动物行为学研究范文
时间：2024-02-07 18:08:15
导语：如何才能写好一篇动物行为学研究，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
关键词：导课 实验 思维 成功 兴趣
我校是一个小县城的三类学校，学生基础普遍不好，在遭受中考的挫败后，学习动力严重不足，如何将他们重新拉回课堂，恢复他们的自信，重新投入到紧张的高中学习生活当中，这是最为紧迫的问题。
成功教育理论让我受到启发，高中物理课堂教学中学生在课堂上的“冷场”、“局外人”现象正是由于缺少成功的体验，缺少参与的热情。因此高中物理课堂要寻找学生感兴趣的话题，站在学生的生活经验上，激发他们的兴趣，让每一个学生体验到畅所欲言带来的乐趣与成就感。
一、运用新颖的导课方法，引发学生的学习兴趣
运用小魔术、小实验、讲故事、说新闻、看图片、幻灯片及多媒体等手段，引导学生从情景中进入角色。
[案例1]大气压强――小魔术引入
一进入课堂老师手拿着一个碗问学生，谁能够用手掌把碗吸引住而不往下掉呢？学生都摇头表示不能，此时，老师右手拿碗（事先把碗底弄湿），往左手手掌心上用力压一下，排除碗底里面的空气，慢慢地转动左手手掌，使手掌心朝下，然后松开右手，看到了碗被左手掌心吸住了而不往下掉。学生惊叹之余，再引出大气压强，学生兴趣倍增。
[案例2]惯性――小实验引入
在引入惯性新课时，老师可用这样一个实验来引入。在一个盛有半杯水的烧杯口上放一块硬塑料片，塑料片上放一个鸡蛋，用不锈钢尺（相当于弹片）与塑料片垂直后拉开，问学生，“放手后，鸡蛋会怎样？”此时学生的注意力都集中到了鸡蛋上，有的说鸡蛋会随塑料片飞出来，有的说不会。这时，老师把变弯的钢尺一松手，“啪”的一声，塑料片飞出去了，只见鸡蛋稳稳当当地落在水中，学生紧张而专注地目睹了这一切，此时，再问“为什么呢？”学生注意力高度集中，兴趣盎然。
[案例3]磁现象――故事引入
在讲授磁现象这一节时，可以用讲故事的方式引入。秦始皇在建阿房宫时，为了防止刺客进入宫内，在进宫大门的两边放置两块大磁石。此时问：你们知道为什么吗？课堂上顿时活跃起来。
[案例4]乐音三特征――视频引入
在引入乐音三特征这一节时，首先让学生观看《交响乐音乐会》录象片段，让学生感受到乐音的高低起伏（音调），轻重大小（响度），和不同乐器声音的差别（音色）。这样的视频引入，把平淡的文字表达演化为生动直观的形象，把抽象的知识演化为具体的可以感受到的东西，能迅速抓住学生的眼球，使学生产生浓厚的兴趣。
导入新课时提出一些日常生活中常见的物理现象，引起学生的好奇心，从而引发学生的学习兴趣。例如：讲压强时问：为什么我们坐在沙发上比坐在子上舒服一些？磨刀不误砍柴工的物理道理是什么？在讲摩擦起电时问：油罐车为什么拖一条尾巴――铁链？冬季晚间脱毛衣时往往看到火星闪烁？在讲影响浮力大小的因素时问：为什么生饺子或元宵沉在水底，煮熟后浮在水面之上？
二、新、奇、悬、趣、迷的实验，使学生见之生趣
众所周知，物理学是一门以实验为基础的科学，对于中学生来说，新、奇、悬、趣、迷的实验，会使他们感到新鲜和好奇，可以给他们带来饶有兴趣的乐趣，在此基础上，才能使他们有效地掌握物理基础知识，使之逐步取得探索物理知识的主动权，掌握学习方法，培养自学能力。
[案例1]学习“功”这一章时，对功、功率、机械效率三个概念容易混淆，为了解决这一难题，可以设计一堂比赛形式的实验课，比比谁做的功最多，谁的功率最大，谁的机械效率最高。每个同学都抱五块砖以最快的速度从一楼跑上四楼，设计方案，测出自己做的功，功率、机械效率。然后集体讨论评选出四个“全班之最”。上楼最快的，做功最多的，功率最大的，机械效率最高的，四项冠军分别由四位同学获取。这一结果把学生的思维集中到了同一个焦点上，为什么做功最多的，功率不是最大？机械效率也不是最高？为什么上楼最快的，做功却不是最多？通过这样生动有趣的实验课，把本来混淆不清的概念变得简单易懂，把理论知识转变成了亲眼所见的事实，使学生在欢快的“游戏”中，学到实在的知识。
[案例2] 例如讲“热传递”时，演示“开水煮活鱼而鱼不死”，吸引学生的注意力。在“惯性、惯性定律”教学中，装满水的杯子，当水杯突然向左运动，杯内的水会从杯口溢出来吗？杯内的水是向什么方向溢出的？为什么会发生这种现象？教师在讲台前认真演示，请同学回答现象，这样引入新课，也能激发学生学新知识的欲望。除演示实验作为引子外，还可以讲述物理学史的内容，来开阔学生眼界，了解物理学家及其思想工作、方法，来增强物理教学的魅力；而讲述一些有趣味的小故事，也能吸引学生的注意力，引起学生兴趣。
[案例3]给学生适时讲授有趣味的故事是满足学生学习兴趣的一种补偿方式。例如在讲到玻意耳――-马略特定律的时候，介绍定律的来历以及不同国家对定律的不同称呼可以吸引学生的注意力，为进一步学习创造良好的氛围。当讲到历史上曾有一位学者叫赫曼，为了验证天电（闪电）与它电是否是同种电，竟被雷电击死在实验台上时，课堂一片寂静。当讲到秦始皇在建阿房宫时用磁石来防刺客时，课堂上又是一片活跃气氛。
[案例4]举例寓趣，置疑设趣，习题融趣，在课堂教学中，教师可以适时地穿插一些日常生活中富有趣味性的例子，来说明物理原理。例如讲授“声音可否在固体中传播”时，举例：“伏地听声”的故事，人可以伏在荒野的地上听到远处的马蹄声。在进行液化教学时，举例：夏天从冰箱里拿出来的鸡蛋会“出汗”，用此来说明液化原理，就可以活跃课堂气氛，激发学生学习的兴趣。在课堂教学中，“设疑”也是教学中一个重要手段，它可以开发学生思路，激发学生探索知识的兴趣，使其主动去学。正因为如此，教师不仅善于释疑，以激发学生的好奇心，引发学生的注意力，唤起学生学习物理知识的兴趣。例如：鸡蛋握在手心中不容易捏破，而放在桌上，只要一个手指往下一按，就压破？为什么热粥要一面搅拌，一面吹气，才使稀饭凉得快？象这类设差别，既贴近生活，又能激发学生的好奇心，引起兴趣。
三、努力提供“成功的机会”，增强学生学习兴趣
不论是教师的讲授，还是实验，都应努力创造一种有利于学生独立思考的情景，始终将学生置于探索者、发现者的位置，在条件许可的情况下应尽可能将物理课移到实验室去上，演示实验尽可能让学生参与，让学生切身体会到成功的乐趣。
篇2
在一所学校里，无论是校园文化建设还是课堂改革，无论是学校规划发展还是学生养成教育，都需要教师的参与，教师的处事态度、工作方法将直接影响到学校工作质量。而长时间单调、繁重的教学生活，或多或少的都会使教师产生职业倦怠，因此，如何激发教师工作的积极性，充分挖掘教师的潜能，就成为每一位学校管理者不得不面对的一个实际问题。
一提到调动教师积极性，很多学校管理者马上会想到通过多发奖金和物质奖品的方法来激发教师的工作热情，这的确是最简单、最直接、最容易被教师接受的一种方法。但是对于义务教育阶段的农村中小学来说，有限的经费维持平时的办公开支还捉襟见肘，根本就拿不出用于奖励教师的“富裕”钱。因此，在农村中小学，我们必须把调动教师积极性的重点放在精神奖励上，让教师发自内心地去爱教、乐教、愿意从教。
一、弘扬主旋律，宣传新的教育政策，对教师们进行正面引导
目前国家的教育理念已经开始改变，例如：从提倡教师像蜡烛一样燃烧自己照亮别人转向鼓励中小学教师发展自我、成名成家；从大规模的合校并点转向区域化、均衡化的教育发展。十八届三中全会更是提出了“立德树人”的教育理念，改变科目的分值设置，改变功利化的教育模式，让教育回归原生态。为了提高教师地位，对教师任职资格制度也进行了改革，提高了获取教师任职资格的门槛，即使师范院校毕业的学生也必须通过国家统一组织的教师资格考试，才能取得教师任职资格证书。此外，教师职称制度也在逐步改革，在中小学教师中已经开始增加正高级职称的名额。管理者可以通过这些正面信息的传达让教师知道国家正在想办法提高教师待遇，引导他们积极地去对待教育工作。
二、学校要建立公平、公正的管理制度，做到规范化办学 学校的管理制度都是为教学工作服务的，涉及学校所有教师的切身利益。因此，在制定管理制度时一定要尊重广大教师的意见。学校管理制度的制定应该分以下几个步骤：1调查研究。制度的制定是为了解决某一方面的问题，不调查不研究就没有发言权，所以第一步就是调查研究、了解实情。2．组织教职工委员会讨论，拿出初稿。3．把初稿分发给教师并征求他们的建议。4．对教师提出的建议进行汇总并提交教职工委员会再次讨论定稿。5．学校大会公布实施。
比如：《沙河五中绩效工资分配方案》就是在教师全员参与的情况下制定的，并且随着学校实情的变化不断进行修改。修改的过程也是透明的，完全是由教师讨论并提出反馈建议，学校再组织教师代表整理建议，并依照大多数教师的建议进行修改。发放绩效工资时，学校严格按照制度执行，对于分配结果教师也都能够欣然接受。．
三、学校管理者要摆正自己的位置，演好自己的角色，提高自身的素质
1．借助榜样的力量。首先，学校管理者要做教师的榜样，要求教师做到的事自己一定要做到、做好。在道德标准、思想作风上，要高标准要求自己，做教师生活中的楷模；在教学工作中，要提高自身的教育教学研究能力，积极主动地参加学校的各项教学活动，做教师工作中的领路人。其次，从我校教师队伍内部找典型、树榜样，比如我们学校的崔然老师课堂教学理念先进，善于创新，在教学改革上常有突破，就可以把她作为课改榜样；陈捧书老师，埋头苦干从不计较工作得失，30年如一日，教学工作从未放松，可以作为师德楷模。身边榜样的力量，更能激发教师的积极性。
2．学会服务于教师。作为学校管理者，不应高高在上，而应多为教师服务，在生活上关心他们，在工作上帮助他们，在业务上指导他们，融入他们中间去，以此调动他们的积极性，营造和谐的工作氛围。
从人性的角度来讲，一直要求教师把全部精力放在工作中也是不现实的，对此，我们大胆提出了“家庭第一，健康第二，工作第三”的口号。让教师看到学校管理者对他们的爱护，当他们真正感受到学校管理者的关心之后，反而会做到“工作第一，健康第二，家庭第三”。我想这也许就是《孙子兵法》上所说的“不战而屈人之兵”的道理吧！
3．学会与教师沟通。教师是小知识分子，普遍爱面子、自尊心强，在与他们沟通时要适时、适地、适度。对于个性特别强的教师，要运用多种渠道进行沟通，要给教师讲明道理：要想获得自尊，就必须自强，要想在工作中做出成就，就必须有勇于献身的精神，有投入才会有收获。不实在、不踏实、不努力、不奋斗、不积极的人永远得不到别人的尊重。
四、规划教师的专业化发展，为教师们树立一个明确的奋斗目标
教师长年在学校里闭门教书，从初一教到初三，又从初三教到初一，视野被固定在一个小范围内，有的教师经过几轮教学小有成就沾沾自喜，停步不前，进而产生职业的倦怠。因此，必须要把老师从自满的“牢笼”中解放出来，要为教师谋划专业发展之路，促使他们不断充实自己、改变自己。
1．给教师一个明确的奋斗目标。学校管理者在规划学校愿景的时候，要帮助每位教师找到自己的发展方向，并制定个人的发展计划。例如：为了让教师认识到自身价值，看到自己的发展潜力，学校每年都要组织一些活动，让教师在活动中展示自我，学会沟通．找回自信。
篇3
【关键词】 地氟醚
关键词: 地氟醚;缺血预处理;脑缺血，暂时性
摘 要:目的 探讨地氟醚预处理对脑局灶性缺血损伤的影响. 方法 采用大脑中动脉阻闭（middle cerebral artery oc-clusion，MCAO）模型，将30只雄性SD大鼠随机分成3组:对照组（C组，n=10），动物不接受任何处理;地氟醚组（Des组，n=10），动物每日接受1h的地氟醚预处理（57mL L-1 地氟醚，940mL L-1 O2 ），连续5d;吸O2 组（O2 组，n=10），动物每日接受1h的吸O2 预处理（940mL L-1 O2 ，无地氟醚），连续5d.所有动物均在大脑中动脉阻闭120min后恢复再灌注，观察再灌注后24h动物神经行为学改变及脑梗死容积. 结果 再灌注后24h神经行为学评分Des组明显低于C组和O2 组（P
Keywords:desflurane;ischemic preconditioning;cerebral is-chemia，transient
Abstract:AIM To investigate if desflurane preconditioning induces ischemic tolerance against neuronal damage produced by middle cerebral artery occlusion（MCAO）in rats.METHODS Thirty male SD rats weighing280～320g were randomly pided into three groups:control group（n=10），C group，without pretreatment;desflurane preconditioning group（Des group，n=10），which were pretreated with inhalation of57mL L-1 desflurane in940mL L-1 O2 1h per day for5d;and oxygen preconditioning group（O2 group，n=10），which inhaled940mL L-1 O2 1h per day for5d.Right MCAO（120min）was induced by a3-0nylon thread with round tip inserted cranially into right internal carotid artery.The neurologic deficit score（NDS）was evaluated24h after reperfusion and the infarct volume was determined24h after reperfusion.RESULTS The NDS of the Des group was lower than the other two groups（P
0 引言
自Murry等［1］ 1986年发现心肌缺血预处理现象以来，人们对缺血预处理（ischemic preconditioning，IP）进行了大量的研究.但IP是一种损伤性预适应，研究用药物诱导预适应来替代IP成为一种必然趋势.因此有人用化学预处理来模拟缺血预处理［2］ .最近国内外研究发现常用挥发性麻醉药异氟醚、七氟醚、地氟醚等预处理可在心肌缺血中模拟产生缺血预处理效应［3-7］ ，我们以前的研究发现，异氟醚预处理可诱导脑缺血耐受［8］ .地氟醚作为一种新型卤素化醚类吸入性全麻药，人们对其是否具有脑保护作用进行了大量研究，发现其与异氟醚等其他挥发性麻醉药一样，对脑缺血损伤具有保护作用［9，10］ ，但采用大脑中动脉阻闭（MCAO）模型实施预处理脑保护作用方面的研究报道甚少.我们旨在探讨地氟醚预处理模拟IP的可行性.
1 材料和方法
1.1 材料 实验动物由第四军医大学实验动物中心提供.30只雄性SD大鼠（280～320g），随机分成3组（每组n=10）:对照组（C组）、吸O
2 组（O2 组）和地氟醚预处理组（Des组）.对照组动物不接受任何处理;地氟醚组动物每日接受1h的地氟醚预处理（57mL L-1 地氟醚，940mL L-1 O2 ），连续5d;吸O2 组动物每日接受1h的吸O2 预处理（940mL L-1 O2 ，无地氟醚），连续5d.
1.2 方法
1.2.1 局灶性脑缺血模型 最后一次预处理结束24h后，动物用40mL L-1 异氟醚（氧流量4L min-1 ）面罩吸入诱导麻醉［8］ ，20mL L
-1 异氟醚（氧流量1.5～2.0L min-1 ）面罩持续吸入维持麻醉.MCAO模型采用右侧颈内动脉尼龙线线栓法，参考Tatlisumak等［11］ 根据Longa等［12］ 的改良方法，手术时间15～25min，术毕1min内动物基本清醒，恢复活动.阻闭120min后再次用异氟醚快速麻醉动物，抽出尼龙线，恢复再灌注.体温由直肠温探头连接多功能监测仪（Spacelab，USA）监测，并用烤灯维持在37.0～37.5℃.
1.2.2 动物恢复及神经行为学评估 麻醉苏醒后将动物放回鼠笼，自由饮食.脑缺血再灌注后24h，由一不了解分组情况的观察者评估记录神经行为学评分，方法参考Longa等［12］ 的报道，即6级评分法:0级，无功能障碍;1级，不能伸展左侧前肢;2级，向左侧旋转;3级，向左侧倾倒;4级，无自主活动伴意识抑制;5级，死亡.
1.2.3 脑梗死灶测量 24h神经行为学评分完成后，动物用异氟醚深麻醉后被处死，迅速取出鼠脑，置入冰盐水中10min，取冠状切面均匀切成2mm厚脑片，迅速放入TTC溶液中，置入恒温水浴槽中（HH-W21-Cr600，广东汕头医用设备厂），水温37℃，染色30min，最后用40g L-1 甲醛缓冲液固定.24h后用数码相机（Kodak，DC240，USA）拍照，输入计算机，用图像处理软件（Adobe，Photoshop5.0）计算梗死面积（粉红色区为正常脑组织，白色区为梗死区），各脑片梗死面积和乘以厚度（2mm）为总的梗死容积.统计学处理:数值用x ±s表示.梗死容积用单因素方差分析方法（ANOVA）统计.神经行为学评分用非参数检验（即Kruskal-Wallis方法），P
2 结果
2.1 神经行为学改变 术后对照组和吸O2 组动物出现明显神经功能障碍，Des组神经功能损伤明显轻于前两组.再灌注24h神经行为学评分，与对照组 （2.0±0.7）相比，O2 组为2.0±0.6，Des组为0.9±0.6（P
图1 略
2.2 脑梗死容积 再灌注24h脑梗死容积，与对照组（276.10±155.63）mm3 相比，O2 组为（253.84±174.39）mm 3 （P>0.05），Des组为（59.56±30.37）mm3 （P
图2 略
3 讨论
药物性预处理是近年来研究热点之一.氟醚类吸入麻醉药如异氟醚、七氟醚和地氟醚等预处理可减轻心肌缺血损伤［3-7］ ，但采用MCAO模型行地氟醚预处理脑保护作用研究尚未见报道.本研究结果表明地氟醚可诱导脑缺血耐受产生而对大鼠短暂性局灶性脑缺血引起的脑缺血损伤起保护作用.Kersten等［3］ 进一步研究发现异氟醚诱导心肌预适应作用与其激活心肌细胞上KATP通道有关，KATP通道选择剂优降糖取消其对缺血再灌注心肌的保护作用.本研究中地氟醚是否同样经激活KATP通道诱导脑缺血预适应尚待进一步研究.
地氟醚是20世纪60年代由Ross Terrell首先合成的一种吸入麻醉剂，其血液和组织溶解度低.由于其合成困难，加之挥发罐的特殊性，曾一度限制了其在临床中的应用，随着医学的发展，其易于调控维持，麻醉恢复快［13，14］ ，在钠石灰中稳定［15］ ，加之抗肝降解作用的优越性，应用日益广泛.因此，本研究结果具有潜在的临床应用价值.对于潜在脑梗死诱因的高危人群，在进行专科治疗的同时，不妨采用异氟醚或地氟醚进行预处理，将会减轻脑梗死后的损伤.当然，其临床预处理方案尚需进一步研究.
本研究仅观察雄性SD大鼠吸入57mL L-1 （1MAC［16］ ）地氟醚，每日1h，连续5d的预处理效果，主要参照异氟醚预处理的实施方案［8］ .但不同地氟醚吸入浓度和时间对脑的预处理效应如何以及其作用机制尚待进一步研究.
参考文献:
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篇4
关键词：帕金森病；大鼠；6-羟基多巴胺
帕金森病（PD）是常见的中老年人中枢神经系统退行性疾病，其病因及发病机制目前尚不清楚， 研究认为可能与遗传、环境因素、线粒体功能障碍、兴奋性氨基酸、氧化应激、过多的自由基形成及神经生长因子缺乏等有关，是多种机制协同作用的结果[1-2]。偏侧6-OHDA损毁模型是目前使用最多的PD动物模型之一，其在症状、病理、生化方面的表现与人类PD有不少相似之处，但该模型的损伤程度因6-OHDA的剂量、浓度、注射位点不同而存有争议，特别是对损伤早期大鼠行为学方面的观察比较缺乏。本实验通过观察6-OHDA损伤早期PD大鼠行为学及黑质部位组织学的变化特点，验证损伤早期PD大鼠模型的稳定性及可靠性。
1资料与方法
1.1一般资料 选用健康雄性SD大鼠40只， 体重 250～300 g，由南通大学实验动物中心提供。6-OHDA、抗坏血酸干粉剂、盐酸阿朴吗啡（apomorphine）、抗酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase， TH）抗体均购于Sigma公司。
1.2方法
1.2.1实验动物分组 40只SD大鼠随机分为三组：①空白对照组（n=8）；②6-OHDA模型组（n=24）：分为24 h组（n=8）、7 d组（n=8）和28 d组（n=8）3个亚组；③假手术组（n=8）。
1.2.2动物模型 模型组大鼠用复合麻醉剂（含戊巴比妥钠、丙二醇、硫酸镁等，0.25 mL/100 g体重）腹腔注射麻醉，待大鼠后肢回缩反射及角膜反射消失后，将其头部水平位固定在脑立体定位仪上，剪除颅顶鼠毛，碘酒、酒精消毒皮肤，沿中线切开一长约2cm切口，充分暴露前囟，参照Paxinos & Watson（1996）《大鼠脑立体定位图谱》确定左侧前脑内侧束（mfb）三维坐标位置，选取mfb区坐标：前囟后2.8 mm，中线左侧2.0 mm，硬膜下8.2 mm。根据注射位点确定钻颅部位，手术刀尖小心钻开一直径约2 mm颅骨孔，微量进样器缓慢进针至靶点，留针10 min，以9 ng/s的速度注入2 μg/μL 6-OHDA 4 μL（含0.02%抗坏血酸），注射完毕后留针5min，以1mm/min的速度退针。手术完毕，用明胶海绵堵塞颅骨孔，适量青霉素涂敷创口，消毒缝合皮肤，放回笼中饲养。并于24 h、7 d、28 d分别检测大鼠行为学和组织学的改变。假手术组同法予含0.02%抗坏血酸的生理盐水4 μL，空白对照组不作任何处理。
1.2.3行为学检测
1.2.3.1跨步调节试验[3] 将大鼠身体的后半部分拖起 ，并使大鼠身体重量仅由一侧前肢支撑 ，记录10s内大鼠这一前肢走步次数 ，然后同法检测另一前肢的情况，以损伤对侧前肢行走次数所占比例（损伤对侧前肢行走次数/（损伤对侧前肢行走次数+损伤侧前肢行走次数））为评价指标。
1.2.3.2姿势不对称性试验[4] 握住鼠尾的中后部将其提起，悬空于实验台上方约10 cm处，使大鼠头向下处于垂直状态， 以其偏离垂直轴不超过10°为垂直位（标准位），记录大鼠头或上身左右摆动的情况，以摆动偏离垂直位并再返回到垂直位记数为1次。观察45 s内大鼠头或身体转动的方向和次数，以向损伤对侧摆动的次数所占比例（损伤对侧摆动的次数/（损伤对侧摆动的次数+损伤侧摆动的次数））为评价指标。
1.2.3.3阿扑吗啡诱发旋转试验 模型组分别于术后24 h、7 d、28 d于动物腹腔内注射阿扑吗啡0.5 mg/Kg 诱发大鼠向右侧（健侧）旋转，于阿扑吗啡注射后5 min开始记录，持续记录30 min。以24 h诱发旋转次数210次/30 min为合格模型。
1.2.4组织学检测
1.2.4.1动物灌注、固定、取材、切片 各组大鼠在最后一次行为学检测后，用复合麻醉剂麻醉，剪开大鼠胸腔，经主动脉快速灌注生理盐水（37℃）150～200 mL冲洗，至大鼠肝脏发白，流出液基本无色为止。随即灌注4%甲醛（4℃）先快速灌注 200 mL，再缓慢灌注300 mL，至头与四肢均已发硬。断头取脑，置于4%甲醛，放4℃冰箱固定4 h，再依次置入20%及30%蔗糖磷酸盐缓冲液内，存4℃冰箱至脑块沉入瓶底。取中脑黑质组织块进行冠状连续冰冻切片，片厚20 μm。
1.2.4.2抗TH染色 作漂片SABC法染色，具体步骤依次为：冰冻切片用0.01 M（pH7.4）磷酸盐缓冲液（PBS）漂洗3次，5 min/次。0.3% H2O2抑制内源性过氧化物酶活性， 0.02 mol/L EDTA（95℃）复性（2 min），非免疫的正常羊血清，室温下孵育30 min，抗TH抗体（1∶1000，抗体稀释液稀释），37℃孵育4 h， SABC试剂，室温下孵育1 h， DAB显色（阳性产物为棕黄色）。以上各步骤之间均以0.01M（PH7.4）PBS漂洗3次，5 min/次，正常羊血清与抗TH抗体孵育之间不漂洗。显色后贴片，自然风干，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
1.2.4.3 TH阳性神经元记数 各组大鼠取包含黑质致密部最明显的中脑切片，在×100倍显微镜下计数两侧黑质有完整细胞体的TH阳性细胞，计算左侧与右侧黑质TH阳性细胞数的百分比（左侧黑质TH阳性细胞数/右侧黑质TH阳性细胞数×100% ）。参照蔡文琴等[5]介绍的神经细胞计数方法进行细胞计数。
1.2.5统计学分析 数据结果均使用 SPSS13.0软件进行统计学分析。数据资料采用均数±标准差（x±s）表示。单因素方差分析进行差异性检验，P
2结果
2.1行为学观察 对照组及假手术组大鼠经阿扑吗啡诱发后无旋转行为，也未出现非药物诱发的行为学改变。模型组大鼠在注射6-OHDA后数小时即出现损毁侧肢体动作减少，身体重心偏向损毁侧，并出现身体向损毁侧缓慢旋转，不能进行直线或随意爬行。
2.1.1跨步调节试验 对照组及假手术组大鼠两侧前肢10 s内跨步次数基本相同，模型组大鼠在左侧前脑内侧束注射6-OHDA后24 h跨步调节试验评分出现有意义减少，7 d及28 d评分进一步减少，见表1。
2.1.2姿势不对称试验 在左侧前脑内侧束注射6-OHDA后24 h，姿势不对称试验结果显示模型组大鼠头部和身体出现向右侧转动次数有意义增加，7 d及28 d姿势不对称试验评分进一步增加，对照组及假手术组大鼠头部和身体向两侧转动次数大致相同，见表2。
2.1.3阿扑吗啡诱发旋转试验 在注射6-OHDA后24 h，阿扑吗啡腹腔注射诱发大鼠以右侧后肢为支点，首尾相接向右侧旋转，30 min旋转次数210次/30 min，对照组及假手术组大鼠未诱发出旋转行为，见表3。
2.2组织学检测 抗TH染色结果显示，在左侧前脑内侧束注射6-OHDA后24 h，大鼠左侧黑质TH阳性神经元数目出现有意义减少，高倍镜下见少部分神经元出现胞体肿胀、核膜界限消失等变性征象，部分神经轴突断裂、错乱；7 d和28 d时大鼠左侧黑质TH阳性神经元几乎消失，残留的TH神经元表现出染色质浓缩坏死现象，神经轴突散在稀疏；模型组大鼠右侧黑质TH阳性神经元数目同时也有部分减少；对照组及假手术组大鼠两侧黑质TH阳性神经元无明显改变，见表4，图1。
3讨论
研究PD需要建立稳定可靠的模型。6-OHDA是一种选择性中枢儿茶酚胺能神经元毒性物质，具有很强的呼吸链抑制作用，偏侧6-OHDA损毁模型是目前使用最多的PD模型之一。1970年Ungerstedl[6]首先报道了应用6-OHDA成功制备大鼠偏侧PD模型，这种模型能够在多巴胺能药物的诱发下产生旋转行为，以便于判断模型成功与否。阿扑吗啡是多巴胺（dopamine，DA）受体激动剂，能够引起该模型向健侧旋转，这是由于损伤侧纹状体多巴胺含量下降，多巴胺D2受体代偿性大量增加，且敏感性增高，出现超敏现象[7]，此时应用DA受体激动剂使损伤侧兴奋作用占优势而产生向健侧旋转。
PD的神经保护治疗需要早期进行，评估6-OHDA损伤早期大鼠行为学变化，可进一步明确模型是否成功及神经保护性治疗是否有效。阿扑吗啡诱发旋转试验结合非药物诱发的行为学试验，其评估结果更加有效、可靠[8]。在偏侧前脑内侧束注射6-OHDA后数小时，大鼠出现肢体动作减少，身体重心偏向损毁侧，并出现身体向损毁侧不自主旋转，不能进行直线或随意爬行，6-OHDA注射后24 h大鼠跨步调节试验和姿势不对称试验出现有意义改变，腹腔注射阿扑吗啡后可诱导大鼠在原地向健侧旋转，以健侧后肢为支点，首尾相接，形成环状，但旋转次数
偏侧前脑内侧束注射6-OHDA后24 h大鼠出现行为学和组织学方面的变化，为检测模型的稳定性和可靠性，实验设立6-OHDA损伤后7d和28d组。结果显示：大鼠行为学改变较24 h组更加显著，阿扑吗啡诱发旋转次数>210次/30 min，符合成功PD模型标准；7 d和28 d时大鼠左侧黑质TH阳性神经元减少90%。偏侧前脑内侧束注射6-OHDA后，损伤对侧有部分DA能神经元丢失，可能与药物的渗透作用或经血液循环等有关。
综上所述，通过早期行为学检测，可为神经保护性研究确立合格的PD模型，避免了药物提前干预存在的药物显效与模型失败之间的争议。
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篇5
【关键词】 DEHP；行为学；学习记忆1 材料与方法
11 主要试剂 DEHP(分析纯)，美国Sigma公司。玉米油，市售。
12 实验动物分组与染毒 Wistar大鼠35只，其中雌性25只，雄性50只，体重200~250 g，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供，生产许可证号：SCXK(吉)20110004。动物自由饮水摄食，饲料由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供，合格证号：SCXK(吉)2010~0001。动物室温度20~22℃，相对湿度55％~65％，适应性饲养7 d，按体重随机分为4组：对照组和低、中、高剂量组，每组6 只。动物雌雄大鼠以1∶ 1同笼，次日晨于盘底及阴道检查阴栓，查出阴栓者，记为妊娠0 d，母鼠编号称重，在妊娠期7~16 d，高、中、低三剂量组每天经口灌胃给予DEHP，给予DEHP的量均为10 ml/100 g BW，对照组经口灌胃给予等量玉米油。同时进行如下处理。对照组：给予母鼠对照物玉米油；高剂量组：染毒母鼠DEHP 1000 mg/kg；中剂量组：染毒母鼠DEHP 750 mg/kg；低剂量组：染毒母鼠DEHP 250 mg/kg。孕鼠产子后，单独一笼哺养幼鼠。实验时，每笼选取雌雄两只子代大鼠进行神经行为学测定。
13 仔鼠行为学改变的测定
131 跳台实验 实验时，将离乳的子代大鼠置于箱中，自由活动5 min，然后将其置于安全台上，箱底通电，观察其跳台的潜伏期(latency，L)并记录5 min内仔鼠跳下台的次数，即错误次数(mistake，M)，此为训练成绩，24 h 后再测为测试成绩。
132 避暗实验 实验时将离乳的子代大鼠头部背对着洞口放入明室，仔鼠一进入暗室立即受电击，记录仔鼠5 min内进入暗室的错误次数，此为训练成绩，24 h后再测为测试成绩。
14 统计学方法 数据采用SPSS 105 统计软件进行单因素方差分析。组间比较采用最小显著差异法检验(LSD法)。
2 结果
21 DEHP对子代大鼠跳台实验的测定 如表1 所示，跳台实验中高、中、低剂量组与对照组比较，错误次数明显增多，平均潜伏期明显缩短(P
22 DEHP对子代大鼠避暗实验的测定 如表2所示，高、中、低剂量组子代大鼠进入暗箱的潜伏期缩短明显低于对照组(P
表1 DEHP对子代大鼠跳台测试结果的影响(x±s)
篇6
现在动物行为的研究在我国正处于起步阶段，研究的内容主要为描述性，在理论研究方面，在研究的广度和深度方面，仍与国外存在着较大的差距。
而作为21世纪生物科学专业的一员，更有必要学好这门学科，为我国动物行为方面的研究做出自己的贡献。出于对这个大千世界的好奇，我选择了动物行为生态学这门学科，在老师的带领下，我眼界变得开阔了，我也重新认识了这个世界，感受到了大自然的和谐，重新认识到了自己在这个大千世界中的价值。
在老师的推荐之下我阅读了《小鸟的大道理》这篇短小却饱含动物之间哲理的文章，它不是作家创造出来的世界，它不同于一般的文章，它是最基本的事实！是戴维斯生活的每一天每一夜，是独自的，安静的，几乎与世隔绝的寂寞与艰辛，更是展示给我们的精华。
戴维斯一个将自己的精力放在小鸟身上的伟大科学家，在小鸟的繁殖季节里他几乎每天都要去拜访他们，比如像篱雀这种样子很像麻雀，羽毛颜色黯淡，看上去很单调的不起眼的小鸟，在戴维斯的眼中，它的生活可是一点也不谦逊、正派。
他描述道：
“一对篱雀在一起觅食，安详地跳进树丛中。到那里以后，雄鸟跑到一边，雌鸟去了另一边。一旦出了雄鸟的视线，雌鸟立即飞进附近的矮树丛里，和藏在那里的另一只雄鸟。过后她立即和配偶会合，做出好像什么都没有发生过的样子。”
虽然鸟类常常被当情的象征，天鹅、爱情鸟、鸳鸯这些美丽的鸟儿也经常成为诗人讴歌的对象，但是它们的相亲相爱显然不是出于感情，而只是为了传播基因。它们的生活被达尔文法则决定了：留下尽可能多的后代。雌、雄为此走在了一起，但是它们的利益并不总是一致的，其生理特征导致了它们的目标有所差异：雄性是要尽可能多地播种，雌性则是要尽可能多地养育自己的后代。对雌性来说，对自己最有利的婚姻形式是一妻多夫制，其次是一夫一妻制，第三是一夫多妻制。对雄性来说，则倒了过来，最好的形式是一夫多妻制，其次是一夫一妻制，第三是一妻多夫制。
雌性和雄性在长期进化过程中相互博弈的结果，让大多数鸟类都采用了一夫一妻制，这样做似乎对雌雄双方都很公平。但是篱雀这种外表单调的小鸟却有着最丰富的婚姻形式：一夫一妻制、一夫多妻制、一妻多夫制都存在着，还普遍存在多夫多妻制。
戴维斯发现，那些表面上是一夫一妻制的家庭，雌鸟通常也会主动勾引第三者来，这么做会鼓励第三者为雌鸟的后代提供食物。而雌鸟的原配一旦发觉，会尽力把第三者赶走。根据达尔文法则，第三者应该根据是否与雌鸟成功地来决定要不要为雌鸟的后代服务。如果成功，雌鸟的后代中有可能有第三者的种，第三者去帮忙才会增加自己的基因传播的机会，不然就是在做无偿服务了。
篱雀多姿多彩的家庭生活，其实是两性既合作又冲突的结果，双方都想利用对方来为自己留下尽可能多的后代。这个适用于所有有性生殖的生物的道理，却由一种不起眼的小鸟如此鲜明地证明了。
求偶是动物繁衍的前奏，也是动物种群自我选育、优育的基础。是一方动物向另一方动物炫耀各种信号或做出各种动作的行为方式。求偶行为对保护种群的优良素质，更好地适应自然环境，具有重要的意义，主要表现在以下几点。
（1）每种动物的求偶行为都有物种的特异性，即使是很相近的物种也有细微的差异，这可以避免不同动物的种间杂交。种间杂交在相近物种之间也有时发生，如马和驴杂交生骡，狮和虎也能杂交产仔，但这种情况大多是发生在人工喂养的特殊环境下。
（2）求偶行为使雌雄双方有更多选择机会，使后代获得良好的遗传基因组合。求偶不成的，常常是群体中的弱者。例如鹿科动物，雄性为争夺配偶而斗殴，失败的弱者，多为幼小刚成年或年老体衰者、瘦弱有病者，它们不被雌鹿选中，对物种的繁衍有利。现在就来看看各类动物表现在求偶上的不同现象：
鱼类
很多人肯定都看过电影《海底总动员》，里面奇妙而美丽的世界，色彩斑斓的鱼的色彩，稀奇古怪的鱼的样子。里面我最喜欢的要数小丑鱼了，哈哈。 鱼的求偶有很多种，其中最为精妙杰出的求偶炫耀行为可能是座头鲸的歌声了，每只座头鲸 ，都唱着它们自己的特殊歌曲，这种歌由一系列的长音符组成，而且能不停的重复演唱下去。它们的歌声嘹亮，旋律美妙，以此来吸引异性的注意。
爬行动物
在我看来蛇是很讨厌的动物，我最害怕也最不喜欢。可它们的求偶却也比较好玩。譬如：
1、响尾蛇一旦坠入爱河，它们就会如胶似膝很难再分开，感情深厚吧。
2、罗河雄鳄在期喜欢守护着一段河堤，并大声吼叫，严防其他鳄鱼的闯入。雌鳄听到叫声后就会前来相会。雄鳄就会兴奋的摇头摆尾，并将水从鼻孔射向天空。
鸟类
鸟的求偶行为多种多样
1、孔雀的羽毛很漂亮，但这只是雄孔雀的毛。雌孔雀有点象个丑姑娘，但美丽的雄孔雀还是喜欢追求她们。雄孔雀在求偶时会展开羽毛，变成一把金光闪闪的扇子，在高兴的时候还会发出嘎嘎的响声。
2、雄鹤是最深情的求爱者。它们在求偶过程中会用美妙的舞蹈去打动雌鹤。它们一边上下摆头，快速拍动双翅，突然奔走和停止。舞蹈中的鹤如痴如醉，并常常神魂颠倒的凝视对方。
其他如燕鸥喜欢在求偶时送彩礼；啄木鸟在求爱时通过有节奏的敲打树干，发出爱情电报；信天翁求爱时非常有礼貌，经常以不断弯腰向对方示爱，有趣吧！
哺乳动物
1、大熊猫
一只的雌熊猫，往往会引发数只雄性大熊猫的争斗。最后最厉害的大熊猫将得到雌熊猫，并与之携手而归。
2、大象
处于期的大象总是通过激烈的搏斗来赢得雌大象。大象搏斗的时候用象牙做武器，庞大的身躯互相抵触，扇动着大耳朵，并发出大声的吼叫，直至一方落败。
3、骆驼
骆驼是沙漠之舟。它们为了争夺妻子，常常失去了平时的温和，变得异常凶猛。两只公骆驼在打斗的时候，往往把对方摔倒在地上，并咬住对方的脖子。
篇7
关键词：偏头痛 垂体腺苷酸环化酶激活肽 三叉神经脊束核尾核
中图分类号：R747.2R255文献标识码：A文章编号：1672-1349(2011)05-0582-03
偏头痛是临床上常见的原发性头痛疾患，常可造成劳动力丧失。在世界卫生组织列出的世界范围内所有可造成伤残的疾病中，按危害程度偏头痛位列19位［1］。本实验通过观察尾静脉注射垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP38）后大鼠的行为学变化和大鼠三叉神经核尾核（TNC）的c-fos蛋白表达情况，与已得到公认的硝酸甘油（NTG）实验性偏头痛大鼠模型比较，探讨PACAP38能否作为诱发大鼠偏头痛发作的诱导剂，为偏头痛发病机制及治疗药物研究和开发提供实验依据。
1材料与方法
1.1实验动物Wistar系健康封闭群大鼠30只，体重（250～300）g，由山西医科大学实验动物中心提供。
1.2主要试剂及药品垂体腺苷酸环化酶激活肽（吉尔生化有限公司，批号P1009007-SY52290），兔抗大鼠c-fos抗体、SP-9001免疫组化染色试剂盒，DAB显色剂均为博士德生物工程有限公司提供，硝酸甘油注射液（太行制药有限公司，批号120101）。
1.3方法
1.3.1分组将30只大鼠随机分为硝酸甘油模型组、PACAP38高剂量组、PACAP38中剂量组、PACAP38低剂量组、空白对照组，每组6只，雌雄各半。硝酸甘油组大鼠给予尾静脉注射硝酸甘油注射液2 μg/kg，建立实验性偏头痛大鼠模型；PACAP38高、中、低剂量组大鼠分别给予尾静脉注射PACAP38 12 μg/kg、6 μg/kg、3 μg/kg；空白对照组大鼠给予尾静脉注射1 mL/kg生理盐水。
1.3.2大鼠行为学观察观察耳红、挠头、爬笼出现及消失的时间。挠头出现时间以大鼠连续挠头次数达5次以上为标志，消失时间以一个时间段中大鼠挠头次数少于5次，并出现倦怠疲乏表现为标志。采用持续时间分段计数方法，以每30 min为一时间段。
1.3.3取材及切片造模4 h后，用10%水合氯醛0.3 mL/kg麻醉动物，仰卧固定、开胸，心尖部插管入主动脉，剪开右心耳处。首先迅速灌注生理盐水200 mL，冲净血液后再以4%多聚甲醛250 mL灌注，待充分固定后断头，取脑组织，自延髓闩部向尾端行冠状切取4 mm脑组织，放入甲醛液中固定24 h，后移入70%的乙醇中保存。常规脱水、石蜡包埋。石蜡切片机切片，每次2 μm，共4张。1.3.4免疫组化石蜡切片行常规HE染色，显微镜下观察确定组织结构未被破坏，进行免疫组织化学染色。室温显色，镜下控制反应时间，（2～3）min后显色充分。蒸馏水充分洗涤。梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中型树胶封固。
1.3.5免疫组化对照实验阴性对照，用PBS缓冲液代替c-fos抗体，其他步骤与前述程序相同。
1.3.6图像定量分析在光学显微镜下，切片背景为淡黄色或无色，阳性细胞呈黄褐色圆形或卵圆形，主要为核染，易与背景分别。高倍镜下每张切片在TNC部位随机选取5个视野，记录阳性细胞数，取平均值进行统计学比较。
1.4统计学处理计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS 13.0统计软件分析。各组间先行方差齐性检验，在各组方差齐的情况下，采用单因素方差分析，其中两两比较用LSD-t检验。
2结果
2.1耳红空白对照组大鼠始终没有耳红症状出现，硝酸甘油组、PACAP38高剂量组、PACAP38中剂量组、PACAP38低剂量组平均在静脉给药后4 min出现耳红，各组间无统计学意义（P＞0.05);4组在给药后3 h耳红症状消失,数据记录各组间无统计学意义(P＞0.05)。详见表1。
2.2挠头硝酸甘油组、PACAP38中剂量组、PACAP38高剂量组均出现了挠头增多现象，出现与消失时间基本与耳红时间相平行（P＞0.05）。详见表2。大鼠在尾静脉给药后4 min出现挠头频繁，60 min～90 min维持高峰期，之后挠头次数逐渐下降，至180 min挠头消失。空白对照组、PACAP38低剂量组挠头次数无明显增加，与硝酸甘油组同时间段比较有统计学意义（P
2.3爬笼硝酸甘油组、PACAP38中剂量组、PACAP38高剂量组大鼠在尾静脉给药后出现明显烦躁、爬笼次数增多，增多、减少以及高峰时间与挠头时间相类似。详见表4。2.4c-fos蛋白表达光学显微镜下可见切片背景为淡黄色，c-fos免疫反应阳性神经元呈黄褐色圆形或卵圆形，核染为主，主要分布于两侧TNC。阴性对照片无阳性信号出现。硝酸甘油组、PACAP38中剂量组、PACAP38高剂量组较空白对照组c-fos免疫阳性细胞明显增多（P0.05）；PACAP38低剂量组c-fos免疫阳性细胞较空白对照组无统计学意义（P>0.05）。详见表5。
3讨论
三叉神经血管系统目前被认为是偏头痛发作的解剖结构基础，此系统的激活是患者偏头痛发作产生疼痛的关键环节。基于这一理论提出的三叉神经血管反射假说是目前解释偏头痛发病机制的主流学说之一。这一假说将血管、神经、递质三者相结合，认为偏头痛患者的三叉神经血管系统及中枢性调节系统可能存在功能。偏头痛发作启始，神经组织受刺激后颅内血管周围的神经纤维释放多种神经递质，引发包括颅内血管舒缩障碍、血浆成分外渗及肥大细胞脱颗粒致无菌性神经源性炎症以及三叉神经敏化在内的一系列病理生理改变，从而触发偏头痛的发作［2］。
PACAP38是一种具有多样生物活性的神经多肽，在中枢神经系统和周围神经系统均有广泛的表达，有神经递质和神经调质的作用。PACAP38具有高度扩血管作用，而以往研究结果提示人体静脉输注扩血管药物可能引发偏头痛发作。基于上述两点，Henrik等提出了静脉给予PACAP38注射可能诱发人体偏头痛发作的假设，并在随后的实验中得到证实，这项双盲交叉试验显示，人体在肘静脉注射PACAP38（10 mg/kg）后诱发了偏头痛样头痛发作［3］。
大鼠对疼痛的行为学反应比较复杂。付先军等［4］建立的一套比较完整的NTG偏头痛大鼠模型行为学特征评价体系中，评价指标主要包括耳红、挠头、爬笼等行为学改变，这些指标是大鼠对疼痛防御反应的客观表现，可广泛应用于大鼠偏头痛发作的评估。c-fos原癌基因是一种即早基因，它的快速表达产物c-fos蛋白被作为神经元激活的标志物广泛用于感觉通路的研究，并可用于神经元功能活动的形态定位［5］。本实验中，观察到尾静脉注射中等剂量（6 μg/kg）以上的PACAP38出现了耳红、连续挠头、爬笼增多等行为学改变，相关记录数据经统计学比较与硝酸甘油组无统计学意义（P>0.05）；同时在PACAP38中、高剂量组大鼠脑干TNC部位观察到c-fos蛋白免疫阳性细胞明显较空白组增多（P0.05）。推测低剂量PACAP38仅能引起实验动物动脉扩张而不能达到诱发偏头痛阈值。
PACAP38受体可分为两类三型即VPAC1、VPAC2、PAC1。其中VPAC1及VPAC2与血管活性肠肽（VIP）和PACAP38的亲合力相当，而PAC1与PACAP38的亲和力要远远高于VIP［6］。目前并无明确证据表明究竟是哪型受体介导偏头痛发作，且无任一PACAP38受体拮抗剂阻止偏头痛发作的相关实验研究。但根据VIP只能诱导人体较弱头痛而非偏头痛样头痛发作［7］，高度提示PAC1受体可能是PACAP38介导偏头痛发作的作用靶点。
PACAP38介导偏头痛发作的病理生理过程尚不明确。尽管PACAP38具有高强度的扩血管作用，但在本实验中显示PACAP38低剂量组大鼠仅有耳红症状出现，耳红程度以及出现、消失时间与除空白组外其余3组无统计学意义，但其他行为学改变并不明显，且c-fos免疫阳性细胞无明显增加。扩张血管并不是PACAP38诱发偏头痛发作的决定因素。PACAP38诱导偏头痛发作的可能途径是三叉神经二级神经元敏化-致敏三叉神经-级神经元-诱发偏头痛［8］。静脉注射PACAP38 5 min后只有其中的0.063%可以通过血脑屏障［9］，推测PACAP38诱导偏头痛发作主要依靠血脑屏障外作用。静脉注射PACAP38致硬脑膜细胞内cAMP浓度的提高，可能是偏头痛发作的关键，这在具有同样效应的西洛他唑和CGRP相关研究中也得到了证实［10,11］。矛盾的是，肥大细胞脱颗粒、无菌性神经源性炎症这些很多认为的偏头痛发作关键途径所通过的受体均非PAC1而是VPAC。
在本实验中，尾静脉注射中等以上剂量的PACAP38大鼠出现了偏头痛发作的行为学及病理生理改变，提示PACAP38构建新的偏头痛大鼠实验模型的可能性。在未来的研究中,PAC1可能会成为开发偏头痛治疗药物的新的突破点，而对这一受体介导的一系列偏头痛病理生理过程的阐述，以及PAC1受体拮抗剂的研究及应用都可能对防治偏头痛发作具有重要的意义。
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篇8
【摘要】 探讨六味地黄丸对帕金森病小鼠模型的异常行为和黑质抗氧化系统的影响。［方法］经腹腔注射1甲基4苯基1，2，3，6四氢吡啶（MPTP），建立小鼠帕金森病（PD）模型。通过爬竿实验和滚筒实验研究小鼠造模和给药后的行为表现；给药4周后测定小鼠中脑黑质部位超氧化物岐化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活性及丙二醛（MDA）水平的变化。［结果］经MPTP诱导的小鼠，其爬竿时间、滚筒运动潜伏期与正常对照组比较有显著性差异，经六味地黄丸给药后能明显改善MPTP诱导的小鼠的行为学表现；可使MPTP诱导小鼠的MDA含量降低，SOD、GSHPX含量升高。［结论］经六味地黄丸给药可以改善MPTP致帕金森病小鼠的运动功能障碍，提高机体抗氧化能力，减轻机体的氧化应激损伤。
【关键词】 帕金森病；六味地黄丸；氧化应激
Fund project：Subject of Integrated TCM and WM of Hubei Provincial Health Bureau（No：E.W.F［2006］63帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一种以黑质多巴胺能神经元特征性缺失为主要病理改变的神经系统变性疾病，临床上以静止性震颤、肌僵直、运动减少和姿势调节障碍为特征。临床研究表明，帕金森病患者处于氧化应激状态，氧化应激反应是PD的发病机制之一［1］，在各种神经变性机制中，氧化应激仍占主导地位，并对多巴胺神经元死亡起重要作用［2］。
1 材料与方法
1.1 材料
（1）药物：滋阴补肾之中药六味地黄丸。美多巴：上海罗氏制药公司产品，批号：SH0607。（2）动物：C57BL小鼠50只，雄性，体重20～25g，由武汉大学动物实验中心提供，动物合格证号：SCXK（鄂）2003-0004。（3）试剂：1甲基4苯基1，2，3，6四氢吡啶（MPTP），为Sigma公司产品。超氧化物岐化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、丙二醛（MDA）试剂盒为南京建成生物工程公司产品。
1.2 方法
（1）动物分组 将50只小鼠随机分为5组：正常对照组（A）、模型组（B）、美多巴组（C）、六味地黄丸组（D）、美多巴加六味地黄丸组（E），每组10只。（2）模型制备：以无菌生理盐水溶解MPTP后，按25mg／kg的剂量腹腔注射小鼠，每日1次，连续5d。（3）给药：美多巴组，六味地黄丸组，美多巴加六味地黄丸组根据药理学方法计算小鼠给药量［3］，按照每次灌胃量0.5ml配制。正常对照组，模型组每只鼠给予灌胃等体积生理盐水，1次/d，连续4周。（4）行为学实验5组小鼠分别进行爬竿实验和滚筒实验的行为测验以检测其肢体运动协调情况。各组小鼠于实验前4d进行2次/d爬杆、滚筒行为训练。两个实验在实验的第2周和第4周检测小鼠的行为学改变，最后计算得分情况。（5）小鼠脑组织SOD、GSHPx、MDA含量测定：实验结束后，各组小鼠断头取脑，分离中脑黑质。制备脑组织匀浆液，取适量上清液进行SOD、GSHPX、MDA的检测，具体方法按南京建成生物工程研究所试剂盒说明书步骤进行测试。（6）统计学处理方法：所有实验数据采用SPSS11.5统计软件进行统计学处理，结果用均数±标准差表示，对资料进行t检验。
2 结果
2.1 小鼠造模情况
小鼠注射MPTP后出现全身震颤、弓背、皮毛及尾巴竖立、后肢张开、运动迟缓、活动减少，并随MPTP给药次数增加上述症状表现趋于明显。
2.2 爬竿实验
小鼠运动功能测定结果，以爬竿时间为指标考察小鼠行为学变化。模型组与正常对照组比较有显著性差异（P
与模型组比较，﹡P
2.3 滚筒实验
经过治疗的3组小鼠行为都有改善，与模型组比较均有差异（P
图1 各组小鼠的滚筒实验评分2.4 小鼠黑质抗氧化系统指标检测 脑组织GSHPx、SOD含量与正常组比较，模型组明显降低显（P
脑组织SOD、和MDA含量在给药组组间比较差异无统计学意义，推测与样本数偏少有关。
3 讨论
中医认为PD属于“颤证”范畴。早在《内经》中就有类似此病的记载，如《素问》“诸风掉眩，皆属于肝”“诸寒收引，皆属于肾”“骨者髓之府，不能久立，行则震掉”等。本病为脑髓与肝脾肾等脏器受损而发生的退行性病变，其关键在于肾虚精亏，筋脉失荣；脾虚生化不足，脑髓失充所致。六味地黄丸为治肾虚诸证的经典补阴方剂，重用熟地，滋阴补肾，填精益髓为君药。山萸肉补养肝肾，山药补益脾阴，共为臣药。三药相配，滋养肝脾肾，为“三补”。佐以茯苓、泽泻、丹皮“三泻”，渗湿浊，清虚热，六味合用，三补三泻，以补为主，肝脾肾三阴并补，以补肾阴为主。已有研究表明六味地黄丸有抗氧化和抗衰老作用，可增强SOD活性，减少MDA的生成量，能显著降低脂质过氧化的含量［4］，有调节免疫［5］，抗血管内皮细胞凋亡［6］的作用。本次实验，使用MPTP制备PD模型，在运用六味地黄丸对其治疗4周后，PD小鼠脑内的SOD、GSHPx水平与模型组相比显著提高，而其MDA的含量较模型组明显下降，对于给药组组间比较无显著差异，考虑可能与样本数少和给药时间短有一定的关系，有待于实验的进一步深入。
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篇9
【关键词】 脑缺血再灌注损伤；血红素结合蛋白；血红素氧合酶-1
DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.29.193
Hemopexin in HO-1 up-regulation for improving rat neuroethology after cerebral ischemia reperfusion injury DONG Bei-bei， ZHANG Zhi-shen， XIE Ke-liang， et al. Department of Anesthesiology， Tianjin Medical University General Hospital， Tianjin 300052， China
【Abstract】 Objective To investigate whether or not hemopexin （HPX） can improve rat cerebral ischemia reperfusion（IR） injury by its heme oxygenase-1 （HO-1） up-regulation. Methods A total of 60 male SD rats， aging 7～8 weeks and weighting 250～280 g， were divided by random number table into sham operation （Sham） group， ischemia reperfusion （MCAO） group， solvent （sodium azide） （MCAO+Vehicle） group， HPX （MCAO+HPX） group and HO-1 inhibitor （MCAO+HPX+ ZnppⅨ） group， with 12 rats in each group. Middle cerebral artery occlusion （MCAO） was applied to prepare model of rat ischemia reperfusion. MCAO group， MCAO+Vehicle group， MCAO+HPX group and MCAO+HPX+ZnppⅨ group received respectively single injection through paracele immediate at IR by normal saline （10 μl， 0.9%）， sodium azide （10 μl， 0.1%）， HPX （10 μl， 1.86g/L） and 10 μl HPX+ZnppⅨ （HPX 1.86 g/L+ sodium azide 0.1%）. Carcia evaluation was applied in 24 h and 7 d after IR for neurobehavior score （NBS）， along with real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction （RT-PCR） for HO-1 mRNA level in ischemic penumbra brain tissue. Results In 24 h after IR， Sham group， MCAO group， MCAO+Vehicle group， MCAO+HPX group and MCAO+HPX+ZnppⅨ group had NBS scores respectively as （15.50±2.43）， （5.17±1.60）， （5.00±2.10）， （10.83±1.47） and （5.33±1.97） points， and the difference had statistical significance （F=34.819， P
【Key words】 Cerebral ischemia reperfusion injury； Hemopexin； Heme oxygenase-1
对脑卒中患者进行溶栓治疗会发生再灌注损伤， 缺血再灌注损伤涉及到氧化应激[1]、细胞凋亡[2]、线粒体紊乱[3]等诸多机制 ， 针对上述机制进行干预的效果并不理想。过多的游离血红素有强烈的细胞毒性， 能够造成内皮损伤[4]， HPX能够清除过多游离血红素， 而HO-1是游离血红素代谢的关键限速酶。作者的前期动物实验研究显示：HPX 在中枢神经系统的神经元和脉管上皮细胞均有表达， 侧脑室注射HPX可缩小大鼠脑梗死容积[5]。然而国内外针对HPX的神经保护作用及其机制的研究相对缺乏， 因此本实验在前期研究基础上， 探讨HPX是否通过提高HO-1表达改善脑缺血再灌注损伤后行为学表现， 为促进脑卒中患者的认知功能恢复提供新思路。
1 材料与方法
1. 1 实验动物来源 成年雄性SD大鼠60只， 7～8周龄， 体重250～280 g， 购自中国军事医学科学院实验动物中心， 许可证号：SCXK（军）2009-003。分笼饲养于无特殊病原菌环境：温度（22±2）℃， 相对湿度约55%～60%， 每日12 h昼夜交替， 自由饮食、饮水。采用随机数字表法将其分为五组：Sham组、MCAO组、MCAO+Vehicle组、MCAO+ HPX组、MCAO+HPX+ZnppⅨ组， 每组12只。本研究已获天津医科大学实验动物管理委员会批准。
1. 2 脑缺血再灌注模型制备 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型， 参照文献所述[6]， 10%水合氯醛（0.3 g/kg）腹腔注射麻醉， 暴露并分离右侧颈总动脉（CCA）， 右颈外动脉（ECA）及颈动脉分叉， 直视下用眼科剪于CCA距离动脉分叉5～15 mm处剪一小口， 右手改用眼科镊持准备好的栓线（购自北京西浓科技有限公司）经此小口置入CCA内向前送入颅内， 至稍感阻力， 拉紧固定栓线。待栓塞1 h大鼠苏醒后， 采用Longa法[7]评估大鼠行为表现， 评分1～3分提示造模成功。Sham组大鼠相同条件下暴露分离右侧CCA， 右侧ECA及颈动脉分叉， 结扎右侧CCA和ECA， 但不插入栓线， 关闭切口。手术过程中使用电热毯维持大鼠体温， 使其直肠温度维持在（37.0±0.5）℃。
1. 3 方法 参照文献所述[8]， MCAO组、MCAO+Vehicle组、MCAO+HPX组、MCAO+HPX+ZnppⅨ 组大鼠分别在IR后即刻在立体定位仪下经侧脑室注射方式单次给予生理盐水（10 μl， 0.9%）、叠氮钠（NaN3）（10 μl， 0.1%）、HPX（10 μl， 1.86 g/L）和10 μl HPX+ZnppⅨ混合液（HPX 1.86 g/L+0.1%叠氮钠）。
1. 4 观察指标
1. 4. 1 NBS评分 参照文献所述[9]， IR后24 h、7 d采用Carcia评分法由一个不了解本研究实验分组情况的研究人员评价各组大鼠NBS评分。该评分法分为运动功能和感觉功能评价两方面， 最高18分， 最低3分， 得分越高说明动物的神经行为表现越好， 得分3～7分说明重度神经功能障碍， 8～11分为中度神经功能障碍， 12～18分为轻度神经功能障碍。
1. 4. 2 RT-PCR法检测缺血半暗带区HO-1 mRNA水平变化 Sham组、MCAO组、MCAO+Vehicle组和MCAO+HPX组， 每组选取6只大鼠， 水合氯醛深麻醉， 然后进行左心室灌注， 直至肝脏色发白， 右心耳开口处流出的灌注液体基本变成清亮， 这时可认为灌注有效。经灌注死亡后断颈取大鼠缺血半暗带脑组织， 提取总RNA， 反转录合成cDNA， 使用SYBR Green法进行实时荧光定量PCR检测， 以GAPDH为内对照。HO-1引物长度77bp， 上游引物5′-CGACAGCATGTCCCAGGATT-3′， 下游引物5′-TCGCTCTATCTCCTCTTCCAGG-3′；GAPDH引物长度95 bp， 上游引物5′-CAGTGCCAGCCTCGTCTCAT-3′， 下游引物 5′-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3′。用iQTM多重实时荧光定量PCR仪（Bio-Rad公司， 美国）进行扩增并分析处理数据。用2-ΔΔCT法计算mRNA相对表达量。
1. 5 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 组间比较用单因素方差分析， 两两比较用LSD检验。P
2 结果
2. 1 NBS评分 IR后24 h Sham组、MCAO组、MCAO+Vehicle组、MCAO+ HPX组、MCAO+HPX+ZnppⅨ组大鼠的NBS评分分别为（15.50±2.43）、（5.17±1.60）、（5.00±2.10）、（10.83±1.47）、（5.33±1.97）分， 比较差异有统计学意义（F=34.819， P
2. 2 缺血半暗带组织HO-1 mRNA水平 与Sham组比较， MCAO组大鼠IR后24 h、7 d缺血半暗带区脑组织HO-1 mRNA水平显著增加（P0.05）；与MCAO+Vehicle组比较， MCAO+HPX组大鼠IR后24 h、7 d缺血半暗带区脑组织HO-1 mRNA水平显著升高（P
3 讨论
大脑中动脉是颈内动脉的直接延续， 是血管缺血闭塞发生率最高的动脉分支；然而大脑中动脉提供大脑半球约80%的血供， 一旦发生闭塞， 造成的临床症状更加广泛严重。因此本研究通过采用经典的MCAO法建立大鼠脑IR模型， 这与临床上缺血性脑卒中发生的特点相一致。多种神经行为学评价方法比较表明， Carcia评分法与缺血性脑卒中大鼠的梗死容积有更好的相关性[10]， 因此本研究采用Carcia评分法评价大鼠IR后的神经行为学表现。本研究结果显示， 与Sham组相比， MCAO大鼠IR后24 h和7 d的NBS明显降低， 侧脑室注射HPX能明显的提高大鼠IR后24 h和7 d的NBS评分， 给予HPX时同时给予HO-1抑制剂ZnppⅨ后， HPX提高大鼠IR后的NBS评分的作用消失；大鼠IR后24 h和7 d的NBS评分降低到HPX治疗前的水平， 侧脑室注射叠氮钠对大鼠IR后24 h和7 d的NBS评分无明显影响， 表明HPX能够有效改善大鼠IR后的神经功能缺损， 提高其神经行为学表现， HO-1可能是HPX发挥神经功能保护作用的关键分子。
游离血红素为亲脂性结构， 主要用于血红蛋白、细胞色素P450、过氧化氢酶等的合成， 同时也还是调节这些蛋白基因表达的重要因子。然而越来越多的研究发现， 过多的游离血红素有强烈的细胞毒性作用， 该毒性作用在血管内皮细胞和神经元中最为显著， 多种组织损伤时伴随游离血红素的过度释放[11]。游离血红素的亲脂性结构特点使其能够很容易的插入血管内皮细胞膜脂质分子中， 破坏内皮结构的完整性， 与此同时， 游离血红素还参与了血管内皮的氧化应激、炎症反应， 从而引起血管内皮功能障碍[12]。HPX是血浆中与游离血红素亲和力最强的蛋白， 可清除过多有害游离血红素。作者前期研究表明HPX在脑缺血后的脉管系统中表达增加， 侧脑室注射HPX能够呈剂量依赖性显著缩小大鼠的脑梗死容积[5]。HO-1是催化血红素分解的限速酶， 其作为机体内源性的保护因子， 是细胞应激最敏感的指标之一， 对多种血管源性损伤发挥保护作用[13]。缺血再灌注损伤发生时HO-1的表达增加， 外源性导入HO-1基因载体， 缺血再灌注后24 h动物神经行为学评分明显升高， 组织病理改变减轻， 梗死面积减少[14]。
本研究结果显示， 与Sham组相比， MCAO大鼠IR后24 h缺血半暗带区的HO-1 mRNA应激性增加， 在IR后7 d下降到手术前水平；侧脑室注射HPX能够显著上调大鼠IR后24 h缺血半暗带区的HO-1 mRNA的转录水平， 该作用能持续到IR后7 d；给予HPX时同时给予HO-1抑制剂ZnppⅨ， 阻止了神经行为学改善， 表明HPX通过上调HO-1表达改善脑缺血再灌注后行为学表现。
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篇10
【关键词】 益智宁神口服液/药理学;抽动—秽语综合征/中药疗法;神经递质;疾病模型，动物;大鼠;色谱法，高压液相
抽动—秽语综合征(tourette syndrome，ts)，又称多发性抽动症，是一种儿童期发病的慢性神经精神障碍性疾病。wWW.133229.cOM临床表现主要为突然、快速、反复、非节律性、不自主和刻板的运动性抽动和发声性抽动，还可能伴有各种行为紊乱、强迫观念与行为、认知障碍等，可不同程度地干扰和损害儿童的认知功能，影响社会适应能力。本病病因尚未明确，具有明显的遗传倾向，多见于4～12岁的儿童，患病率约为005%～3%，近年来发病呈明显上升趋势，男孩多于女孩[1]。广东省中医院儿科在临床实践中运用自拟方益智宁神口服液治疗该病，取得了较好的疗效[2]。本实验应用亚氨基二丙腈腹腔注射建立抽动—秽语综合征模型大鼠，观察该药对模型大鼠行为学和神经生物学的影响，现报道如下。
1材料与方法
11实验动物spf级sd大鼠60只，28～30d龄，体质量(250±10)g，雌雄各半。由广东省医学实验动物中心提供(许可证号:粤监证字2008d006，批号：0037766)。
12实验药品亚氨基二丙腈(iminodipropionitrile，idpn)购自alfa aesar公司(批号：c7323a)，中药益智宁神口服液(由广东省中医院提供，批号：080201)，对照药物为氟哌啶醇(上海信谊九福药业有限公司，批号：08031121)。
13仪器及试剂lc26a 型高效液相色谱仪、spd26av 荧光检测器、c2r4a 数据处理机均为日本岛津公司产品，脱水机、包埋机、切片机和生物显微镜等设备为德国leica公司产品，微量组织匀浆器为millipore公司产品，zh蓝星c/s型脑立体定位仪，高氯酸、乙二胺四乙酸二钠(edtana2)均为分析纯，甲醇为色谱纯，对照品由中国药品生物制品所提供。
14模型复制参考wakata[3]的方法，将亚氨基二丙腈溶解于生理盐水，稀释成浓度100mg/ml，给药途径为腹腔注射，剂量为150mg·kg-1·d-1，每天1次，共用7d。
15分组及给药选用sd大鼠随机分为4组：空白组和模型组各10只，中药组和西药组各20只，每组均雌雄各半。治疗组在造模后第2天开始给药，中药组按20kg的儿童每天口服20ml益智宁神口服液的比例计算，每只大鼠灌胃约2ml/d;西药组按20kg的儿童每天口服氟哌啶醇片1mg的比例计算，每只大鼠灌胃约015mg/d，连续14d。
16大鼠行为观察[4]采用观察评分，每次至少观察1h，主要诱发症状为运动行为和刻板运动。(1)运动行为评分：0分：安静或正常活动;1分：能过度兴奋;2分：探究行为增加;3分：跑;4分：跑和跳;(2)刻板运动(或定型运动)评分：0分：无刻板运动;1分：旋转行为;2分：头和颈部的上下运动过多;3分：头、颈部的上下运动过多加旋转行为;4分：头向侧摆合并头和颈部的上下运动过多。
17神经递质水平检测[5]第14天将所有实验大鼠迅速断头处死，借助脑立体定位仪，取右脑海马组织及边缘系统(包括纹状体、隔核、层壳核、基底节、齿状回)，精确称质量，置入1ml处理液(含01mol/l高氯酸和05g/ledtana2)中，微量组织匀浆器冰溶下匀浆，4℃冰冻离心10000r/min，取上清液置入-20℃保存。采用高效液相色谱法测定多巴胺(da)和去甲肾上腺素(ne)浓度。测样时，室温下解冻，进样20μl，以峰面积外标法定量。
18统计学方法采用spss130和sas913版本进行统计学处理和分析，各组神经递质水平检测数据分别进行方差齐性和正态分布检验，方差不齐采用秩和检验，检验水平α=005。
2结果
21各组行为学观察和评分各组治疗前后运动行为和刻板运动积分见表1。模型组行为学评分与空白组比较，差异有显著性意义(p<001)，表明造模是成功的。
治疗14d后，中、西药组运动行为积分和刻板运动积分降低，与模型组比较差异有显著性意义(p<005或p<001)，表明中药组和西药组对动物行为均有明显改善作用，中药组效果与西药组相仿。
22各组治疗前后脑组织da、ne含量变化比较表2结果显示：模型组脑组织da水平降低，ne水平升高，与空白组比较差异均有显著性意义(p<001);治疗14d后，中、西药组均可显著升高da水平，降低ne水平，与模型组比较差异均有显著性意义(p<005或p<001)，中药组作用与西药组相仿。表1各组治疗前后运动行为和刻板运动积分比较(x±s) 表2各组治疗前后神经递质水平比较
3讨论
idpn是一种中枢神经毒素，50年代以后就用于神经病理学的研究，本研究参考wakata[3]的方法复制模型，从神经生物学和行为学两方面观察药物治疗对ts模型动物临床行为学典型特征的影响。idpn诱发ts模型大鼠出现明显刻板运动和运动行为异常，如过度兴奋、探究行为、异常跑跳、旋转行为和头颈部上下侧摆等动作均具有ts临床行为学的典型特征，有时出现连续的嗤鼻、抬举上肢等动作，类似于人类ts患儿喉部发声、耸肩等特征行为。本研究通过对药物治疗前后ts模型大鼠运动行为和刻板运动行为评分的比较，发现中药组在改善动物ts典型特征行为方面效果明显，如头部、颈部的抽动减轻，旋转行为明显缓解，每次异常行为发作持续时间缩短，异常抽动次数消失，异常跑动及不规律的弹跳运动明显减少。
虽然目前对ts的神经生物学物质基础还未完全阐明，但基本认为中枢神经递质，特别是da、ne、5-羟色胺(5ht)等与ts之间关系密切[5]，因此，探讨大脑多巴胺类神经递质及其代谢产物的水平是证明药物神经生物学疗效的主要依据。本研究对大脑海马区da和ne水平进行测定，结果表明：治疗后中药组da水平明显升高，而ne水平有所下降，均趋向于正常水平。与ts有关的神经递质包括乙酰胆碱、肾上腺素、5ht、多巴胺等，主要分布于纹状体、隔区、蓝斑、黑质等海马、基底前脑及边缘系统，构成复杂的神经网络[6-8]。有关药物治疗对大脑组织不同部位和核团神经递质水平的影响文献报道并不一致，而且与检测时间点有很大关系[8]。本研究结果初步表明，中药治疗14d后，对大脑组织da和ne两种神经递质水平的变化产生显著影响，对于治疗过程中以及停药后神经递质的动态变化仍需进一步观察。
益智宁神口服液的主要组成为：熟地黄、黄芪、白芍、龙骨、远志、石菖蒲、五味子。其中熟地，其味甘，性微温，入心、肝、肾经，本品味厚气薄，为补血生精、滋阴补肾之要药，《珍珠囊》曰：“主补血气，滋肾水，益真阴”。黄芪，味甘，性微温，入脾、肺经，质轻升浮，为升阳补气之圣药。可补中气、益元气、温三焦、壮脾阳，选以补脾益气。白芍味苦、酸，性微寒，入肝经，既能养血敛阴，又能平抑肝阳，还能柔肝止痉;而龙骨味甘、涩，性微寒，入心、肝经，专攻平肝潜阳、镇静安神之用，两者搭配，养阴宁心，平肝潜阳。五味子性温，五味具备，酸能收敛，苦能清热，咸能滋肾，温而不燥，既能益气生津，补肾养心，用其养心滋肾安神;远志、石菖蒲有安神益智、化痰开窍之功效。诸药配伍，具有健脾滋肾、平肝熄风、宁神益智、化痰开窍之功效。氟哌啶醇是目前治疗ts的最有效药物之一[9]，疗效确切，但因副作用明显使其临床应用受到限制，通过实验结合临床用药发现，益智宁神口服液的疗效与氟哌啶醇无明显差异，且疗效更加稳定，易为患儿及家属接受。
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