幸福的流泪范文

导语：如何才能写好一篇幸福的流泪，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

也许眼泪有时苦，有时甜。幸福会流泪；难过会流泪；高兴会流泪；激动会流泪。无论何事何时，眼泪都是我们最亲密的陪伴者。

我伪装着，尽量不露痕迹，努力让自己不轻易掉下眼泪，但它似乎和我作对，一次又一次不争气的落下来。落在脸上，凉在心中。

我一次又一次的警告自己：嘴角向上45度——微笑。但一次又一次的失败，直到有一天我才真正的明白，其实哭比笑更能让自己放松，有时哭出来比笑更好。“阳光总在风雨后”，“风雨”都来了，那“阳光”还会远吗？

眼泪真的很奇怪，它会使人们拥有多种复杂的情绪，让人们难以揣摩与分辨。幸福？痛苦？其实，眼泪也是一种幸福！

哭泣不一定就是软弱、无能、可怜的表现；微笑也不一定就是快乐、开心、幸福的标志。自己的心境只有自己最清楚、最明白，别人再怎样说，也不会代替自己。所以，不要掩饰我们的情绪，想哭就哭；想笑就笑；难受就难受；开心就开心。流自己的泪，让别人说去吧！

流泪是一种幸福，因为它宣泄了心中的不快，让心灵重获温暖！学会流泪。！对自己，何必太过苛刻。让自己或微笑，或流泪。随心而动，那样，会是我们更加的成熟，快乐。

泪水流在属于自己的天空中，快乐把握在自己的手中！

雨过天晴，天会更蓝；泪水过后，心情会更舒畅。泪如雨丝，让它滋养这颗易感的心吧！

幸福的时刻，我泪流满面。

篇2

关键词：正反馈；负反馈；串联反馈；并联反馈；电压反馈；电流反馈

中图分类号：TN721.2 文献标识码：A

交流负反馈四种基本类型的判断，具有很强的实用价值。任何一个实用电子电路，都要引入各种反馈。掌握反馈的基本概念和判断方法是研究实用电路的基础。交流负反馈四种基本类型的判断，历来是教学中的重点，也是难点。笔者根据教材相关内容，结合自己教学实践中的体会，推出了一套简单易行的判断方法，抛砖引玉，供同行讨论，请大家批评指正。

本文按什么是反馈，反馈极性的判断，交流负反馈的四种基本类型，输入端的连接方式，输出端的取样方式的顺序进行讨论，最后举出了较多的分析实例。

1 什么是反馈

凡是通过输出对输入的影响，从而改善系统的运行状况及控制效果的，都可称之为反馈。反馈的概念广泛地用于各个领域。在电子电路中，将输出量（输出电压或输出电流）的一部分或全部通过一定的电路形式（与输入信号相串联或并联）作用到输入回路，用来影响其输入量（放大电路的输入电压或输入电流）的措施称为反馈。

假设：输入量为xi（含ui、ii）

净输入量为xd（含分立元件ube、ib、ugs；集成运放uD、iD）

反馈量为xf（含uf、if）

输出量为xo（含uo、io）

使放大电路净输入量增大的反馈称为正反馈，xd＝xi+xf（xd>xi）；使放大电路净输入量减小的反馈称为负反馈，xd＝xi－xf（xd

注意：在分析反馈时，可以认为反馈量是仅仅决定于输出量的物理量，而与输入量无关。在分析反馈极性时，可将输出量视为作用于反馈网络的独立源。

正负反馈各有各的用途。例如，在振荡器中，利用正反馈实现信号的产生。在放大器中，利用直流负反馈稳定电路的静态工作点；利用交流负反馈使电路具有自动调节作用，从而稳定放大倍数，改变输入、输出电阻，展宽频带，减小非线性失真等，这些交流参数的改变都是以减小放大器的增益为代价换来的。

2 反馈极性的判断

2.1 瞬时极性法

瞬时极性法是判断电路中反馈极性的基本方法。

（1）设信号工作频率为中频，电路中射极旁路电容、隔直电容可视为短路，管子的极间电容视为开路。

（2）设输入信号在某一时刻对地的瞬时极性为正（+）。

以此为依据，逐级判断电路中各相关点电流的流向和电位的极性，从而得到输出信号的极性。对于共射（共源）电路，输出、输入相位相反，若b（g）极设为正（+），则c（d）极为负（-）；对于共集（共漏）电路，输出、输入相位相同，若b（g）极设为正（+），则e（s）极为正（+）；对于共基（共栅）电路，输出、输入相位相同，若e（s）极设为正（+），则c（d）极为正（+）。

（3）再根据输出信号的极性判断出反馈信号的极性；反馈信号为表示瞬时增量，反馈信号为表示瞬时减量。

若反馈信号的极性使基本放大电路的净输入信号（ube、ib、ugs、uD、iD）减小，则说明引入了负反馈。

反之，若反馈信号的极性使基本放大电路的净输入信号增大，则说明引入了正反馈。

2.2 负反馈的判断

设输入信号在某一时刻对地的瞬时极性（以下简称为极性）为正（+）。用瞬时极性法先找出输出信号的极性，再找出反馈信号的极性。

凡是反馈信号的极性与输入信号相反，使净输入信号（ube、ib、ugs、uD、iD）减少的反馈，称为负反馈。

2.3 负反馈的简捷判断方法

2.3.1分立元件电路的负反馈

本文以晶体管电路为例予以说明（场效应管电路与之相似）。

当净输入信号ube（或ib）减少，则为负反馈。其表达式为：

ube＝ub-ue＝ui-uf（ube

凡反馈信号使ub端为-（ub减少）的为负反馈。

凡反馈信号使ue端为+（ue增加）的为负反馈。

或ib＝ii－if（ib

凡反馈信号使ib减少的为负反馈。

（注：对于共射极电路的瞬时交流极性为B、E相同，C相反。）

2.3.2集成运放电路的负反馈

当净输入信号uD（或iD）减少，则为负反馈。

（1）同相输入

输入信号ui加到同相输入端，其电位为up（即u+）；

反馈信号uf加到反相输入端，其电位为uN（即u-）。

当：uD＝up-uN＝ui-uf（uD

或：同相输入，凡使up端为-（up减小）为负反馈；同相输入，凡使uN端为+（uN增大）为负反馈。

（2）反相输入

输入信号ui加到反相输入端，其电位为uN（即u-）；

反馈信号uf加到反相输入端，其电位为uN（即u-）。

当uD＝uN-up＝ui-uf（uD

或：反相输入，凡使uN端为-（uN减小）为负反馈。

反相输入，凡使up端为+（up增大）为负反馈。

注意：对于单级集成运放电路，如果反馈信号（xf）与反相输入端（uN）相连，必为负反馈；如果反馈信号（xf）与同相输入端（up）相连，必为正反馈。

3 交流负反馈的四种基本类型

交流负反馈按其输入端的连接方式、输出端的取样方式的排列顺序可分为四种基本类型，即：

输出端的取样方式 输入端的连接方式 反馈的极性

反馈信号正比于反馈信号与输入信号的连接

输出电压（流）为串（并）联为正（负）反馈

电压串联负反馈

电流 串联负反馈

电压 并联负反馈

电流 并联负反馈

应当指出，出现以上四种不同的负反馈连接方式，主要并不是数学上的排列组合的可能性，而是由于实际的需要。所以我们必须把不同的反馈连接方式与引进反馈的目的性紧密联系起来综合考虑。例如，为了增大输入阻抗，可采用串联负反馈；为了减小输入阻抗，可采用并联负反馈；为了增大输出阻抗，可采用电流负反馈；为了减小输出阻抗，可采用电压负反馈；电压反馈稳定了输出电压；电流反馈稳定了输出电流。又如，为了将电流信号转换成电压信号，应引入电压并联负反馈；为了将电压信号转换成电流信号，应引入电流串联负反馈；电压串联负反馈对应于电压放大器；电流并联负反馈对应于电流放大器；电压并联负反馈对应于互阻放大器；电流串联负反馈对应于互导放大器，等等。

4 串联负反馈与并联负反馈

按反馈信号在输入端与输入信号比较形式的不同，可分为串联反馈与并联反馈两类。

串联反馈：反馈信号xf与输入信号xi在输入回路以电压串联的方式相加减（正反馈取加号，负反馈取减号）。

并联反馈：反馈信号xf与输入信号xi在输入回路以电流并联的方式相加减（正反馈取加号，负反馈取减号）。

其中xf或xi既可是电压信号，也可是电流信号。下面重点阐述串联负反馈和并联负反馈。

4.1 串联负反馈

反馈信号xf与输入信号xi在输入回路以电压串联的方式相减。例如：

分立元件电路：ube＝ui－uf＝ub－ue（ube

集成运放电路：uD＝ui－uf＝up-uN（uD

uD＝ui－uf＝uN-up（uD

4.2 并联负反馈

反馈信号xf与输入信号xi在输入回路以电流并联的方式相减。例如：

分立元件电路：ib＝ii－if（ib

集成运放电路：iD＝ii－if（iD

4.3 判断反馈的极性和判断输入端的串并联方式也可以同时进行

在判断出反馈极性为负反馈的同时，如果输入信号、净输入信号与反馈信号接在同一个点上，只能用电流的加减来表示，因而一定是并联反馈；如果输入信号、净输入信号与反馈信号不接在同一个点上，只能用电压的加减来表示，因而一定是串联反馈。

4.4 串并联反馈的简捷判断方法

由于ube（uD）与ui极性相同，ib（iD）与ii极性相同，对于：

（1）分立元件共射电路

当反馈信号xf为且接到基极B时，必为并联负反馈（反馈量以电流的形式影响输入量）。

当反馈信号xf为且接到射极E时，必为串联负反馈（反馈量以电压的形式影响输入量）。

（2）单级集成运放电路

当反馈信号（xf）端与反向输入端（uN）之间有元件相连时，必为负反馈。

如为同相输入（输入信号xi接到同向输入端up），必为串联负反馈。

如为反相输入（输入信号xi接到反向输入端uN），必为并联负反馈。

5 电压反馈与电流反馈

按反馈网络在放大电路输出端取样信号的不同，可分为电压反馈与电流反馈两类。

5.1 电压反馈

反馈信号xf取自输出电压，xf∝uo

凡从信号输出端uo（即负载端）取出反馈信号xf，必为电压反馈。

或从正比于uo的非接地端取出xf，必为电压反馈。

或：凡反馈网络与负载（或负载的一部分）是并联连接的，必为电压反馈。

5.2 电流反馈

反馈信号xf取自输出电流，xf∝io

凡正比于输出电流io（或ie、ic）的反馈，必为电流反馈。

凡反馈网络与负载不是并联连接的，必为电流反馈。

5.3 电压电流反馈的简捷判断方法

只要令输出电压uo为零，若反馈量xf也随之为零，则说明电路中引入了电压反馈；若反馈量依然存在，则说明电路中引入了电流反馈。

对于共射极电路，凡从集电极C取出反馈信号的，必为电压反馈；凡从发射极E取出反馈信号的，必为电流反馈。

凡不是电压反馈的，必为电流反馈。

6 负反馈判断举例

6.1 图1电压串联负反馈

反馈信号uF的极性为接到T1的E脚（uF增加，即ue1增加）。

ube1＝ub1－ue1＝ui-uF（ube1

为串联负反馈。

篇3

[方法] 收集、分析本地区参加全球沙门菌监测(GSS)腹泻病例中分离的山夫登堡沙门菌生化、编码SPI-1毒力岛基因(hilA、invA)和耐药特征;应用Riboprinter(r)(RP)DNA指纹图谱系统比较表型典型与不典型菌株的核糖体分型;通过Pluse Net China数据库中同型菌株的脉冲凝胶电泳(PFGE)图谱聚类比较分子型谱。

[结果] 2006年长宁区GSS监测病例分离出19株山夫登堡沙门菌,其中10株属于硫化氢阴性和SPI-1毒力岛缺失的表型变异菌株。RP分型证实发生变异的山夫登堡沙门菌与典型菌株间分属2个不同的克隆。Pluse Net China数据库将包括长宁区19株山夫登堡沙门菌在内的36株山夫登堡腹泻株共分18种PFGE带型。长宁区的表型变异株优势型分属4型(2株)和6型(6株),典型菌株的优势型分属11型(1株)、17型(4株)和23型(2株)。聚类分析显示,表型变异株的克隆在遗传相似度上高于典型株。

[结论] 分子溯源证实,SPI-1毒力岛缺失的山夫登堡沙门菌变异菌株与典型菌株同样具有引发局部爆发的致病性。2006年长宁区分离的硫化氢阴性山夫登堡沙门菌变种腹泻株与2002年深圳市的1例食物中毒案例分离的2株SPI-1毒力岛缺失株存在同源性。

关键词: 山夫登堡沙门菌; 变种;Riboprinter(r)(RP); 脉冲凝胶电泳; 毒力岛; 溯源

中图分类号:R 117 文献标志码: A

Molecular tracing ofinfection source of rare H2S negative strains ofSalmonella Senftenberg

HUANG Zheng1, XU Xue-bin2, JIN Hui-min2, Chen Min2,RAN Lu3, KAN Biao3(1.Shangahi Municipal Changning District Center for Hygeian Analysis,Shanghai 200051,China;2. Shangahi Municipal Center of disease Control and Prevention,Shanghai 200336,China;3.China Center of Disease Control and Prevention,Beijing 100050,China)

Abstract: [Objective] To investigate the genetic clone characteristics of rare H2S negative strains of Salmonella enterica subsp. enterica serovar Senftenberg(S. Senftenberg) .

[Methods] A retrospective analysis was performed to explore the characteristics of biochemical test, encoding Salmonella pathogenecity island gene 1(SPI-1) and antibiotic resistance of S. Senftenberg from diarrhea patients in Shanghai Global Salm-Surv(GSS). Ribotyping comparisons were made between typical and atypical strains of S. Senftenberg using Riboprinter (RP) DNA finger printing technique. Using cluster analysis we compared the molecular subtyping of these strains with the same serotyping strains in China PulseNet dynamic database by PFGE.

[Results] Of 19 strains of S. Senftenberg isolated from Changningdistrict GSS-Surv hospital, there were 10 phenotype variant strains found to be H2S negative and lacking SPI-1.There were two different clones betweenvariant strains and typical strains, which was proved by RP Ribotyping. Thirty six strains of S. Senftenberg including 19 strains from Changningdistrict were divided into 18 PFGE typing-pattens by China PulseNet database. The PFGE subtype 4(2 strains) and 6(6 strains) were the predominant epidemic strains of variant strains ,the subtype 11(1 strains) ,17(4 strains)and 23(2 strains) were the predominant epidemic strains of typical strains in Changningdistrict. Cluster analysis showed the clone of variant strains was higher than that of the typical strains in genetic similarity.

[Conclusion] The molecular tracing of source confirms that variant strains of S. Senftenberg lacking SPI-1 can induce sporadic outbreak as the typical strains. There washomologous nature between H2S negative variant strains of S. Senftenbergisolated from diarrhea patients in 2006 in Changningdistrict and two strains of S. Senftenberg lacking SPI-1from a food-borne disease outbreak in 2002 in Shenzhen.

Key words: S. Senftenberg; Variant; Riboprinter(RP); PFGE; Salmonella pathogenecity island; Tracing source

长宁区疾病预防控制中心(CDC)作为上海第一批4个监测点之一,于2006年加入非伤寒沙门菌全球监测网络(GSS)。通过全市沙门菌病例监测发现,山夫登堡沙门菌血清型在2006年7―9月呈现一过性爆发的流行病学特征[1]。2006年从各哨点医院分离到19株山夫登堡沙门菌,其中10株为硫化氢阴性株。通过表型特征分析,利用2006―2007年全市收集GSS山夫登堡沙门菌的RP核糖体分型和脉冲凝胶电泳(PFGE)分子图谱资源,依靠国家疾病预防控制中心肠道病重点实验室的Pluse Net China数据库资源追溯此变异菌株的遗传学特征,为本地区非伤寒沙门菌监测和防制提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验菌株 2006年从长宁区GSS腹泻病例中分离19株山夫登堡沙门菌;2006―2007年上海市4个GSS监测点分离的山夫登堡沙门菌共计39株。大肠埃希菌ATCC 25922为药敏试验质控菌株;布伦登卢普沙门菌H 9812作为PFGE的分子量标准菌株,由上海市CDC菌种保藏室提供。

1.1.2 培养基 亚硒酸煌绿增菌液(SBG)、罗伯特增菌液(RVS)、木糖赖氨酸胆酸盐琼脂平板(XLD)、CHROMagar(tm)沙门菌显色琼脂平板(CAS)、M-H琼脂平板、“H”相诱导软琼脂平板(上海科玛嘉科技有限公司);肠道双支糖综合鉴别管和其他辅助生化鉴定试剂购置于上海市CDC。以上增菌液和平板均避光保存在10℃以下环境中,在有效期内使用。

1.1.3 试剂和仪器 编码SPI-1毒力岛基因(hilA、invA)基因检测试剂盒(上海宝生生物科技有限公司);沙门菌分型诊断血清56种(成都生物制品研究所)、沙门菌分型诊断血清79种(S&A,Ltd,泰国);药敏分配器和14种抗生素纸片:四环素(TET)、头孢噻呋(EFT)、阿莫西林/克拉维酸(AMC)、氨苄西林(AMP)、复方甲异恶唑(SXT)、环丙沙星(CIP)、氯霉素(C)、氧氟沙星(OFX)、萘啶酸(NA)、头孢吡肟(FEP)、头孢噻肟(CTX)、头孢他啶(CAZ)、庆大霉素(CN)、链霉素(S)(Oxoid,英国);VitekAM-60自动生化鉴定仪(生物梅里埃,法国);菌液比浊仪(西门子,德国);限制性内切酶XbaⅠ(TaKaRa,日本);SeaKem Gold琼脂糖(Cambraex Bio Rockland,美国);脉冲凝胶电泳仪CHEF mapper system和凝胶成像系统GEL Doc2000(Bio-Rad,美国);Riboprinter(r)(RP)指纹图谱仪和酶切试剂(PvuⅡ kit)、样品处理包(DuPont Qualicon(tm),美国)。血清和抗生素纸片均在有效期内使用。

1.2 实验方法

1.2.1 非伤寒沙门菌病例监测 按照文献方法[2]和《上海市沙门菌病监测方案.2006年》中检测程序,每月完成辖区内3家定点临床医院的肠道门诊粪便样品的分离、菌株初筛鉴定和血清分型。系统生化反应符合并且血清抗原式符合[3,19:g,s,t:-]者鉴定为山夫登堡沙门菌。

1.2.2 抗生素敏感性试验 参照CLSI(NCCLS)2005年的操作规程,采用改良K-B法并根据抑菌圈直径判断敏感(S)、中介(I)、耐药(R)。头孢噻呋(EFT)K-B法的判断结果由Oxoid公司提供参考值。

1.2.3 RP指纹图谱分析 根据生化和基因表型的不同,选择2006年分离的8株山夫登堡沙门菌(长宁区山夫登堡沙门菌),进行PvuⅡ酶切图谱的分析比较,操作步骤按照厂商提供手册进行。

1.2.4 PFGE数据库 按照GSS方案要求,在中国CDC国家肠道病重点实验室按照Pulse Net规定的PFGE标准方法,挑选包括长宁区分离的19株山夫登堡沙门菌在内的共34株本市2006―2007年GSS分离的山夫登堡沙门菌腹泻株进行凝胶电泳、图谱分析和Bio Numerics(Version 4.0)软件聚类分析,同时将2002年深圳市从食源性爆发事件中分离的2株SPI-1毒力岛缺失的山夫登堡沙门菌的PFGE图谱重新整合后,聚类形成山夫登堡分子分型数据库。

2 结果

2.1 长宁区19株山夫登堡沙门菌分型

表型典型菌株9株,hilA、invA基因和硫化氢均阳性;SPI-1毒力岛缺失的山夫登堡不典型菌株10株,hilA、invA基因和硫化氢均阴性,涂片染色均为革兰阴性无芽孢杆菌,系统生化编码结果均提示为沙门菌属,血清分型结果符合山夫登堡抗原式。

2.2 上海市山夫登堡沙门菌病例监测

2006年上海市GSS山夫登堡病例在7月、8月、9月共分离30株,其中8月份高峰期14株。4个监测点3个月内以长宁区分离菌株最多(19/30);山夫登堡表型变异株也相对集中出现在7、8、9月,共11株,长宁区报告10株。2007年分离到的5株山夫登堡沙门菌没有表型变异株报告。2年内山夫登堡占本市非伤寒沙门菌病例血清型优势构成比由2006年的第3位下降至2007年的第6位。山夫登堡沙门菌典型与不典型菌株月度报告数对应流行曲线见图1。

图1 2006―2007年上海市GSS两类山夫登堡沙门菌监测情况

2.3 抗生素耐药率

包括长宁区在内,2006―2007年上海市GSS共39株山夫登堡沙门菌腹泻菌株,它们对四环素耐药率为79.5%(31/39),对萘啶酸的耐药率为2.6%(1/39),对其他12种抗生素均敏感。

2.4 RP指纹图谱分析

长宁区分离的19株山夫登堡沙门菌依据硫化氢产生和hilA、invA基因表型分成典型与不典型株两类。根据此原则各挑选4株(典型和不典型株)山夫登堡,同时使用PvuⅡ限制性内切酶对菌体染色体中的核糖点进行酶切和图谱分析比较。图谱显示,表型相反的两类菌株核糖体型的分型图谱分别对应为有显著DN段差异的2个克隆群(图2)。

注:1―SH 06163;2―SH 06124;3―SH 06142;4―SH 06100;(硫化氢+、hilA、invA基因+);5―SH 06062;6―SH 06160;7―SH 06061;8―SH 06072(硫化氢-、hilA、invA基因-);M―内标DNA分子量

图2 上海市长宁区山夫登堡沙门菌核糖体分型图谱(酶:PvuⅡ)

2.5 PFGE分型

2006―2007年上海市GSS病例的34株山夫登堡沙门菌的PFGE图谱与2002年深圳市食源性爆发事件中分离的2株SPI-1毒力岛缺失的山夫登堡沙门菌的PFGE图谱构建成Pluse Net China山夫登堡型谱数据库。36株山夫登堡腹泻株共分18种PFGE带型。符合疑似爆发案例特征的优势带型为6型(6株)、17型(5株)、23型(5株)、4型(4株)、11型(3株),其余各型均为1株。同源聚类后产生A、B 2个克隆族,除1株23型外,4、5、6、7型中有11株SPI-1毒力岛缺失株的图谱聚类显示为同一克隆菌株,具有90%以上的遗传相似性特征;而余下的12个型22株菌的电泳图谱聚类显示有80%的遗传相似性,属于更大的一组在遗传上克隆特征相近的族特征(图3)。长宁区分离的10株山夫登堡表型变异株间存在高度的遗传相似性,优势型4型(2株)和6型(6株)仅有1个DN段的差异,并与深圳的2株组成同一个大的克隆族;另9株表型典型菌株优势型为11型(1株)、17型(4株)和23型(2株)。在符合爆发病例分子型特征中,长宁区曾经爆发过由6例6型病人和4例17型病人与存在95%同源的1例18型病人分别构成2例较典型的案例,而其他的优势型,包括4型、11型、23型在长宁区均属于高度散在的“爆发”。

3 讨论

GSS是重点针对非伤寒沙门菌引起“散在爆发”案例开展相关食源性溯源调查研究的全球合作项目[3]。山夫登堡是我国较常见的沙门菌血清型,在禽、畜等动物养殖场或屠宰场所易分离到,人群中带菌者亦常见,一般仅引起散发的食源或医源性个案病例,对多数抗生素敏感,出现爆发流行较少见。该菌高度散发的流行病学特征符合我们2002―2003年的食源性监测资料[4,5]。但2006年7―9月报告的30株腹泻菌株高度疑似为爆发病例,且同时伴有变异株病例的现象仅涉长宁(10例)和卢湾(1例)2区。对病例流行病学调查没有发现共同就餐点和明确的疑似食品,有不洁饮食史(海鲜类和肉制品)是此次一过性爆发的主要危险因素之一。在全年同步进行的对生鲜肉制品等食品进行食源监测中也没有发现与病例菌株匹配的山夫登堡典型株与变异株。

RP核糖体分型能分辨菌株间5-50 kb的DN段。PFGE对DNA相对分子质量的分辨率优于前者。虽然本市34株(2006年30株和2007年的4株)山夫登堡沙门菌的PFGE共呈16种带型,但聚类显示,分别属2个克隆族,与RP的分型结果存在一致性。PFGE 6型是变异株的优势型,17、23型是典型株的优势型,病例在长宁区有集聚性。推断长宁区山夫登堡沙门菌优势PFGE腹泻病例可能存在一个潜在而持续的污染源,由2个克隆族、3种优势分子型菌株构成“多点爆发”,逐步扩散形成流行趋势的腹泻病例。

有山夫登堡沙门菌生态学监测报道:1998―2002年,西班牙西南部地区的海岸水产养殖和加工厂的3种甲壳类贻贝在加工过程中受到了海水污染,使山夫登堡沙门菌形成生态循环能力造成持续而潜在的污染源,并随着贻贝类产品消费增加引发人的感染病例增加。此外,文献强调在含高盐量(300 g/L)海水中长期“顽强”存活的山夫登堡沙门菌中有少数出现了菌落形态不典型等变异。

2002年9月,扈庆华等发现参于编码SPI-1毒力岛的hil A和inv A基因均缺失的山夫登堡沙门菌与本次发现的山夫登堡不典型菌株的基因型特征完全相符。通过初步建成的中国Pulse Net网络将深圳的山夫登堡SPI-1缺失株的PFGE图谱整合到此次的山夫登堡爆发病例的图谱中重新聚类:深圳的2株山夫登堡沙门菌变异株之间存在1个DN段的差异,但和长宁区的10株变异株间聚集成同一遗传克隆。两者区别在于前者引起了1例局部食源性爆发案例,而后者引起较长时间的多点爆发案例。我们结合前期的流行病学调查结论及文献与菌型比对等间接和直接证据判断:本市2006年发生的由2个克隆型导致的山夫登堡沙门菌爆发病例,可能源于南方流入的寄生有山夫登堡沙门菌并同时能在宿主内完成生态循环和克隆变异变化的某些软体海产品。本市大型水产品批发市场毗邻长宁区,病例的发生和消亡在某种程度上符合区域内消费者对某种甲壳类水产品消费的变化规律。

大多数非伤寒沙门菌在自然界中缺少在特定宿主体内的生命循环,但如果在自然界的生存时间达1年甚至更久,就可能为其造就忍受环境变化获得新的适应环境的能力[7,8],由此带来的某些菌株表型(产硫化氢能力)改变,客观上降低了传统分离方法的敏感性和增加了分离的“不确定度”的影响。由于此次GSS实验室方案已经系统评价并选择沙门菌显色培养基分离目的病原,避免了使用SS或XLD平板作为首选培养基而产生的“漏检”现象[2]。

SPI-1毒力岛参与构建沙门菌的Ⅲ分泌系统,其中主要由hil A和inv A基因共同参与了沙门菌致病性毒力岛(SPI-1)的表达,其致病基因理论是目前公认的沙门菌“分子理论基础”。所以目前国内对沙门菌分子生物学检测的靶基因也多选择hilA和invA基因。本次我们发现的山夫登堡SPI-1毒力岛缺失株的hil A、inv A基因不能被商品化的检测试剂盒检出。但问题是,从2002年的深圳到2006年上海市发生的更多看似散发实则爆发的病例这一事实可以认为,这种变异株已经在合适的生态环境中找到适宜的宿主长期繁殖存在并能依靠其他致病性毒力岛(SPI-Ⅱ等)不断引起爆发病例;同时其hil A、inv A基因缺失的表型特征也给分子生物学靶基因的调整提供科学依据[9]。

基于上述研究,我们建议:由于复杂环境催化和自身遗传进化等因素,增加了沙门菌的某些血清型不断发生某种遗传变异的概率,对有能力进行沙门菌检测的实验室在实践中需要不断验证沙门菌常规方法和分子生物学方法在日常监测和应急检测中的效果,以满足不断增长的公共卫生体制建设和疾病预防控制的技术需要。

4 参考文献

[1]顾宝柯,袁政安,金汇明,等.上海市沙门菌病流行特征分析[J].环境与职业医学,2008,25(3):245-247.

[2]许学斌,顾宝柯,陈敏,等.沙门菌检测方法的优化[J].检验医学,2007,22(6):677-680.

[3]许学斌,顾宝柯,陈敏,等.上海市沙门菌流行特征分析[J].中国共患病学报,2008,22(6):677-680.

[4]许学斌,顾宝柯,金汇明,等.免役磁珠法检测食品中沙门菌及分离菌株的耐药性[J].中国食品卫生杂志,2006,18(3):202-204.

[5]Young JL,Hyun JK,Cheng KP,et al.Characterization of Salmonella spp.Isolated from an Integrated Broiler Chicken Operation in Korea[J]. J Vet Med Sci,2007,69(4):399-404.

[6]Martinez U J,Liebana E.Use of pulsed-field gel electrophoresis to characterize the genetic diversityand clonal persistence of Salmonella Senftenberg in mussel processing facilities[J]. Int J Food Microbiol. 2005,105(2):153-163.

[7]Martinez U J, Liebana E. Investigation of clonal distribution and persistence of Salmonella Senftenberg in the marine environment and identification of potential sources of contamination[J].FEMS Microbiol Ecol,2005,52(2):255-263.

[8]Nesse LL, Refsum T, Heir E,et al.Molecular epidemiology of Salmonella spp. isolates from gull,fish-meal factories,feed factories,animals and humans in Norway based on pulsed-field gel electrophoresis[J].Epidemiol Infect,2005:133(1)53-58.

篇4

【关键词】

中颅窝;鼻咽纤维血管瘤;鼻内镜手术;手术径路

Endoscopic surgery for juvenile nasopharyngeal angiofibroma involving the middle cranial fossa(with a typical case report)KE Jia,LIU Zhong-qi,LI Tao,et al.Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery,the Third Hospital of Peking University,Beijing 100191,China

【Abstract】 Objective To report a case of endoscopic surgery of juvenile nasopharyngeal angiofibroma(JNA)involving the middle cranial fossa,review and summarize the existing surgical approaches.Methods The clinical features and therapeutic methods of a case of JNA involving the middle cranial fossa were summarized,and characteristics of different surgical approaches were reviewed.Results The tumor was successfully excised by endoscopic surgery with active preoperative preparation and the patient was free of residual tumor or recurrence and complication after a follow-up period of 12 months.Conclusion As for JNA with involvment of skull base bone and middle cranial fossa,the endoscopic surgery is effective on the premise of sufficient preoperative preparation.

【Key words】

Middle cranial fossa;Juvenile nasopharyngeal angiofibroma(JNA);Endoscopic surgery;Surgical approach

鼻咽纤维血管瘤是一种较少见的良性肿瘤,在治疗方式上主张手术切除,但对于广泛侵及颅底骨质并局限性累及中颅窝的鼻咽纤维血管瘤,在手术的入路选择上一直存在争议。北京大学第三医院耳鼻咽喉头颈外科收治1例广泛侵及颅底骨质并累及中颅窝的鼻咽纤维血管瘤,病例报道如下。

1 病例资料

患者男,30岁,主因反复左鼻出血半年,再次出血1周,发现鼻腔肿物1 d。于2008年3月14日收入院。入院前患者有双侧鼻堵进行性加重,左侧明显,伴左耳听力下降。入院查体鼻内镜下见左侧中鼻道一红色新生物,表面光滑,质韧,触之易出血。左侧中甲附着缘标志尚清楚,中甲下方与肿物界限不清。肿物垂入鼻底,并自鼻咽部突入右侧鼻腔,右侧咽鼓管、圆枕形态正常,鼻咽顶后壁光滑,左侧不可见。鼻窦增强CT扫描显示,左侧鼻腔后部可见软组织肿块影,约3.6 cm×5.3 cm×3 cm大小,其内密度不均,内部可见液化坏死。增强后肿物有不均匀明显强化。相邻蝶骨体骨质有破坏,肿物侵及蝶窦并破坏蝶窦左侧壁,左侧海绵窦受累。MRI提示鼻咽部一巨大占位性病变,T1WI上为等信号,T2WI上呈轻度高信号,增强T1WI显示强化明显,肿物呈结节状,侵犯左侧蝶窦,左侧海绵窦形态尚可,左侧颈内动脉周围可见组织水肿反应,硬脑膜完整。增强后肿物强化明显,其内可见血管流空信号(图1)。术前诊断为鼻咽纤维血管瘤Ⅱb期(Radkowski[1],1996)。

①术前轴位增强CT,②术前轴位T1WI增强MRI;③术前鼻内镜下左侧鼻腔,箭头示肿物;④术后11个月,左侧鼻腔内镜下照片

入院后完善各项常规检查及术前准备,术前配血,于手术前1 d行鼻咽部血管造影,术中见肿物为双侧上颌动脉供血,左侧为主,遂行双侧上颌动脉明胶海绵栓塞。于3月20日在静脉复合麻醉控制性低血压下行鼻内镜下鼻咽纤维血管瘤切除术。术中暴露肿瘤前上方, 见瘤体巨大, 前至中鼻甲中前部,广基,以绝缘吸引器逐步凝切,游离肿瘤上方及外侧,见瘤组织破坏蝶窦前、下壁侵入蝶窦、海绵窦,圈套器先行套除蝶窦外大部瘤体,进而分离蝶窦内瘤组织,见瘤体外侧突破蝶窦侧壁,部分已进入海绵窦,该处有波动及活动性出血,压迫并电凝止血后,内镜下探查并全部切除剩余瘤体,置入鼻咽止血栓,碘仿纱条填塞术腔及双侧鼻腔,固定鼻、鼻咽填塞物,结束手术。手术顺利,术中出血量约1000 ml,未输血。术毕检查瘤体,为富含血窦及纤维组织不规则结构,无明显包膜,术中冰冻回报为纤维血管瘤。术后予抗炎、补液,患者无发热、头痛,无颅内及眼部并发症,鼻腔无活动性出血。术后2周于手术室取除鼻腔及鼻颅底术腔内填塞物,见术腔有少量肉芽组织增生,无活动性出血。术后1个月复查见蝶窦术腔内仍有肉芽组织生长,术后11个月复查鼻内镜见术腔已上皮化,未见肿物残留。患者术后未再次出现鼻堵、鼻出血症状,耳部闷堵感及听力下降症状消失。

2 讨论

鼻咽纤维血管瘤是一种较为少见的良性肿瘤,约占全部头颈肿瘤总数的0.05%~0.5%[2],多见于青少年男性。虽然在病理表现上为良性肿物,但其具有进行性扩张性生长的特点,因此在治疗上首选手术治疗。术前常规CT、MRI 检查能有助于准确进行临床分期,并为手术能否切除及预后提供指导[3]。由于鼻咽纤维血管瘤部位重要而深在,瘤体血供丰富,因此手术治疗的关键就是如何控制和减少术中的出血。一般来说,一旦瘤体出现大量的出血,单纯依靠手术技巧很难有效地止血,因此术前进行瘤体的血管栓塞、硬化等治疗,采取可以充分暴露瘤体的手术进路,术中控制性低血压、改革手术切割器械,以及尽量缩短手术时间等一系列方法及措施,其目的就是为了尽量减少术中的出血量[4]。

传统用于治疗鼻咽纤维血管瘤的手术径路,根据肿瘤的大小和侵犯的部位,包括经腭部径路、经鼻腔径路、经口腔径路、颅内外联合径路、上唇龈沟径路[5]等,上述径路基本可以较好的暴露鼻咽部的术腔及肿物,为手术中彻底切除肿物提供了一个良好的视野,但有些术式存在创伤大,甚至面部遗留瘢痕,正常鼻腔及邻近组织结构损伤重等缺点,对患者的生活质量造成了一定的影响。随着微创技术的发展,自1996年Kamel[6]报告首例经鼻内镜鼻咽纤维血管瘤切除术以来,鼻内镜技术已经越来越多得应用于鼻咽纤维血管瘤的治疗。无论从手术创伤、术中并发症,还是从预后和随访等方面,鼻咽纤维血管瘤鼻内镜下的微创手术治疗已充分显示出其优越性,其可行性不容置疑[7]。但同时,由于鼻内镜视野有限,在大量出血的情况下视野受到影响,在一定范围内限制了鼻内镜下手术的适应证。早期韩德民等[8]将鼻内镜下进行手术操作适应证总结为:①病变范围局限于鼻腔、鼻咽腔、筛窦或蝶窦,部分瘤体侵及上颌窦或翼腭窝;②未广泛侵蚀侧颅底及波及颅内。如此便将鼻内镜下切除鼻咽纤维血管瘤的手术适应证限定在了Ⅰ期和部分Ⅱ期的病变。目前国内外有较多的报道,比较传统的手术方式与鼻内镜手术在治疗鼻咽纤维血管瘤方面的应用[9],指出随着手术器械和手术技巧的提高,在进行了充分的术前准备的情况下,对于一定体积和部位的鼻咽纤维血管瘤,均可以通过鼻内镜手术获得完整的切除[10]。蒋卫红等[11]根据不同临床分期的鼻咽纤维血管瘤所累及的解剖区域不同,及手术中所要处理的解剖结构和显露的解剖区域的不同,选择不同的鼻内镜下的手术入路,如单纯经鼻入路、经中鼻道上颌窦后壁入路、经中鼻道-下鼻道扩大上颌窦后壁入路等,既保证充分显露并完整切除肿瘤,又避免了鼻腔鼻窦结构的不必要破坏。这其中包括Ⅰ期的病变,部分Ⅱ期的肿瘤[12],甚至有经鼻内镜成功切除Ⅲ期及Ⅳ期肿瘤的报道[13-14]。认为如果没有临床及影像学上明确的海绵窦的侵犯,轻微的颅内侵犯已经不是经鼻内镜手术切除的绝对禁忌证。

本例患者病变范围侵犯了蝶窦,翼突的内侧板部分破坏,翼窝内可见肿瘤,同时肿瘤破坏了蝶窦侧壁中颅窝脑板的骨质,局部进入中颅窝并将海绵窦向外侧推移,部分包绕了颈内动脉,但从MRI上看硬脑膜完整,这就为选择鼻内镜下切除肿瘤提供了可能。在术式的选择上,考虑首先选用经鼻内镜径路切除,如果操作困难,则改经硬腭径路的手术方案。术前、术中采用了一系列方法控制出血:术前1 d行双侧上颌动脉栓塞并配血;术中麻醉采用控制性低血压;同时术中采用绝缘吸引器进行边电凝止血,边进行瘤体分离,在仅有少量出血的情况下游离出大部分的瘤体,达到了在充分游离瘤体的同时有效的减少术中出血的初步目标,并保证了鼻内镜下有一个良好而清晰的视野,为进一步在内窥镜下清理蝶窦腔及中颅窝瘤组织创造了条件;圈套器可以快速有效的将大体肿瘤组织取出[15],而对于残余的小块的瘤体则使用高速切吸钻进行去除。处理瘤体的实际手术时间在1 h左右,术中出血量约为1000 ml,监测患者生命体征平稳,未予输血。海绵窦及颈内动脉附近肿瘤的处理基于对该部位解剖结构的熟悉和良好的鼻内镜下操作的技术。目前随访12个月,患者局部无复发,无手术并发症,进一步的随访还在继续。结合本病例,笔者认为,对于广泛侵犯颅底骨质但中颅窝受累局限的巨大鼻咽纤维血管瘤,可以在充分的术前和术中准备的前提下经鼻内镜下切除。

参 考 文 献

[1] Radkowski D,McGill T,Healy GB.Angiofibroma.Changes in staging and treatment.Arch Otolaryngol Head Neck,1996,122(2):122-129.

[2] 王正敏.临床耳鼻咽喉科学.上海医科大学出版社,1996:129-131.

[3] 夏宇,刘小军,刘进康,等.CT、MRI在鼻咽纤维血管瘤中的诊断及应用价值.中国耳鼻咽喉颅底外科杂志,2005,11(2):121-122.

[4] 张小伯.鼻内和颅底肿瘤的内镜引导下手术.中华耳鼻咽喉科志,2004,39(6):321-323.

[5] 乔明哲,邢光前,乔宗海,等.鼻咽纤维血管瘤手术径路探讨-附56例报告.耳鼻咽喉-头颈外科,2002,9(5):275-277.

[6] Kamel RH.Transnasal endoscopic surgery in juvenile nasopharyngeal angiofibroma.J Laryngol Otol,1996,110:962-968.

[7] 王挥戈,林彬,林心强.鼻咽纤维血管瘤鼻内镜下微创手术治疗的临床探讨.中国内镜杂志,2004,10(4):47-49.

[8] 韩德民,陈学军,王景礼,等.鼻内窥镜引导下鼻咽血管纤维瘤切除术.中华耳鼻咽喉科志,1998,33(6):358-360.

[9] Douglas R,Wormald PJ.Endoscopic surgery for juvenile nasopharyngeal angiofibroma:where are the limits.Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg,2006,14(1):1-5.

[10] Joo D,Chhetri DK,Wang MB.Endoscopic removal of juvenile nasopharyngeal angiofibromas:a video presentation.Laryngoscope,2008,118(6):e1-3.

[11] 蒋卫红,赵素萍,谢志海,等.不同临床时期鼻咽血管纤维瘤的手术方式选择.中华耳鼻咽喉头颈外科杂志,2007,42(6):417-421.

[12] Andrade NA,Pinto JA,Nóbrega Mde O,et al.Exclusively endoscopic surgery for juvenile nasopharyngeal angiofibroma.Otolaryngol Head Neck Surg,2007,137(3):492-496.

[13] Chen MK,Tsai YL,Lee KW,et al.Strictly endoscopic and harmonic scalpel-assisted surgery of nasopharyngeal angiofibromas:eligible for advanced stage tumors.Acta Otolaryngol,2006,126(12):1321-1325.

篇5

十几年的生活中，幸福的事儿，信手拈来。

我爱游泳，因为人在水中像鱼儿一样畅快的游戈的感觉是无与伦比的。但是，我体质差，在夏天才能游泳，家附近没有什么好的游泳池，于是，一年中为数不多的游泳便成了我的幸福。

从小我便爱读书，但小的时候却真的不知道我和书原来这么有缘。直到在六年级的一个下午，阳光暖洋洋的，我再次拿起我生命中的书，忽然想起一句从未想过的话：书是永远不会背叛我的朋友。我眼前骤然一亮，有这样一个好朋友，夫复何求？那个下午，我开始相信，因为书，我会幸福，直到永远。

渴时一杯清茶，倦时温暖的床铺，烦时动听的音乐，何尝不是幸福？但，幸福仅仅是高兴的事情吗？流泪的时候，幸福还在不在？

篇6

它，毫不吝啬的扔下一串足迹，任你去回味去遐想去感慨。你什么都不能都不能做，也无能为力，你只有想办法跟上它的脚步，奏响同一片旋律，以至于不被时间远远抛弃、遗忘。许多事一去不复返，却留在了记忆深处，抹不去，挥不走，一切尽在不言中。Why?这个世上有太多的神奇，太多玄妙，更有诸多的无奈。找一种适合自己的生活方式比不切实际的空想和安于现状更符合我们这个时代的人吧！

“我们可能在雨中分别，却又会在风中相遇！”透过时间的骰子，我们经营着青春。

每个人都有青春，至少也该经历过。没有欢笑的青春不值得回忆，没有泪水的青春更是一种残缺！翘首远方的风景，忘记回首看看来时的路。青春如潺潺流水，顺着岁月的河道，默无声息，却异常地丰富。大多数时间我们都在体会青春的泪水，回顾流泪的那一刻！

“流泪，代表什么？”当泪水滑过脸颊，你受到了幸福的青睬。

人们认为流泪是软弱、无能的表现，实际上并非如此。泪水是心中的一种感觉，是种心灵的释放。当不如意之时，泪水是一种宣泄，是抚慰，泪流过了心情也就好了，舒坦了，就可以准备好明天的微笑了；泪水可以洗去一切的不快，洗去忧伤和痛苦，包括那沉重的思念。

高兴时也会流泪，不过那是幸福的泪水，有甜蜜的滋味！

篇7

随后医院的检查让玛丽娅绝望不已，她患上了一种极为罕见的病：泪腺枯燥症。目前世界上还没有根治这种疾病的药方。也就是说，玛丽娅要永远失去哭泣的能力。没有人愿意流泪，但当你遭遇不幸，或者拥有着人人都艳羡的幸福时，难道你不觉得泪水是最合适的表达方式吗?何况玛丽娅是一个多愁善感的姑娘。一只小鸟的死亡都会让她伤心哭泣，男友一个温暖的拥抱也会让她幸福得泪水涟涟，更重要的是，玛丽娅学的是电影文学，如果阅读感人的剧本、观看凄美的影片都欲哭无泪，那人生不就是一出悲哀可笑的闹剧吗?医生的诊断出来后，相恋三年的男友弃玛丽娅而去，接下来的日子里，玛丽娅将自己完全封闭起来。

八个月后，玛丽娅的高中同学约克从国外回来了。约克是个幽默快乐的男孩，玛丽娅回忆起他时总能想到许多开心幸福的片段。玛丽娅不知道，约克早在高一那年就爱上了多愁善感的她了。当约克得知玛丽娅的病情，以及她的男友因此离开她时，他决定去看玛丽娅。他希望这个因为不能哭泣而拒绝微笑的姑娘，能像当初那样挥起双手开心大笑。

为了让玛丽娅开心，那天约克故意套了一只大红塑料鼻子、穿了一件他11岁时穿的小肚兜，将肚脐眼露在外面，当约克像小孩一样蹦跳着出现在玛丽娅的面前时，她的眼睛里突然绽放出了一丝惊喜的光芒，这一丝光芒，将约克埋藏在心底多年的情愫再次点燃了，他决定要让这个女孩永远微笑下去。

从那以后，约克经常去看望玛丽娅，每一次他都费尽心思给玛丽娅带去“礼物”：让人捧腹大笑的装束打扮、让人开怀大笑的笑话、还有无比滑稽的舞蹈表演。约克频繁的到来渐渐让玛丽娅从悲伤中解脱出来。终于有一天。她对约克说：“其实不能哭泣也是一种幸福，因为只拥有欢乐和幸福。”几天后，玛丽娅在门前发现了一大束鲜艳的玫瑰，玫瑰里面有一张粉红色卡片：“昨天晚上上帝在梦中跟我说：‘傻小子约克啊，玛丽娅就是我赐给你的天使。快把她娶回家吧，一定要让她永远笑颜如花。’嫁给我吧。约克虽是凡人，但也有着一辈子不让天使流泪的信心。”玛丽娅哑然失声，她嘴唇颤抖，感觉眼泪在眼眶汹涌，可等到她激动地跑到镜子前，发现自己幸福的“哭泣”却没有一滴眼泪时，她突然又变得沮丧伤心，就在这时。约克从背后走过来拥住她：“亲爱的天使，我对上帝发过誓，一辈子也不让你哭。”

就在这年圣诞节，约克和玛丽娅举行了盛大的婚礼。当时比利时乡下有一种奇怪的风俗：新娘出嫁前夕，必须和家人抱头痛哭，哭的时间越长说明她越有孝心。考虑到玛丽娅的特殊病情，约克为家人定制了迪士尼的可爱服装，古板的父亲和多愁善感的母亲穿上动画片里的衣服，所有人见到他们时都开怀大笑，他们忘记了新娘要流泪的规矩，一致认为始终微笑着的新娘是比利时最美丽动人的新娘。

婚后，约克放弃了钢琴表演的工作，开办了一家私人幼儿园，这是他送给妻子的一份特殊礼物。因为世上有许多人、许多地方会让人伤心哭泣，但天真无邪的孩子永远只会让人开心微笑。玛丽娅改行做了幼儿教师，当结束一天繁忙却开心的工作回到家，玛丽娅就轻轻依偎在约克怀里，肩膀抖动、声音哆嗦地说：“请相信我，从此以后我不会再哭泣。”

玛丽娅果然说到做到，当34岁那年，母亲因病去世时，玛丽娅一个人面容平静、从容有序地料理了母亲的后事，尽管自始至终都没有流一滴眼泪，但所有人都看得见这个孝顺善良的女儿心底悲伤的泪水；36岁那年，玛丽娅有了一对漂亮的双胞胎女儿，当护士将一对小天使放进她的臂弯，玛丽娅眼神恬淡笑容圣洁，但所有人都看得见那一刻她的眼眶深处蕴藏着多么幸福的眼泪；当她48岁那年，约克在比利时最大的歌剧院――德拉莫内歌剧院的工人钢琴演奏会上，特意为玛丽娅演奏了一首钢琴曲《我的天使玛丽娅》，许多观众都感动得流泪时，穿着25年前的美丽嫁衣，眉毛轻扬、嘴角微微绽放的玛丽娅看着台上深情的爱人不曾流泪，但那有什么要紧呢?因为这世界上有一个人知道她的心就够了。

篇8

给特别的你}

轻轻闭上双眼

深呼吸

我{不想想太多}

{只因为你}

让我幸福不孤单

我不想说太多

只因为在乎

像一只傻傻的{鸭子}

大步大步走向你

只知道

不会再傻傻的流泪

做一个{快乐宝贝}

记得我们的{约定}

说好的

一辈子幸福的约定

闭上双眼

想念从前

篇9

关键词 定量结构-保留相关关系； 香精； 醛； 酮； 酯； 气相色谱-质谱； 气相色谱-红外光谱

1 引 言

气相色谱-质谱联用（GC-MS）技术结合了GC高效分离和MS定性专属性强的优势，具有灵敏度高、分析速度快和鉴别能力强的特点，可同时完成待测组分的分离鉴定，适用于混合物中未知组分的定性和定量分析，在食品[1]、环境[2]、医药[3]、化工[4]等领域中应用广泛。但气相色谱的色谱柱容量有限，同系物或异构体化合物的色谱保留时间相近或一致[5]。虽然GC-MS配置的NIST数据库中已包含超过20万张化合物的EI质谱图谱，但在含有较多同系物和同分异构体的复杂样品分析中，有些化合物在EI（与GC常联用的离子化方式）电离方式下不产生分子离子峰；利用谱库检索一般只能给出某个成分的可能匹配物质，一些结构异构体的EI质谱图较为相似，仅仅依靠GC-MS得到的结果对化合物进行定性并不十分充分，需要通过其它电离技术获得分子量信息，或采用多级质谱（MSn）技术获得结构信息。研究者常通过与其它定性方法联用、建立指纹图谱[6]或化学计量学[7]的手段来弥补NIST数据库在同系物和异构体鉴定分析中的不足。气相色谱-红外光谱（GC-IR）联用技术结合了GC良好的分离能力和IR结构鉴定的优势，适合复杂未知物成分分离及其定性定量分析。另一方面，定量结构保留相关关系（QSRR）是直接利用分子结构信息关联和预测有机物的色谱保留时间[8]。多元线性回归模型是QSRR中应用广泛的一种经典建模方法，它对自变量和因变量加以线性拟合得到最小二乘意义下的最佳结果，在环境、食品、化工等领域未知化合物的分离分析中得到广泛应用[9～15]。

香精香料是食品香味的主要来源之一，它们使制造食品的香味能够与传统手工制作的食品相媲美。香精香料已经广泛应用到食品生产的各个领域，它能改善食品质量、降低生产成本、增加食品的色香味，大大提高了人民的生活质量和品味，同时促进了食品工业的快速发展[16]。醛酮酯类化合物是重要的工业原料、药物原料、合成中间体，也是合成香精香料的重要组成之一[17]。目前，醛酮酯类化合物的QSRR方面的相关研究已多有报道[18～24]。

本研究采用QSRR辅助GC-MS/IR方法快速定性分析饱和醛酮酯同系物及其同分异构体。以醛酮酯标样保留时间tR为因变量，分子拓扑指数0Q为自变量，构建简单醛酮酯类化合物定量结构-保留相关关系（QSRR），采用本方法辅助GC-MS/IR方法建立快速、准确的香精样品中醛酮酯类化合物定性分析方法。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

GC 6890N气相色谱（美国Agilent公司）；IR 6170红外光谱联用仪（美国Thermo Fisher Scientific公司），另配有FID检测器；6890/5790气相色谱-质谱联用仪（GC-MS，美国Agilent公司）。

2-戊酮、3-戊酮、2-己酮、4-庚酮、5-甲基-2-己酮、3-辛酮、正己醛、1-辛醛、丙酸乙酯、丁酸甲酯、丁酸乙酯、乙酸异戊酯、丁酸丙酯、丁酸丁酯、丁酸异戊酯、丁酸正戊酯、异戊酸异戊酯、丁酸己酯、乙酸戊酯、己酸乙酯、癸酸乙酯、十二酸乙酯、十四酸乙酯、十五酸乙酯、棕榈酸甲酯、三醋酸甘油酯（纯度≥99.5%，阿拉丁试剂公司）；正己烷（色谱纯，百灵威公司（上海））。香精等样品由某企业提供。

各标准品以正己烷为溶剂，配制成1000 mg/L储备液备用；单标使用液和混标使用液根据需要由储备液用正己烷稀释而成。

2.2 分析条件

2.2.1 GC-MS条件

色谱柱： Agilent HP-VOC（60 m × 0.32 mm × 1.80 μm）； 进样口温度： 260℃； 质谱接口温度270℃，离子源温度230℃，电离方式为 EI，电子轰击能量 70 eV；载气为高纯He，柱流速1.0 mL/min；进样量1 μL，分流进样，分流比为25∶1；程序升温：以5℃/min的速率从70℃升至270℃。

2.2.2 GC-IR/FID条件 Agilent HP-VOC色谱柱 （60 m × 0.32mm × 1.80 μm）；进样口温度： 260℃，FID检测器温度：250℃；载气为高纯He，柱流速1.0 mL/min；进样量1 μL，分流进样，分流比为5：1；程序升温：以5℃/min的速率从70℃升至270℃；红外光谱分辨率：16 cm1，扫描次数：8次；GC-IR接口传输线温度：270℃，光管温度：270℃。

2.3 样品处理

在0.2 mL香精样品中加入0.5 mL 正己烷，振荡2 min后，用1 mL 注射器吸取上清液，重复3次，得到1 mL萃取液，备用。

2.4 分子拓扑指数0Q

3 结果与讨论

3.1 GC-MS和GC-FID/IR中醛酮酯化合物的保留时间

结合GC-IR可对未知物进行官能团鉴定的特点，辅助GC-MS定性分析复杂样品中的醛酮酯类化合物。本研究首先考察了醛酮酯类化合物在不同方法中的色谱保留时间（表1）。结果表明，采用同一方法和同型色谱柱，由于GC-IR接口构造特殊，馏出物在气红接口中滞留时间较长，导致醛酮酯化合物在GC-MS和GC-IR/FID中保留时间不同，但色谱保留时间顺序基本一致，相应化合物的保留时间差值近似为常数，这为GC-IR辅助GC-MS用于复杂样品中未知物的分析鉴定奠定了基础。

3.2 QSRR模型建立

将17种饱和酯类化合物分为两类，其中7种乙酯类同系物（丙酸乙酯、丁酸乙酯、己酸乙酯、癸酸乙酯、十二酸乙酯、十四酸乙酯、十五酸乙酯）作为训练集，推测对应关系式；剩余的不同取代基的其它酯类化合物作为预测集，用于检验方法准确性。饱和酯类化合物的Q值、在GC-MS方法中保留时间实验值见表2。由表2可知，乙酯类同系物的色谱保留时间与其分子结构参数Q值间存在良好的线性关系，相关系数为0.997。由于这些乙酯类同系物都是直链羧酸基乙酯，在GC中存在良好的碳数规律。因此，本对应关系式与同系物碳数规律结果一致。此对应关系式对其它酯类化合物的保留时间预测值也列于表2。

由于作为预测集的酯类化合物与训练集的乙酯类化合物的结构存在较大差异，单独采用保留时间碳数规律无法得到良好的预测。但经过分子拓扑结构处理后的结果表明，酯类化合物的保留时间与其对应的Q值能很好地符合此线性关系，预测值与实验值的偏差不超过5%。

对于醛酮类化合物，以2-戊酮、3-戊酮、2-己酮、4-庚酮及5-甲基-2-己酮作为训练集，将醛酮化合物在不同方法上的色谱保留时间（tR）与相应化合物的0Q进行多元线性回归分析。结果表明，tR与0Q具有良好的相关性，其相关系数R2=0.997。其中醛酮化合物在GC-MS方法中色谱保留时间（tR）与0Q的拟合方程为：

tR=0.9090Q-8.141（4）

以4-庚酮、3-辛酮、1-辛醛和4-壬酮为测试集，用公式（4）对测试集在GC-IR方法中的色谱保留时间进行预测，所得预测值及其与实验值的相对偏差见表3。结果表明，测试集化合物的预测值与实验值的相对偏差小于3.4%，表明模型预测能力较强。

3.3 QSRR辅助GC-MS/IR方法在复杂样品醛酮酯类化合物鉴定中的应用

3.3.1 香精样品1#分析 采用GC-MS分析香精样品1#的正己烷萃取液（图1A）。通过NIST质谱图谱库搜索，其中9、16、19和24号峰可能为醛酮类化合物，相应化合物及其匹配度见表4。

由图1A可见，3号和16号谱峰的匹配度并不高，而24号谱峰不仅质谱匹配度低，而且给出了相似匹配度的不同化合物。本研究进一步采用GC-IR分析该样品（图1B），结合IR谱库鉴定结果，可以基本确定谱峰9和19为醛酮类化合物，峰3为酯类化合物，但具体结构无法确定。

为了准确确定这些醛酮酯类化合物的同系物结构，采用QSRR模型进一步处理。表5给出了6～14个碳直链饱和醛的0Q值及其根据已知模型中拟合公式得到的色谱保留时间预测值。

为壬醛。而24号峰（十三醛和十四醛）相应的色谱保留时间预测值与实验值相对误差相当大，初步判断MS谱库推荐的两个可能结果均不正确。根据保留时间预测值与实际色谱保留时间判断，24号谱峰应为十一醛。通过标准样品对预测结果进行核实， 3号峰为丁酸乙酯；16号峰为壬醛；24号峰为十一醛，证明采用QSRR结合GC-MS/IR能准

确判断未知化合物的结构。

3.3.2 香精样品2#分析 香精样品2#经正己烷处理后的GC-MS分析结果见图2，通过NIST质谱谱库搜索给出的相应化合物及其匹配度见表6。

结果表明，虽然GC-MS NIST谱库和GC-IR都显示香精样品2#中含有多个酯类化合物，但GC-MS对多个酯类化合物的同系物给出了匹配度相近的可能结果，单独通过GC-MS或通过GC-IR辅助MS难以准确简单酯类化合物同系物的结构。为此，本研究通过NIST推荐的化合物的0Q值并结合QSRR已建立的模型进行预测。结果表明，辛酸乙酯、十二酸乙酯、癸酸异戊酯和十五酸乙酯的预测保留时间与实验中2， 8， 9和10号峰的保留时间吻合度较好，进一步采用相应标准样品进行对比，最终确定预测结果与实际结果一致。

4 结 论

根据分子拓扑指数0Q和色谱保留时间关系，建立了醛酮酯类化合物的QSRR模型tR=0QA+B，该模型因变量、自变量具有较好的线性相关性，预测能力良好。采用GC-MS、GC-IR对香精样品分离分析并进行初步定性，利用所建立的tR-0Q模型对初步定性结果辅助定性确定准确的定性结果，确立了快速、准确判定香精香气等复杂样品中未知化合物结构的分析方法。本方法中气相色谱采用的色谱柱均为HP-VOC柱，在其它色谱柱体系，本方法并不适用。另外，本方法的tR-0Q模型对脂肪族饱和醛酮酯类化合物的能够准确定性，但对苯系物或不饱和化合物的定性误差较大。

References

1 Pacioni G， Cerretani L， Procida G， Cichelli A. Food Chem.， 2014， 146： 30-35

2 Bonansea R I， Amé MV， Wunderlin D A. Chemosphere， 2013， 90（6）： 1860-1869

3 Emond P， Mavel S， Adoud N， Nadal-Desbarats L， Montigny F， Bonnet-Brilhault F， Barthélémy C， Merten M， Sarda P， Laumonnier F， Vourc H P， Blasco H， Andres C R. Anal. Bioanal. Chem.， 2013， 405（15）： 5291-5300

4 Zhang M， Resende F L P， Moutsoglou A. Fuel， 2014， 116： 358-369

5 HUANG Jian. Identification of 7 Kinds of BTEX in Industrial Additives by Headspace Gas Chromatography-Mass Spectrometry， Jilin University Master′s Thesis， 2014

黄 鉴. 工业助剂中7种苯系物的顶空气相色谱-质谱定性分析， 吉林大学硕士论文， 2014

6 HUANG Ying-Feng. Study on the Analysis of Flavor and Flavor Material for Tobacco， Zhejiang University Master′s Thesis， 2007

黄映凤. 烟用香精香料的分析研究， 浙江大学硕士论文， 2007

7 He M， Yan J， Cao D， Liu S， Zhao C， Liang Y， Li Y， Zhang Z. Talanta， 2013， 103： 116-122

8 QUAN Mei-Ping. Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory， 2013， 30（5）： 2288-2293

权美平. 光谱实验室， 2013， 30（5）： 2288-2293

9 Kaliszan R. Chem. Rev.， 2007， 107（7）： 3212-3246

10 Héberger K. J. Chromatogr. A， 2007， 1158（1-2）： 273-305

11 Ebrahimi-Najafabadi H， Mcginitie T M， Harynuk J J. J. Chromatogr. A， 2014， 1358： 225-231

12 Dashtbozorgi Z， Golmohammadi H， Konoz E. Microchem. J.， 2013， 106： 51-60

13 Yan J， Cao D， Guo F， Zhang L， He M， Huang J， Xu Q， Liang Y. J. Chromatogr. A， 2012， 1223： 118-125

14 Ghavami R， Sepehri B. J. Chromatogr. A， 2012， 1233： 116-125

15 Qin L， Liu S， Chen F， Xiao Q， Wu Q. Chemosphere， 2013， 90（2）： 300-305

16 CAI Pei-Dian， BAI Wei-Dong， QIAN Min. China Condiment， 2010， （2）： 35-38

蔡培钿， 白卫东， 钱 敏. 中国调味品， 2010， （2）： 35-38

17 LIU Mei-Sen， HE Wei-Ping. China Food Additives， 2003， （5）： 6-10

刘梅森， 何唯平. 中国食品添加剂， 2003， （5）： 6-10

18 Souza S， Kuhnen C A， Junkes B D S， Yunes R A， Heinzen V E F. J. Chemometr.， 2009， 23（5）： 229-235

19 Gupta V K， Khani H， Ahmadi-Roudi B， Mirakhorli S， Fereyduni E， Agarwal S. Talanta， 2011， 83（3）： 1014-1022

20 Souza S，Kuhnen C A， Junkes B D S， Yunes R A， Heinzen V E F. J. Mol. Graph. Model.， 2009， 28（1）： 20-27

21 ZHOU Cong-Yi， NIE Chang-Ming， TIAN Wan-Fu， DAI Yi-Min， PENG Guo-Wen. J. Instrum. Anal.， 2007， （6）： 802-807

周丛艺， 聂长明， 田万福， 戴益民， 彭国文. 分析测试学报， 2007， （6）： 802-807

22 LIU Feng-Ping， LIANG Yi-Zeng， CAO Chen-Zhong. Chinese J. Anal. Chem， 2007， 35（2）： 227-232

刘凤萍， 梁逸曾， 曹晨忠. 分析化学， 2007， 35（2）： 227-232

23 DU Xi-Hua， GU Ju-Guan. Chinese J. Anal. Chem.， 2005， 33（4）： 553-556

堵锡华， 顾菊观. 分析化学， 2005， 33（4）： 553-556

24 Junkes B D S， Amboni R D D M， Yunes R A， Heinzen V E F. J. Brazil. Chem. Soc.， 2004， 15（2）： 183-189

篇10

第二天,女孩变成了男孩家中的一株百合花.男孩一天没见到女孩,十分着急.他打遍了所有人的电话,就是找不到女孩.男孩像发疯一样,不吃不喝,可并没有流泪.

变成了花的女孩有些伤感:原来自己还不能让男孩流泪.

第二天,男孩一天都不吃不喝,脸也不洗,像发了疯一样寻找女孩.女孩在为他心痛之余还有些伤心,难道自己还不能使男孩流泪吗?

终于到了第三天,男孩没有去找女孩.他一个人坐在床上,抱着女孩以前送给他的礼物,整整坐了一天.这时候,女孩突然从花中飞了出来,来到了男孩的面前.她清楚的看到,男孩流了一滴眼泪,而那眼泪分明就是自己!女孩这才明白;原来自己就是男孩的泪!

忽然,一股强大的旋涡把她吸了进去.女孩又到了上帝面前,她恳求上帝让她回到男孩身边.可上帝却说:“是你自己不珍惜他,可不是我要把你们分开.以后,你就是一朵百合花了!

女孩大叫不要.这时候,女孩从梦中惊醒.她首先看到了男孩,他握着自己的手,说:“怎么了?宝贝!”女孩这才知道,原来刚才只是一个梦.她抱紧了男孩,流下了两行幸福的眼泪,说:“我在也不会离开你了!”“小傻瓜!”……