级，气温到度，湿度到%。汕头气象台日晚发。

11.品一杯香茶：思念朋友；听一首老歌：回忆朋友；发一条：联络朋友；道一声问候：最近好吗？传一份关怀：天冷保重；送一个祝福；立冬快乐！

12.今日立冬。一年又一年，一个节气又一节气。但其实又不是简单的重复，因为今时今日再不会有。唯有珍惜每个一天！

13.天冷了，我却冻的像个小丑，没人给暖手。

14.不要忘记冬天的理想，那是你在春天的愿望。

15.远处巍峨的群山，在阳光照映下，披上了金黄色的外衣，显得格外美丽。

16.墙角数枝梅，凌寒独自开。——王安石《梅花》

17.又是寒冷立冬时，冒着凛冽寒风吹，顶着鹅毛大雪飞，忍着超常低温冻，拎着冷静头脑奔，冲着时间比赛跑，赶着手机结冰前，接着友情信息念。朋友，又立冬了，穿厚点可别冻着！

18.眨眼立冬降临，忍不住发条提醒你：天冷多注意，添衣保暖防病袭；保持好心情，莫要烦躁坏情绪；有空时多联系，温馨带去温暖！祝身康体健，快乐如意，好运继续！

篇8

关键词 全血直接扩增; 线性指数聚合酶链式反应; 焦磷酸测序; 基因多态性; 酒精代谢

1 引 言

随着基因组学及后基因组学的发展，人们意识到基因多态性在阐明疾病的发生和发展、毒物的易感性与耐受性、疾病临床表现的多样性以及对药物治疗的反应上都起着重要作用，而单核苷酸多态性是目前最受关注的一类多态性。

焦磷酸测序技术是通过核苷酸和单链模板结合后释放焦磷酸引发酶级联反应，促使荧光素发光并进行检测的一种核酸测序技术[1～3]，用于基因多态性检测^[4]、微生物分型^[5]、基因甲基化检测^[6]等领域，尤其是在大规模DNA测序中^[7]的应用，使测序技术发生了革命性变化。但是目前焦测序的单链模板制备主要采用固相微球法^[8]，该方法操作步骤繁琐且效率较低; 使用生物素标记引物、链亲和素包被微球增加了检测的成本; 同时，单链制备过程中容易引起样品的交叉污染，以上不足极大地妨碍了焦测序技术的临床应用^[9]。

为了解决单链模板制备问题，可以采取不对称PCR直接产生单链产物^[10]，但常规不对称PCR方法扩增单链的效率低，无法得到广泛使用。线性指数PCR（Linear-after-the exponential-polymerase chain Rreaction， LATE-PCR）^[11]在不对称PCR的基础上，通过优化引物浓度和Tm值，可获得接近对称PCR的扩增效率，产生大量单链DNA产物，能够满足基于单链核酸序列的杂交、实时荧光PCR等反应的需要^[12]。但是LATE-PCR引物设计要求严格，且随着PCR的进行，非限制性引物与扩增产物产生竞争，若扩增片段较长则得到的单链DNA产率会降低。改进的LATE-PCR方法（Improved LATE-PCR， imLATE-PCR）^[13]弥补了LATE-PCR的不足，增加非限制性引物长度，减少限制性引物长度，使两者的Tm差值更大，引物的设计相较于LATE-PCR更为宽泛，产生扩增片段长度也更长，扩大了不对称PCR的实际使用范围。

为了提高基因检测速度，降低样本污染的可能性，本研究将全血直接扩增和imLATE-PCR技术相结合，建立了基于普通rTaq聚合酶和“高pH缓冲液（HpH Buffer）”的全血imLATE-PCR扩增方法。本方法具有以下优点：（1）检测速度快，操作简便。采用全血直接作为扩增单链DNA测序的模板，省去了DNA提取和单链模板制备两个繁琐的步骤，极大提高了检测速度，简化了操作过程，缩短了检测时间; （2）成本低，经济环保。无需制备DNA单链可以避免使用生物素修饰引物和磁性微球，无需DNA提取可以省去大量有机试剂和实验耗材，降低了成本; （3）污染少。避免了DNA提取和模板制备过程中反复打开管盖进行加液、移液等操作，减少了平行测多份样品时交叉污染的可能性; （4）灵敏度高。实验表明， 0.1 μL全血即采用指尖取血即可得到较好的测序结果，应用于临床检测方便、快速^[14]。采用本方法对酒精代谢相关基因ADH1B、ADH1C进行了基因多态性焦测序检测，用于临床快速评估人体酒精代谢能力，对于预防与饮酒行为相关的多种疾病，以及常规体检监测有重要意义。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

EDC-10基因扩增仪（东胜创新生物科技有限公司）; 小型焦测序仪（日本Hitachi公司）。

三磷酸腺苷硫酸化酶（ATP-sulfurylase）和Klenow聚合酶为实验室自表达; rTaq DNA聚合酶、500 bp DNA Ladder marker（日本Takara公司）; 聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、QuantiLum重组荧光素酶（美国Promega公司）; 腺苷三磷酸双磷酶-Ⅶ（Apyrase-Ⅶ）、腺苷-5′-磷酸硫酸（Adenosine 5′-phosphosulfate， APS）、牛血清蛋白（Bovine serum albumin， BSA）（美国Sigma公司）; Sepharose Beads（美国GE Healthcare公司）; α-硫化三磷酸腺苷 （dATPαS）、三磷酸脱氧胞苷酸（dCTP）、三磷酸脱氧鸟苷酸（dGTP）、三磷酸脱氧胸腺苷酸（dTTP）（美国Amersham Pharmacia公司）; 其它试剂均为分析纯; 实验用水均为灭菌二次蒸馏水。

所有引物由上海Invitrogen公司合成，具体引物名称及序列见表1。

2.2 实验方法

2.2.1 imLATE-PCR引物设计 本研究选取与酒精代谢相关的乙醇脱氢酶（ADH）基因中中国人较常见位点进行扩增。扩增引物使用Primer 5.0软件进行设计，引物设计原则：TmE-TmL≥5 ℃; TmA-TmE≤13 ℃^[13]（TmE为过量引物Tm值，TmL为限制性引物Tm值，TmA为扩增产物Tm值）。Tm值计算采用OligoAnalyzer 3.1软件（地址：http：///analyzer/Applications/OligoAnalyzer/）。本实验中所用到的PCR扩增引物见表1。

2.2.2 全血imLATE-PCR扩增 取抗凝外周全血样本1μL（本研究中血样均来源于总院受试者，受试者已签署知情同意书并获得伦理委员会同意。除特别说明，抗凝血所用抗凝剂均为EDTA二钾。）直接用于ADH1B、ADH1C位点的目的片段扩增。PCR 反应体系包括用于全血PCR 反应的HpH Buffer（100 mmol/L Tris-HCl，50 mmol/L KCl，pH 9.3～9.5）5.35 μL，2 mmol/L Mg2+，dNTPs 100 μmol/L，过量引物（PE）1 μmol/L，限制性引物（PL）0.1 μmol/L，Taq 酶2.5 U，适当PCR添加剂（10% BSA和5% 吐温20），全血模板1 μL，加水补充至50 μL。ADH1B位点PCR反应条件：3个循环（94 ℃， 3 min; 55 ℃， 3 min）; 65个循环（90 ℃， 10 s; 53 ℃， 20 s; 72 ℃， 20 s）。ADH1C位点PCR反应条件： 94 ℃预变性3 min; 65个循环（90 ℃，10 s; 55 ℃， 20 s; 72 ℃， 20 s）。

2.2.3 单链扩增产物处理以及焦磷酸测序 imLATE-PCR扩增产物除了大量单链DNA可用做测序模板，还含有过量的dNTPs、延伸产生的PPi、部分未完全延伸的产物等，这些成分都会对后续的焦测序反应造成影响。因此，扩增产物需经过处理后方可进行焦测序反应。本研究使用自制的焦测序反应液^[15]对产物进行处理，主要成分为0.1 mol/L Tris-HAc（pH 7.7），2 mmol/L EDTA，10 mmol/L Mg（Ac）2， 0.1% BSA，1 mmol/L DTT，80 μmol/L APS，0.4 mmol/L D-虫萤光素，60 U/mL ATP-sulfurylase，1.6 U/mL Apyrase-Ⅶ，18 U/mL Klenow聚合酶，适量荧光素酶。反应液中的APS可以和延伸产生的PPi作用生成ATP，过量的dNTPs和少量的ATP可以在Aprase-Ⅶ作用下发生降解，从而减少对焦测序反应的影响^[10]。具体步骤为：取3 μL imLATE-PCR扩增产物，加入自制焦测序反应液，置于小型焦磷酸测序仪中，室温反应5 min; 加入10 pmol测序引物，常温下退火5 min，再循环加入dATPαS， dCTP， dTTP 和dGTP 进行焦测序反应。测序引物如下： ADH1B： 5′-ATGGTGGCTGTAGGAATCTGTC-3′， ADH1C： 5′-TTTCGTTTGAAGTCATCGGTC-3′。

3 结果与讨论

3.1 PCR扩增体系对全血imLATE-PCR的影响

以全血代替DNA作为模板，其中的免疫球蛋白G、血红蛋白和乳铁蛋白等成分会抑制PCR反应，且常用血液抗凝剂EDTA或肝素也会抑制PCR反应。所以，采用全血代替DNA作为PCR反应模板时，需要调整PCR反应体系。本实验室之前报道的“HpH Buffer”体系可以很大程度上减少全血成分对PCR扩增的影响，主要由于高pH值的缓冲体系可以使蛋白质表面带负电，抑制其与带负电的基因组DNA相互作用，从而降低对PCR反应的抑制作用^[16]。

3.2 全血imLATE-PCR扩增血液模板量考察

考察了上述方法在进行全血imLATE-PCR扩增时，0.05， 0.10， 0.50， 1.00和2.00 μL 5个模板加入量对扩增和测序结果的影响。结果表明，50 μL扩增体系中加入0.10～2.00 μL的EDTA抗凝全血作为模板进行扩增，扩增产物经处理后进行焦测序，均可得到良好的焦测序结果（图2），扩增产物的检测平均单碱基信号值分别为0.629、0.794、0.879、0.883，均可进行准确的SNP分型。由此证明，本方法仅需0.10 μL全血样本就可对乙醇脱氢酶的两个SNP位点进行焦测序检测并分型，大大减少了对病人的创伤。

3.3 乙醇脱氢酶ADH1B、ADH1C基因SNP位点检测

对收集到的24例临床血样的乙醇脱氢酶基因ADH1B、ADH1C的多态性检测结果（图3）显示，本方法测序结果较好，测序信号强度高，可以进行准确的SNP分型。24例样本的基因型测序结果如表2所示，其中ADH1C位点AA纯合型本实验中未检测到，而NCBI数据库也显示了亚洲人群中AA型基因频率接近于0。为了验证测序结果的准确性，从24例样本中抽取10例进行Sanger测序（图4），结果与本实验的测序结果完全一致，证明了本方法的准确性。ADH1B位点的AA型和ADH1C位点的GG型的患者酒精代谢能力较强，可加快乙醇向乙醛转化的速度，易产生面红、恶心等反应，使饮酒者对乙醇耐受性降低，一定程度上可以避免产生酗酒或酒精依赖^[17]; ADH1B位点的GG纯合型和ADH1C位点的

AA型患者的乙醇代谢能力较弱，易产生酒精依赖和酒精滥用，临床应建议减少酒精的摄入^[18]。

考察了临床上常用的3种血液抗凝剂EDTA二钾、柠檬酸钠和肝素钠对全血imLATE-PCR扩增的影响。结果表明，3种抗凝剂对扩增无明显影响，均能够得到准确的测序结果。

3.4 本方法与传统焦测序检测方法的比较

表3是本实验方法和传统焦磷酸测序检测方法^[20，21]在耗时和成本方面的比较。本方法以全血作为模板省去了DNA提取过程，从收到样本到得到PCR扩增产物可在2 h内完成，同时降低了样品间交叉污染的可能性; 另外，高灵敏的焦磷酸测序在保证检测准确性的前提下仅使用0.10 μL全血或3.00 μL PCR产物，与传统焦磷酸测序方法相比，成本下降了约40%。

a基因组DNA提取使用QIAamp DNA 血液提取试剂盒。b传统PCR方法和全血imLATE-PCR方法均使用rTaq DNA 聚合酶。c传统基于PCR的焦测序方法单链DNA制备使用链亲和素琼脂糖球珠。d传统基于PCR的焦测序方法采用PyroMark Gold Q24 焦测序试剂。

a QIAamp DNA Blood Mini Kit （QIAGEN） was used for gDNA extraction. b rTaq DNA polymerase （TaKaRa） was used for conventional PCR and whole blood-imLATE-PCR. c Streptavidin Sepharose beads （GE Healthcare） were used for ssDNA preparation in conventional PCR-based pyrosequencing. d PyroMark Gold Q24 Reagents （QIAGEN） were used for conventional PCR-based pyrosequencing.

4 结 论

乙醇脱氢酶基因多态性导致乙醇在不同个体中的代谢速率不同。研究表明，急性酒精中毒、酒精性肝病、胰腺炎、心脑血管疾病、肝癌以及结直肠癌等一些癌症都与乙醇脱氢酶基因多态性有关^[17，18]。乙醇对许多肿瘤是一种促癌剂，已有报道表明乙醇代谢酶基因多态性与肿瘤发生密切相关^[19]。所以检测酒精代谢相关基因的多态性，评估人体酒精代谢能力，可用于预防与饮酒相关疾病，对人类健康有着非常重要的意义。

本研究改进了LATE-PCR方法，采用“HpH Buffer”以全血为模板直接扩增，建立了全血imLATE-PCR方法，该方法具有检测速度快、灵敏度高、污染少、成本较低等优点，为临床上检测基因多态性和疾病早期预警提供了新手段。

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XIANG Zheng1， LIU Yun-Long2， XING Xiao-Qing1， CHU Ya-Nan2， SONG Qin-Xin*1，2， ZHOU Guo-Hua1，2

1（Key Laboratory of Drug Quality Control and Pharmacovigilance of Ministry of Education，

China Pharmaceutical University， Nanjing 210009， China）

2（Department of Pharmacology， Jinling Hospital， Nanjing University School of Medicine， Nanjing 210002， China）

Abstract Pyrosequencing is one of the important genetic polymorphism detection methods currently， but the complicated pretreatment procedure limits its application in clinical test. To simplify the whole process of pyrosequencing， on the basis of the linear-after-the-exponential-polymerase chain reaction （LATE-PCR）， we improved the primer design method of LATE-PCR， increased the length and the concentration of the excess primer， applied direct amplification technology with whole blood， and established a whole blood-imLATE-PCR method based on common rTaq polymerase and “HpH Buffer” （High pH buffer）. The amplification system was optimized， and the influences of blood anticoagulant and the amount of whole blood template were investigated. The single stranded template for the pyrosequencing was obtained by PCR amplification using a single tube in one-step process， and the alcohol dehydrogenase gene polymorphisms of 24 clinical blood samples were then detected successfully. The results could be used to guide clinical individualized medication. The genotypes of ADH1B locus of 24 samples were 6 cases of AA homozygote， 14 cases of AG heterozygote， and 4 cases of GG homozygote. The genotypes of ADH1C were 20 cases of GG homozygote， 4 cases of AG heterozygote， and no cases of AA homozygote.

篇9

我期盼这场雪已经好久，等待着它来滋润万物。说实话，我对雪也是挑剔的，《咏雪联句》中说：“撒盐空中差可拟，未若柳絮因风起”。我想这可能是江南的雪，显得细腻。南国的雪爱跟雨水凑热闹，落地即化，不能在人间长驻。“燕山雪花大如席”或许描写的有些夸张，却是北方那大学飞纷的真实写照。

这场雪来的干净利落，毫无保留的把它积攒的能量释放出来。这场雪是地地道道的北方雪。如北国风光，千里冰封，万里雪飘，带有一种豪放粗旷。雪来之时，天地如同一张白纸，不知怎地，也许太阳不想参与这白色的盛宴，直到上午10点多，太阳都没有出现，被封杀在白茫茫里。

曾听一些长辈说过，冬至后，一九开始，谚语说“一九二九不出手，三九四九冰上走……”。虽然此时已不是一九二九，却同样寒冷。可是在大雪飞纷中，我并没有感觉到无法出手的冷意，取而代之的是兴奋。在雪中，我们奔跑与欢笑，在我们的欢声笑语中，雪渐渐大了，雪花直直地快速坠落，铺在地上，越来越密，越来越厚，像织成了一张大网。回到教室，平时最爱听的生物课也无心眷恋，只是一直久久地注视窗外，希望不要停，越来越大，我不知道为什么这样想，或许是想让洁白的雪来丰富我的生活。

放学后，走在回家的路上，在微弱的灯光下，雪层反射出刺眼的白光，一闪一闪，接连不停，这时，我才能真正了解雪的晶莹剔透，看着透明的雪，我甚至不忍去踩它们。

不管如何如何，我总觉得这次雪与其它时候不一样，我也无法将全部都注入到这张纸上。