望尘莫及范文
时间：2023-04-06 07:51:17
导语：如何才能写好一篇望尘莫及，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
自2000年开始，由日本里原宿街头文化所延伸出的潮流风潮席卷全球，而复古元素作为这其中最具分量的组成部分，自然也吸引了无数年轻人对此趋之若骛。一时间，那些之前甚至快被人们遗忘了的复古Sneaker纷纷披上全新的外衣再一次闪亮登场。而Air Force 1则无疑是这些球鞋中最具吸引力的。
来自日本的著名Sneaker文化推手，著名Sneaker店铺Atmos的主理人Hommyo在回忆复古风潮最初开始风靡的那段时间时，也曾清楚的记得众人对于Air Force 1的喜爱――大概是在2000年左右，里原宿包括全日本越来越多的年轻人开始脱下Air Max的跑鞋，到处找寻上世纪七八十年代的鞋款，一些售卖二手服饰的古著店也因此而开始火爆。我当时有一个预感，Air Force 1和Dunk等球鞋肯定会是大家的终极目标，因而我开始联系在美国的伙伴，托他们在美国寻找，我甚至亲自去了美国无数次，开着车到美国的多个城市找寻。在一些小的城市里，还看到他们有很多那时库存的球鞋。于是不管有多少，我们都买下来再带回日本，但每一次都是供不应求，以至于我不得不在日本和美国之间往返。再后来，美国的复古风也开始了，但其实美国的Hip-Hop潮流里Air Force 1一直都有着很高的地位。所以找寻这些球鞋变得越来越难，所以我们开始联系Nike的日本分公司，要求他们复刻这些过去，的球鞋。”
不过复古风潮其实仅仅是Air Force 1再一次流行的原因之一。正如Hommyo所说的那样，在美国的街头潮流中，Air Force 1一直都有着无可取代的地位，这不仅和之前我们所介绍的那些球星以及街头篮球选手有关，更与那些来自美国黑人区的年轻人密不可分。而这些年轻人中，除了其中的一些在篮球领域拥有者巨大的成就，更有人在音乐和其他流行艺术领域，有着非比寻常的过人之处。这其中就包括了JAY-Z、Kanye West等如今叱咤全球音乐界的天王级人物。而在这些代表者的身后，不仅有着那些追随他们的铁杆Fans，还有着不计其数来自街头的孩子，他们从小就深受Hip―Hop文化的影响，Air Force 1一直就是他们生活的一部分。如今号称“Air Force 1之王”的DJ克拉克肯特就是其中的代表
从9岁就开始热爱Sneaker文化的他，从小就开始靠给邻居家打零工赚取买球鞋所需的资金，从Pro-Kids到PUMA等等球鞋伴随着他的孩童时光，而直到1982年Air Force 1的出现，自此他再也没有穿过别的球鞋。而这位如今已经拥有数千双Air Force 1的收藏家，在成名之后经常拿出自己的球鞋用作慈善，捐献给其他来自黑人社区的孩子。类似的例子不计其数，在这种潜移默化的影响熏陶下，Air Force 1所承载的，俨然已不仅仅是一双球鞋那么简单――一种来自美国黑人街头文化最独一无二的精神与气质，透过21世纪以来最炙手可热的Hip―Hop音乐传播到地球的每一个角落。人们争相模仿这些明星和潮流ICON们的装扮，而Air Force 1则是搭配中最重要的部分。与此同时，Nike自身也开始发掘这些球鞋和流行文化之间的微妙联系，进入21世纪以来，一双又一双的限量别注款Air Force 1开始出现，稀少的数量加上有别于普通版本的配色或细节，开始成为热爱潮流的人们仅仅乐道的话题。在这些人之中就包括，如今在亚洲潮流界呼风唤雨的“里原宿潮流教父”藤原浩、香港明星陈冠希等等，而通过这些潮流精英们的影响力，Air Force 1开始受到越来越多普通人的喜爱。这也成就了Air Force 1令其他复古鞋款所望尘莫及的巨大影响力。
篇2
【关键词】 储层 层序地层学 沉积微相 沉积模式 剩余油
萨北开发区Ⅰ类储层河道发育规模大、平面及垂向切叠严重、砂体内部构型复杂，Ⅱ类储层微相类型多样、相变复杂，Ⅲ类储层的成因需进一步明确。针对研究区储层特征，应用“储层层次分析和模式预测”[1，2]砂体解剖方法对各类储层进行研究，实现成因单砂体时间单元精细对比；完成了Ⅰ、Ⅱ类储层单砂体识别，Ⅲ类储层沉积微相厘定，提高了各类储层预测精度，并在此基础上，按河道砂体形成过程和离湖岸线的远近建立Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类储层沉积模式。
1 区域概况
萨北开发区位于松辽盆地大庆长垣萨尔图构造北部，储层属河流～三角洲沉积体系，主要分青一段～姚一段沉积时期的湖退进积三角洲沉积、姚一段～嫩一、二段沉积时期的湖进退积三角洲两个沉积阶段。发育萨尔图、葡萄花、高台子三套油层，可进一步细分为8个油层组，35个砂岩组，118个沉积单元。
2 沉积模式分析
2.1 剖面精细对比方法
经过研究区1546口井系统对比分析，按照“旋回对比、分级控制、不同相带区别对待”[3]的原则，提出了“封闭骨架剖面控制对比、标准层控制大套地层对比、标志层组合对比、特征岩性组合对比、标准层逼近控制对比、沉积模式指导对比”的储层综合对比方法，解决了各类储层复杂的油层对比问题。
2.2 平面沉积微相类型
研究区河流相可划分为点坝、心滩，废弃河道、天然堤、溢岸薄层砂、河道间泥、决口水道、决口扇8种微相[4]；三角洲相可划分为分流平原、三角洲前缘2种亚相。三角洲分流平原又可进一部划分出分流河道、废弃河道、天然堤、溢岸薄层砂、河道间泥、决口水道、决口扇7种微相；三角洲前缘亚相可划分出水下分流河道、水下漫流薄层砂、水下分流间湾微相、河口坝4种微相。
2.3 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类储层沉积模式
2.3.1 Ⅰ类储层沉积模式
（1）泛滥平原相的辫状河砂体沉积模式：主要发育于PI3沉积单元，该时期河流能量强，物源供给充足，以垂向加积为主。主要微相为心滩和辫状水道。心滩以纵向坝、斜列坝为主，坝长一般250-400m，宽150-250m；辫状水道宽度在400m-600m，厚度4-7m。
（2）泛滥平原相的曲流河砂体沉积模式：主要发育于PI2沉积单元，该时期河流侧向迁移频繁，多期单一河道侧向切叠。废弃河道发育，但保存不完整，多呈新月状、半圆状。单一河道砂体宽度一般大于500m，砂体总厚度4-7m。
2.3.2 Ⅱ类储层沉积模式
Ⅱ类储层属三角洲分流平原亚相，按其离湖岸线的远近分为远、中、近岸水上分流河道砂体沉积3种沉积模式（图1）。
（1）远岸水上分流河道沉砂体沉积模式：河道的侧向切叠能力相对曲流河变弱，单一河道继承性近南北向展布[5]。废弃河道、点坝发育，且废弃河道保存完整。单一河道砂体宽度一般大于300m，垂向上砂体厚度为2～6m。
（2）中岸水上分流河道砂体沉积模式：仍以河流作用为主控因素，河流的侧向迁移能力进一步变弱，废弃河道相对不发育，河道两侧伴生溢岸薄层砂。单一河道砂体宽度在300～600m，垂向上砂体厚度2～4m。
（3）近岸水上分流河道砂体沉积模式：由于湖岸线来回摆动，河流和湖泊沉积作用兼具，但以水上河道为主控因素。废弃河道基本不发育，河道规模较小，以道间泥规模较大为特点。中-小型河道砂体宽度为150～300m，垂向上砂体厚度为2～4m。
2.3.3 Ⅲ类储层沉积模式
Ⅲ类储属于三角洲前缘亚相沉积，按其离湖岸线的远近也可细分为近、中、远岸水下分流河道砂体及三角洲外前缘席状砂沉积4种沉积模式（图2）。
（1）近岸水下分流河道砂体沉积模式：仍以河道为主控因素，多发育呈枝状、窄条状小型水下分流河道，河道两侧发育大面积泥粉和泥质。河道砂体宽度小于150m，厚度为1.5～3m。
（2）中岸水下分流河道砂体沉积模式：处于浅湖-半深湖沉积环境，湖浪改造能力进一步增强，以窄小型水下分流河道及席状砂为主要沉积类型，分流间泥不发育。河道砂体宽度小于100m，厚度为1～2m。
（3）远岸水下分流河道沉砂体沉积模式：处于水下半深湖沉积环境，以特小型水下分流河道及席状砂为主要沉积类型，砂体在平面上多呈窄条状、串珠状或透镜状分布。河道砂体宽度小于80m，垂向上砂体厚度为0.8～2m。
（4）三角洲外前缘亚相席状砂沉积模式：水体进一步加深至水下半深湖—深湖沉积环境，河流携带的泥沙被湖浪改造成大片的席状砂，同时伴随席内缘、席外缘、席间泥，以席状、片状、破席状形态分布。
3 沉积模式与储层非均质性及剩余油分布关系
3.1 Ⅰ类储层
（1）辫状河由于河道下切，多级韵律变化造成砂体内部水平隔层发育，剩余油在剖面上主要分布于物性相对变差的部位，平面上分布于河道边部相对薄砂体或局部物性变差的部位。
（2）曲流河剩余油分布受点砂坝非均质性控制，侧积体底部局部连通，中上部被泥质所分隔，剩余油一般分布在储层物性变差的厚油层顶部。
3.2 Ⅱ类储层
水上分流河道及河道带为高渗带，分流河道间为低渗带。废弃河道和道间泥是控制剩余油分布的关键因素，剩余油多形成于由两者所形成的注采不完善区。
3.3 Ⅲ类储层
河道砂体泥质含量高，物性较差，非均质性强；加之河道窄小，大面积的席状砂分布，剩余油主要以井网控制不住型、注采不完善型存在。
4 结语
（1）综合研究提出了“封闭骨架剖面控制对比、标准层控制大套地层对比、标志层组合对比、特征岩性组合对比、标准层逼近控制对比、沉积模式指导对比”一套河流——三角洲相储层综合对比方法，建立全区等时高分辨率层序地层对比格架。
（2）研究区识别出2种相6种亚相和19种微相模式，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类储层共发育9种沉积模式。
（3）确定了各沉积单元沉积时期的沉积环境与沉积模式的对应关系。
参考文献：
[1]邹才能，池英柳，李明，等.陆相层序地层学分析技术——油气勘探工业化应用指南[M].北京：石油工业出版社，2004.
[2]赵翰卿，付志国，吕晓光.储集层层次分析和模式预测描述法[J].大庆石油地质与开发，2004，23（5）：77
[3]赵翰卿，付志国，吕晓光.大型河流——三角洲沉积储集层精细描述方法[J].沉积学报，2000，21（4）：109-113.
篇3
【摘要】
目的 探讨化学合成小干涉RNA（siRNA）对EpsteinBarr病毒（EBV）潜伏膜蛋白1（LMP1）阳性胃上皮（GT38）细胞LMP1编码基因表达的抑制作用，以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法 化学合成靶向LMP1 mRNA不同位点的3对siRNA，分别转染GT38细胞，选择干扰效果最佳的siRNA进行实验研究，行RTPCR、Hochest 33258荧光染色及流式细胞术分析。结果 RTPCR结果显示，3对靶向LMP1的siRNA均能抑制GT38细胞LMP1的转录表达，以靶向LMP1 mRNA 649位点的siRNA作用效果最强。Hochest 33258荧光染色可见siRNA649作用后的GT38细胞发生凋亡。流式细胞分析显示，siRNA649作用24、72以及120 h后的细胞其细胞周期无明显改变。RTPCR检测结果表明，转染siRNA649的靶细胞Bcl2的表达水平降低。结论 靶向LMP1的特异性siRNA可以有效抑制LMP1的转录表达，进而可能通过抑制Bcl2的表达诱导靶细胞凋亡。GT38细胞系可作为研究LMP1生物活性及其在EBV相关肿瘤发生中所起作用的理想的靶细胞。
【关键词】 EpsteinBarr病毒 潜伏膜蛋白1 RNA干扰 小干涉RNA 细胞凋亡
［ABSTRACT］ Objective To explore the relationship between specific silencing effect of siRNA that targets latent membrane protein 1 (LMP1) coding gene on the proliferation and apoptosis of EBV positive gastric epithelium cells. Methods The chemically synthetic siRNA targeting LMP1 was transfected into target cells，then RTPCR， Hochest 33258 staining and flow cytometry were used to detect apoptosis and cell cycle of target cells，respectively. Results RTPCR showed that siRNAs markedly inhibited the expression of LMP1 in target cells，and the effect of siRNA649 was most obvious. Apoptosis was observed in target cells transfected by siRNA649 with Hochest 33258 staining. A flow cytometry analysis showed no obvious discrepancy after 24， 72 and 120 h of transfection of siRNA649. RTPCR showed that siRNA649 inhibited the expression of Bcl2 in target cells. ConclusionChemically synthetic siRNA targeting LMP1 gene could effectively silence the expression of LMP1. Then it may though suppressing the expression of Bcl2 lead target cells apoptosis. This cell line can be used as a good target cell to explore LMP1 bioactivity and its effect in oncogenesis of EBV correlated tumors.
［KEY WORDS］ EpsteinBarr virus; Latent membrane protein 1; RNA interference; siRNA; Apoptosis
EB病毒(EpsteinBarr virus，EBV) 是重要的DNA肿瘤病毒，该病毒与鼻咽癌(NPC)、Burkitt淋巴瘤(BL)、胃癌(GC)等多种肿瘤的发生有关[1]。在EBV编码基因中，潜伏膜蛋白1（LMP1）编码基因已被确认具有癌基因的功能[2]。近年来的研究结果表明，LMP1具有介导细胞增殖、抑制细胞凋亡的功能；LMP1表达还可抑制细胞分化，与鼻咽癌的低分化有关，并能促进肿瘤的侵袭和转移[3～6]。小干涉RNA（siRNA）能高效、特异地阻断体内特定基因的表达，诱使细胞表现出特定基因缺失表型。本研究选择EBV阳性胃上皮（GT38）细胞作为靶细胞，采用人工合成的siRNA特异性阻断LMP1的表达，检测LMP1沉默对GT38增殖和凋亡的影响，旨在探讨LMP1在EBV相关肿瘤发生发展中的分子机制，为EBV相关肿瘤的生物治疗提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 主要试剂 DMEM培养基、胎牛血清以及OPTIMEM I培养基均购自美国GIBco公司。LipofectamineTM2000和TRIzol均购自Invitrogen公司。逆转录试剂盒购自美国Promega公司。碘化丙啶(PI)、Hochest 33258购自美国Sigma公司。
1.1.2 靶细胞 EBV阳性GT38细胞由日本鸟取大学医学部生体情报学教室西连寺刚教授惠赠，用作该实验的靶细胞。
1.2 实验方法
1.2.1 靶向LMP1基因寡核苷酸的设计 本文靶向LMP1基因的siRNA、荧光标记的siRNA（FAMsiRNA）以及非特异性siRNA，均由广州锐博生物科技有限公司合成。经过Blast确定靶向LMP1基因siRNA的特异性及非特异性siRNA与人的mRNA无同源性。序列见表1。
表1 siRNA序列货号LMP1靶向位点（略）
1.2.2 siRNA转染效率的检测 将GT38细胞接种于24孔细胞培养板中，待细胞生长至30％～50％汇合时，采用脂质体法分别以20、30、50、80和100 nmol/L终浓度的FAMsiRNA在OPTIMEM I培养基中转染细胞，在37 ℃，体积分数0.05的CO2培养箱中培养6～8 h后，更换为含体积分数为0.10的胎牛血清不含双抗的培养基。转染12 h内用倒置荧光显微镜检测转染效率，转染效率=荧光细胞的数量/相同视野下的细胞总数×100％。靶向LMP1的siRNA和非特异siRNA的转染方法与FAMsiRNA的转染方法相同。
1.2.3 半定量RTPCR检测LMP1、Bcl2、Bax mRNA转录水平 将特异性siRNA以50 nmol/L终浓度分别转染GT38细胞，分别于转染后24、48和72 h收集细胞，TRIzol一步法提取细胞总RNA。按照逆转录试剂盒要求的标准条件合成cDNA用作PCR模板。扩增LMP1、Bcl2、Bax基因和内参照基因GAPDH的引物参照文献[7，8]设计，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，扩增产物分别为490、318、257和450 bp。PCR扩增产物于含溴化乙锭（0.5 mg/L）的15 g/L琼脂糖凝胶中电泳，凝胶成像系统分析电泳结果。
1.2.4 Hochest 33258染色实验 将无菌玻片置于6孔板内，接种GT38细胞37 ℃培养至细胞汇合度约为40％时，以20和50 nmol/L终浓度siRNA转染，同时设非特异性对照组及细胞对照组，置于37 ℃体积分数0.05的CO2培养箱中培养48 h。取出盖玻片用PBS洗净，加0.5 mL固定液(甲醇∶冰醋酸=3∶1)4 ℃固定5 min，去固定液，用PBS冲洗2次，加终浓度5 mg/L的Hochest 33258避光染色10 min，PBS漂洗后封片，荧光显微镜观察。
1.2.5 流式细胞分析 收集转染siRNA后24、72和120 h的GT38细胞以及细胞对照，制备单细胞悬液，PBS洗2次，调整细胞浓度为5×109/L，加体积分数0.70冷乙醇4 ℃固定24 h以上。PBS洗2次除尽乙醇，300目不锈钢细胞筛过滤去除细胞团块，加RNase至终浓度0.5 g/L，PI染液至终浓度50 mg/L，暗室孵育30 min，流式细胞仪检测分析。
1.2.6 统计学方法 实验数据采用SPSS 11.5软件，统计处理以3次重复实验测定值的±s表示，组间比较用方差分析，P
2 结果
2.1 siRNA转染效率的检测
FAMsiRNA转染GT38细胞后12 h各浓度组在荧光显微镜下均可观察到细胞内有点状绿色荧光出现，表明转染成功。随机计数5个视野下的细胞数量，计算转染效率，取3次实验的平均值。20、30、50、80和100 nmol/L终浓度siRNA转染效率分别为40.2%、47.9%、90.3%、90.4%和89.7%。表明当siRNA终浓度为50、80和100 nmol/L时转染效率较高，因此，实验中选用50 nmol/L浓度siRNA转染GT38细胞。
2.2 不同siRNA对LMP1 mRNA转录表达影响
选用50 nmol/L终浓度siRNA转染GT38细胞，转染48 h后LMP1 mRNA表达量均有不同程度下降，RTPCR检测结果见图1。统计分析结果显示，转染非特异性siRNA组LMP1/GAPDH为0.51±0.03，转染siRNA649组LMP1/GAPDH为0.09±0.00，转染siRNA979组LMP1/GAPDH为0.31±0.02，转染siRNA1348组LMP1/GAPDH为0.43±0.02。与转染非特异性siRNA的细胞相比，siRNA649、siRNA979和siRNA1348对靶细胞LMP1的表达均具有明显抑制作用，差异有统计学意义（F=235.99，P
2.3 siRNA649对LMP1 mRNA表达影响的时效关系
选用50 nmol/L终浓度siRNA649转染GT38细胞，RTPCR检测LMP1 mRNA的转录表达。电泳结果显示，与细胞对照比较，转染后24、48和72 h对GT38细胞LMP1的转录表达均有抑制作用，结果见图2。统计学分析结果显示，siRNA64924 h组LMP1/GAPDH为0.32±0.03，siRNA64948 h组LMP1/GAPDH为0.08±0.02，siRNA64972 h组LMP1/GAPDH为0.15±0.06，GT38细胞对照组LMP1/GAPDH为0.77±0.09。转染后24、48和72 h时LMP1 mRNA的转录水平均明显低于细胞对照组，差异有显著性（F=89.93，P
2.4 Hochest 33258染色观察细胞凋亡
采用Hochest 33258荧光染料对活细胞进行染色，在波长为365 nm荧光显微镜下观察，可见对照组细胞核呈均匀淡蓝色的椭圆形或圆形，边界清晰。20和50 nmol/L浓度siRNA649作用48 h后均能观察到具有典型凋亡特征的GT38细胞，细胞核呈亮蓝色的半月形、马蹄形，边界清晰，出现凋亡细胞染色质的边集、核浓缩或聚集现象；有的细胞核则呈3个或3个以上的荧光碎块，结果见图3。各组分别随机计数200个细胞，20 nmol/L终浓度转染组出现凋亡细胞数较少为20%（40/200），50 nmol/L组凋亡细胞占30%（60/200）。
2.5 流式细胞分析
收集50 nmol/L终浓度siRNA649转染后24、72和120 h的细胞以及细胞对照，流式分析细胞周期。参考文献[9]计算细胞增殖指数(PI)：PI=(S+G2)/(G1+S+G2)×100％。统计学分析结果显示，各组间差异无显著性（F=5.71，P>0.05），说明本实验中siRNA649对GT38细胞的周期无明显影响。见表2。
表2 各组转染siRNA649后不同时间的PI比较（略）
2.6 siRNA649对Bcl2和Bax mRNA表达影响
选用50 nmol/L终浓度siRNA649转染GT38细胞，分别于转染后24、48和72 h时提取各组细胞总RNA，RTPCR检测Bcl2、Bax mRNA的转录表达。电泳结果显示，与细胞对照比较，转染后24、48和72 h对GT38细胞Bcl2的转录表达均有抑制作用，而对Bax的转录表达无明显影响，Bcl2/Bax降低。统计学分析结果显示，GT38细胞对照组Bcl2/Bax为4.61±1.94，siRNA64924 h组Bcl2/Bax为0.56±0.51，siRNA64948 h组Bcl2/Bax为1.23±0.91，siRNA64972 h组Bcl2/Bax为1.77±1.48。转染后24、48和72 h时Bcl2/Bax mRNA的转录水平均明显低于细胞对照组（F=5.45，P
3 讨论
研究结果表明，LMP1编码基因是EBV永生化基因中唯一能够转化体外培养的人和啮齿类动物细胞并使之具有致瘤性的基因[10]。除转化B细胞外，LMP1还可在体外转化哺乳动物纤维母细胞和人角质细胞，抑制人上皮细胞的分化，诱导表皮生长因子受体的表达等，从而表明LMP1在非淋巴细胞肿瘤的发病中具有重要作用，是公认的EBV致癌基因。LMP1和细胞信号传递密切相关，研究证实LMP1 可以通过多种途径抑制细胞凋亡[11]，参与EBV相关的肿瘤发生。因此，如何通过干扰LMP1基因表达以诱导EBV阳性肿瘤细胞凋亡或降低其恶性程度成为EBV相关肿瘤研究的热点。大多数研究结果表明，EBV相关胃癌（EBVaGC）不表达LMP1，只有个别研究在部分EBVaGC组织中检测到LMP1的表达[12]。本研究选择的靶细胞GT38是TAJIMA等[13]于1998年从1名69岁中分化胃腺癌病人的癌旁组织中分离建立的细胞系，能使SCID小鼠致瘤[14]。该细胞CD19和CD3分子均为阴性，而细胞角蛋白阳性，表明其为上皮来源。与大多数EBVaGC组织中LMP1不表达不同，EBV在GT38细胞中为Ⅲ型潜伏状态，能够稳定地表达LMP1、EBNA1和EBNA2；且GT38细胞为贴壁生长的上皮细胞，易采用脂质体法进行转染，实验操作简便。
本实验采用脂质体法转染不同浓度荧光标记的阴性对照siRNA以确定转染效率，结果显示，各浓度组细胞内均可观察到绿色荧光，转染效率在20～50 nmol/L范围呈浓度依赖性增高，当siRNA浓度大于50 nmol/L时转染效率无明显变化。考虑到荧光淬灭、进入细胞siRNA量少等因素，可能还有部分成功转染的细胞未能观察到荧光，推测实际转染效率应高于检测值，提示脂质体适用于人工合成siRNA对GT38细胞的转染。 我们根据LMP1基因的不同区域，设计3组不同的siRNA，从而验证不同的区域是否对siRNA介导的降解更为敏感，采用RTPCR检测LMP1的转录表达来评价沉默效应。研究结果显示，3对人工合成的siRNA均能特异性沉默LMP1的转录表达，干扰作用具有特异性，其中以靶序列位于LMP1重要功能区（第四功能区内）的siRNA 649干扰作用最为明显，说明针对功能区设计的siRNA更能有效地沉默靶基因。转染后24 h即检测到靶基因mRNA转录水平的下降，48 h时siRNA的抑制作用最强，有效阻抑时间可持续72 h，分析与siRNA降解及细胞增殖导致siRNA绝对浓度下降有关。
图1 不同序列siRNA对LMP1 mRNA转录表达的影响（略）
①PCR Marker DL2000，②、③转染非特异性siRNA 48 h后LMP1 mRNA和GAPDH mRNA表达，④、⑤转染siRNA649 48 h后LMP1 mRNA和GAPDH mRNA的表达，⑥、⑦转染siRNA979 48 h后LMP1 mRNA和GAPDH mRNA的表达，⑧、⑨转染siRNA1348 48 h后LMP1 mRNA和GAPDH mRNA的表达
图2 转染siRNA649后不同时间对LMP1 mRNA表达的影响 （略）
①、②转染siRNA649 24 h后LMP1 mRNA和GAPDH mRNA的表达，③、④转染siRNA649 48 h后LMP1 mRNA和GAPDH mRNA表达，⑤、⑥转染siRNA649 72 h后LMP1 mRNA和GAPDH mRNA表达，⑦细胞对照LMP1 mRNA表达，⑧细胞对照GAPDH mRNA， ⑨PCR Marker DL2000
图3 靶细胞的Hochest 33258染色结果（略）
A：对照组GT38细胞，B：50 nmol/L终浓度转染siRNA649后的GT38细胞(×400)
图4 转染siRNA649后不同时间Bcl2、Bax mRNA 表达变化（略）
①PCR Marker DL2000， ②GT38细胞对照中Bcl2 mRNA的表达，③～⑤分别为转染siRNA649 24、48、72 h后Bcl2 mRNA的表达，⑥GT38细胞对照中GAPDH mRNA表达， ⑦～⑨分别为转染siRNA649 24、48、72 h后GAPDH mRNA的表达，⑩GT38细胞对照中Bax mRNA的表达，～转染siRNA649 24、48、72 h后Bax mRNA的表达
细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为3期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状或呈折缝样，部分染色质出现浓缩状态；Ⅱ期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；Ⅲ期的细胞核裂解为碎块，形成凋亡小体。在转染特异性siRNA的细胞中同时存在这3期表现，而对照组细胞染色均匀，表明siRNA可诱导细胞发生凋亡。
典型的细胞周期包括有严格顺序的4个期，即G1期(DNA合成前期)S期(DNA合成期)G2期(DNA合成后期)M期(分裂期)；细胞的DNA合成和有丝分裂期是细胞增殖的两个重要指标，两者之和称为增殖指数。G1S期的调控点称“启动点”或限制点，位于G1期末，DNA合成的起始。有学者研究发现，与肿瘤发生密切相关的细胞周期缺陷主要发生在细胞周期限制点及G1期DNA损伤检查点，尤其以G1S的调控更为重要[15]。本研究结果显示，siRNA649作用不同时间后的细胞增殖指数无明显改变，原因可能是各期细胞的多少只代表细胞停留在这一时相的时间长短，并不真正代表进入细胞增殖周期的细胞数量。因此，LMP1基因沉默对GT38细胞周期的影响仍需进一步探讨。LMP1能够介导功能不同甚至功能相反的基因表达，LMP1介导的基因表达与其表达持续时间和表达水平相关，不同表达水平和不同表达时间介导的基因表达谱不同；在不同细胞、不同条件下，LMP1具有促进细胞凋亡和抑制细胞凋亡的双重生物学效应[16]。有研究结果表明，LMP1表达可通过上调Bcl2的作用而抑制人B淋巴细胞的凋亡[17]。刘克拉等[18]的研究则显示，人鼻咽癌组织中的LMP1与Bcl2的表达无相关性，Bcl2的表达也不能抑制鼻咽癌细胞凋亡。另有研究显示，多数组织表达少量的Bcl2，其表达水平在不同的细胞及组织不同。例如，在皮肤和黏膜组织中，基底细胞和黏膜干细胞表达Bcl2，而位于表面的细胞极少甚至不表达；结直肠黏膜在生理范围内表达高水平的Bcl2，但胃黏膜几乎检测不到Bcl2的表达。
Bcl2和Bax同属于Bcl2蛋白家族，分别具有抑制和促进细胞凋亡功能，在细胞凋亡的调控发生中发挥重要的调节作用。分布于线粒体外膜上的Bcl2蛋白通过稳定线粒体膜，防止线粒体内促凋亡相关蛋白泄漏至胞质及阻断Ca2+从内质网释放，使依赖Ca2+的核酸内切酶活性降低等途径阻断细胞凋亡[19]。Bax是Bcl2基因家族中的细胞凋亡促进基因，具有抑制Bcl2、进而促进细胞凋亡的作用。目前认为 Bax和Bcl2通过形成同源或异源二聚体来调节细胞凋亡：当Bax形成同源二聚体时诱导细胞凋亡；Bax与Bcl2形成异源二聚体时则抑制细胞凋亡。本研究表明，在具有恶性性质的胃上皮细胞GT38中Bcl2基因在mRNA水平呈阳性表达；干扰LMP1后，对GT38细胞Bcl2的转录表达有抑制作用，而对Bax的转录表达无明显影响，Bcl2/Bax降低。推测本实验干扰LMP1后，Bcl2表达下调，Bax蛋白占优势，发生构象改变，形成同源二聚体，进而活化凋亡的级联反应，最终导致细胞凋亡。
肿瘤细胞中EBV主要以潜伏感染的形式存在，根据其潜伏期基因的表达情况，分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型潜伏，LMP1为EBVⅡ型和Ⅲ型潜伏时表达的病毒基因。EBV的Ⅲ型潜伏通常见于体外EBV永生化的B淋巴母细胞系和某些免疫缺陷病人的B淋巴细胞增生性疾病，该类细胞系多呈悬浮生长，不适合用脂质体法进行转染；而EBVⅡ型潜伏的细胞系多见于鼻咽癌细胞系。我们首次采用LMP1稳定表达的具有恶性性质的胃上皮细胞进行实验研究，结果显示人工合成的siRNA可有效沉默靶细胞LMP1的转录表达，进而引起某些细胞表型的改变，表明GT38细胞可用作深入探讨LMP1生物学功能的理想靶细胞。此外，鉴于大多数EBVaGC组织不表达LMP1，该细胞系对进一步阐明LMP1在EBVaGC发生发展中的作用具有重要意义。
【参考文献】
[1]梁华，罗兵，王云，等. 胃癌和相应癌旁组织中EB病毒感染的检测[J]. 青岛大学医学院学报， 2003，39(4)：428430，432.
[2]ELIOPOULOS A G， CAAMANO J H， FLAVELL J， et al. EpsteinBarr virusencoded latent infection membrane protein 1 regulates the processing of p100 NFkB2 to p52 via an IKK Y /NEMOindependent signaling pathway[J]. Oncogene， 2003，22：75577569.
[3]LIU L T， PENG J P， CHANG H C， et al. Reck is a target of EpsteinBarr virus latent membrane protein 1[J]. Oncogene， 2003，22：82638270.
[4]KOMANO J， SUGIURA M， TAKADA K， et al. Expression of EpsteinBarr virus latent membrane protein 1 contributes to the malignant phenotype and to apoptosis resist in Burkitt’s lymphoma cell line Akata[J]. Virol， 1998，72：91509156.
[5]YANG X， SHAM J S， TSAO S W， et al. LMP1 of EpsteinBarr virus induces proliferation of primary mouse embryonic fibroblasts and cooperatively transforms the cells with a p16 insensitive CDK4 oncogene[J]. Virol， 2000，74：883891.
[6]XIN B， HE Z， YANG X， et al. TRAAD domain of EpsteinBarr virus transforming protein LMP1 is essential for inducing immortalization and suppression senescence of primary rodent fibroblasts[J]. Virol， 2001，75：30103015.
[7]WANG Y， LUO B， YAN L P， et al. Relationship between EpsteinBarr virusencoded proteins with cell proliferation， apoptosis，and apoptosisrelated proteins in gastric carcinoma[J]. World J Gastroenterol， 2005，11：32343239.
[8]王娜，祝兆怡，侯琳，等. 2，3吲哚醌对人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y凋亡和端粒酶表达的影响[J]. 中国药理学通报， 2007，5：680684.
[9]黄河，黄培春. 不同来源LMP1基因转染对CNE1细胞TGFβ1抗性的影响[J]. 癌症， 2003，22(12)：12541259.
[10]MOSIALOS G， BIRKENBACH M， YALAMANCHILI R， et al. The EpsteinBar virus transforming protein LMP1 engages signaling for the tumor necrosis factor receptor family[J]. Cell， 1995，80 (3)：389399.
[11]KIESER A， KILGER E， GIRES O， et al. EpsteinBarr virus latent membrane protein1 triggers AP1 activity via the cJun Nterminal kinase cascade[J]. The EMBO Journal， 1997，16(21)64786485.
[12]SHEU L F， CHEN A， WEI Y H， et al. EpsteinBarr virus LMP1 modulates the malignant potential of gastric carcinoma cells involving apoptosis[J]. Am J Pathol， 1998，152(1)：6374.
[13]TAJIMA M， KOMURO M， OKINAGA K. Establishment of EpsteinBarr viruspositive human gastric epithelial cell lines[J]. Jpn J Cancer Res， 1998，89：262268.
[14]MURAKAMI M， HOSHIKAWA Y， SATOH Y， et al. Tumorigenesis of EpsteinBarr viruspositive epithelial cell lines derived from gastric tissues in the SCID mouse[J]. Virology， 2000，277(1)：2026.
[15]KREK W. Proteolysis and the G1S transition：the SCF connection[J]. Curr Opin Genet Dev， 1998，8(1)：3642.
[16]卢忠心，曹亚. LMP1与细胞凋亡[J]. 国际病理科学与临床杂志， 2005，25(5)：450452.
[17]GREGORY C， DIVE C， HENDERSON S， et al. Activition of EpsteinBarr virus latent genes protects human B cells from death by apoptosis[J]. Nature， 1991，349(6310)：612614.
篇4
我愿化作一只飞燕，率先登上顶峰去寻找金银铜牌的踪迹。
我愿化作一只飞燕，来体会那刹那“一览众山小”的辉煌。
南山，我的高中。
在这么一个汇聚着四川各地英才的地方，我发觉我是如沙粒般如此微不足道，一个个精英才子在我身边闪现，仿佛我这颗黯然的连名字都叫不出来的小星是为了衬托他们的辉煌而存在。
每一年，南山中学全国奥数第一，第二层出不穷，甚至让人有了一种理所当然的感觉，而我啦，每当看到学校光荣榜上的名字，照片，心中除了自卑就只剩下失落。
因为，我连普通数学考试也一直挂科。
这对我来说，实实在在是个讽刺，同样的学校，看着同样的花草树木，呼吸着同样的空气。为什么，这差距竟让我有了一种望尘莫及的感觉？
可悲，可笑。
是什么造成了如此的天壤之别？
习惯，是习惯。
一切的事物都以习惯为自然，没有一个好的习惯，即使你是比爱因斯坦还天才的人，你的天赋也只会是昙花一现，而最后被无数个不是天才，却拥有好习惯的人，甩在后面。
数数指头，2012年也已经不远了，这意味着什么？意味着我的机会来了，上帝网开一面给了我重新来过的机会，我难道会任由他错过。
不，不会。
2012年，等着我，我会以良好的习惯为开端，去征服这一年，去尝试触摸那些如今我只能仰视的东西。
也许你不相信，但是365天之后，你一定会发现，我已经化作一只飞燕，飞在你上空。
篇5
微笑不难 但是 以微笑面对一切 就很难 当人生孤独时 你能微笑吗？ 但是用微笑面对 是再好不过的了
世界上有三种红尘： 心 朋友 世界
当你学会用微笑面对一切时 你就看透了这三种红尘 心里的红尘 是人们最为遥远的地方 当心碎了 你能以微笑面对一切吗 我能 心碎了 你如果你不以微笑面对 你会减轻你的痛苦吗 心里的红尘 对于有些人来说 是望尘莫及的 但是 以微笑面对一切 是万物之根本 用微笑来掩饰自己的痛苦 是最好的抉择
心之苦 谁能懂 你们懂吗 心 有多苦 只有自己明白
篇6
尊敬的人类：?
首先，对万物之主的智慧生物致以崇高的敬意。?
自开天地，万物形成，众生平等，自由生活。然而无能鼠辈不能以正道生存，做起了偷摸东西、损人利己的勾当，霸占粮食，损毁衣物，扰乱人们正常的生活，甚至传播疾病，犯下滔天大罪。自帝喾开始，鼠类便为人类之大敌。出于正义之感、自然之法，自然界生灵们对鼠辈表示谴责，并推举猫头鹰、蛇、黄鼠狼等作为鼠之天敌，组成灭鼠联盟。千万年来，我们兢兢业业，牢记使命，为自然、为人类除去鼠患，竭力保持生态平衡，为构建和谐自然倾尽全力。?
可是，正当我们认真履行自身职责时，你们人类却忘却了自然之法，大肆杀害灭鼠联盟之战士，导致我们成员数目日益减少，元气大伤。这一切，只因你们人类太贪婪，热衷野味，视我们为餐桌上的佳肴，完全不顾我们为人类作出的巨大贡献！唉，你们只顾眼前，不看长远，结果呢，鼠患日益严重，各地鼠辈横行。公元2007年，洞庭湖一场洪水，20亿田鼠迁徙，所过之处，农田几无收获，田间地头一片狼藉。人类啊，当你动辄用大量人力物力，甚至派出飞机灭鼠时，可曾想过，之所以会酿成今日鼠灾苦果，是因为当初自己的贪婪！?
自古君子“酌贪泉而觉爽，处涸辙以犹欢”。人不可贪婪，应坦诚对待万物，即使拥有我们望尘莫及的伟大智慧，即使建立城市，登上月球，都不可忘却自然法则，冷落心中那片回归自然、感受生命的纯洁土地。“忧劳可以兴国，逸豫可以亡身”，要是人类沉浸于取得文明的巨大成就中而不思自省，那么千年前楼兰古城的冤魂们冥冥中也要扼腕长叹了！?
如今的灭鼠联盟已是支离破碎，残破不堪，我等捕鼠志士，面对猖狂鼠辈，心中悲愤不已。但是我们纵使面对千万灾难，也会坚强地站起来；我们更期待人类能改过自新，牢记教训，遵守自然法则，努力构建新社会新自然。我们相信，现代科技掩盖不了心中那种亲近土地的自然感情，我们相信，贪婪的欲望战胜不了心中那种纯真质朴的土壤气息。?
人类啊，请你们安静一会儿，聆听藏在心里已久的自然之心，感受一下自然之情。愿我们能够一起通过努力，构建一个和谐的、诗意的、全新的美好自然！?
敬礼！?
灭鼠联盟?
2008年6月8日?
篇7
虽然这世界有很多不公平,虽然这世界有很多不快乐,虽然这世界充满了悲伤和离别.
一个人做事有输也有嬴,输了的你也许会认为上帝创造了你,却永远看不见你,只是偏爱那些优秀的人.你永远也成不了上帝捧在手心里的宠儿.也许你会认为上帝只赋予了那些天资聪明的人幸福的堤岸,而你却对那种生活望尘莫及,甚至觉得自己永远比不上别人.也许你是那个宠儿,当你用轻掠的目光看着别人的时候,别人怎么想?
我仰天长问:上帝你你难道望了那些不优秀的人了吗?
直到某日,并不是宠儿的人不在悲伤了.因为明天会更好!是金子总有发光的时候.
我深信:世界没有偏爱,只要你努力的去做,我们都是天使!
篇8
1、宋慧乔选择宋仲基作为自己人生另一半的原因很多，宋仲基的颜值、人品还有成就自然成为了首要需要考量的要素了。而看是不是真的帅往往要看素颜平头时候的魅力如何了，而最好的时机莫过于入伍了。因为韩国所有男性在适当年龄都要服兵役的，而宋仲基、宋承宪、Rain(郑智薰)还有李敏稿等人的入伍照对比后就可以一窥一二了。
2、宋慧乔在韩国的众多男星中选择其实蛮多的，首先就是和乔妹合作过《浪漫满屋》的郑智薰。Rain185cm的大个子配上笔挺的五官确实很震撼，不过入伍照的他确实比剧中颜值降低了不少。不过相比于宋承宪来说郑智薰的入伍照还是算比较好的了，但是和宋仲基比起来可谓是望尘莫及。
（来源：文章屋网 ）
篇9
2、和你捉迷藏，我一定会输的，因为喜欢一个人是藏也藏不住的。
3、你这种人，我除了恋爱跟你也没什么好谈的。
4、不要帮我物色女人，如果是你，勉强可以。
5、纵然万劫不复，纵然相思入骨，我也待你眉眼如初，岁月如故。
6、我想牵你的手，从心动到古稀！
7、你哪是造物者难辞其咎的败笔，你是芸芸众生望尘莫及的瑰丽。
8、我负责爱你，你负责鼓励我爱你。
9、小雨滴答，路上坑洼，此刻，很适合躲在伞里想你。
篇10
她，圆圆的脑袋，嘴角向上微微翘起，估计是在烈日暴晒下而变得黝黑的皮肤。别看她一幅不正经的样子，在翻筋斗方面，可是令人望尘莫及的哦！
就说那次吧，我们去崇儒春游。大概是春意盎然的缘故吧，那充满无限生机的美丽公园顿时便成了她的舞台。一下，两下，三下……只见她双手撑着地面，腰部稍微弯曲，就这么利索地翻过了第一下，之后便是借着这股惯性，双手不停地交换着，又翻过了几下。最后，她单手直撑着地面，身体与地面成45度角倾斜，左手突然抽离地面，右手在即将倒下时再次撑住地面，借着这股往前冲的劲儿，她成功完成了最后一次的翻跃。顿时，掌声如同暴雨一般向她袭来。
俞日辉不服气，向她提出挑战，结果可想而知。彦君都翻出了五六个了，他才翻了一两个，这还不算，他还一屁股坐在了草坪上，起不来了呢！
杨彦君，你不愧是“筋斗云”，你真是名符其实啊！
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