黑白记忆范文
时间:2023-04-02 21:34:15
导语:如何才能写好一篇黑白记忆,这就需要搜集整理更多的资料和文献,欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文,供你借鉴。
篇1
从隧道口钻出来的首先是头,之后是身子,再往后,一车煤也跟着出来了。那其实不是车,俗称“船子”。船子由木头做成,样式像普通的木船,底部没有轮子,下面两边凸出来的两条棱承担滑行的任务。棱上钉有两条很厚的铁片,以减少磨损。
老家地处高寒山区,在那些连亘的山峦和沟壑之下,埋着现代工业最重要的能源之一:煤。老家上世纪八十年代中期以前出生的人,尤其是男人,基本上都与煤炭、煤窑有过最亲密的接触。八九岁的时候,我就跟着父亲进煤窑。
在老家,每几户人家就会共有一口煤窑,有的甚至一户人家就有一口。我们家煤窑里的煤脆性,黑亮,容易接火。可是煤窑太矮,隧道高处不过三尺,低处不到两尺。一米七几的父亲在里面挖煤,只好坐在地上,还要偏着头,防止碰在顶棚的岩石上。煤炭挖下来,要运出去还得花大功夫,隧道矮,父亲有力不能使,我这样的孩子就派上了用场。父亲在前面拉,我在后面推。通道是黑暗的,唯一的光亮是父亲手里的煤油灯发出的,昏黄,我们在昏黄的灯光下一步一步朝前挪。如果一不小心摔倒,煤油灯坠地,熄灭,整个世界都消失了,一颗心跌进无边的黑暗。走出窑门,看见天空,哪怕正下着雨或雪,灰白一片,心情也会好起来。每一次从煤窑里出来,我都会看见父亲挺直腰杆,长嘘一口气。
十四岁那年,我辍学回家,在老家的矿山上跟十二岁的妹妹一起背煤。矿山离家七八里,在一个山谷里,离公路有一公里左右。我们背着煤炭爬坡下坎,一过秤,我背了一百一十多斤,妹妹背了八十多斤。妹妹见我背的比她的多,不服气,第二次就加了重量。我见她加了,我也加。第一天我们背得腰酸背疼两腿发麻,回家坐在凳子上,感觉双腿已经不是自己的了。不过心里很高兴,我挣了一块八,妹妹挣了一块三。
后来,我辗转给几个窑主背煤。天一亮,我吃过早饭就去矿上,天黑回家。挣到的钱,大部分给母亲到街上买粮食。有一次,我帮一个窑主背一堆煤,该得三块三角钱。问他要,他说,不给就不给,你要怎样?我不敢跟他动粗,只好不要了。我于是进煤窑挖煤。
我们一起的四个人,最大的不超过十六岁。很多煤窑拉煤用两轮人力车,我们没钱买车,就用船子。两人挖,两人拉,轮换着来,赚的钱平分。只用工具去挖,弄不到多少煤,要放炮炸。那时的雷管和炸药还没管制,随便就可以到大老板那里拿。放炮之前先要用钢钎钻炮眼,煤炭不像石头那样坚硬,因此钻炮眼很容易。把导火索插在雷管的一头,把雷管埋进炸药的一头,再把它们放进炮眼,然后往里塞散碎的炸药和煤炭粉末,把炮眼筑紧。这一道工序很危险,曾经有人在筑炮眼的时候用力过度,以至当场引爆雷管丢了性命。我是连点炮也不敢的,要跑出老远。他们不怕,为了节约导火索,他们常常把导火索剪到不能再短。用烟火点燃,迅速跑到拐弯的角落,其间只花几秒钟。因为炸飞的煤炭不会拐弯,所以没出过事。
那段时间我们住在煤矿上的窝棚里。那个山谷叫煤炭沟,煤窑星星点点,到处都是,洞口旁边,都会有几个窝棚,窝棚里的矿工一律黑色,额下嵌一双如豆的眼睛。我们在下午五点后下班,因为劳累过度,大家吃东西都很厉害,一大碗肥肉,一会儿就见底了。两斤一捆的面条,我可以吃完大半捆,有的能吃一捆。吃东西的时候我们来不及洗脸,我们对吃迫不及待,似乎要通过吃来弥补一些失去的东西。吃完之后便是赌博。整个矿山的黄昏和夜晚都笼罩在赌博的气氛里,有的人今天赢了,明天又输了。有的人辛辛苦苦干了一个月,结果输个精光。而赢了钱的,再没心思干活,忙着挥霍手里的钱。
意外还是发生了。我们拉着煤从煤窑出来,再一次进入的时候,里面漆黑一片。煤油灯熄灭了,挖煤的一个同伴被上面掉下的一块几百斤重的大石头压着,而与他干活的另一个因为去岔洞解手躲过了一劫。我们把石头撬开,把他弄了出来。那个同伴救活了,可是也残废了。我心存畏惧,于是重新改行背煤炭。
而丧身于煤窑的人每年都在递加。村子就几百号人,死于矿难或因此而受残的,先后已有十多人。有一家兄弟五个,三个死于矿难,一个被窑顶的石头砸成终身残废,剩一个远走他乡。四五十岁的男人们仍然在煤矿里干活,他们已经不能后退,到外面找一份工作不可能了,而在煤矿里干,一个月可以挣两三千块。对那些煤窑,他们已经很熟悉了,就像熟悉自己的家人一样。矿里没有瓦斯;隧道四通八达,里面不缺氧;隧道是平挖进去的,也不存在泄水事件,因此,唯一的灾难是冒顶。可是他们已经很有经验了,他们的眼睛能够发现煤窑顶棚上每一道裂开的缝隙,他们的耳朵能够听到来自头顶的岩石断裂的最初的声音。偶尔的事故或灾难,在于他们的一时疏忽。
年轻人呢?在老家煤矿里干活的已经很少了,在春节后某天的清晨离开,踏上茫茫的打工之旅,直到腊月的时候,才候鸟一样回来。
篇2
判断一个母亲的好与坏,并非从人的本身取决,而是对自己孩子心灵上的感动,母爱的奉献。对于一个单亲家庭的孩子,他的成长没有一个良好的家庭环境。如果他是和母亲相依为命地生活,就需要母爱更多的呵护,才能健康成长。但是,他跟着的母亲是一个吸毒者,那似乎孩子的前途已经没有希望了。
天无绝人之路,是母爱创造了这奇迹,挽救了孩子,谱写了一个感人肺腑的故事。母亲因为母爱,决心把毒瘾戒掉,继续好好养育孩子,给孩子理想;孩子因为母爱,没有放弃母亲,没有嫌弃母亲,继续爱着母亲,不屑追求自己的理想。无论贫困、疾病,还是多大的挫折,母爱的存在,我们都能挺过去,继续面对新的未来。
世界的不平,道路的不平,不是我们自暴自弃的理由,寻死更不是解决事情的方法。我们应该想想我们的亲人,更是我们的父母,他们都是爱我们的人,他们为我们倾注了多少的心血,才有我们今天的幸福。我们要学会珍惜,学会感恩。如果害怕黑暗,就要学会战胜黑暗。相信我们永远都是幸运者,因为我们都是被爱者,爱的存在,让我们学会了坚强。有了理想,就应该努力追求,为了实现理想,就应该珍爱生命。我们是祖国的未来,拒绝,珍爱生命,是我们迈出成功的第一步,有了健康的生命,我们有力量去追求理想,才能奉献我们的爱,去爱别人。
放飞我们的理想,努力地学习;感受生活的美好,幸福地活着。
篇3
影片记录了一个小女孩在去给妈妈买药时,发现妈妈吃的不是药而是。种种原因,迫使小女孩离开了家。在路上她遇到了一个青年男子,想让他为自己找一份工作,之后,她来到了歌舞厅,染上了。
影片中的一幕幕,震人心魄,让人惊呆。片中的人物也是和我一样是在享受美好的花季的时候,却被这白色死神一步步吞噬,人的良知,也因此被抹杀,人的渺小、生命的脆弱令人感慨。
这样我不由发出感叹:一次也不能沾,对坚决说“不”!我们要珍爱生命,远离,不能被所诱惑,我们应让青春成为一道亮丽的风景线,而不是成为令人不堪回首、潸然泪下、永远无法承受的痛。
多少人曾因为同样的方式失去了自己宝贵的生命!太多人为付出了太高昂的代价!这个代价,无法用单位衡量,无法用言语形容!
珍爱生命,拒绝。我们要真正打一场禁毒战争。
篇4
关键词:土栖白蚁 诱杀技术
中图分类号: Q969.296 文献标识码:A DOI:10.11974/nyyjs.20150936002
土白蚁、大白蚁种类我国报告有52种(其中大白蚁属23种),这些都是危害森林、园林、果木和堤坝以及农作物的主要害虫,其中以黑翅土白蚁Odontotermes formosanus和黄翅大白蚁Macrotermes barneyi Light为主。我国黄河以南多数植物都是白蚁取食对象。给农林生产和江河水库堤坝造成很大的经济损失,为有效防治白蚁,现将多年来探索诱杀此类白蚁的方法与技术简述如下。
1 诱饵材料的选择
植物体是白蚁的主要营养物质,从植物中筛选白蚁嗜食的作为诱饵料既经济又实用。
采用植物样线调查法,随机抽取20个样线在野外试验,蛀食程度达全食的植物品种有65%以上。再经室内给食比较试验,能诱集白蚁多量取食并产生白蚁聚群取食效应的例表试验。
2 诱饵材料评级方法(见附表1)
2.1 评级方法
每种诱饵料经糖化处理干燥后加入灭蚁药,按每包5g分装,在林地按每667m2等距投放50件(处),10d后观察被食数量。在不同林地重复试验3次,并同时在室内进行供食饲养试验。
2.2 评级结果
2.2.1 在林地
土栖白蚁对猎食物体的蛀食量受诸多因素影响,选择白蚁嗜食和特别嗜食的植物作为引诱白蚁的饵料,引诱白蚁取食的招引力因植物体不同显示出很好和特别好(敏感)等不同强度。
经室内外试验,被食数量(包)均达90%以上的在附表中标注为A级,75~90%的为B级,65~74%为C级饵料(被食率在65%以下的不计入本试验报告)。
评级为“A”的饵料在防治区食物丰富条件下,仍能有效招引白蚁猎食毒饵。而评级为“B”、“C“的则随食料的丰富程度上升,引诱白蚁猎食毒饵的敏感度逐渐下降。在白蚁食物缺乏的林地或食物营养差时,30种植物均能有效招引白蚁取食毒饵,但应优先采集“A”级的饵料植物配制毒饵剂。
2.2.2 根据试验中各类白蚁取食喜好
测定出黑翅白蚁喜好植物在附表中标注为“黑”、黄翅大白蚁喜好植物标注为“黄”;2种白蚁都喜好的标注为“黑+黄”或“黄+黑”。
2.2.3 特别提出的是
PAR、VHA、EAP 3种植物经粉碎并糖化处理后分包,分别投放在林间白蚁活动区,每一投放点一昼夜被食量均可超过5g,并有调动白蚁猎食的显著效应。其中土白蚁属白蚁对VHA特敏感,大白蚁属白蚁对EAP和RAR特别敏感。(PAR、VHA、EAP为植物缩写名称,为作者试验成果在此不便公开)
3 诱饵制作方法
将各种引诱白蚁取食的植物体,经过造型、改性、加工等制作成诱饵备用。
3.1 造型
段材:取植物的枝干、茎杆(例如:芦苇杆 )趁湿截成15cm、20cm或30cm的段材。
板材:取植物主干部分(例如:松树)锯成厚度2cm左右,长度20~30cm的木板。
粉材:取植物叶、块根、草质茎杆(例如:插田泡 )用饲料粉碎机打碎,先过米筛,再过糠筛取粉屑收存备用。筛出的粗粉(颗粒粗1~2mm以上)用做诱饵粉剂,筛出的细粉部分,用做诱饵饼剂。
3.2 处理及辅料添加
将各种诱饵材料添加糖类、酸类、醇类、松花粉、纤维素、氨基酸、防霉剂进一步处理并保持诱饵材料的敏感性。例如:在粉剂中添加20%糖类水溶液(或浸泡)干燥备用。评级越高的饵料越可简化辅料添加与处理程序。
3.3 加工
段材及板材扎捆:茎杆500~1000g捆扎成1把,备用;板材4~6块组成1组,分层叠放捆扎成1件,备用。
粗粉分包:将诱饵粉加入灭蚁药等物质后,按一定量分装入各种纸袋内封口备用。
细粉制饼:将诱饵细粉加入淀粉等固型物后加水调成浓浆状,分量造形为饼状或条状,晒干备用。
4 诱饵使用方法
4.1 引诱坑
在野外设置引诱坑的密度一般按每600平方10~15个为准,诱坑深15cm,长25~35cm,宽10~15cm(具体尺寸视诱材体积),长度两端朝顺坡方向。将诱材铺入坑底,盖上薄膜(或纸板、树叶、枯草)后覆盖细土(防止雨水冲刷和积水)。
4.2 引诱堆
在白蚁活动地点设置引诱堆(密度与引诱坑相同),利用前述诱饵材料(或场地枯枝落叶,或水上漂浮物渣)堆成小堆,然后盖上草垫(席)或薄膜,再覆盖细土成推(防雨水冲刷)。
4.3 引诱箱
土栖白蚁引诱箱,取马尾松、加杨、泡桐或桉树板材制作成10~15cm的方木框,另加相当面积的木盖板一块,备用。在林间,选择有白蚁活动的部位或每667m2地等距离设10~15个点,作土坑(或在地表)放好木框,在框(箱)内放入处理后的诱饵粉适量,盖上盖板并覆细土(防雨防水)。
4.4 毒饵诱杀
在白蚁(活动)危害区域作土坑埋放加工好的粉剂诱杀包(或诱饵饼),是一次性杀灭蚁巢的最简便、最经济的方法。
一般每公顷投放450~600包(枚),能使400~500个林间蚁巢得到防治,防治效果达95%以上。4.5 树皮卷引诱
将桉树、杉树、黑荆树等树皮剥离后(内朝上摆放),让其自然卷曲干燥截成段,用20%浓度糖水处理后晾干,在白蚁活动的地方挖洞(洞的大小视引诱材料而定)斜埋在土内,引诱白蚁。
4.6 板材引诱
将已晾干的松树、杨树、桉树尾梢(直径5~10cm),带皮截成10~15cm每段,斜埋于白蚁活动地,并露出一小部分以利观察诱集白蚁效果。
5 诱饵剂的运用
5.1 监测各种白蚁分布密度
在一片标准地中,以高密度(4~5m等距离)设点,投放单量能杀灭一巢黄翅大白蚁的Eap白蚁毒饵诱杀剂,并在第一次投药15~20d后,在仍有白蚁活动的部位复投毒饵诱杀剂,直至标准地再看不见有黄翅大白蚁继续活动迹象,再隔20d后,仔细统计标准地出现的白蚁死巢指示菌(群)数量。该数量可视为该区域单位面积黄翅大白蚁蚁巢分布密度。
在同一标准地,仍以高密度(同上)设点,等距离投放单量能杀灭一巢黑翅土白蚁的VHA白蚁毒饵诱杀剂,15~20d后在白蚁新的危害点补充投药,直至标准地再看不见黑翅土白蚁继续活动迹象,再隔20d后,仔细统计白蚁死巢指示菌(群)数量,该数量可视为该区域单位面积黑翅土白蚁蚁巢分布密度。
根据已知危害白蚁种类制作并投放诱杀剂的防治效果稳定,比投放广谱性诱杀剂防治效果明显且对环境污染小、成本投入少。
5.2 间种柳桉监测
在监测区域或防治年度间种柳叶桉,早春伐桉后留树蔸桩,至秋季便是优良的监测器和诱杀装置,将灭蚁药喷在取食桉树蔸的白蚁体上即可达到防治目的。桉树蔸续存能力强,并可长期反复利用同时获取薪材。
6 结论与问题讨论
6.1 白蚁危害率可下降95%
该成果在湖南省森林病虫害防治总站的指导下在湖南林业用地应用40万件(平均每667m2用药30包)以上,分别筛选、验证了土白蚁属、大白蚁属和土栖白蚁3类通用型饵料及针对具体白蚁种配制的毒饵诱杀剂,防治效果均可在原被害率下降95%。
6.2 防治首选诱杀方式
挖巢、烟熏、白蚁道灌药、环蔸施药(喷粉、淋蔸)树干喷药,地针(打孔)施药都能有效防治白蚁,但以诱杀白蚁方式最优。此方式通过使用灭蚁灵0.3g与诱饵料混合制作的诱饵剂即可灭杀一巢白蚁,且最省工、省时、省钱并能适合应用于各种树木土白蚁、大白蚁蚁害,且对林地、绿地破坏最小。
6.3 对环境污染最小
使用诱杀剂防治土栖白蚁,能达到蚁巢内全部白蚁死亡的效果且防治用药总量最底,对环境污染最小,是目前环保评价较高的技术。
6.4 取材广泛
在密度较大的土栖白蚁分布地段,Eap、VHA、插田泡、蕨、PaR等植物干枯体是土栖白蚁取食的主要物质。在这些植物分布量持中、下水平时,多被白蚁取食完全,利用这些植物能成为优质诱饵料且取材广泛可变废为宝。
6.5 保质期影响防治效果
毒饵诱杀剂的防治效果受诱饵料的保质期(药效持久性)影响,在列表中的30种植物原料评价为“A”“B”(除甘蔗以外)的数10种饵料在林间的自然保持期均达20d以上。
6.6 同种植物制作成诱杀剂或诱饵影响取食量
少数植物(例如:杉木、插田泡)诱饵料经添加辅料(糖化、添加药物等)制作成诱杀剂后,会影响白蚁取食量。具体运用时参考不同试验结果选择。
参考文献
[1]李桂祥.中国白蚁及其防治[M].科学出版社,2002.
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[7]祁承经,哈勋林等.湖南种子植物总览[M].湖南科学技术出版社,2002.
篇5
1、第3集第一次出现,打碎戒指那集。
2、第4集,在舞会上遇到过。
3、第6集在后面红夫人的葬礼上出现过。
4、第10、11、12集都有出现。
5、伊丽莎白·米多福特(エリザベス·ミッドフォード ),动漫作品《黑执事》登场人物,小名莉兹(Lizzy)。
篇6
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篇7
摘要:混凝土路面改造为沥青路面是旧路改造常用的方式,俗称“白改黑”,本文以工程实例详细介绍“白改黑”旧路改造设计中应注意的细节问题和施工中的一些常见问题及处理方案。
关键词:白改黑旧路改造 ,设计与施工
Abstract: the concrete pavement transform for the asphalt pavement is old road reconstruction commonly used methods, commonly known as the "white to black", based on the engineering example detailed introduction "white to black" old road reconstruction should be paid attention to in the design of the details and the common questions and in the construction of the deal.
Keywords: white to black old road reconstruction, design and construction
水泥混凝土路面改造成沥青混凝土路面的方式具有快速、经济、环保的特点,且改造后的路面行车舒适性、美观性增强,被较多地应用于城市道路改造。把白色混凝土路面改为黑色沥青混凝土路面,该工艺克服了水泥路面的弊端,又大大节约了成本。但很多路面做完后,很快路面面层出现反射裂缝,或面层出现网裂现象,如何避免该现象出现?笔者结合了具体工程实例,论述了在设计和施工中需注意的细节,并加强施工管理,经过运营期的跟踪观察,路面上没有出现裂缝和破损,现就该路面设计及施工向大家做一简单介绍,供同行借鉴。
一、需对旧路做调查评价
沥青加铺层结构设计是在对现有水泥混凝土路面的结构性能做出正确评定的基础上进行的。对原有水泥混凝土路面状况进行调查和评价是合理进行加铺层结构设计的必要条件。其中调查的内容有旧路面的损坏情况、接缝传荷能力和板底脱空状况、旧混凝土路面结构参数等。其调查的方法和评定标准可按《公路水泥混凝土路面养护技术规范》(JTJ 073.1-2001)和《公路水泥混凝土路面设计规范》(JTG D40-2002)的规定进行。
二、某工程概况
某市政道路长约1609.96米,道路为三幅路型式,建筑红线宽50米,其中机动车道宽15米;分隔带宽2×2米;非机动车道宽2×7米,人行道宽2×8.5,机动车道为水泥混凝土路面,路面结构为22cm厚C30水泥混凝土面层+15cm12%灰土+15cm10%灰土,非机动车为沥青混凝土路面,地下管线均已按规划建成。机动车道经过10多年的使用路面整体结构破坏较轻,但局部路面出现破碎和沉陷,部分路段横向接缝破坏较为严重,宽度达到3~5cm,并出现错台现象,因此决定对该路进行大修。
三、机动车道路面结构:
在旧水泥路面上直接加铺沥青混凝土面层,形成"复合式"路面结构,为了有效防止原有路面的裂缝及横向接缝在新建的沥青混凝土路面上形成反射裂缝,在水泥混凝土路面纵缝及横向接缝处铺设1米宽土工布,在整个路面上喷洒粘层油,加铺6cm(平均厚度)AC-20中粒式沥青混凝土,满铺自粘式玻璃纤维土工格栅(强度50kN),再铺设5cm厚的AC-16中粒式改性沥青混凝土面层。
四、在设计中注重了以下几个细节:
1、路面上现有病害必须全部进行处理:a、破碎沉陷板需挖除后重新浇注新板。b、把横向接缝内的杂物全部清除,用压缩空气机吹净横向接缝灰尘,用嵌缝料(沥青玛蹄脂)将横向接缝填平。c、横向接缝之间的错台超过2cm时,必须用沥青混凝土把错台抹平,然后再铺土工布。d、局部脱空板应进行压浆处理。
2、使用铣刨机对路面进行整体铣刨,铣刨厚度原则为5mm,以达到刻痕拉毛,施工时要求把铣刨后的路面清扫干净,不允许有浮尘,防止沥青面层出现推移。
3、采用聚酯长丝经无纺针刺而成的土工布,厚1.95mm,单位面积质量140g/m²,该土工布渗透性好,可以均匀吸收沥青并达到饱和,使之与路面黏结致密,其独特的单面烧毛工艺,使土工布铺放后不致被车辆轮胎带起。施工时要求用钢丝刷清扫横向接缝两侧80cm的范围,然后铺1米土工布,铺设土工布的横向接缝两侧各60~70cm的范围内喷洒粘层油,以热溶沥青为最佳,每平方米沥青使用量1~1.2kg,沥青温度要保持150~170度之间,喷洒沥青的横向范围要比土工布宽10~20cm,喷洒均匀,土工布要随粘层油的喷洒而同时展开,纵向搭接宽度10~15cm,搭接部分的粘接料用量须为0.4升/平方米。铺设后人工及时使用铁制滚轮碾压密实,防止土工布黏结不牢,出现折皱现象,对路面连接起到反作用。
4、土工布铺设完毕后,在整个路面(包括土工布)喷洒粘层油(热溶沥青),然后摊铺AC-20中粒式沥青混凝土。施工时不要因为土工布下面喷洒了粘层油,有局部渗透,而放弃上面粘层油的喷洒,该层粘结油对基层与面层的连接起关键作用。
5、铺设自粘玻璃纤维土工格栅(强度50kN),格栅搭接长度纵向不小于20cm,横向不小于15cm,纵向搭接应根据沥青混凝土摊铺方向将前一幅置于后一幅之上,最后用胶轮压路机进行碾压,使格栅与原路表面黏结牢固。施工时要求严格控制运送沥青混凝土的车辆出入,禁止车辆在格栅层上急转向、急刹车和倾泻沥青混凝土余料,以防止对玻璃纤维土工格栅的损伤。
6、加铺沥青混凝土的厚度在10cm~13cm之间,水泥路面虽然被覆盖在沥青路面以下,如果面层太薄,旧混凝土路面的裂缝很快被反射到面层,另外,玻璃纤维土工格栅要求上面层厚度不小于4cm,设计上面层为5cm厚AC-16中粒式改性沥青混凝土,避免面层太薄出现脱落现象。
五、施工中出现的问题及处理方案:
由于设计图纸进行了严格要求,施工单位也严格按规范及规定进行了施工,也选用了正规厂家生产的材料,但在施工时仍出现了玻璃纤维土工格栅被摊铺机、车辆及行人带起的现象,格栅被带起后,摊铺面层时格栅出现皱折,如果不及时处理格栅可能会起反作用,使上面层与下层无法黏结,面层很快出现脱落。根据现场情况,设计、监理及施工单位制定了如下方案,取得了很好的效果。
1、用钉子把格栅的重要部位进行固定,虽然是自粘玻璃纤维格栅,但由于现场情况不同、机械设备和人员熟练程度不同,可能会出现局部不合格现象,采取辅助措施保证了玻璃纤维格栅的设置。
2、根据摊铺机的宽度铺设格栅,按摊铺机的宽度预留上搭接宽度即可,不要把整幅路面全部铺上格栅后再摊铺沥青混凝土,并且要求前面铺设好格栅,后面紧跟摊铺面层,避免其它车辆及行人在上面行走。
篇8
【摘要】
目的 研究survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞survivin mRNA及蛋白表达的影响。方法 人工合成survivin ASODN,脂质体介导转染人恶性黑素瘤细胞株A375,采用原位杂交、免疫组化SP法检测survivin mRNA及其蛋白表达的变化。结果 转染24 h后,ASODN组A375细胞survivin mRNA表达较对照组显著下调(P
【关键词】 survivin 恶性黑色素瘤 反义寡核苷酸
ABSTRACT: Objective To study the effects of survivin antisense oligodexynucleotide (ASODN) on the expression of survivin mRNA and its protein in human malignant melanoma cell line A375. Methods Survivin ASODN was synthesized and transfected into melanoma cell line A375 by the liposome-encapsulation. Survivin mRNA and protein were detected by in situ hybridization and immunohistochemistry, respectively. Results At 24h after the transfection, the expression of survivin mRNA was significantly lower in the ASODN group than in the control group (P
KEY WORDS: survivin; malignant melanoma; antisense oligonucleotide
Survivin是新近发现的一种结构独特的哺乳类凋亡抑制蛋白(inhibition apoptosis protein, IAP),表达于人类大多数肿瘤组织,但是在正常成人组织不表达(胸腺除外)[1],与肿瘤发生、发展及治疗抵抗密切相关。在恶性黑素瘤皮损[2]及其细胞株中[3]都存在survivin过表达。本研究以survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide, ASODN)转染体外培养的恶性黑素瘤细胞株A375,分别用原位杂交和免疫组化的方法检测人恶性黑素瘤细胞survivin mRNA表达及其蛋白水平的变化,初步探讨反义寡核苷酸的作用机制,为survivin ASODN治疗恶性黑素瘤提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
人恶性黑素瘤细胞株A375购于第四军医大学口腔生物学教研室;Oligofectamine转染试剂购自Invitrogen公司;Survivin原位杂交检测试剂盒、DAB显色试剂盒购自武汉博士德生物公司;羊抗人survivin多克隆抗体sc-8806购自Santa Cruz公司;SP免疫组织化学试剂盒购自中山生物公司。
1.2 全硫代寡核苷酸设计、合成和修饰
Survivin反义寡核苷酸序列设计参照文献[4],由18个碱基组成,序列如下:5'-TGTGCTATTCTGTGAATT-3'。寡核苷酸的合成及全硫代磷酸化修饰均由上海生工生物工程技术服务有限公司完成。
1.3 细胞培养
复苏人源性恶性黑素瘤细胞株A375,用含10 mL/L胎牛血清RPMI-1640培养基培养,2-3 d传代一次。
1.4 原位杂交测定survivin mRNA
将无菌盖玻片放入24孔培养板,以4×104 /mL浓度接种细胞,6 h后各孔分别置换为不含血清的、含ASODN的试验用培养液0.66 mL。ASODN的处理浓度设为20 μmol/L,脂质体终浓度为1 mL/L。实验分ASODN处理组和空白对照组:①ASODN处理组,即试验用培养液含20 μmol/L ASODN;②空白对照组,即不含血清的RPMI-1640培养液。在无血清条件下阻断4 h后,各孔均加入含30 mL/L胎牛血清的RPMI-1640培养液0.34 mL,继续培养24 h后,倾出培养液,40 g/L多聚甲醛固定,按试剂盒程序进行原位杂交检测。每组测定3张切片,使用HPIAS-1000彩色病理图文分析系统,随机选取每张细胞片中不相重叠的400倍视野,共计数50个细胞,进行细胞阳性程度的测定,计算每组阳性细胞的平均染色灰度值,以确定细胞中survivin mRNA的相对含量。
1.5 免疫组化测定survivin蛋白的水平
细胞接种、分组和处理方法同原位杂交。进行4 h无血清阻断,再培养48 h后,倾出培养液,冷丙酮固定,免疫组化按试剂盒程序进行。取未经复染的免疫组化染色结果进行图像分析,利用HPIAS-1000彩色病理图文分析系统,分析转染前后人恶性黑色素瘤细胞中survivin蛋白表达的相对含量,每组选取3张切片,每张切片随机选择5个高倍镜测量视野,计数50个细胞,由计算机给出平均光吸收数值。
1.6 统计学处理
数据均采用平均数加减标准差表示。应用t检验进行统计分析,显著性差异取P
2 结 果
2.1 Survivin ASODN下调A375细胞survivin mRNA的表达
光镜显示对照组阳性细胞杂交信号位于胞浆,呈颗粒状,棕黄色(图1)。ASODN处理组胞浆中杂交信号与对照组比较明显减弱(图2)。说明转染ASODN后细胞survivin mRNA的翻译受到抑制。阴性对照结果均为阴性。用图像分析系统对阳性染色的强度(灰度值)进行半定量测定,灰度值与阳性强度成反比,灰度值越小,染色越强。两组细胞所测结果如表1所示。对照组平均灰度值为109.8±12.8,而ASODN处理组为188.6±8.2,两组经独立样本t检验显示差异有统计学意义(P
2.2 Survivin ASODN降低A375细胞survivin蛋白表达的水平
免疫组化染色显示A375细胞survivin蛋白免疫阳性反应呈棕黄色,主要分布于胞浆。正常对照组阳性细胞染色较深(图3)。而survivin反义寡核苷酸在处理细胞48 h后,胞浆内染色强度明显减弱(图4),表明survivin蛋白合成受到抑制。两实验组所测细胞平均灰度值如表2所示。对照组平均灰度值为111.6±8.8,而ASODN处理组为186.0±9.3,两组经独立样本t检验显示差异有统计学意义(P
3 讨论
恶性黑素瘤对化疗等多种通过凋亡途径杀伤肿瘤细胞的治疗方法疗效均不理想。近年来利用反义核酸技术选择性地封闭与细胞增殖、凋亡及耐药密切相关的靶基因,在恶性黑素瘤研究中取得了较大进展,为恶性黑素瘤的治疗提供了新的途径。
反义寡核甘酸是一类以碱基配对原则与特定的靶互补结合的小分子量的,可扩散的寡核甘酸序列[5]。能从翻译水平、转录和核酸复制水平高度特异地抑制靶基因的翻译和表达,选择性地关闭特定的靶基因。因其具有精确的选择性和高度的特异性,而成为一项具有价值的研究工具和治疗恶性肿瘤的重要策略[6]。
Survivin在正常分化成熟的组织和肿瘤组织中差异表达使其成为肿瘤治疗理想的靶基因[7]。王颖等[8]用survivin ASODN体外经脂质体介导转染hepG2细胞,可明显降低细胞survivin表达,抑制肿瘤生长,诱导凋亡,明显增加肝癌细胞对化疗药物5-FU和DDP的敏感性,从而达到治疗的目的。我们先前的研究[3]已证实人恶性黑素瘤细胞株A375中存在survivin过表达,并对survivin ASODN转染A375细胞时ASODN及脂质体浓度及相应的细胞培养条件进行了优化选择。基于以上实验基础,本研究以survivin ASODN转染A375细胞,转染24 h后,原位杂交显示ASODN处理组A375细胞survivin mRNA的表达水平低于正常对照组。此结果与反义寡核苷酸特异性的活动机制相吻合,即通过抑制转录和降解靶mRNA,导致survivin mRNA水平降低。进一步于转染48 h后,免疫组织化学方法检测到ASODN处理细胞后survivin蛋白表达降低。印证了反义寡核苷酸通过序列特异性与靶mRNA结合,阻断了蛋白质的翻译过程,引起蛋白表达水平降低。实验间接证明了survivin ASODN经脂质体介导体外转染A375细胞是成功的,属有效转染。我们推测恶性黑素瘤中survivin过表达与恶性黑素瘤凋亡抵抗及对放化疗不敏感密切相关,体外实验survivin ASODN能诱导survivin mRNA和蛋白水平的下调,初步为survivin ASODN用于恶性黑素瘤的治疗及提高对传统治疗的敏感性提供了实验依据。
参考文献
[1]Sah NK, Khan Z, Khan GJ, et al. Structural, functional and therapeutic biology of surviving [J]. Cancer Lett, 2006, 244(2):164-171.
[2]Grossman D, McNiff JM, Li F, et al. Expression and targeting of the apoptosis inhibitor, survivin, in human melanoma [J]. J Invest Dermatol, 1999, 113(6):1076-1081.
[3]王梅,王冰,谭升顺. 反义寡核苷酸转染A375细胞实验条件的优化 [J]. 西安交通大学学报(医学版), 2007, 28(5):502-505.
[4]Olie RA, Simoes-Wust P, Baumann B, et al. A novel antisense oligonucleotide targeting survivin expression induces apoptosis and sensitizes lung cancer cells to chemotherapy [J]. Cancer Res, 2000, 60(11):2805-2809.
[5]Chan JH, Lim S, Wong WS. Antisense oligonucleotides: from design to therapeutic application [J]. Clin Exp Pharmacol Physiol, 2006, 33(5-6):533-540.
[6]Leonetti C, Zupi G. Targeting different signaling pathways with antisense oligonucleotides combination for cancer therapy [J]. Curr Pharm Des, 2007, 13(5):463-470.
篇9
Memento (2000 美国)
导演:克里斯托弗・诺兰
制片人:苏珊娜・陶德、詹妮佛・陶德
编剧:克里斯托弗・诺兰、乔纳森・诺兰
摄影师:瓦力・菲斯特
配乐:大卫・朱力安
演员:盖・皮尔斯、凯瑞-安・莫斯、乔・潘托里亚诺、罗斯・菲格、乔雅・福克斯
《记忆碎片》的电影叙事结构可谓精巧。导演诺兰通过彩色和黑白两种画面的交替、顺叙和倒叙两种叙事手法的穿插演绎出极具悬念的情节线。两条并行线索交叉,黑白的是正叙,是故事发展的前半部分,彩色的是倒叙,是事情愈演愈烈的后半部分,最后在末尾汇到一点,黑白逐渐变为彩色。它的叙述手法闻所未闻,打破了常规的简单规则,令观众手足无措,诺兰的创造力和才气显露无遗。
莱昂纳多・谢尔比(盖・皮尔斯饰)的生活只有一个目标,那就是向杀害他妻子的凶手复仇。原来,若干时日以前,正值新婚的谢尔比夫妇遭到了一名歹徒的袭击,凶犯残忍地杀害了莱昂纳多的妻子,莱昂纳多自己虽然从死亡线上挣扎了回来,却因为脑部的严重损伤而得了一种奇怪的“短期记忆丧失症”,从此他只能记住几分钟前发生的事情。尽管在警方看来,这是一起每天都会发生的普通抢劫案件,但是莱昂纳多的生活却从此被彻底改变了,不满于警方草草结案,莱昂纳多发誓要追查到凶手,替惨死的妻子报仇。可是,支离破碎的记忆却令莱昂纳多举步维艰,他只能凭借一些零碎的小东西诸如纹身、宝丽来快照等才能回忆起过去的点点滴滴,而且,每当他找到一些有价值的线索时,他必须要使用一切方法立即将之记录下来,因为很可能十几分钟后,他就根本无法记得自己在什么地方、做过什么。
篇10
高考满分作文700字一:阿锦的黑白记忆
阿锦摊开那本泛黄的相册,周边的角被岁月磨出了须线,她定定地望着里面夹的黑白照,岁月竟将它装订得如此拙劣,落下斑驳的印迹。她忍着泪,一读再读,却不得不承认,青春本就是一本太过仓促的书,唯有自爱,此生不老……
阿锦对这个世界开始有认知的时候,她就觉得这个世界挤满了黑与白的单调色彩,黑白的电视,有常年晃动的“雪花”;笨重的黑色收音机,吱吱送出美妙的音乐;还有就是父亲最珍视的全家福黑白照片,被镶嵌在精致的镜框里,挂在墙上。父亲吃力地抱着微胖的自己,欢悦地指着照片的人儿给自己辨认,阿锦眨巴着自己水汪汪的大眼睛,摇摇头,转向一旁的毛绒玩具,父亲微微嗔怒,却也无可奈何。阿锦还小,无法将家的概念一针一线的纳入她的心底,这时刻的阿锦对于黑白照的第一抹印象,尚未在她的心里撩拢出动人的涟漪,她哪里会晓得,一张小小的照片,牵绊住了往后的岁月,绊住了那颗敏感的心。
阿锦渐渐长大,她开始渴求穿上漂亮的小花裙,欢心雀跃地跑去相馆,倚在父母怀里,照上一张全家福。她嘟着嘴,卖力地摇着父亲的手臂。父亲皱了皱眉,照上一张相,就该意味着这个月的饭菜无法合乎阿锦的心意,倘若她眼泪涟涟,嚷着要吃肉的话?父亲望望撒娇的阿锦,宠溺的眼神不言而喻,他弯下腰去,搂抱起阿锦,说:好,阿爸周末带你去照相!阿锦的牙齿亮白得像一道闪电,她狡猾地笑着,这世上最爱自己的人,愿意摘下最美星星给自己。那个周末,阿锦如愿拍下自己想要的全家福,她的笑靥如花,被定格在那个黑白岁月,即使日子艰苦,父母们愿付出一切去爱她的岁月。
日子一天天过去,阿锦渐渐长高,父亲的背更驼,母亲眼角的皱纹也愈深,可不变是,每一年,父亲总要全家去照相馆照上一张全家福。阿锦的眼里色彩日渐丰富,黑白的照片也逐渐褪去它夺目的光彩,被一沓沓的彩色照片替代,可阿锦分明看见,父亲粗糙的双手,抚摸黑白全家福的专注与慈爱。
记忆站在一米外的光阴,朝阿锦点头微笑,阿锦轻轻合上相册,眼里顿时起了雾气,她觉得那泛黄的陈旧的黑白相册,装载着那么多的黑白记忆,却是明晃晃的耀眼,时代永远会变,可有一些东西,却固若金汤地躺在自己的心房,只待岁月静好!
高考满分作文700字二:数码时代,珍存点滴
家中有不少老照片。
最古老的一张是属于妈妈的奶奶的,也就是我的外曾祖母的。她一脸安详地面对镜头,黑白照片略微泛黄,却丝毫无损于她的雍容气度。每当母亲提起她时,总有十分的崇敬。在那物质匮乏的年代,她从香港给家里捎回了不少好东西。母亲一脸自豪地叙说着家里拥有全村第一台黑白电视机、引来晚上全村人的大集会的故事。诸如此类的尘封往事总能带来一段温馨的记忆,当然还有那逝去的伤痛。她的照片不多,屡次搬家之后便只剩下这张了,我们的万千思绪,便全由这照片来承托。
我还见到过父母的婚纱照,寥寥几张,或是深情的凝望,或是相爱的依偎。甫一翻开,那爱意与幸福总能触动我的心弦。当然还有我刚出生时在父亲怀中的笑脸,那时父亲两鬓尚未斑白,模样正值年青。这些照片都被父母装裱起来,仔细珍藏。每当父母从照片下经过,我常能看见他们沉浸于记忆中的甜蜜微笑。
然而,时代的脚步却总不会留恋畴昔。生产胶卷的柯达早已倒闭,CMOS感光元件与不断扩充的储存卡为海量拍摄提供保障。或许在从前,我们还要细细取景,不想浪费手中的胶卷。而今,我们只须轻按快门,“咔嚓”便是一张。有时候嫌一张不好,便有事没事多拍几张,说是多留点纪念,其实最后都丢进了记忆的垃圾箱。而今我们每次出游归来,把单反里10多个G的相片复制到电脑上,接下来便是三个字:删、删、删。又或是空闲时,翻看手机上动辄成百上千张照片,大多都不记得自己当初在干什么,于是兴味索然,无心观看。
有人说,这是因为照片太多,在浩茫的照片之海中稀释了本应珍存的生活记忆。此话的确有道理,我们随手一拍,大多是日常琐事,拍完就忘。在照片中找记忆,再也不是先前的把玩珍珠了,而成了沙里淘金的苦差事。
说到底,这便是数码时代人与信息的困局。人生也有涯,而信息也无涯,我们不断地加快脚步,想要接住扑面而来的更多信息,比如照片。殊不知,这会应了庄生两千年前的谶语:“以有涯随无涯,殆已。”在快节奏的社会生活中,我们已经无法停住自己的脚步,回望生活的点滴。生活的美好记忆,便是道旁串串遗落的珍珠,弃掷逦迤。为什么不停下来,看一看,再出发?
在数码时代,我们本应有更好的技术条件,去记录自己生活的点滴。为何不将这些生活的沙子放进蚌壳,结成令人惊艳的珍珠?数码时代,我们更应该珍存生活的点滴,让这点滴的记忆相伴一生。
高考满分作文700字三:藤蔓,人生,懂得放下
麻纸粗糙的纹理带着原始树木的粗犷,香火味和着纸张燃烧的味道仿佛是从远古吹来的风,带着厚重呛鼻的气息,灰烬升腾,摇曳,又无力委落在尘埃里。瞳跪在满是荒草的墓前,按下手机上单曲循环键,低吟浅唱的越剧缓缓溢出,不知不觉,她也跟着哼唱起来,寂寥而落寞。
每个人的喉头都卡着一根鱼刺,那是一种咽不下去又无法言语的痛,只得等着岁月这味陈醋的浸泡,慢慢软化。瞳的那根。鱼刺”却坚硬而固执,母亲便是她一生的心痛。
十年前。小镇总被薄雾所包裹,一切都朦朦胧胧,看不真切。发黑的乌蓬船靠在岸边,昏黄的灯沿着河流一路闪烁,瞳撑着一把泛黄的油纸伞,趿拉着雨鞋走在回家的路上,青石板上的苔藓几次让她险些滑倒,屋檐将天空割裂成不规则形状,指尖所触及的墙体,片片剥离,逢着.丁香般的姑娘”,瞳在心中自嘲了一下,只有为生计而忙碌的.侏儒”。她恨透了这样的天气,心想:诗人真是矫情。远远地,母亲轻唤:.囡囡回来了,头发有没有湿,有没有着凉……”一串的询问打断了瞳的沉思,抬头便望见,母亲斜倚在厚重的木门上,古朴精致的木簪将发轻轻束起,嘴角噙着几丝温暖人心的笑,周身总是散发着江南女子所特有的温润与体贴,这薄薄的雾更是平添了一份美人如花隔云端的诗意。
“嗯,没有”。瞳冷冷的回答。我给你熬了碗姜汤,喝了暖暖身子”。“不用了。”
屋内又是死水一般的沉寂,母亲放上磁带,坐在一旁静静聆听越剧,手不断揉着膝盖,捶着肩膀,江南潮湿的气候使母亲早早患上了风湿,梅雨天气里,又犯的紧。童起身原本去帮母亲捶肩,身子顿了顿,抬手关了录音机。.嗞嗞,嗞嗞”声在空气里颤动,童望着窗外,一字一句缓缓的说:.学校填志愿表,我填了北方的一所学校。”母亲猛地停了手中的动作,停在半空的手,紧紧握成了拳头,几乎用恳求的语气说道:.为什么去那么远呢,填省内的吧,你可以多回家看看那我也可以照顾你啊……”.我想去!”她不想再听下去,仅仅用这三个字就让母亲从今往后只字未提。
瞳如愿以偿,到了心心念念的北方。她爱晃得人眼疼的蓝天,爱北方姑娘的豪爽与洒脱,艾沙漠瑰丽奇绝似火晚霞,爱明媚阳光渗进骨骼,爱冬日大雪纷飞,明艳的红和金色调占据整个眼球,她疯狂的想要忘记一切有关潮湿气味的记忆,包括母亲与那绵软越剧,撞击耳膜的一直是嘹亮的秦腔,这才是最惬意的生活。她自私的活着,贪恋这样的人生。以致四年大学毕业后,仍固执决定留在北方。
母亲一人守着江南的老房子,望着大门前奔跑嬉戏的的幼童,几十年如一日的断桥。六年匆匆而过,瞳与母亲的见面只限于参加婚礼那次,平日的嘘寒问暖。.囡囡,以后想干什么就随心而做,快乐就好,不要被太多的事牵绊……”母亲这次絮絮叨叨说了很多。可也成了最后一次说这么多的话。
她跪在墓前,感觉失去了整个世界,明明最讨厌的是呢喃似的软语,明明最可有可无的是母亲,明明一切的一切都按自己的想法完美到了极致,可这一刻,心好像被掏空了,空洞洞的,这下自己真正成了孤儿。