动物行为学方法范文

导语：如何才能写好一篇动物行为学方法，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

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在一所学校里，无论是校园文化建设还是课堂改革，无论是学校规划发展还是学生养成教育，都需要教师的参与，教师的处事态度、工作方法将直接影响到学校工作质量。而长时间单调、繁重的教学生活，或多或少的都会使教师产生职业倦怠，因此，如何激发教师工作的积极性，充分挖掘教师的潜能，就成为每一位学校管理者不得不面对的一个实际问题。

一提到调动教师积极性，很多学校管理者马上会想到通过多发奖金和物质奖品的方法来激发教师的工作热情，这的确是最简单、最直接、最容易被教师接受的一种方法。但是对于义务教育阶段的农村中小学来说，有限的经费维持平时的办公开支还捉襟见肘，根本就拿不出用于奖励教师的“富裕”钱。因此，在农村中小学，我们必须把调动教师积极性的重点放在精神奖励上，让教师发自内心地去爱教、乐教、愿意从教。

一、弘扬主旋律，宣传新的教育政策，对教师们进行正面引导

目前国家的教育理念已经开始改变，例如：从提倡教师像蜡烛一样燃烧自己照亮别人转向鼓励中小学教师发展自我、成名成家；从大规模的合校并点转向区域化、均衡化的教育发展。十八届三中全会更是提出了“立德树人”的教育理念，改变科目的分值设置，改变功利化的教育模式，让教育回归原生态。为了提高教师地位，对教师任职资格制度也进行了改革，提高了获取教师任职资格的门槛，即使师范院校毕业的学生也必须通过国家统一组织的教师资格考试，才能取得教师任职资格证书。此外，教师职称制度也在逐步改革，在中小学教师中已经开始增加正高级职称的名额。管理者可以通过这些正面信息的传达让教师知道国家正在想办法提高教师待遇，引导他们积极地去对待教育工作。

二、学校要建立公平、公正的管理制度，做到规范化办学 学校的管理制度都是为教学工作服务的，涉及学校所有教师的切身利益。因此，在制定管理制度时一定要尊重广大教师的意见。学校管理制度的制定应该分以下几个步骤：1调查研究。制度的制定是为了解决某一方面的问题，不调查不研究就没有发言权，所以第一步就是调查研究、了解实情。2．组织教职工委员会讨论，拿出初稿。3．把初稿分发给教师并征求他们的建议。4．对教师提出的建议进行汇总并提交教职工委员会再次讨论定稿。5．学校大会公布实施。

比如：《沙河五中绩效工资分配方案》就是在教师全员参与的情况下制定的，并且随着学校实情的变化不断进行修改。修改的过程也是透明的，完全是由教师讨论并提出反馈建议，学校再组织教师代表整理建议，并依照大多数教师的建议进行修改。发放绩效工资时，学校严格按照制度执行，对于分配结果教师也都能够欣然接受。．

三、学校管理者要摆正自己的位置，演好自己的角色，提高自身的素质

1．借助榜样的力量。首先，学校管理者要做教师的榜样，要求教师做到的事自己一定要做到、做好。在道德标准、思想作风上，要高标准要求自己，做教师生活中的楷模；在教学工作中，要提高自身的教育教学研究能力，积极主动地参加学校的各项教学活动，做教师工作中的领路人。其次，从我校教师队伍内部找典型、树榜样，比如我们学校的崔然老师课堂教学理念先进，善于创新，在教学改革上常有突破，就可以把她作为课改榜样；陈捧书老师，埋头苦干从不计较工作得失，30年如一日，教学工作从未放松，可以作为师德楷模。身边榜样的力量，更能激发教师的积极性。

2．学会服务于教师。作为学校管理者，不应高高在上，而应多为教师服务，在生活上关心他们，在工作上帮助他们，在业务上指导他们，融入他们中间去，以此调动他们的积极性，营造和谐的工作氛围。

从人性的角度来讲，一直要求教师把全部精力放在工作中也是不现实的，对此，我们大胆提出了“家庭第一，健康第二，工作第三”的口号。让教师看到学校管理者对他们的爱护，当他们真正感受到学校管理者的关心之后，反而会做到“工作第一，健康第二，家庭第三”。我想这也许就是《孙子兵法》上所说的“不战而屈人之兵”的道理吧！

3．学会与教师沟通。教师是小知识分子，普遍爱面子、自尊心强，在与他们沟通时要适时、适地、适度。对于个性特别强的教师，要运用多种渠道进行沟通，要给教师讲明道理：要想获得自尊，就必须自强，要想在工作中做出成就，就必须有勇于献身的精神，有投入才会有收获。不实在、不踏实、不努力、不奋斗、不积极的人永远得不到别人的尊重。

四、规划教师的专业化发展，为教师们树立一个明确的奋斗目标

教师长年在学校里闭门教书，从初一教到初三，又从初三教到初一，视野被固定在一个小范围内，有的教师经过几轮教学小有成就沾沾自喜，停步不前，进而产生职业的倦怠。因此，必须要把老师从自满的“牢笼”中解放出来，要为教师谋划专业发展之路，促使他们不断充实自己、改变自己。

1．给教师一个明确的奋斗目标。学校管理者在规划学校愿景的时候，要帮助每位教师找到自己的发展方向，并制定个人的发展计划。例如：为了让教师认识到自身价值，看到自己的发展潜力，学校每年都要组织一些活动，让教师在活动中展示自我，学会沟通．找回自信。

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【关键词】 铁离子 阿尔采默病 Morris水迷宫 凋亡

Abstract Objective：To examine the behavioral performance and molecular pathological changes induced by higher concentration iron.FeCl3 were injected into intracephalic of rats by embedding a plastic hollow tube into their ventricle of brain.Methods：15 rats were pided into control and experimental groups.Both of the experimental and control rats.A small burrhole was made in the left/right side of the craium with a dental drill.A plastic hollow tube was embedded in the ventricle of brain.After the surgen，FeCl3 were injected into ventricle of brain.Of control tats interval 5 days and 3 times injection were carried out.Then the behavioral performance were examined by Morris water maze and the percentage of early apoptosisin of cells load with AnnexinFITC were testded by flow cytomery.Results：There were ignificant differences in the mean escape latencies：sum of escape distance between exprimental and control rats.Percentage of AnnexinFITC loaded cells that are undering apoptosis in animals treated by iron were higher than that of normals.Conclusion：Injecting higher concentration iron into ventrcle induce damage of study and memory and neuron apoptosis which were the clinic and pathological characteristic of AD.

Key words iron；AD；Morris water maze；apoptosis

阿尔采默病(AD)是一种临床上以进行性智能障碍为特征，病理上以皮层及海马区出现老年斑、神经纤维缠结为特征的疾病。近来，随着家族性AD病因的揭示，散发性AD病因的研究日益受到重视，人们发现环境、代谢对散发性AD的发生起着重要作用。而饮食(水)因素，特别是一些微量元素与AD病因的关系日益引起人们的重视。研究通过在大鼠侧脑室埋管，分别将FeCl3注入大鼠脑室系统，用Morris水迷宫测定其行为学改变，用Annexin VFITC染色细胞，通过流式细胞仪测定大鼠脑组织早期凋亡细胞百分率，研究大鼠行为学改变及神经元凋亡的发生，进一步探讨铁离子与AD病因之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

实验对象为山西医科大学动物中心提供的3月龄雄性SD大鼠18只(起始体重250～280 g)。随机分为实验组10只，对照组8只。实验期间自由饮食、饮水，分笼饲养。

1.2 行为学测定装置

行为学测定装置由Morris水迷宫及图像自动监视系统组成。Morris水迷宫为一直径120 cm、高50 cm的圆形水池，水深30 cm，水温23℃。池壁上标有东、南、西、北4个入水点，而将水池分为西南、东南、东北(平台所在)、西北4个象限(记录时分别以1～4代表)。在3象限正中距池壁20 cm处固定一直径为10 cm的圆形透明逃避平台，池水没过平台1 cm。测定前将鼠头用染发剂染黑，向池中加入奶粉使水呈白色不透明。由图像监视系统同步记录大鼠运动轨迹。

1.3 动物筛选

将鼠面向池壁依次从1，2，4象限放入水池，限时180 s内找到逃避平台，并在平台上停留2 s，即被认为逃避成功。18只大鼠每日上午、下午各进行1次行为学测定，共测定5 d 10次，8次(含8次)逃避成功者入选，其余剔出。

1.4 脑室埋管术

用戊巴比妥钠(40 mg/kg)经腹腔注射麻醉后将鼠置于立体定位仪上将鼠头固定，参照大鼠立体定位图谱1旁正中切口，在正中线旁开2 mm，前囟十字缝横线后1.3～1.8 mm处用牙钻钻孔至硬脑膜下3.5 mm，拔钻后，将长0.9 cm，直径1 mm的空心塑料管垂直插入约3 mm，见有透明脑脊液平面，用牙粉固定塑料管，术后恢复休息1周。

1.5 给药方法

实验组取FeCl3溶液10 μL(5.2 μg/μL)，对照组取生理盐水10 μL，分别用微量加样器经脑室埋管缓慢注入大鼠侧脑室。每5 d给药1次，共给药3次。

1.6 水迷宫行为学测定

实验组有9只，对照组有6只大鼠进行行为学测定，共测定7 d，测定指标有平均潜伏时间(s)；行程(cm)。

1.7 流式细胞计数

去大鼠大脑额叶皮层组织，以70％冷乙醇固定，将固定组织用机械法制备成单分散细胞悬液，低速离心后(700r/min)，用500目滤网弃去团块，调整细胞浓度为每个3×106/个/mL，加入特异性的早期凋亡细胞标记物Annexin VFITC染色标记细胞15 min后收集1万个神经元细胞，用流式细胞仪测定细胞早期凋亡百分率。

1.8 统计学方法

数据用SPSS软件包进行方差分析，用±s表示，将平均潜伏时间、距离转换成lgX，将早期细胞凋亡百分率转换成sin－1X，P＜0.05则认为有显著差异。

2 结

果

实验组与对照组大鼠平均潜伏时间、距离、早期凋亡细胞百分率比较差异显著(见表1)。表1 两组平均潜伏距离、时间及早期凋亡细胞百分率比较

3 讨

论

纵观近年来的研究，普遍认为早期发病的AD与遗传因素有关，晚期发病的AD与环境因素有关，有报道指出，AD时有铁代谢的参与，脑内铁离子、转铁蛋白和转铁蛋白受体的变化直接或间接与AD有关［1］，Connor用免疫组化法检测AD患者脑组织中铁、铁蛋白及转铁蛋白含量［2］，发现老年斑及血管周围染色呈强阳性，同时这些部位的铁蛋白染色阳性细胞也明显增多，另有研究证明，AD患者血浆、脑脊液中铁结合蛋白P97增加［3］，并且提出P97浓度作为AD的一个检测指标。由于AD是以智力减退为特征的病变，研究者常以Morris水迷宫作为检测AD动物模型的重要手段之一。本研究结果显示，实验组大鼠在水迷宫行为学测定中平均逃避时间延长，所走过的距离增加，说明在脑脊液中注入铁离子可损伤大鼠的行为学，能引起大鼠学习记忆功能障碍，这正是AD的重要临床特征。细胞凋亡在AD发病机制中的作用备受关注，运原位标记技术可证实AD患者脑中细胞凋亡的发生，与年龄相配对的非AD患者脑中凋亡细胞明显增多，细胞凋亡已成为AD神经元死亡的重要途径。Annexin VFITC是特异性的早期凋亡细胞发生的标记物［4］，可将早期凋亡细胞识别，目前有文献报道用此方法作为凋亡诊断指标［5］。本研究经用此法标记大鼠额叶细胞，观察到实验组大鼠细胞早期凋亡百分率显著高于对照组，说明实验组大鼠出现了神经元凋亡，而鉴于行为学障碍及神经元凋亡是AD特征性的临床和病理变化，故推测脑脊液中高铁与散发性AD存在关联。

参考文献

［1］Markesbery W R.Oxibative stress hypothesis in Alzheimer′s disease［J］.Free Radic Biol Med，1997，23：134147.

［2］杜宇.脑内的铁、转铁蛋白及转铁蛋白受体［J］.生理科学进展，1999，30(4)：337340.

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[关键词]鱼类行为，研究动态，发展

中图分类号：S932.4 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）46-0125-01

鱼类行为学是一门古老而又年轻的科学，在动物行为进化上和渔业生产发展中均具有重要意义。近年来随着现代渔业技术的发展，人们对鱼类行为的关注程度越来越高，其中主要包括鱼类与环境因子的相互作用、鱼类对重金属或有机毒物的应激反应以及鱼类群体内部个体间的协调机制等。这直接促进了鱼类行为学研究的发展，使得更多的成果应用到生产实践中。鱼类行为就是指鱼类进行的各种运动，是鱼类对环境变化的外在反应，主要包括游泳、摄食、生殖、呼吸等行为；此外，避敌、攻击、求偶时改变体色等非运动形式也列入行为范畴。本文主要介绍鱼类行为学的研究动态和发展趋势，以期为国内学者开展鱼类行为学研究提供参考依据。

1.鱼类行为学研究的历史过程

动物行为学的研究由来已久，但直到20世纪动物行为学才得到了迅速的发展和延伸。当时的主要研究对象是鸟类和哺乳类，而对于鱼类的研究和报道都较少。自从1904年Lyon报道了鱼类的趋流行为以来，陆续有学者开展关于鱼类行为的研究，但并未引起人们的足够重视。真正鱼类行为研究直到上世纪中叶才逐步发展起来，主要是为了适应海洋捕捞的发展需要。在1963年召开的联合国粮农组织大会中，Blaxter介绍了鱼类在不同光照下对网具不同部分的反应，1970年在冰岛雷克亚米克召开的世界性渔具会议有专门讨论鱼类行为的论文，1977年国际水生生物管理中心在意大利召开会议，专题讨论了鱼类行为与捕捞业和养殖业的关系。进入上世纪90年代后，鱼类行为的研究引起国际海洋理事会的重视，1992年在挪威召开会议上强调了鱼类行为学在渔业资源评估和渔业资源管理方面的应用，2004年在波兰召开的渔具工作组会议上又讨论了渔具渔法、鱼类行为和鱼群的声波反射强度等。可见，有关鱼类行为学的研究领域已经从最初的海洋捕捞业，逐渐扩展到生物技术、信息技术和资源管理等。

2.鱼类行为学的研究领域

随着现代科学技术的不断发展和完善，人们对鱼类行为的观察和探索也不断取得进展。最初只是研究鱼类行为在捕捞产业中的应用，其后发展到研究鱼类个体对声响、光照等环境因子的反应，最后发展到研究鱼类群体行为及内部机理。鱼类行为学的研究方向主要分为个体行为学和群体行为学：

2.1 鱼类个体行为学

个体行为学主要是指鱼类个体在外界物理或化学刺激下所产生的自发或条件反射行为。主要研究对象为鱼类个体或者鱼群中的独立个体，主要研究方向为鱼类的趋、鱼类的游泳行为和摄食行为等。

2.1.1 鱼类的趋

鱼类趋通常与环境因子的改变有关，如鱼类的趋光性、趋流性和趋礁性等，这些行为通常理解为鱼类的本能行为，不同鱼类面对光照、温度、流速甚至颜色的改变均有不同的反应和适应过程。王武等研究了水温与光照对瓦氏黄颡鱼幼鱼行为的影响，发现水温与光照的变化会对瓦氏黄颡鱼行为产生显著影响，过低的水温会减少瓦氏黄颡鱼对外界影响因素的反应，而高强度光照会使瓦氏黄颡鱼的游动增加，寻求藏匿处。该研究结果表明瓦氏黄颡鱼适合在低光照强度下养殖，增加了瓦氏黄颡鱼幼鱼的成活几率，成功将鱼类行为学应用于养殖技术领域。罗清平等[3]对孔雀鱼幼苗在光场中的行为反应进行分析，得出孔雀鱼幼苗对短波长的蓝、绿光趋向性最强，相应的照度范围为1500～2000lx，而对长波长的红、黄光表现出避光性。该研究结果在孔雀鱼工厂化养殖中得到应用，主要利用其趋光性特点进行定时定量投饵，也可以利用其避光性的特点对其进行驱赶，以提高清洁、分箱或捕捞等操作的效率。张硕等分析了黑幼鱼的趋流性，测定了黑幼鱼的感应流速、喜好流速和极限流速，并定量分析了黑幼鱼体长与流速之间的关系，为今后学者开展遗传育种或增殖放流相关研究提供科学依据。

2.1.2 游泳行为与摄食行为

鱼类在长期的进化演变中，体形和游泳能力反映出鱼类对环境的某种适应性，观察和研究鱼类的游泳行为是鱼类行为学的重要内容。Marie-Laure等[9]早在1999年便利用声学遥感装置对养殖虹鳟鱼的游泳行为进行研究，结果表明在不同养殖密度条件下，虹鳟鱼的行为差异显著，在高密度下具有较高的行动水平。Hanson等对黑鲈在自然环境中的游泳行为进行研究，并对于个体间的游泳相似性进行分析，得出了黑鲈在自然状态下的游泳行为习性。由于这次实验实在自然条件下进行的，所以非常具有实用价值。

2.2 鱼类群体行为学

自然界中，许多动物以群居的形式存在。群体生活的好处在于有利于发现食物、抵御敌害和繁衍等。有统计表明，80%的鱼类均以聚集成群的形式进行栖息、索饵和洄游，这是鱼类经过长期自然选择的一种适应性，对鱼类生存起着十分有利的作用。鱼类群体行为学以整个鱼群为研究对象，主要研究方向为鱼群的形成机制和鱼群的行为模拟等。ANNE等[17]研究了鱼类早期的经验对鱼类集群的影响，认为鱼群能否成功聚集及逃避捕食危害，多数取决于早期的经验，这在鱼类行为学的研究中，具有突破性价值，该项研究也可以应用于人工培育鱼类的早期驯养。日本学者M. Zheng等从鱼群对逃避捕食造成影响的角度出发，利用模型研究了鱼群对捕食者的行为反应，得出了不同情况下鱼类的被捕食概率，鱼群通常是某些个体行为对整个鱼群发出讯息，并成功逃避捕食者的追捕。

3.鱼类行为学的发展趋势

鱼类行为学发展至今，研究领域已经从水产捕捞学逐渐拓展到生理学、生态学甚至计算机学。其未来发展趋仍会借助现代科技手段，对鱼类行为的原理、方式和结果进行更加精确的分析研究。随着基因遗传学的不断发展，更多的学者将该项技术应用于种群多样性、个体性状性和行为差异性的研究，鱼类行为学也可以借鉴该项技术，对个体和群体行为的内在因素进行探索与表达，如研究鱼类游泳姿态的差异性，雌、雄鱼求偶行为的基因表达等。

近年来，随着人工智能或仿真影像技术的发展，鱼类行为研究者们也开拓了研究的新思路和方法，人工智能在鱼类行为方面应用的典型是涂晓媛鱼，这是一种以计算机动画为条件，具备人工生命的鱼类。涂晓媛鱼具有自主性，可以根据外界环境变化作出不同反应。该种技术的应用具备广阔前景，许多不具备的实验条件在计算机上便可完成。仿真影像技术可以将鱼类的相对位置在计算机上精确显示出来，不仅可以应用于鱼群个体间的相对距离研究，而且可以应用于鱼群与渔船、礁体之间的相对位置研究。鱼类行为学会随着社会科技的不断进步更加繁荣地发展。

参考文献

[1] 何大仁，俞文钊译.（普罗塔索夫 B. P.著）.鱼类的行动.北京：科学出版社，1984.

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目的实验观察针刺对抑郁模型大鼠行为学的影响。方法以 220 V，0.8 mA的方波刺激Wistar大鼠15 s，间隔45 s/次，共60次，总刺激时间15 min，进行不可逃避的前休克动物（pre-shocked animals）制作，形成学习无助大鼠模型，采用Open-Field法进行动物行为学敞箱实验及条件回避实验，观察针刺对模型大鼠行为学的影响。结果针刺对学习无助模型大鼠水平及垂直运动均有明显改善，且显著提高大鼠的逃避成功次数、缩短逃避潜伏期（P

【关键词】 针灸疗法 抑郁症

Abstract：ObjectiveTo observe the effect of acupuncture on behavior changes in the Wistar rats of depression.Methods40 male Wistar rats were randomly pided into 4 groups，namely acupuncture group， drug group， model group and normal control group.The rats were stimulated 15 minutes by quadratal wave of 220v， 0.8mA to make Wistar rat model of studying helplessness.The animal behavioral spacious box testing and conditioned avoidance testing were performed with the method of Open-Field.Results The crossing and rearing score of model rats were obviously improved and the time of successful avoidance was obviously enhanced by acupuncture，as well as shorten avoidance latent period（P

Key words：Acupuncture and moxibustion therapy; Depression

抑郁症是一种常见的情绪障碍性疾病，表现为一种持久的抑郁状态，以心境低落、躯体不适和睡眠障碍等为主要症状［1］。是危害全人类身心健康的常见病，其终生患病率为6.1%～9.5%［2］。据专家预测，到2020年，精神疾病在人们的疾病负担中将列首位，而抑郁症则占精神科疾病的47%［3］。抑郁症及其治疗引起内外广大学者的广泛重视。本研究旨在通过观察针刺对抑郁模型大鼠行为学的影响，评定针刺抗抑郁疗效。

1 器材

1.1 药品多虑平：南京白敬宇制药厂产品，批号：20040912。

1.2 动物（200±20）g Wistar雄性大鼠，由山东大学实验动物中心提供，合格证号：鲁动质字：20040816。

1.3 器材“华佗”牌32号1.0寸针灸针，苏州医疗用品厂产品；穿梭箱：山东中医药大学中西医结合基础研究室提供，根据文献介绍制备［4］，大鼠穿梭箱有两室，每室30 cm×30 cm× 20 cm，可人为开闭，箱底为不锈钢栅条，条间距离为1 cm，两室栅条可错时通电，一室与刺激器接通时，另一室为安全室；敞箱：根据文献介绍，自行制备［5］，标准为40 cm×80 cm×80 cm，周壁、底面为黑色，底面以白线划分为面积相等的25块。

2 方法

2.1 模拟临床建立大鼠学习无助模型将大鼠放入穿梭箱，中间通道关闭，通过底部的金属栅条给予220V，0.8 mA的方波刺激，刺激15 s，间隔45 s/次，共60次，总刺激时间15 min，进行不可逃避的电休克即前休克动物（pre-shocked animals）制作［1］。

2.2 分组及给药(200±20)g Wistar雄性大鼠40只，按体重均衡随机分为空白对照组、模型对照组、阳性药多虑平组、针刺组，每组10只。空白组及模型对照组分别给予凉开水1 ml/100 g，ig；多虑平对照组给予多虑平3 mg/kg，生理盐水配成30%水溶液1 ml/100g·ig ；空白对照组大鼠只放入穿梭箱内而不进行电刺激，时间相同。第2天除重复进行前一天实验并开始给药，连续给药14 d。最后一次给药后24 h，采用Open-Field法进行动物行为学敞箱实验及条件回避实验，记录并统计实验数据。

2.3 针刺取穴及操作方法针刺组根据《实验针灸学》［6］大鼠穴位定位方法，选择百会、内关、神庭、三阴交穴，并参照人和动物的穴位解剖结构特点，在动物针灸穴位图谱的基础上，于大鼠前正中线上，额顶骨缝交界线前方处定位神庭穴。其他穴位仿人取穴。针刺方法: 穴位常规消毒，百会穴向前斜刺，神庭穴向上斜刺，进针深度约为0.2 cm。内关直刺0.3 cm，三阴交直刺0.2 cm。每穴行均匀捻转刺激30 s，留针10 min，每日治疗1次，连续14 d。最后一次治疗后24 h，采用Open-Field法进行动物行为学敞箱实验及条件回避实验，记录并统计实验数据。

2.4 敞箱实验将各组大鼠依次放入自制敞箱，以动物穿越底面块数为水平运动（crossing）得分，直立次数为垂直运动（rearing）得分，记录其水平运动、垂直运动次数，每只动物测定1次，测定时间为3 min/次，记录水平运动得分和垂直运动得分情况。

2.5 条件回避实验（conditioned avoidance testing）继敞箱实验后，大鼠放入穿梭箱后适应5 s，进行铃声刺激，非条件刺激为足电休克0.8 mA，在铃声响起3 s后开始方波输出电刺激，当动物逃到安全室后停止铃声和刺激，如未能逃避时刺激达30 s时停止。1次/min，共进行30次，刺激间隔为27 s。测定回避成功次数和逃避潜伏期。 动物在铃声开始3 s内逃到安全室，记录回避成功一次，逃避潜伏期为0；刺激后才逃避的，其潜伏期记录是从刺激开始到逃避完成的时间；到最后未能逃避的，则潜伏期为30 s。

2.6 统计学处理所有实验数据用 ±s表示，计量资料采用t检验、q检验进行差异显著性检验；计数资料采用四格表的确切概率法检验。

3 结果

3.1 针刺对学习无助模型大鼠敞箱实验的影响

3.1.1 水平运动针刺组、多虑平组、空白组均优于模型组。结果见表1。

表1 对大鼠水平运动的影响（略）

为避免统计学上第2类错误，出现假阳性结果，本组数据采用q检验。结果见表2。

表2 q检验结果（略）

由此可见，空白组与模型组有显著性差异，说明此造模方法成功；针刺组及多虑平组与模型组有显著性差异，其差异具有统计学意义；而前两组与空白组的差异及前两组间的差异不具有统计学意义，说明针刺与多虑平均有改善抑郁模型大鼠水平运动状态的作用，且二者作用相似。

3.1.2 垂直运动各处理因素对实验动物垂直运动的影响无显著差异。结果见表3。

表3 对大鼠垂直运动的影响（略）

为避免统计学上第2类错误，出现假阳性结果，本组数据采用q检验。结果见表4。

表4 q检验结果（略）

由此可见，各处理因素对大鼠的垂直运动的影响无统计学意义。

3.2 针刺对学习无助模型大鼠条件回避实验（conditioned avoidance testing）的影响

3.2.1 回避成功空白组、多虑平对照组、针刺组大鼠，回避成功次数较多。结果见表5。

表5 回避成功次数（略）

本组数据采用q检验。结果见表6。

表6 q检验结果（略）

由此可见，模型组与空白组具有非常显著性差异，说明造模成功。针刺组与模型组有显著性差异，其差异具有统计学意义，说明针刺可以显著提高实验动物的回避成功次数，同时与多虑平组差异也无统计学意义。多虑平组与模型组有非常显著性差异，说明多虑平可以明显提高实验动物的回避成功次数，但仍与空白组有显著性差异。

3.2.2 回避潜伏期空白组、多虑平对照组、针刺组，回避成功较多，部分回避不成功的大鼠回避潜伏期也较短。结果见表7。

表7 回避潜伏期基本数据（略）

本组数据采用q检验。结果见表8。

表8 q检验结果（略）

由此可知，模型组与空白组具有非常显著性差异，说明模型成功；针刺和用药组与模型组都具有非常显著性差异，其差异具有统计学意义，而针刺与用药组之间的差异不具统计学意义；这两组与空白组间的差异也不具统计学意义，即针刺与多虑平均可使实验动物的由于抑郁状态而影响的回避潜伏期的改变恢复正常。

4 讨论

抑郁症属祖国医学“郁证”范畴。综合历代医家文献，结合现代医学对抑郁症的特点和诊断标准的认识，认为情志不舒是抑郁症的主要致病因素，肝气郁结、气郁伤神为其主要病机，属标本俱实之症，其病位在肝，涉及心神，肝郁伤神是抑郁症发病的关键。因为情志不舒可影响肝的疏泄功能，而致肝气郁结，气机不畅，久郁心神不得所养而致伤神，从而出现精神抑郁、胸胁胀痛、易怒易哭等症状，故治疗当以疏肝理气、解郁安神为主。方中神庭为督脉穴位，督脉入络脑，与脑相连，脑居颅内，为元神之府，故取之可以起到宁心安神，醒神开窍之功效；百会亦为督脉穴位，是诸阳经与督脉的交会穴，能清利头目；三阴交属足太阴脾经经穴，有调理、健壮脾胃的功能，取之可健脾和胃、补益气血；内关为手厥阴心包经络穴，气通三焦，三焦主气，取之可宽胸理气、行气开郁。诸穴合用，共奏理气、解郁、安神之功效。

现代医学认为第二信使系统及其最初接收胞外信号的G蛋白都与抑郁症的病理生理有密切的关联［7］。近年的研究发现抑郁症的发生还与细胞免疫功能降低，免疫细胞数目减少或免疫细胞因子水平升高有关。此外 ，5-羟色胺和去甲肾上腺素的降低也与抑郁症的发病密切相关［8，9］。

我们实验观察了针刺对抑郁模型大鼠行为学的影响，实验结果显示：针刺可以显著改善实验动物的水平运动(P0.05)。在本实验中，各处理因素对实验大鼠垂直运动的影响，不具统计学意义(P>0.05)；条件回避实验提示针刺可显著提高实验动物的逃避成功次数(P0.05）。对于未逃避成功的实验大鼠，针刺也可以显著缩短其逃避潜伏期(P0.05)。说明针刺可明显改善抑郁症状，为临床治疗抑郁症提供了新的思路和方法，但针刺抗抑郁机理以及最佳疗程等诸多问题还需在今后的实验和临床研究中进一步探讨。

参考文献

［1］ 沈渔村.精神病学［M］.北京:人民卫生出版社，1998： 358.

［2］ 郭克锋.抑郁症患者的治疗难度预测性研究［J］.现代康复，2001，5（8上）：48.

［3］ 李 辉，针刺治疗抑郁症的现状［J］.辽宁中医学院学报，2004，6(1):26.

［4］ 徐叔云，卞如濂，陈 修.药理试验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：811.

［5］ 张有志，聂惠民，张德昌，等.柴胡加龙骨牡蛎汤等经方治疗抑郁症的动物行为学研究［J］.中国中医基础医学杂志，2001，7（7）：30.

［6］ 林文注，王 佩．实验针灸学［M］.上海：上海科学技术出版社，1999：277.

［7］ 炎 彬，杜力军.抑郁症分子生物学研究进展［J］.中国药理学通报，2005，2（2）：138.

篇5

摘要：目的观察头顶一颗株注射液对快速老化大鼠学习记忆能力及血、肝、肾、海马、脑皮质抗氧化酶的影响。方法采用氟哌啶醇造成实验大鼠获得性记忆缺失动物模型，用电跳台法观察对照组、模型组、头顶一颗株注射液高、中、低剂量组大鼠行为学变化，测定各组大鼠血及肝、肾、海马、脑皮质等组织超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果与模型组比较头顶一颗株注射液各剂量组能维持实验大鼠学习记忆成绩，多种组织SOD，GSH-Px 显著升高，高、中剂量组作用尤其明显(P

关键词：头顶一颗株； 学习； 记忆； 抗氧化酶； 超氧化物歧化酶； 谷胱甘肽过氧化物酶

Effects of Trillium tschonoskii Maxim on Learning and Memory and Anti-oxidase in Rats

Abstract：ObjectiveTo study the effect of Trillium tschonoskii Maxim injection on the learning and memory and on the expression of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) in serum， liver， kidney， hippocampus， cortex of aging rats.MethodsRats were randomly pided into five groups， control group， model group， Trillium tschonoskii maxim injection small dose group， middle dose group and large dose group. Rat model of acquired memory deficiency induced with haloperidol was employed. Electricity stimulated jumping stand was used for observation on rat behavior change and meanwhile concentrations of SOD and GSH-Px in different organs of the animal were detected.ResultsIn contrast with model groups， Trillium tschonoskii maxim injection at different dosage could maintain learning and memory， significantly increase the concentrations of SOD and GSH-Px in different tissue of the rats.(P

Key words：Trillium tschonoskii Maxim; Learning； Memory； Anti-oxidase； Superoxid dismutase; Glutathione peroxidase

头顶一颗株又称延龄草Trillium tschonoskii Maxim，为百合科延龄草属植物，以根入药，含有薯蓣皂素、甾醇、甾酮等化学成分，具有镇静、止痛、止血作用，主要用于治疗眩晕头痛、神经衰弱、跌打损伤、月经不调、崩漏等疾病［1］。 现代医学研究认为，中枢神经系统功能退行性病变是人体衰老的关键，并与代谢产生的氧自由基（oxygen free radicals）慢性损伤或抗氧化酶不足密切相关。本实验用头顶一颗株注射液腹腔注射，通过对各组大鼠行为学观察和组织SOD，GSH-Px含量测定，探讨头顶一颗株注射液对大鼠学习记忆能力及抗氧化酶的影响，从而进一步探讨其改善中枢神经系统功能抗衰老作用机制。

1 材料与方法

1.1 头顶一颗株注射液制备头顶一颗株由恩施中药材生产GAP（质量管理规范）示范基地提供，采用水提醇沉法制成含生药30%的注射液，瓶装密封消毒备用。

1.2 药品与仪器氟哌啶醇注射液(湖南洞庭药业股份有限公司生产)， SOD、GSH-Px试剂盒（由南京建成生物工程研究所提供），回避反应箱（由华中科技大学同济医学院病理生理系提供），GL-20G II型高速低温离心机，UV-2450分光光度仪，水浴箱。

1.3 电跳台行为学训练及测试实验装置为30 cm×30 cm回避反应箱，箱底为铜栅，可通刺激电流。另有一高5 cm，顶端直径为5 cm的橡胶圆台作为避电击平台，固定放置在箱内一角的铜栅上，大鼠可在圆台上停留以回避电击。实验开始时，先将大鼠轻放于回避反应箱内，使其适应3~5 min，以消除探究反应。尔后底部铜栅通电（36 V）2 s，大鼠在受电击刺激中逐渐学会跳上平台回避电击。多数大鼠可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击后又重新跳回平台，如此训练3 min，并记录每只鼠受电击数或犯错次数，以此作为学习成绩。末次给药后，再测试行为学改变，记录3 min各鼠跳下平台的错误次数和第一次跳下平台的潜伏期。

1.4 动物分组与用药雄性Wistar大鼠50只，鼠龄40~50周，体重300~350 g，由华中科技大学同济医学院动物中心提供。随机分为对照组、模型组、头顶一颗株高剂量组、中剂量组和低剂量组，每组10 只。模型组按1 g/kg体重腹腔注射氟哌啶醇注射液，头顶一颗株高、中、低剂量组分别在注射氟哌啶醇的同时，按7.2，3.6，1.8 g/kg体重腹腔注射头顶一颗株注射液，对照组每天等量腹腔注射生理盐水，Bid，连续用药7 d。

1.5 组织SOD，GSH-Px测定行为学测试结束后断颈处死大鼠，迅速取血及各种组织，血液离心取血清，组织制成10%匀浆，备用。SOD，GSH-Px测定，按试剂盒说明书进行，蛋白定量采用双缩脲法测定。

1.6 统计方法所有结果都用SPSS统计软件进行处理，计量资料用±s表示，在对数据进行分析的过程中，发现个别数据不符合ANOVA比较的要求，而用非参数进行比较分析。

2 结果

2.1 头顶一颗株对大鼠学习记忆能力的影响 电跳台行为学测试结果显示，头顶一颗株各剂量组与模型组比较均能延长实验大鼠的跳台潜伏时间，减少3 min犯错次数， 高、中剂量尤其明显(P

2.2 头顶一颗株对大鼠血及组织SOD，GSH-Px影响从表2和表3可见：头顶一颗株注射液各剂量组与模型组比较均能提高血液、海马、脑皮质及肝肾SOD，GSH-Px表达值，高、中剂量组作用明显(P

表1 头顶一颗株对大鼠学习记忆能力的影响（略）

与模型组比较，*P

表2 头顶一颗株对大鼠血及组织SOD的影响（略）

与模型组比较，*P

表2 头顶一颗株对大鼠血及组织GSH-Px的影响 （略）

与模型组比较，*P

3 讨论

衰老（Senility）是人体一种全身性生理变化过程，各系统、器官、组织和细胞都会出现这种过程，其机制复杂，并与多种因素有关。Lustbader等研究发现，阿尔茨海默病的发病机制与氧化应激有关，氧化应激通过氧自由基损伤神经元细胞，促进神经元细胞凋亡或死亡，引起神经系统功能减退［2］。SOD和GSH-Px是重要的抗氧化酶系，普遍存在于人体各组织中，包括血液、肝脏、线粒体和细胞质，有对抗自由基损伤和清除氧自由基、降低细胞内H2O2水平、减少自由基和过氧化物蓄积的作用。氧自由基被SOD转变为H2O2后，GSH-Px可继续作用在H2O2上，使之转变成完全无害的水和氧。因此SOD，GSH-Px表达变化，已成为检测衰老因素最为敏感和可靠的指标［3］。已有实验研究报道，根据氟哌啶醇可使实验动物产生僵住症(强直性昏厥，catalepsy)的原理，用氟哌啶醇进行大鼠腹腔注射，对SOD和GSH-Px有抑制作用，是很好的动物老化造模剂［4］。本实验用氟哌啶醇造模，观察、探讨头顶一颗株对大鼠行为学变化及在不同组织对SOD，GSH-Px表达作用的影响，结果表明：头顶一颗株能维持实验大鼠学习记忆能力，显著提高实验大鼠血、肝、肾、海马、脑皮质SOD，GSH-Px表达量，具有上调抗氧化酶表达、改善记忆抗衰老作用。

参考文献：

［1］ 谢宗万，范崔生，朱兆仪，等. 全国中草药汇编，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，1996：225.

［2］ Lustbader JW， Cirilli M， Lin C， et al. ABAD directly links Abeta to mitochondrialtoxicity in Alzheimer's disease［J］. Science，2004，304(5669):448.

篇6

关键词：颐脑解郁方；抑郁；行为；免疫组化；5－羟色胺；去甲肾上腺素

中圈分类号：R－33　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)07－1446－03

抑郁症(Depression)是指以显著而持久的情绪低落、活动能力减退、思维与认知功能迟缓为临床主要特征的一类心境障碍。其发病率、伤残率、复发率均较高，严重危害人们的心身健康。WHO指出，21世纪人类面对的最大疾息是精神疾病，而抑郁症是其中的重点。对抑郁症的研究已引起国内外学者的重视。目前西药对抑郁症的治疗仍存在着起效慢、疗程长、副作用大、药价昂贵、部分患者对抗抑郁剂治疗无效等不尽人意之处。近年来根据中医辨证论治的原则，对症用药，具有一定的优势。因此从中医药的角度对抑郁症的病因病机、治则治法进行理论性总结和探讨，并结合疗效确切的中药复方对中医药治疗抑郁症进行药效学观察和机理方面的探讨，具有一定的现实意义。本研究采用行为学及免疫组织化学方法，探讨了颐脑解郁方对抑郁状态模型大鼠行为学及脑内5－羟色胺、去甲肾上腺素的影响。

1　材料与方法

1．1　动物及分组

二级雄性Wistar大鼠，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证编号：SCXK(京)2002－0003。饲养1周(早7：00－19：00光照，19：00－次日7：00黑暗)，体重达250－300g，用OPEN－FIELD法进行行为评分…，选择评分相近的大鼠，随机分为正常组、模型组、治疗组、对照组，每组10只。

1．2　造模方法

正常组：每笼5只饲养，正常饮食饮水。模型组：参照文献，采用慢性应激结合孤养法，每笼1只饲养，进行为期21天的慢性不可预见的应激，造成大鼠慢性应激抑郁模型。治疗组：参照文献建立慢性应激抑郁状态大鼠模型，造模结束后开始灌胃给药，每日1次，连续6周。对照组：参照文献建立慢性应激抑郁状态大鼠模型，造模结束后开始灌服生理盐水，每日1次，连续6周。以上各组动物在相互隔离的环境下饲养。

1．3　药物

颐脑解郁方(北京中医药大学中药鉴定教研室鉴定)，使用前按照灌胃剂量煎药浓缩，浓度0.62g生药/mL，贮存于4℃冰箱中备用，临用前加热。

1．4　实验仪器及试剂

大鼠行为观察旷野箱(自制)；SMG－2型大鼠水迷宫反应箱，中国医学科学院药物研究所；Polyvar万能显微镜，美国；Leitz石蜡切片机，德国；CMIAS8真彩病理图像分析系统，北京航空航天大学。

免疫组化染色试剂盒，浓缩型DAB试剂盒，兔抗5－HT，北京中山生物技术有限公司。兔抗NE，Serologicals公司。

1．5　动物处理及切片处理

中药灌胃6周后，进行行为学测试(蔗糖水试验，旷野试验，迷宫法试验)。然后予100g/L水合氯醛(400111g/kg)麻醉，取脑，用100mL/L的中性甲醛溶液固定。石蜡包埋，Leitz石蜡切片机进行石蜡切片，片厚6um。

1．6　免疫组织化学染色(ABC法)

采用ABC法，主要步骤如下：切片入10mL/L甲醇H2O2液，室温30min。蛋白酶K消化，37℃30min。正常羊血清，室温30min。兔抗5－HT(1：80)，兔抗NE(1：300)，4℃过夜。生物素化二抗工作液，37℃2h。辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃2h。0.05％DAB－0.01％H2O2液显色。脱水，透明，封片。

1．7　图像分析与统计学处理

每组随机取3张片子，每张片子在大脑额叶皮质及海马CA1－CA4区各取3个视野，采用CMIAS8真彩病理图像分析系统对5－HT、NE阳性细胞进行测量分析，统计每个场的面密度。

1．8　统计学方法

采用SPSS for windows 10.0软件进行统计分析，以平均差±标准差(x±s)表示，组间差异采用单因素方差分析(ANOVA)。

2　结果

2．1　颐脑解郁方对模型大鼠行为学的影响

蔗糖水试验中，模型组、治疗组、对照组大鼠在治疗前蔗糖水摄入量与正常组相比，均明显减少，有统计学意义(P＜0.01)。治疗组大鼠治疗后蔗糖水摄入量明显增加，与对照组相比，有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

旷野试验中对照组、模型组大鼠水平及垂直得分均小于正常组，有显著性差异(P＜0.01)。反映了对照组和模型组大鼠活动性减少，兴趣缺乏。治疗组大鼠水平走格数与站立次数明显增加，水平得分和垂直得分均高于对照组，与对照组相比，有显著差异(P＜0.01)。见表2。

水迷宫法试验中，模型组、对照组大鼠游到终点的时间延长，错误次数增加，与正常组相比，有统计学意义(P＜0.05或0.01)，反映模型组、对照组大鼠的学习和记忆能力下降。治疗组大鼠游出时间明显缩短，错入盲端次数减少，与对照组相比有统计学意义(P＜0.05或0.01)。见表3、表4。

2．2　颐脑解郁方对模型大鼠脑额叶皮质及海马5－HT的影响

正常组大鼠脑皮质内可见I－Ⅵ层均有5－HT阳性细胞，形态、大小规则，细胞层次清晰，5－HT表达在细胞的细胞质内，呈深棕色，核区呈阴性，海马CA1－CA4区锥体细胞层均表达5－HT，大多呈锥体形。模型组大鼠脑额叶皮质和海马锥体细胞层的5－HT阳性细胞数量也明显减少，细胞形态不规则，间隙增大，排列疏松不齐，表达明显减弱。对照组大鼠皮质和海马锥体细胞层5－HT的表达明显减弱。治疗组大鼠皮质Ⅱ－V层及海马锥体细胞层均有5－HT的表达，且与对照组相比，5－HT的表达明显增强，阳性细胞数量也明显增多。结果表明颐脑解郁方能促进抑郁模型大鼠脑皮质、海马5－HT的表达。见表5。

2．3　颐脑解郁方对模型大鼠脑额叶皮质及海马NE的影响

正常组大鼠脑皮质内可见I－Ⅵ层均有NE阳性细胞，但主要集中在Ⅱ－Ⅵ层，NE表达在细胞的细胞质内，呈深棕色，核区呈阴性，同时血管壁也有表达。模型组大鼠

脑皮质及海马NE的表达与正常组相比，出现阳性细胞表达减弱。对照组大鼠脑皮质及海马NE表达明显减弱。NE阳性细胞数量也明显减少且颜色变浅。治疗组大鼠大脑额叶皮质NE表达在Ⅱ－V层，且与对照组大鼠比较，NE的表达明显增强，阳性细胞数量也明显增多，颜色明显加深。说明颐脑解郁方能够促进抑郁模型大鼠皮层及海马NE的表达。见表6。

3　讨论

中枢5－HT能和NE能系统与情感活动关系密切。目前研究认为，脑内去甲肾上腺素能系统调节睡眠和觉醒、学习和记忆、选择性注意、应激反应以及奖赏系统的功能。5－羟色胺在中枢具有调节情感、睡眠、警觉、记忆、食欲、等多种功能，可以增加行为活动和自发学习积极性。脑内去甲肾上腺素(NE)和5－羟色胺(5－HT)之间的平衡失调，即5－HT和(或)NE一种或数种神经递质(生物胺)出现了神经生化上的失衡或功能缺陷，导致传递功能受损，从而引起抑郁。

Papes(1937)提出了大脑的情绪回路，认为大脑皮质、海马是调节情绪功能的两个主要区域。Starkstein等和Robinson等认为，脑卒中后抑郁是病灶破坏了NE能神经元和5－HT能神经元及其径路，使这2种递质低下而导致抑郁状态的发生。因为NE能和5－HT能神经元胞于脑干，其轴突通过丘脑及基底神经节投射到达额叶皮质及边缘系统。5－HT神经元的密集处中缝核群和去甲肾上腺素神经元的密集处蓝斑核之间有丰富的神经联系。目前研究认为，脑内去甲肾上腺素能系统具有调节睡眠和觉醒、学习和记忆、选择性注意、应激反应以及奖赏系统的功能。5－羟色胺在中枢具有调节情感、睡眠、警觉、记忆、食欲、等多种功能，可以增加行为活动和自发学习积极性。PSD的发生可能与大脑损害引起NE和5－HT之间的平衡失调有关。病灶累及上述部位时，就有可能影响区域内的去甲肾上腺素能和5－羟色胺能的神经通路，使去甲肾上腺素和5－羟色胺含量下降，从而导致抑郁。

篇7

关键词：慢性疲劳综合征 慢性束缚

Chronicity weary synthesis drafts the big mouse to make mold two method comparison

Mei Rongjun Wei Xiaoli

Abstract:Objective:Discusses the barrel fetter law to send the big mouse chronicity with the fetter law to make the mold wearily the comparison. Methods:30 male Wistar big mice divide into the barrel fetter group stochastically,puts up the fetter group and the control group,each group of each 10,use the chronic fetter the way to establish the big mouse chronicity weary synthesis to draft the model,observes each group of big mouses strength to use up the swimming experiment. Results:The barrel fetter group compares the fetter group big mouses behavior study target closer chronicity state of fatigue,also the death quantity are few. Conclusion :Establishes the more ideal chronic weary animal model support fetter law to surpass the barrel fetter law.

Keywords:The chronic weary synthesis drafts The chronic fetter

【中图分类号】R-3 【文献标识码】A 【文章编号】1008-1879(2010)12-0002-01

本课题组［1］确立较为理想的动物模型是研究CFS的基础，本观察通过对两种常见慢性束缚造模方法的比较，寻找更合理的造模方法。

1 材料与方法

1.1 材料。

1.1.1 动物。健康雄性Wistar大鼠30只,清洁级,体重160g~200g，由黑龙江中医药大学动物实验中心提供。动物饲养环境:清洁级实验室饲养,温度20℃~28℃,湿度35%~70%,噪声

1.1.2 主要仪器及造模用具。仪器：水迷宫（研究室设备）。桶束缚法:用硬塑料瓶特制束缚筒，管状,长18 cm直径5.2 cm,其瓶口为通气口。大鼠头向通气口置入后,调节封口束缚大鼠活动空间。大鼠束缚架：为木制，底座宽10cm、长20cm、厚1cm，四角铁钉、大鼠四肢捆绑弹力带。

1.2 方法。

大鼠适应性饲养3d后,随机分为桶束缚组、架束缚组与正常组，每组10只，10只/笼,自由进食饮水。造模期间,桶束缚组与架束缚组每天各束缚1次,晚上六点开始。束缚时,使桶束缚组大鼠钻进束缚筒内,调节到其不产生强烈反抗的紧张程度,平放在大铁台上。将架束缚组大鼠束缚于特制的鼠束缚架上。桶束缚时间为4小时，架束缚时间为3小时。束缚过程中,正常组动物在同一环境,不予以进食水。造模2周，桶束缚组死亡2只。结束后,立即开始行为学的测定。

2 力竭游泳实验观察

3组动物均于造模前一天及造模的第14天(造模最后1d)进行,记录大鼠从入水到游泳至力竭的时间(2次游泳法,取均值)。力竭游泳时水深为50cm、水温(28±1)℃,将事先标记好的大鼠同时置入游泳池,记录大鼠从入水到游泳至力竭(头部沉入水中10秒中不能浮出水面为力竭标准)的时间。

3 结果

本观察选择力竭游泳实验评定动物模型,造模后架束缚组大鼠力竭游泳时间时间明显减少,与正常组对比有明显统计学意义(*P

篇8

【摘要】 ［目的］探讨电针对SD大鼠的行为学的影响。［方法］健康SD大鼠30只，随机分为正常对照组（简称正常组）10只，模型对照组（简称模型组）10只，电针加模型组（简称电 针组）10只三组；正常组采用大平台法造模；模型组采用小平台法造模，电针组造模同模型组，给予每日1次的电针治疗。采用旷场实验检测方法，观察针灸的抗睡眠剥夺作用。［结果］电针能明显改变其行为学指标。［结论］电针可以改善其行为学，这种作用可能与电针促进神经内分泌免疫学机制有关。

【关键词】 电针；大鼠睡眠剥夺（SD）；行为学；百会；三阴交

Abstract： ［Objective］ To investigate the effects of REMl sleep deprivation （SD） on actions to investigate the efficacy of application of electroacupuncture for treating sleep deprivation.［Methods］Thirty healthy SD rats randomly allocated to three groups （normal control，model （A1），electrotreatment groups）.The rats of model （A1）group and electrotreatment group were induced in male rats by housing them on small platforms overwater，normalcontrol group rats were on big platforms overwater.After electrotreatment for electrotreatment groups，the changes of normal status and Open Field Test were measured with all rats.［Results］Electroacupuncture treatment can improve the actions.［Conclusion］Application of electroacupuncture can produce a fighting effect on sleep deprivation.The effect may be related to promoting the nerval endocrine cytokine of electroacupuncture.

Key words：electroacupuncture; rats sleep deprivation; actions;Baihui; San yinjiao

睡眠剥夺（sleep deprivation，SD）是指由于某些原因导致的所需睡眠数量被迫减少［1］。本研究通过观察针刺对睡眠剥夺大鼠行为学的影响。探索针刺改善失眠等睡眠障碍患者临床症状的作用机理。

1 SD大鼠模型的建立

1.1 实验动物

健康SpragueDawley（SD）大鼠30只，雌、雄各半，体重200～250g，由成都中医药大学实验动物中心提供。动物饲养环境温度：（20±2）℃；湿度：60％～80％；水温：保持在20℃左右。

1.2 主要仪器设备

小平台（20个）：根据文献［2］制成30cm×30cm×40cm鼠箱，睡眠剥夺装置为圆柱形，正中立一直径6cm，高8cm的小平台，从箱底注水，使水面离平台约1cm。每天早晚8：30更换鼠箱中的水。上午8∶00～11∶00之间在安静的房间内进行观察记录。将大鼠置于中心方格内，记录大鼠在3min旷场内的活动，彻底清洁敞箱后再进行下1只大鼠的观察。

1.3 动物造模

采用小平台水环境法，剥夺箱为30cm×30cm×40cm大小的塑料水箱，正中立一直径6cm圆形平台，箱中注满水，水面距平台面约1.0cm。大鼠在平台上可自由进食进水，如果睡眠，会因为肌张力松弛而落入水中，因而造成SD。为排除隔离、限制活动和水环境造成的应激影响，我们采用了大平台水环境法，其平台直径为18.0cm，大鼠在平台上可以睡眠，其他环境与小平台水环境法相同。SD期间持续灯光照射，室内温度控制在18℃～22℃。每天更换箱中的水，水温保持在20℃左右。正常组（大平台组）单独笼养，自然昼夜光照，电针组条件同睡眠剥夺组，共持续9d。结果:健康SpragueDawley（SD）大鼠30只，成功造模28只，实验大鼠在造模过程中死亡两只。其中正常组9只，电针组10只，模型组9只。

1.4 实验分组及处理

SD动物模型成功28只，按照随机分组的原则，分为正常组（即大平台组）、电针组、模型组。

正常对照组（简称正常组）：9只，采用大平台，大鼠在已注水平台上可以自由进食饮水和睡眠；并在电针组治疗时，用与电针组相同方法进行抓放、固定，但不针刺。试验期间持续灯光照射，室温（20±2）℃。

模型对照组（简称模型组）：10只，采用小平台水环境法。将大鼠放于已注水的小平台上，大鼠在平台上可自由进食饮水，如果睡眠，会因为肌张力松弛而落入水中。余同正常组。

电针加模型组（简称电针组）：9只，从试验第2天开始，于每天上午9∶00针刺针灸组大鼠“百会”、“三阴交”，选用1寸30号毫针，电针，留针20min。穴位定位：根据李忠仁编著的《实验针灸学》的实验动物穴位定位。电针治疗仪：采用G6805I型电针仪（青岛生产）;电针刺激参数：频率100HZ；电压24V；波形：疏密波；强度：以大鼠能安静耐受为度，约为2mA； 疗程：1次/d，共治疗9d。余同模型组。

2 电针SD大鼠一般状况的影响

模型组与电针组在早期均表现为兴奋性增高，易激惹，对外界的反应性及攻击性增强，但72h后，可见身体明显消瘦、精神萎靡、反应迟钝、警觉力下降等现象。而电针组在72h后大鼠并无身体明显消瘦、精神萎靡、反应迟钝、警觉力下降等现象。正常组全程全部精神活泼、稳定；活动如常；抓取时反抗较剧，咬人；自48h起全部对照动物耳廓、双目和四肢末颜色呈淡粉红色；144～216h，本组鼠毛由正常变为略枯槁、潮湿。

3 电针对SD大鼠的旷场实验的影响

3.1 指标检测方法

各组动物每天按组处理，并于处理后30min放入旷场中，测试其水平得分、垂直得分和中央格停留时间。旷场箱为木质箱，底面为12m 的正方形，划为25个面积相等的小方格，箱高40cm，周壁涂成黑色。测试时，将大鼠置于旷场测试箱底面中心，观察其3min内的行为。观察指标：以大鼠在中央格（即不靠近周壁的9个格子）停留的时间为中央格停留时间（time of staying in center），以大鼠穿越底面的方格数为水平得分（crossing core ），以后肢站立的次数为垂直得分（rearing core）。记录各组动物每天的垂直活动得分、水平活动得分和中央格内停留时间。并观察动物修饰行为和大小便次数。每只动物仅做一次行为测定，每次试验后，清洗旷场周壁及底面，以免上次动物余留的信息影响下次测试结果。

3.2 实验结果

实验结果见表1、2及图2～4。 表 1 不同时间大鼠在旷场反应中的水平得分（s）（略）表2 不同时间大鼠在旷场反应中的水平得分（s）（略）

图1及表1、2所示：正常组与电针组相比较，水平得分比较无意义，P=0.507（P>0.05）；正常组与模型组比较有极显著差异，P=0.001（P

图2及表3、4所示：正常组与电针组相比较，垂直得分比较无意义，P=0.681（P>0.05）；正常组与模型组比较有极显著差异，P=0.002（P

从图3、表5及表6可知，正常组与模型组比较有极显著差异（P

4 讨论

4.1 关于SD动物模型的选择

睡眠剥夺动物模型是引起失眠较理想的研究睡眠的手段。本研究采用小平台水环境法进行SD表明：平台面积与大鼠体重量之比为1∶1时不会产生SD，故本研究中大平台直径为18.0cm，在实验前后大平台组体重无明显变化，说明其应激水平远远低于SD组。水环境和隔离对动物确实产生一定的应激作用，这从旷场实验得分可知。由旷场实验得知，与正常组相比，大鼠SD后精神行为表现出一定的兴奋性，修饰行为或“洗脸”行为增多。我们知道修饰行为常发生于产生矛盾或害怕的情境中［3］，说明SD环境使大鼠情绪非常紧张恐惧，攻击行为增多。SD时间短，表现为一定的兴奋，72h以后则有抑制趋势。正常组由于一定的应激作用，兴奋性较高，并且没有SD的影响，所以旷场实验得分优于其他各组。由于大鼠SD后兴奋性的提高，随着SD时间的延长，剥夺程度加深。

4.2 电针对SD大鼠旷场实验的影响

旷场实验（Open Field Test）是目前最常用的一种动物心理实验方法，用来研究新环境中自发活动（Spontaneous Activity）和探究行为（Explore behavior），检验受试动物在新环境下探究行为和适应性。

从测试结果可知，正常组动物的水平得分及垂直得分呈下降趋势，表明动物活动性下降。实验中观察到，正常组动物生活相对安逸，又因为旷场测试在白天进行，正是大鼠的相对安静时间，故而动物不爱活动；实验的后期尤其如此；这可能也同其对旷场环境的逐步熟悉有关［4］。但与此同时，正常组动物表现机敏、反应灵活、目光有神、空间识别能力强。模型组动物却不如此，水平得分及垂直得分均有很大的波动，在SD192h时仍相当高，在最后一次测试时仍在增加。此时动物极为疲惫，体力己衰弱而殆尽，行走时表现方向感极差。与此同时，电针组动物则表现较为稳定，波动比较小。

中央格停留时间反映动物对环境的认知能力。正常动物会避开空旷环境，迅速离开中央格，沿周边活动。如果对新环境的认知能力差，则停留在中央格的时间就会延长。从我们的测试结果来看，正常组大鼠在中央格的停留时间日益减少；事实上，这组动物在放入旷场实验箱后通常会迅速离开中央地带，行至角落或箱壁下，整理毛发，偶尔站立，少有行走。模型组动物经过长时间SD，对环境的认知能力明显下降，常反复穿越中央地带并在其中逗留，呆在中央格中的时间不断增长。电针组动物的中央格停留时间则有不同程度的下降，提示电针可以改善睡眠剥夺大鼠的空间认知能力。

此外，旷场行为测试指标还包括理毛时间（修饰时间）和排便次数。理毛是动物满足的表现；排便多则反映了动物的紧张程度高。由于我们采用改良多平台水环境法造模，接受SD的动物常常水湿毛发，放入旷场中时欲将其毛发舔干而使理毛时间增加，从而对结果产生干扰。本实验中，接受SD的动物虽然与正常动物有同样的进食进水机会，但由于中枢、躯体双重应激的影响，食欲明显下降，尤其是实验后期，进食显著减少，因此，排便次数作为考察指标的准确性特异性也不强。故而我们没有将这两项作为考察药物作用效果的指标。

参考文献

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［2］Mendelson W.B，Guthrie R.D，et al.The flowerpot technique of rapid eye movement sleep deprivation［J］.Pharmacol Behave，1974，2：553556.

篇9

关键词：安宫牛黄丸；缺血性中风；大脑中动脉梗死大鼠模型；细胞因子

中图分类号：R743 R289.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349（2011）06-0710-03The Protective Effect of Angong Niuhuang Pill on Experimental Cerebral Ischemia

Liu Zongtao,Sha Dike,Liu Yuanxin,et al

The Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine,Xinjiang Medical University （Urumqi 830000）

Abstract：Objective To investigate the protective effect of Angong Niuhuang pill on experimental cerebral ischemia and its mechanism.Methods Rats were randomly divided into five groups：Sham group,model group,Angong Niuhuang pill group,western medicine group,Chinese traditional medicine with western medicine group.The models with focal cerebral ischemia of rat were established by the suture occluded method.Neurology evaluation was studied at 6 h,24 h,48 h and 72 h after middle cerebral artery occlusion（MCAO）and cerebral ischemia.The coefficient of brain and water content in whole brain were examined.The level of serum interleukin 10 （IL-10） in abdominal aorta was detected by enzyme linked in ununosorbent assay.Results Within four days of MCAO,different degrees of motion disturbances were observed in all rats except sham group.The coefficient of brain,the water content of whole brain and the level of serum IL-10 were obviously increased （P

Key words：Angong Niuhuang pillischemic apoplexymiddle cerebral artery occlusioncytokine缺血性中风，西医属于缺血性脑血管病范畴，是由于血管阻塞引起脑缺血损伤而致局灶或全脑的功能障碍。具有发病率高、致残率高、死亡率高和复发率高等特点，是威胁人类健康的重大疾病之一。中医认为，中风其本在肝肾亏虚，其标在风、火、痰、瘀、虚；它们在发病过程中相互影响，相互作用，临床出现烦躁神昏谵语，此乃为脑血管意外急性期的关键所在【sup】［1］【/sup】。Framingham流行病学研究结果,65%的中风为大脑中动脉供血区的血管堵塞所致,与之相应,大脑中动脉区局部缺血模型是实验性脑梗死研究中最常用的一种模型,其中大脑中动脉（MCA）线栓模型应用最为广泛【sup】［2］【/sup】 。因此本实验采用MCA线栓法造成局灶性脑缺血大鼠模型，探讨中药制剂安宫牛黄丸灌胃配合西药甘露醇与呋塞米针静脉给药对缺血性中风急性期大鼠脑水肿变化规律、血清细胞因子及神经行为学改变的影响，为中西医结合并治,多途径给药治疗缺血性中风提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物 健康雄性SD大鼠60只,3月龄，体重250 g～300 g,由新疆实验动物研究中心提供，实验动物使用许可证号：SYXK［新］2003-0003号环境温度控制在25℃～30℃饲养，空气湿度维持在（50±5）%，用灯照使动物体温维持在（37.5±0.5） ℃。

1.2 药物与试剂 安宫牛黄丸由北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂提供（国药准字Z11020076，批号9013181），实验前用蒸馏水配制成所需浓度；20%甘露醇、胞磷胆碱钠注射液，由上海旭东海普药业有限公司提供。呋塞米（速尿）由上海美优制药有限公司提供。白细胞介素（IL）-10定量ELISA试剂盒，购于上海瑞齐生物科技有限公司（批号20101221）。

1.3 仪器 显微手术器械（上海医疗手术器械厂）；电子分析天平（MC,京制0000249号,北京赛多利斯仪器系统有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；TGL-16C台式高速离心机（金坛市医疗仪器厂制造）；酶标分析仪（美国伯乐公司制造，X Mark）；参照文献【sup】［3］【/sup】，选用4-0尼龙线,栓线直径为0.25 mm～0.28 mm。

1.4 方法

1.4.1 动物分组与给药 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、安宫牛黄丸组（中药组）、西药组、中西药组；假手术组、模型组均给予等容量生理盐水3 mL灌胃；安宫牛黄丸组给予3 mL安宫牛黄丸溶解液灌胃治疗；西药组给予20%甘露醇2.625 mL、速尿0.42 mg尾部静脉注射；中西药组在西药组治疗的基础上加用安宫牛黄丸（将1.134 g安宫牛黄丸加入54 mL水中溶解稀释）；每只3 mL溶解液灌胃。动物造模后连续灌胃给药4 d，于末次给药后分别处死。

1.4.2 大鼠局灶性脑缺血模型的建立 参照文献采用线栓法制备大脑中动脉（MCA）局灶性脑缺血模型【sup】［4］【/sup】:大鼠腹腔注射麻醉（即阿托品、氯胺酮、安定各2 mL、4 mL、4 mL，稀释至20 mL，0.75 mL/100 g）后,仰卧固定,颈部正中切口,钝性分离甲状腺，将其上翻并用无菌纱布保护，分离右侧颈总动脉（common carotid artery，CCA）、颈内动脉（internal carotid artery，ICA）、颈外动脉（externa1 carotid artery，ECA）,并在ECA、ICA分叉处结扎ECA,右侧CCA剪口约0.2 mm的侧“V”字形切口，插入头端烧成圆钝形直径为0.28 mm的尼龙线,使线栓经过CCA分叉处进入ICA，到达MCA起始处，进线长度约（18.5±0.5） mm,感觉有阻力时即停止插入，并向外稍拉出一点即可实现MCA起始端堵塞MCA所有的血液来源,然后将CCA连同尼龙鱼线一起结扎，扎紧备线，甲状腺复位，关闭并缝合皮肤切口。假手术组大鼠接受相似手术处理，但是不插入线栓。缝合皮肤,实现MCAO造模完成。动物入选标准（按Longa五级评分法【sup】［5］【/sup】取神经功能行为评分为1分、2分、3分、4分的动物）：选择苏醒后左上肢屈曲、行走时向左侧旋转或左侧肢体瘫痪的大鼠为栓堵成功者进行实验,否则视为栓堵失败,弃之不用。模型成功后，分别于MCAO后6 h、24 h、48 h、72 h进行神经功能行为评分；大鼠在断头处死前取血清检测IL-10含量:各组大鼠麻醉后腹主动脉取血法分别取全血约5 mL，室温下放置20 min，然后以2 500 r/min离心10 min，小心吸取上清液即为血清标本（溶血标本不用），常温下保存备用。

1.5 观察指标及测定方法

1.5.1 神经功能行为学评分测定 动物苏醒后，按Longa法【sup】［5］【/sup】对其神经功能行为进行5分制评分：0分，无明显神经病学症状；1分，不能完全伸展左侧前爪；2分，向左侧旋转；3分，行走时向左侧倾倒；4分，不能自行行走。

1.5.2 脑系数 动物称重,造模给药4 d后断头取脑,沿脑桥上界水平切断,取全脑称重,脑系数全脑重÷体重×100%。

1.5.3 脑组织含水量的测定 造模给药4 d后断头取脑，去除小脑、嗅球、低位脑干等，用滤纸吸干表面水分，称量脑湿重，105 ℃烘烤24 h至恒重，精确称量干重，采用Elliot【sup】［6］【/sup】公式计算脑组织含水量。

1.5.4 血清IL-10含量测定 酶联免疫吸附法（ELISA法）检测IL-10含量，具体操作步骤参照试剂盒说明书。

1.6 统计学处理 实验数据以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS 17.0软件做统计分析；组间比较用单因素方差分析及Student-Newman-Keuls test统计。

2 结 果

2.1 一般状态 假手术组大鼠麻醉苏醒后精神好，反应灵活，活动度大，全部存活，未见明显对侧肢体活动障碍。其余各组术后4 d精神均较造模前差，反应迟钝，饮食较前减少，自洁能力下降，扎堆蜷缩，均出现不同程度的肢体活动障碍，而以模型组为甚；其中模型组、西药组、中西药组分别有2只大鼠造模后半小时左右死亡；中药组有1只大鼠造模后昏迷不醒，于第2天死亡。

2.2 体重指数 大鼠造模前称重（g）为基础值，造模后第1天、第2天、第3天、第4天分别称重，取各时间点体重与基础值之比,即体重指数。与模型组比较，各组动物术后均有体重渐回升的过程；而假手术组体重上升较明显，与其他各组比较有统计学意义（P

2.3 神经功能行为学评分 假手术组大鼠都没有神经功能行为学症状，而模型组、中药组、西药组、中西药组大鼠则有不同程度的神经功能行为学表现。与模型组大鼠比较，中药组、西药组、中西药组均可降低大鼠的神经功能行为学评分（P

2.4 各组对局灶性脑缺血大鼠脑水肿的影响（见表3） 与模型组比较，其他各组大鼠脑系数、脑组织含水量明显降低（P

表3 各组对大鼠脑系数、脑组织含水量的影响（x±s）%

2.5 各组对局灶性脑缺血大鼠血清IL-10的影响（见表4） 与假手术组比较，各造模组IL-10均明显升高（P

表4 各组对大鼠血清IL-10表达的影响（x±s）ng/L

3 讨 论

安宫牛黄丸是我国传统药物中久负盛名的良方，是中医治疗中风之要药。安宫牛黄丸出自清代吴鞠通《温病条辨》，素有“救急症于即时，挽垂危于顷刻”的美誉，由牛黄、水牛角浓缩粉、麝香、珍珠、朱砂、雄黄、黄连、黄芩、栀子、郁金、冰片等11味药组成。具有清热解毒、豁痰开窍的功效，主治热病、邪入心包、高热惊厥、神昏谵语。临床研究表明，安宫牛黄丸制剂具有改善缺血性中风急性期神经功能缺损情况的作用【sup】［7］【/sup】。对于急性中风患者，安宫牛黄丸配合常规西医综合抢救治疗明显优于单纯常规综合抢救治疗【sup】［8］【/sup】。

IL-10作为一种抗炎性细胞因子，在缺血性脑损伤中具有脑保护作用。其保护作用是通过缩小脑梗死灶范围，减缓炎性细胞浸润和减少神经细胞凋亡而发挥的【sup】［9］【/sup】。本试验结果显示模型组大鼠血清IL-10升高，推测可能是动物在受到应激性损伤之后机体的自身保护机制而引起的；安宫牛黄丸组大鼠血清IL-10升高显著，与单纯西药甘露醇、呋塞米、胞磷胆碱静脉用药疗效未见明显差别，而中西药合用大鼠血清IL-10水平升高更为显著，从而最终保护脑细胞，改善神经功能缺损症状，降低缺血性中风大鼠的死亡率、致残率；这提示改变抗炎性因子IL-10的分泌为安宫牛黄丸对局部脑缺血大鼠脑损伤保护作用的机制之一。总之，虽然传统中药安宫牛黄丸给药途径受限,但仍是具有特殊功效的良药，其与西药联用也许会提高临床疗效。

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篇10

本书分为3个部分。第1部分为机器人学中的行为层次结构。介绍了如何通过设计一个机器人来处理行为分层结构问题。该过程涉及部分仿生技术，该阶段最主要的贡献是建立了很实用的智能技术产品。本章节重点介绍了行为层次结构中很重要但是常常被忽略的两个特征，即它对于探究行为的影响以及促使复杂领域规划成本的降低。本章还给出了4个分层增强学习的例子来说明行为层次结构在探究及表征研究中的关键作用。通过学习给出的实例，我们有效验证了行为分层在人工以及现实世界中至关重要的作用。

第2部分为动物行为学中的层次结构。介绍了用于理解真实世界中动物行为的层次结构计算模型。该模型在一定程度上解答了科学研究中关于动物智能行为分层的疑问。本部分着重探讨了动物行为学中如下的研究热点：1.模块化的多臂控制模型。包括电机控制中的可计算问题、感官冗余、大脑的模块化和层次结构、模块化和层次化模型；2.电机控制中的泛化与干扰问题。包括程序记忆的巩固、生物系统中的干扰和泛化、多任务学习等；3.一个累积学习机器人的模型框架。内容包括条件约束、感官运动映射模型、构造映射模型、进化行为训练，最后阐述了目前所面临的研究挑战等；4.分布式自适应控制架构中的知识层次积累。包括分布式自适应控制描述、活性和环境控制系统的互补作用、空间信息集成等。

第3部分为动物脑层次结构。介绍了动物脑层次结构相关的计算模型，从而为未来的智能机器人解决实际问题奠定了一定的基础。本部分涵盖如下内容：1.智能计算假说。包括线程的特点及其局限性、皮质层次结构、基底核层次结构、大脑皮层结构整合；2.分层强化学习和任务分解。包括分层增强学习、潜在的神经机制、识别有效子目标等；3.大脑中分层运动功能的神经网络模型。包括构造运动功能的分层动态模型、调制高层次运动程序、学习运动序列以及分层建模未来所面临的挑战。