基因多态性研究范文
时间：2023-12-22 17:50:42
导语：如何才能写好一篇基因多态性研究，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
中图分类号：Q51； Q71；R394.3
文献标识码：A
文章编号：1007-7847（2014）05-0441-04
硒蛋白家族共有25种蛋白，而Seppl是硒蛋门家族中非常重要的成员之一，最初在小鼠血浆中发现，占血浆总硒含量的60%，主要由肝脏合成分泌入血，在转运硒到非肝脏组织的同时还具有抗氧化酶的活性，在保护机体免受氧化损伤、运输硒到非肝脏组织、维持血浆硒含量稳定等方面具有重要作用。基因敲除硒蛋白P的小鼠中发现神经元细胞退化导致癫痫和共济失调、非肝脏组织硒蛋白表达量降低和雄性小鼠不育。其基凶变异将影响功能发挥，抗氧化能力和转运硒原子的能力降低，进而影响其它硒蛋白的合成，机体整体的抗氧化能力将会降低，而许多研究也表明，Seppl基因多态性与Seppl的存在形式、功能的发挥及与疾病的患病风险密切相关，近年来发现，Seppl在多种疾病的发生发展中起着重要作用。1
硒蛋白P1.1 硒蛋白P的基因结构
人类硒蛋白P基因（Seppl）位于染色体基因组5q31，全长12 kb，由5个外显子组成，起始密码子ATG和编码第一个硒代半胱氨酸的TGA位于第2个外显子上，第5外显子长1 400 bp，含有9个编码硒代半胱氨酸的TGA。Seppl的mRNA的3’非编码区（3’UTR）含有两个硒代半胱氨酸插入序列（SECIS）元件，并具有不同的生物学应.SECIS 1指导UCA解码为硒代半胱氨酸（Sec）的效率足SECIS 2的3倍，但仅指导C端片段上的9个Sec的掺入，基因敲出SECIS1后发现Seppl的产物终止于第一个或者第二个Sec，SE-CIS2指导第一个Sec的掺入，可能为后续硒代半胱氨酸的插入做准备工作。
1.2 硒蛋白P的结构
Sepp1含有两个结构域，为双功能蛋白，由两个大小小同的片段构成，大片段含有244个氨基酸残基，仅含的一个Sec残基位于UxxC，氧化还原模体中（U为硒代半胱氨酸，x为任意氨基酸，C为半胱氨酸），具有抗氧化酶的活性；小片段含有122个氨基酸残基，从第245位残基到C-末端，含有9个硒代半胱氨酸残基，具有运送硒供外周组织利用的功能。此外发现，人血浆中含有两种形式的Seppl.分别为51 kD和61 kD。
1.3 硒蛋白P的生理功能
l.3.1 转运和储存硒
Motsenbocker根据大鼠注射75Se的亚硒酸盐及75Se标记的Seppl后75Se的分布情况推测，Seppl在肝脏合成并将硒转运到非肝脏组织中。随后基因敲除Seppl的小鼠模型的建立确认了Seppl具有转运硒的功能。在基因敲除Seppl的小鼠模型中尿硒含量增加，随之血硒含量降低，说明硒蛋白P在硒代谢中具有重要作用。
1.3.2
抗氧化
Saito等从人血浆里分离出Seppl后发现Seppl可以清除磷脂氢过氧化物从而确定Seppl具有抗氧化酶的活性，在保护机体免受氧化损伤中起着重要的作用。Xiao等发现在人类角质细胞中Seppl具有抵抗4-CIBQ诱导的氧化损伤作用。Eckers等研究发现，Seppl可以保护细胞免受辐射诱导产生的活性氧对细胞的损伤作用。
1.3.3 参与的成熟和发育
存硒缺乏时是继大脑之后的第二个优先利用硒的器官.基因敲除Sepp1的雄性小鼠不能产生正常的和不育，Sepp1（一/一）的雄性成熟的小鼠将产生鞭毛结构缺陷的。此外，Seppl对于组织中硒含量的稳定非常重要，Seppl运输硒到供其它硒蛋白的合成，如谷胱甘肽磷脂过氧化物酶（PHGSH-Px），PHGSH -Px是成熟的主要蛋白，参与构成线粒体内膜和保护免受氧化损伤。
1.4 硒蛋白P的生理代谢
Seppl主要由肝脏合成，肾脏和心脏也合成少量的Seppl，然后分泌入血，占血浆中总矾含量60%（大鼠）或40%（人），进入外周组织后C端片段分泌硒被组织细胞摄取，此外，大脑和具有优先利用Seppl的特权，通过载脂蛋白E受体2 （apoiipoprotein receplor 2，ApoER2）被大脑和组织细胞摄取利用.大脑在利用Seppl提供的硒重新合成Seppl并分泌到脑脊液中，具有火脑硒储存池的作用，在肾脏通过lipoprotein megalin receptor （Lrp2）摄取原尿中Sepp1分泌的硒，进而调节机体硒含量，N端片段与细胞膜具有较强的亲和力，释放了硒的SeppI结合到细胞膜上发挥抗氧化的作用。
2
硒蛋白P基因多态性
人类Seppl基冈单核苷酸多态性位点现已发现10 000多个，研究发现这些多态性位点有些与硒蛋白P的存在形式、功能的发挥及与疾病的患病风险密切相关，其中 rs3877899和rs7579位点研究的最多。这两个多态性位点分布频率在高加索人、中国人及南亚人群中基本相同，AA基因型均是低频基因型。rs3877899多态性位点位于编码区，导致Sepp1第234位氨基酸由丙氨酸（Ala）变为苏氨酸（Thr），也许影响Seppl的翻译后修饰.进而影响其含量；rs7579位于3'UTR，25191位点，该位点的基因变异可以影响Sepp1合成过程中硒代半胱氨酸的插入。研究发现Seppl rs3877899多态性位点和rs7579多态性位点与Seppl的存在形式相关，Meplan等研究发现Seppl rs3877899多态性位点，Seppl 61 kD型在GC基因型中比在GA基因型中多；rs7579多态性位点.GG基因型比GA和AA基因型的61 kD形式硒蛋白含量低。Penney等研究发现在前列腺癌患者肿瘤组织中，Sepp1的mRNA水平与rs230820相关，AA纯合子比CC纯合子的mRNA量高3.6%。
3
硒蛋白P基因多态性与肿瘤
3.1
硒蛋白P基因多态性与乳腺癌
乳腺癌是女性患病率最高的肿瘤，严重威胁女性健康，而Seppl的基因多态性被认为与乳腺癌的发病相关。Meplan等以丹麦975例乳腺癌患者和975例对照组作为研究对象进行Seppl基因多态性与乳腺癌遗传易感性关联分析。结果发现，Seppl rs3877899多态性位点AA纯合子的乳腺癌的发病率更低，进一步研究发现，rs3877899位点仅与导管性乳腺癌的遗传易感性相关，与非导管性乳腺癌不相关；rs7579位点与乳腺癌的遗传易感性不相关。
3.2 硒蛋白P基因多态性与前列腺癌
对于前列腺癌，Seppl基因多态性与其遗传易感性研究结果缺乏一致性，Steinbrecher等发现在欧洲人群中Seppl rs7579多态性位点AA纯合子相比于GG纯合子前列腺癌的发病风险的OR值为1.72，rs3877899位点与前列腺癌的患病风险小具有相关性。Penney等对美国1 352例前列腺癌患者和l382例对照者进行SNP分型分析发现，Seppl rsl1959466位点T等位基因可以升高前列腺癌的患病风险（OR值为1.31；95%可信区间为1.02～1.69；P值为0.03），rs13168440多态性位点CC基因刑具有更低的患病风险（OR=0.56， 95%可信区间为0.33―0.96），rs12517112位点和rs230820位点与前列腺癌的患病风险不具有相关行，这4个SNP位点与前列腺癌的预后不具有相关性。Gevbels等对1 309例欧洲前列腺痈患者和l266例对照进行Seppl的6个SNP位点进行关联性分析，发现在有局部或远处转移的前列腺癌患者中，rs3797310和rs3877899多态性位点与前列腺癌的遗传易感性相关，在未转移的前列腺痛中不具有相关性，在有局部或远处转移的前列腺癌患者中，rs3797310多态性位点TT等位基因是CC等位基因患前列腺癌的1.68倍，rS3877899多态性位点AA等位基因是GG等位基因患前列腺癌的0.33倍，但经过多因素logistic：回归分析，校正了体重指数（BMl）、患病年龄等影响因素后发现rs3797310和rs3877899多态性位点与前列腺癌的遗传易感性不具有相关性。rs7579多态性位点等其他4个多态性位点不与前列腺癌的发病风险相关， Geybels等分析的这6个Seppl多态性位点与前列腺癌的预后亦无相关性。
3.3 硒蛋白P基因多态性与结直肠癌
Meplan等发现在捷克共和国人群中，Sepplrs7579 AA纯合子相比于GG纯合子结直肠癌的发病风险的OR值为1.67，但rs3877899、rs12055266、rs3797310和rs2972994多态性位点与结直肠癌不具有相关性。Peters等收集772例晚期左侧结直肠腺癌和777例对照者的标本，发现在Sepplrs2972994多态性位点TT纯合子相比于CC纯合子，可以降低晚期左侧结直肠腺癌的发病风险.其OR值为0.85 （95% CI 0.63―1.15）； rs3797310位点AA纯合子相比于GG纯合子可以升高晚期左侧结直肠腺癌的发病风险，其OR值为l.53（95% CI 1.05―2.12）； rs12055266位点GG 纯合子相比于AA纯合子，可以升高晚期左侧结直肠腺癌的发病风险，其OR值为1.48（95% CI 1.00～2.19）； rs3877899位点和rs6413428位点与晚期左侧结直肠腺癌的发病风险不具有相关性。
4
硒蛋白P基困多态性与慢性肾病
Hishida等收集了568例日本慢性肾病患者和2 717例对照者，进行Seppl rs7579、rs12055266、rs3797310和rs2972994位点多态性与慢性肾病的遗传易感性的关联性研究，发现这些多态性位点不会影响慢性肾病的发病风险。
5
硒蛋白P基因多态性与大骨节病
大骨节病（kashin-beck disease，KBD）主要分布于我国北部山区、西伯利亚尔部和朝鲜北部，因在我国本病病区分布与低硒十壤地带大体上一致，病人体内可查出与低硒相联系的一系列代谢变化，病区人群头发硒水平上升时，病情下降，补硒后能降低大骨节病的新发率等间接证据，怀疑大骨节病与缺硒有关，而Seppl在体内运输硒到各个组织中起着重要作用，Seppl基因变异可能影响大骨节病的患病风险，但Xiong等和Sun等分别研究发现在中国人群中rs7579位点与大骨节病（KBD）患病风险不具有相关性。
6
硒蛋白P的基因变异与其他硒蛋白的相互作用
研究发现，Seppl可以与其他矾蛋白和疾病影响因素一起影响疾病的发生发展，Cooper等研究发现男性人群中SOD2 Val （16）Ala多态性与前列腺癌的患病风险相关，Ala纯合子可以升高前列腺的发病风险，OR值为1.19，但Seppl rs3877899位点GG基因型联合SOD2-Ala16+纯合子可以进一步升高前列腺癌的发病风险，OR值为1.43；男性吸烟人群中，SOD2-Ala16+纯合子并Seppl rs3877899多态性位点GG基因型联合吸烟导致前列腺癌发病风险更高，OR值为1.97。Penney等研究发现吸烟联合rsl1959466位点T等位基因，肥胖联合rs13168440位点TT基因型可以进一步升高前列腺癌的死亡率。说明硒蛋白基因变异具有累加效应，在吸烟或者肥胖患者中，机体产生更多的活性氧，而有些基因型可以更高效地清除氢过氧化物，而凸显优势基因型的优势，优势比进一步扩大。
7
篇2
Klotho基因是Kuro等〔1〕于1997年发现的与衰老有关的新基因，并用古希腊神话中纺织生命之线女神的名字命名。Klotho基因被敲除的小鼠(KL-/小鼠)可出现类似人类衰老的各种表型，如寿命缩短、不育症、动脉硬化、皮肤萎缩、骨质疏松、肺气肿等。近年来对klotho基因多态性与疾病的关系逐渐受到重视，现将有关研究现状综述如下。
1 Klotho基因的结构
Klotho基因长50 kb，由5个外显子和4个内含子组成〔2，3〕。人的klotho基因位于13q12，klotho基因的操纵子内没有TATA盒和CAAT盒，但有5个潜在的SP1结合位点，外显子1及旁侧2 000 bp序列中，G+C的平均含量为66.75%，最高达到98%，提示在这一区域有CpG岛的存在〔1，4〕。在klotho基因结构中，其RNA存在着一个潜在的可变剪切位点，这一位点如果接受了一个50 bp片段的插入，该插入序列末尾的两个核苷酸TA就会与外显子4的第一个核苷酸G共同构成一个终止密码TAG，使得RNA由此截断形成一个短的开放阅读框，仅含3个外显子和2个内含子而编码分泌型klotho蛋白。但如果可变剪切位点没有50 bp片段的插入，其RNA就是一个完整的结构，包括5个外显子和4个内含子，编码形成一种膜型klotho蛋白。人的膜型klotho cDNA全长3 036 bp，分泌型cDNA全长1 647 bp。膜型klotho基因表达的膜型蛋白是一种单跨膜蛋白，包括一个N端信号序列、带有两个内部重复片段的KL1和KL2细胞外区域，一个单跨膜区和一个短的胞内区。在KL1和KL2之间有一段LysLysArgLys的碱性氨基酸序列，可能为蛋白酶裂解位点，该位点有时可能被裂解，释放出小肽而作为体液因子发挥作用。而分泌型klotho基因表达的分泌型蛋白由于可变剪切的原因，仅含有N端序列和KL1胞外区，缺少了KL2胞外区、跨膜区和胞内区。人的膜型蛋白含有1 012个氨基酸，分泌型蛋白含有549个氨基酸。
2 Klotho基因多态性
Klotho 基因共含有400多个单核苷酸多态性(SNPs)，其中影响转录和蛋白表达的主要是启动子区和外显子区的SNPs，其中启动子区有 16个SNPs，5个外显子区共有15个SNPs，其余均在内含子内。目前研究最多的是KLVS〔5〕，包含6个SNPs，位于外显子2区附近，3个SNPs在外显子2区内，其中1个为无义突变，另两个F352V（A1056G） 和C370S（G1110C），这6个SNPs处于完全连锁不平衡。KLVS具有明显的种族特异性，白种人群有 20%～31%的变异〔5，6〕，而日本和韩国等亚洲人群未发现变异〔7，8〕。其他如启动子395也存在GA变异，在正常人群中G、A的频率分别为80.4%～85.7%和14.3%～19.6% 〔7，9，10〕。该等位基因是Kawano等〔8〕在研究绝经后妇女骨密度时发现，电泳迁移率变动分析(EMSA)显示GA替换后DNA蛋白复合物的量明显下降，推测该替换可能通过减少蛋白和klotho基因启动子区结合而改变klotho基因表达。外显子4区的C1818T（HisHis）的变异，并不能引起氨基酸表达的改变，但可能也与某些疾病有关，多项研究表明〔11，12〕外显子区的无义突变也可能产生有异常功能的多种转录或影响产物的表达水平，Kawano等〔8〕用RTPCR方法没有发现C1818T变异引起的klotho基因转录的变化，推测C1818T位点可能与影响klotho基因功能的一个SNP位点有机联系在一起。在正常人群中C、T的频率分别为58.9%～81.9%和18.1%～41.1%〔7，10〕。klotho基因其他SNPs如启动子区G959C 、外显子1区A44C和C234G、外显子4区C2298T等，因未发现与疾病有关或小等位基因频率低于5%，在此不再赘述。
3 Klotho基因多态性与疾病易感性的关系
3.1 Klotho基因与心血管疾病
Klotho基因缺陷的小鼠在出生4 w后即可出现动脉硬化，并随着年龄的增加而加重，这些血管变化与人类动脉硬化非常相似。把外源性正常klotho cDNA转导给klotho基因缺陷的小鼠后，其动脉硬化程度可得到显著改善〔1〕，由此推测在人体也可能存在klotho基因突变或有特定的klotho等位基因与动脉硬化密切相关。为此，Arking等〔13〕检测了两组相互独立的无症状冠心病患者的KLVS等位基因频率，同时比较冠心病的危险因素如血糖、血脂、血压、体重指数、吸烟情况，经过Logistic回归分析，证实KLVS等位基因是早发冠心病的独立危险因素。随后他们〔14〕又检测了525例北欧犹太教徒的KLVS等位基因频率，并用多元回归法分析KLVS基因型与血压、血脂等心血管危险因素的关系，发现HDLC和收缩压与KLVS具有相关性，野生型（FF）和KLVS纯合型（VV）与杂合型（FV）相比，HDLC分别下降了3.47和9.80 mg/dl，收缩压升高6.51和 18.97 mmHg，提示KLVS纯合型患心血管疾病的危险度最高。用Cox回归分析，KLVS纯合型和野生型较杂合型相对危险度提高了4.49和2.15倍。以上报道均提示KLVS基因与心血管疾病密切相关。除KLVS基因外，在亚洲地区也进行了启动子区G395A与心血管疾病关系的研究其关系目前尚不明确。Imamura等〔9〕认为冠状动脉狭窄患者klotho基因395A等位基因频率(29.9%)明显高于对照组(19%)，调整后的P=0.029，而冠状动脉痉挛组(23.4%)与对照组无显著性差异，从而推测395A可能是冠心病独立的基因危险因子。而Rhee等〔15〕在对274例因胸痛进行冠状动脉造影检查的韩国人G395A分型中发现，冠心病患者携带A等位基因(GA+AA)的频率(45.1%)与非冠心病患者(54.9%)相比，两者无显著差异(P=0.746)，目前395A等位基因是否是冠心病筛选基因还有待大样本进一步证实。
3.2 Klotho基因与骨质疏松
人的骨质密度是基因和环境共同作用的结果，实际上Ralston等〔16〕认为基因在骨质密度方面可能起到50%～80%的作用，而且不同基因在不同年龄阶段起着不同作用。由于KL-/-小鼠可出现类似人类衰老的各种表型，包括骨质疏松，由此推测klotho基因多态可能与骨质疏松有关。Kawano等〔8〕研究报道在55例≥65岁绝经期妇女的小样中提示klotho基因可能与衰老有关的骨质疏松有关。Mullin等〔17〕报道与此相反，他们检测1 190例白种人绝经期妇女基因型及其各部位（包括髋骨、股骨颈、股骨粗隆和粗隆间）的BMD和其中200例降钙素，发现G395A和C1818T两基因多态与各部位的BMD无关，而C1818T多态与血清降钙素有关，TT型的降钙素明显大于CT型，CT型大于TT型。以上报道存在矛盾之处，提示G395A和C1818T多态与人体骨质密度(BMD)可能无关，还有待进一步研究。在T352V与BMD的关系方面，Zarrabeitia等〔18〕检测362位西班牙男性的F352V基因型和各部位(包括腰椎、股骨颈、髋骨和跟骨)的BMD，362位男性作为整体，FV+VV基因型的BMD与FF的无明显区别，≤53岁的中青年人群中，FV+VV基因型的BMD明显高于FF基因型的。Riancho等〔10〕则认为女性的F352V基因型和BMD的关系与绝经状态有关，绝经前F352V基因型和BMD无关，绝经后含FV+VV基因型的妇女BMD较含FF基因型的高。由此推测F352V多态与BMD可能有一定的关系。FF基因型可能是骨质疏松的危险因素。
3.3 Klotho基因与糖代谢
由于KL-/小鼠血糖和胰岛素水平下降且胰岛素敏感性增加，相反，klotho过表达的小鼠胰岛素抵抗，推测klotho基因可能与糖尿病有关。Rhee等〔19〕检测251例健康韩国妇女快速血糖和胰岛素抵抗指数（HOMAIR）并用RTPCR检测klotho基因型，发现G395A与血糖无关，而C1818T与血糖有关，含T等位基因血糖高于C等位基因，HOMAIR 平均值也明显增高，提示klotho基因可能是研究糖代谢的候选基因之一。Graham等〔20〕在对1 793例无糖尿病家族史的2型糖尿病患者、1 619例正常对照和来自509例2型糖尿病家庭的1 616例个体进行klotho基因F352V检测，证明糖尿病患者FV+VV基因型（28%）与正常对照（28%）无显著差异，用FBAT软件进行家系关联性分析，发现V等位基因与糖尿病并无明显关联，提示在大型病例对照研究和家系研究中并未发现klotho基因F352V与2型糖尿病有关。
3.4 Klotho基因与肿瘤
Klotho的功能目前研究较多的是：①klotho蛋白抑制氧化应激、提高哺乳动物细胞对氧化应激的抵抗能力〔21〕；②抑制参与肿瘤发生发展的IGF1R的作用〔22～25〕；③klotho基因缺乏的小鼠具有免疫抑制作用〔1，26〕。以上均提示klotho可能是一个肿瘤抑制因子〔27〕。Wolf等〔28〕在研究klotho蛋白的表达与肺癌的关系时发现klotho表达在正常肺组织较肺癌组织高，在癌组织中，癌块较小的肺癌组织klotho表达较较大的肺癌组织高，Wolf等的结论证实klotho可能是一个肿瘤抑制因子。然而 Lingeng 等〔29〕在研究卵巢癌与klotho蛋白表达的关系时发现卵巢上皮细胞癌组织klotho蛋白表达较正常组织增高，klotho表达可能与卵巢癌的进展有关，这一结论与Wolf等结果相矛盾。klotho蛋白与肿瘤的关系还待进一步研究。我们〔30〕在研究klotho基因多态与胃癌的关系时发现胃癌患者395A明显高于正常对照，这是首次关于klotho基因多态与肿瘤关系的研究。
4 展 望
Klotho是与衰老有关的新基因，目前其多态性与疾病易感性的研究主要集中在心血管、骨质疏松和糖代谢方面的研究，而与肿瘤和免疫功能关系的研究较少。有关klotho基因多态性与疾病的关系研究也应考虑这些方面。klotho基因功能与各种老年性疾病关系的研究帮助我们阐明衰老的分子机制及内在本质，为更好防治衰老性疾病、延长人类寿命奠定基础。
参考文献
1 Kuroo M，Matsumura Y，Aizawa H，et al.Mutation of the mouse klotho gene leads to a syndrome resembling aging〔J〕.Nature，1997；390:4551.
2 Matsumura Y，Aizawa H，ShirakiIida T，et al.Identification of the human klotho gene and its two transcripts encoding membrane and secreted klotho protein〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，1998;243(3):62630.
3 Saito Y，Kuroo M，Nabeshima Y，et al.The protective role of klotho gene on vascular endothelium〔J〕.Nippon Rinsho，1999;57(7):15148.
4 ShirakiIida T，Aizawa H，Matsumura Y，et al.Structure of the mouse klotho gene and its two transcripts encoding membrane and secreted protein〔J〕.FEBS Lett，1998;424(12):610.
5 Arking DE，Krebsovs A，Macek M Sr，et al.Association of human aging with a functional variant of klotho〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA，2002;99：85661.
6 Low AF，O′Donnel CJ，Kathiresan S，et al.Aging sysdrome genes and premature coronary artery disease〔J〕.BMC Med Genet，2005;6:3846.
7 Kim Y，Kim JH，Nam YJ，et al.Klotho is a genetic risk factor for ischemic stroke caused by cardioembolism in Korean females〔J〕.Neurosci Lett，2006；407(3):189194.
8 Kawano K，Ogata N，Chiano M，et al.Klotho gene polymorphisms associated with bone density of aged postmenopausal women〔J〕.J Bone Miner Res，2002；17:174451.
9 Imamura A，Okumura K，Ogawa Y，et al.Klotho gene polymorphism may be a genetic risk factor for atherosclerotic coronary artery disease but not for vasospastic angina in Japanese〔J〕.Clin Chim Acta，2006;371:6670.
10 Riancho JA，Valero C，Hernandez JL，et al.Association of the F352V variant of the klotho gene with bone mineral density〔J〕.Biogerontology，2007；8：1217.
11 Wakamatsu N，Kobayashi H，Miyatake T，et al.A novel exon mutation in the human betahexosaminidase beta subunit gene affects 3，splice site selection〔J〕.J Biol Chem，1992;267:240613.
12 Liu W，Qian C，Francke U.Silent mutation induces exon skipping of fibrillin1 gene in Marfan syndrome〔J〕.Nat Genet，1997;16:3289.
13 Arking DE，Becker DM，Yanek LR，et al.Klotho allele status and the risk of earlyonset occult coronary artery disease〔J〕.Am J Hum Genet，2003;72:115461.
14 Arking DE，Atzmon G，Arking A，et al.Association between a functional variant of the klotho gene and highdensity lipoprotein cholesterol，blood pressure，stroke，and longevity〔J〕.Circ Res，2005;96:4128.
15 Rhee EJ，Oh KW，Lee WY，et al.The differential effects of age on the association of klotho gene polymorphisms with coronary artery disease〔J〕.Metabolism，2006;55:134451.
16 Ralston SH.Genetic control of susceptibility to osteoporosis〔J〕.J Clin Endocrinol Metab，2002；87:24606.
17 Mullin BH，Wilson SG，Islam FM，et al.Klotho gene polymorphisms are associated with osteocalcin levels but not bone density of aged postmenopausal women〔J〕.Calcif Tissue Int，2005;77:14551.
18 Zarrabeitia MT，Hernandez JL，Valero C，et al.Klotho gene polymorphism and male bone mass〔J〕.Calcif Tissue Int，2007;80:104.
19 Rhee EJ，Oh KW，Yun EJ，et al.Relationship between polymorphisms G395A in promoter and C1818T in exon 4 of the KLOTHO gene with glucose metabolism and cardiovascular risk factors in Korean women〔J〕. J Endocrinol Invest，2006;29:6138.
20 Rachel MF，Michael NW，David M，et al.The functional “KLVS” variant of KLOTHO is not associated with type 2 diabetes in 5028 UK Caucasians〔J〕.BMC Medical Genetics，2006;7:51.
21 Yamamoto M，Clark JD，Pastor JV，et al.Regulation of oxidative stress by the antiaging hormone klotho〔J〕.J Biol Chem，2005；280:3802934.
22 Stromberg T，Ekman S，Girnita L，et al.IGF1 receptor tyrosine kinase inhibition by the cyclolignan PPP induces G2/Mphase accumulation and apoptosis in multiple myeloma cells〔J〕.Blood，2006;107(2):66978.
23 Ahlen J，Wejde J，Brosjo O，et al.Insulinlike growth factor type 1 receptor expression correlates to good prognosis in highly malignant soft tissue sarcoma〔J〕.Clin Cancer Res，2005;11(1):20616.
24 Kucab JE，Dann SE. Role of IGF1R in mediating breast cancer invasion and metastasis〔J〕.Breast Dis，2003;17:417.
25 Kurosu H，Yamamoto M，Clark JD，et al.Suppression of aging in mice by the hormone klotho〔J〕.Science，2005;309(5742):182933.
26 Yamashita T，Yoshitake H，Tsuji K，et al.Retardation in bone resorption after bone marrow ablation in klotho mutant mice〔J〕.Endocrinology，2000;141(1)：43845.
27 Wang YA.Klotho，the long soughtafter elixir and a novel tumor suppressor〔J〕? Cancer Biol Ther，2006；5(1):201.
28 Wolf I，LevanonCohen S，Bose S，et al.Klotho：a tumor suppressor and a modulator of the IGF1 and FGF pathways in human breast cancer〔J〕. Oncogene，2008;27(56):7094105.
篇3
关键词：非创伤性股骨头坏死；ApoA1基因-75bp/+83bp位点；中医体质；血瘀质
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.11.005
中图分类号：R272.968.3 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）11-0017-05
Abstract： Objective To study the correlation between nontraumatic osteonecrosis of femoral head （NONFH） and ApoA1 polymorphism of blood stasis type. Methods Totally 93 cases of NONFH were selected as the case group， and 83 healthy volunteers were randomly selected as the control group. With TCM constitution questionnaire survey， the case group was screened out 32 cases of blood stasis NONFH type and 61 cases of non blood stasis NONFH type. In the case group and control group， the subjects took blood samples 2 mL， extracted DNA for PCR amplification， PCR products for DNA sequencing. G994T PAF-AH and rs9658282 gene NOS1 site polymorphism were detected for tatistical analysis. Results -75G/A gene AA ApoA1 genotype （OR： 2.578； 95%CI： 1.174-5.663； P=0.018） and A allele （OR： 1.726； 95%CI： 1.121-2.658； P=0.013） may be one of the risk factors of NONFH. Conclusion -75G/A gene ApoA1 may be related to the pathogenesis of NONFH. There was no correlation between the ApoA1 gene polymorphism of -75G/A gene and the pathogenesis of blood stasis NONFH. There was no correlation between the ApoA1 gene polymorphism of +83C/T gene and the pathogenesis of blood stasis NONFH.
Key words： nontraumatic osteonecrosis of femoral head （NONFH）； ApoA1 gene-75bp/+83bp point； TCM constitutions； blood stasis
非创伤性股骨头坏死（nontraumatic osteonecrosis of femoral head，NONFH）发病机制目前尚不完全清楚，其治疗有一定的盲目性和经验性。对其病因分子生物学机制及药物防治早期NONFH的研究是当今骨科研究热点之一。中医药防治NONFH显示出了一定的优势，主要体现在中医辨证论治的治疗原则重视对个体体质状态的辨析，在治疗过程中发挥“因人制宜”的防治思想。本课题组前期研究显示，血瘀质是NONFH的高发体质类型之一。本研究通过检测血瘀质NONFH患者ApoA1基因多态性，探讨中医血瘀体质与NONFH的相关性，为通过体质辨别运用中医药干预NONFH提供新的思路和依据。
1 资料与方法
1.1 病例选择标准
NONFH诊断、纳入及排除标准依据2006年中华医学会骨科学分会关节外科学组提出的《股骨头坏死诊断与治疗的专家建议》[1]及《中药新药临床研究指导原则》[2]制定。
1.2 中医体质判定标准
依据《中医体质分类与判定》[3]制订“非创伤性股骨头坏死中医体质类型及相关基因多态性研究”调查表，中医体质分为平和质、气虚质、阳虚质、阴虚质、痰湿质、湿热质、血瘀质、气郁质、特禀质9种类型。
1.3 一般资料
应用临床流行病学方法，于2011年1月-2013年8月在甘肃省中医院骨科门诊、住院部对NONFH患者及非血缘关系健康志愿者进行问卷调查，以NONFH患者作为病例组，无血缘关系健康志愿者为对照组。病例组93例，其中血瘀质32例，非血瘀质61例；对照组83例，与病例组在居住地分布上基本一致。2组性别、年龄比较差异无统计学意义（P>0.05），体质指数比较差异有统计学意义（P
1.4 病例调查与样本采集
对调查者进行相关理论知识、调查方法及实验方法培训。因NONFH分布不集中，故指定专职调查者进行病例的收集，并采取空腹外周血2 mL，置入装有EDTA抗凝剂的无菌管中，混匀，-80 ℃冰箱保存。
1.5 试验材料
TIANamp Blood DNA Kit血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型），Premix Ex Taq Version2.0，TaKaRa宝生物工程（大连）有限公司。引物1（10 ?mol/L）、引物2（10 ?mol/L），TaKaRa宝生物工程（大连）有限公司合成。QuickCutTM MspI限制性内切酶试剂盒，TaKaRa宝生物工程（大连）有限公司。灭菌蒸馏水，总医院水处理系统，高压灭菌。
1.6 试验方法
1.6.1 DNA提取 采用TIANamp Blood DNA Kit血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）自血液中提取DNA。
1.6.2 PCR扩增 ApoA1基因-75bp/+83bp位点引物序列：上游5'-AGGGACAGAGCTGATCCTTGAACT CTTAAG-3，下游5'-TTAGGGGACACCTAGCCCTCA GGAAGAGCA-3，扩增片段长度433 bp。PCR反应体系：Premix Ex Taq 25 ?L，上游引物（10 ?mol/L）2 ?L，下游引物（10 ?mol/L）2 ?L，模板DNA 4 ?L，灭菌三蒸水17 ?L，总体积50 ?L。将上述体系加入0.5 mL Eppendorf离心管后瞬时离心，防止体系内液体附壁。ApoA1基因-75bp/+83bp位点的PCR反应条件：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性45 s，62 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，40个循环；72 ℃延伸7 min；保存温度4 ℃。琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳验证，结果见图1。
1.6.3 PCR扩增产物的酶切 ApoA1基因-75bp、+83bp位点的PCR扩增产物在快速酶切反应体系中37 ℃温浴30 min。①ApoA1基因-75bp位点酶切产物检测：配制1.5%琼脂糖凝胶。取5 ?L DL500 DNA Marker加入1.5%琼脂糖凝胶第一个样品槽中；因10×QuickCut Green Buffer中含有电泳时所必需的色素等试剂，酶切产物可直接进行电泳检测，取6 ?L酶切产物依次按标记序号直接加样于琼脂糖凝胶板其他样品槽中，电泳槽内加入1×TBE稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面。设定电压为125 V，电流保持在80 mA以上进行电泳分离。20 min后，当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2 cm，DL500 DNA Marker条带散开可辨时停止电泳。电泳结果使用YLNCCAP OF OLP凝胶成像系统进行观察并拍照。ApoA1基因-75bp位点G被A取代，MspI酶切位点丢失，-75bp处由于碱基的变异而形成GG（113bp及66bp片段）、GA（179bp、113bp及66bp片段）和AA（179bp片段）3种等位基因型。②ApoA1基因+83bp位点酶切产物检测：方法同上。ApoA1基因+83bp处C被T取代后，MspI酶切位点丢失，+83bp处的碱基变异形成CC（209bp及45bp片段）、CT（209bp、254bp及45bp片段）、TT（254bp片段）或GG、GA、AA 3种等位基因型。
1.7 统计学方法
采用SPSS18.0统计软件进行分析。首先通过χ2检验分析总体上各基因型及等位基因分布差异（P
2 结果
2.1 基因检测及分型结果
176例样品中，MspI酶切共检测出6种基因型：GG（113bp及66bp片段）、GA（179bp、113bp及66bp片段）、AA（179bp片段）、CC（209bp及45bp片段）、CT（209bp、254bp及45bp）、TT（254bp片段）。结果见图2。
2.2 ApoA1基因-75G/A位点多态性与血瘀质非创伤性股骨头坏死的关系
ApoA1基因-75G/A位点病例组与对照组总体上各基因型及等位基因分布差异有统计学意义（χ2=7.391，P
将病例组血瘀质、非血瘀质与对照组两两比较，其中血瘀质与对照组总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=5.434，P>0.05；χ2=2.657，P>0.05），非血瘀质与对照组总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=5.848，P>0.05；χ2=2.377，P>0.05），血瘀质与非血瘀质总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=0.664，P>0.05；χ2=0.100，P>0.05），见表3。提示ApoA1基因-75G/A位点多态性与血瘀质高发NONFH不具有相关性。
2.3 ApoA1基因+83C/T位点多态性与血瘀质非创伤性股骨头坏死的关系
ApoA1基因+83C/T位点病例组与对照组总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=1.168，P>0.05；χ2=0.650，P>0.05），见表4。提示ApoA1基因+83C/T位点基因多态性与NONFH发病无相关性。
将病例组血瘀质、非血瘀质与对照组两两比较，其中血瘀质与对照组总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=0.353，P>0.05；χ2=0.345，P>0.05），非血瘀质与对照组总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=1.138，P>0.05；χ2=0.504，P>0.05），血瘀质与非血瘀质总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=0.141，P>0.05；χ2=0.000，P>0.05），见表5。提示ApoA1基因+83C/T位点多态性与血瘀质高发NONFH不具有相关性。
3 讨论
我们前期研究结果显示，NONFH的病因病机以过量摄入激素类药物及酒精中毒引起脂代谢紊乱为主[4]，脂代谢紊乱是NONFH发病的重要机制之一，血脂的异常升高可引起一系列的血管病变，如血管栓塞（脂肪滴随血流流经较细的股骨头微小动脉时，形成栓塞，阻断微循环血供）[5]、血管损伤（血液中游离脂肪酸增多造成微血管内皮细胞功能障碍，主要包括活性氧的产生、凋亡的诱导以及内皮细胞依赖性血管舒张功能的异常）[6]、血管修复功能异常（游离脂肪酸破坏血管内皮细胞增值与凋亡的平衡，导致血管修复功能减弱），以及凝血异常（游离脂肪酸引起促凝血状态，纤维溶解活性降低，血小板的活性和功能增强）。由此可见，脂代谢紊乱引起血脂增高是NONFH血管病变的重要因素。ApoA1作为构成高密度脂蛋白的重要载脂蛋白，是脂质代谢过程的关键调节因子。如果ApoA1的结构或表达量发生变化，则可引起血脂代谢的紊乱，导致血中脂肪酸含量异常，进一步引起上述的血管病变。ApoA1基因结构的改变影响着ApoA1的分子结构、生成和向血液中释放的速率，进而影响血中ApoA1与HDL的水平。本研究选取ApoA1 -75G/A和+83C/T多态性位点，以血瘀质NONFH患者为研究对象，并将血瘀质NONFH、非血瘀质NONFH及对照组进行两两比较，探讨血瘀质高发NONFH与ApoA1 -75G/A和+83C/T的相关性。结果表明，AA基因型及A等位基因可能是发生NONFH的分子生物学机制之一。但并未发现血瘀质NONFH与ApoA1 -75G/A和+83C/T具有相关性。
ApoA1-75G/A多态性不仅可以破坏MspI内切酶识别位点，还能够改变GGGCCGG序列，后者是ApoA1基因转录的调控元件，具有激活转录的作用。当该序列发生变化时，可能会影响基因的转录和表达，从而影响ApoA1的合成。早期报道显示，ApoA1基因启动子-75bp A等位基因与血浆ApoA1和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）水平密切相关，并认为是A碱基的置换促进了ApoA1基因的表达及合成[7]。本研究发现，A等位基因分布频率低可能与NONFH的发病相关。说明ApoA1表达量过低可能与本病的发生相关。如ApoA1的表达及合成减少，首先影响血浆中脂类的传输，其次影响激活卵磷脂胆固醇脂酰基转移酶（LCAT），阻碍成熟HDL的形成，从而增加肝外组织细胞及血浆中脂类的沉积，进一步使血脂升高并引起血管病变。主要可导致血管内皮细胞凋亡，内皮依赖性舒张功能下降并形成高凝血、低纤溶的病理状态，脂质过氧化形成xo-LDL沉积于血管局部，参与脂质斑块的形成，最终阻塞微血管，血管局部氧化性损伤及舒张性降低可阻断微血管血流，是微循环障碍的重要因素。而这些血管病变有可能是股骨头局部血运障碍的主要因素，这与本课题组前期研究NONFH发病的重要机制“脂代谢紊乱-血管病变”一致。本研究结果亦显示，ApoA1-75G/A位点及A等位基因与NONFH相关。所以推断ApoA1基因-75G/A位点A等位基因可能与NONFH发病具有相关性。也有报道显示，ApoA1的生成率在GG纯合子中显著高于GA杂合子，同时体外观察发现A等位基因伴有启动子活性降低，并且表达水平降低[8]。本研究未发现GG、GA基因型与NONFH具有相关性。而A等位基因对ApoA1表达的影响，本课题组会在后续试验中进一步研究，并扩充样本量，探讨NONFH高发体质类型的分子生物学机制。
参考文献：
[1] 李子荣.股骨头坏死诊断与治疗的专家建议[J].中华骨科杂志，2007， 27（2）：146-148.
[2] 中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则：第三辑[M].北京，1997：136.
[3] 中华中医药学会.中医体质分类与判定（ZYYXH/T 157-2009）[J].世界中西医结合杂志，2009，4（4）：303-304.
[4] 李盛华，周明旺，宋渊.陇中损伤散治疗激素性股骨头坏死的实验研究[J].中国中医骨伤科杂志，2008，16（6）：26-31.
[5] BALAKUMAR P， ROHILLA A， MAHADEVAN N. Pleiotropic actions of fenofibrate on the heart[J]. Pharmacological Research，2011， 63（1）：8-12.
[6] CHINEN I， SHIMABUKURO M， YAMAKAWA K， et al. Vascular lipotoxicity：endothelial dysfunction via fatty-acid-induced reactive oxygen species overproduction in obese Zucker diabetic fatty rats[J]. Endocrinology，2007，148（l）：160-165.
篇4
【关键词】 ABCG2基因;单核苷酸多态性
AbstractABCG2 protein is one of the ATP-binding transporters expressed in human normal cells and tumor tissues，ABCG2 can inhibit the gastrointestinal absorption of which can be exogenous substances，involved in many physiological functions such as the formation of the blood-brain and placental-blood barrier. ABCG2 is a new drug efflux pump as well. It is one cause of multidrug resistance. ABCG2 gene single nucleotide polymorphism may affect the expression and function of ABCG2 protein. ABCG2 gene SNP is associated with disease susceptibility and pharmacokinetics. Single nucleotide polymorphism of ABCG2 is becoming a new hotspot. Domestic and international research on the ABCG2 gene SNP is reviewed in this paper.
Key words:ABCG2 gene;single nucleotide polymorphism
1998 年Doyle等[1]首先在乳腺癌细胞株MCF-7/AdrVp 中检测到一种跨膜转运蛋白，称为乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein，BCRP)，系统发育分析该基因为ABC转运蛋白超家族(ATP-binding cassette transporter superfamily，ABC transporter superfamily)G亚家族第2成员，命名为ABCG2。ABCG2定位于细胞膜，在正常组织中分布广泛，主要分布于具有分泌和排泄功能的组织如胎盘合体滋养层、小肠和结肠上皮、肝脏小管膜、胆小管膜、乳腺小叶及血管内皮细胞中。人类ABCG2基因位于4q22～23，编码655个氨基酸残基。ABCG2全长66 kb，由16个外显子和15个内含子组成，外显子为60～332 bp不等。ABCG2在人体内承担着一定的生理功能，如维持细胞稳态、血脑屏障、胎血屏障等，同时与疾病的易感性及药动学等相关。
单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms，SNP)是指基因组水平上由单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性，它是人类遗传变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90%以上。作为“第三代DNA遗传标记”的单核苷酸多态性标记具有位点丰富、具代表性、遗传稳定性和分析自动化的等特点，是研究药物基因组学的分子基础。研究单核苷酸多态性有助于解释个体的表型差异、不同群体和个体对疾病，特别是对复杂疾病的易感性以及对各种药物的耐受性和对环境因素反应的差异。单核苷酸多态性可应用于分子遗传标记，分子标记诊断，在流行病学调查中的高危人群筛查，以及进行患病危险程度评价。
近年来，一些研究资料显示，ABCG2基因单核苷酸多态性可能与ABCG2的表达水平和功能有着不可忽视的作用，此外ABCG2基因单核苷酸多态性与耐药性也有着重大关联。因此，ABCG2基因的单核苷酸多态性的研究引起了研究者的极大关注，本文从ABCG2基因单核苷酸多态性的分布、对蛋白表达和功能的影响以及与肿瘤等疾病相关性的研究进展进行综述。
1ABCG2基因的SNPs及其分布
目前已发现ABCG2基因有40多个SNPs，其中最为常见的3个ABCG2基因SNPs分别是C421A、G34A以及C376T。C421A是由ABCG2第5个外显子的421位点碱基改变引起的，这个SNP导致其编码的多肽141位谷氨酰胺变为赖氨酸(Q141K);G34A位于ABCG2基因第2外显子上，引起12位的缬氨酸变为甲硫氨酸 (V12M)，野生型和变异型氨基酸均不带电荷，呈疏水性，位于ABCG2 N端细胞内区域;ABCG2基因里的另一个单核苷酸多态是C376T(Q126stop)，造成终止密码子代替126位的谷氨酰胺。表1为已报道的ABCG2基因编码区SNPs。表1ABCG2基因编码区单核苷酸多态研究者们已经对东亚人群、高加索人群以及非洲人群的ABCG2 SNPs做了相关的研究，发现ABCG2 SNPs的分布在不同人群中有显著的差异(表2)。C421A在所检测的人群中均可检测得到，A等位基因的发生频率在中国人群中高达29.0%~34.2%，日本人群为30.4%~35.5%，高加索人群为8.7%~11.9%，非洲人群中最为罕见，只有09%~53%;G34A多态性也分布于多种人群中，在瑞典人群中发生率仅为1.7%，而在越南人群中发生率高达36.0%，ABCG2基因的另一常见SNP(C376T)，仅在东亚人群可检测发现，发生频率为0.4%~1.9%。
2ABCG2基因SNPs对ABCG2蛋白表达及功能的影响
多项研究报道ABCG2基因单核苷酸多态性影响ABCG2蛋白的表达水平。Imai等[10]对124名日本健康志愿者的血样作DNA分析，显示C421A导致ABCG2表达水平下降;Furukawa等[11]用野生型和C421A重组Flp-In-293细胞研究ABCG2表达水平，结果显示C421A表达水平约为野生型的50%，但是mRNA水平相同;Kobayashi等[8]也得出了相似的结果，并进一步证实ABCG2蛋白水平的差异由转录后调节而非ABCG2 mRNA水平变化所引起。Poonkuzhali等[12]研究发现，具有G34A单核苷酸多态性的西班牙人ABCG2 mRNA的水平明显降低。Tamura等[13]在研究中创建了7个ABCG2 SNPs(V12M、Q141K、F208S、S248P、F431L、S441N、F489L)重组Flp-in-293细胞，其中F208S、S441N的表达水平下降最为明显;Poonkuzhali等[12]对ABCG2启动子和内含子1单核苷酸多态性进行研究，结果显示15622C>T携带者ABCG2表达水平较低，12283T>C、16702C>T与肝脏ABCG2高表达相关，1143G>A与小肠的低表达相关，15994C>T启动子SNP显著提高BCRP的表达水平。ABCG2基因C376T SNP虽然发生频率较低，但由于376T等位基因不表达ABCG2，因此C376T对ABCG2功能有重要影响。
ABCG2单核苷酸多态性还可能与ABCG2蛋白的转运活性、膜定位、底物活性等功能有关。Kondo等[14]用含有7个SNPs(V12M、Q141K、A149P、R163K、Q166E、P269S、S441N)和野生型的cDNA质粒转染LLC-PK1细胞，发现S441N对ABCG2蛋白的膜定位有影响，S441N表现为ABCG2定位于细胞内，其余六个SNPs及野生型ABCG2均
定位于顶膜。用重组腺病毒感染HEK293细胞确定ABCG2表达水平和转运活性，发现这7个SNPs对脱氢表雄酮、甲氨蝶呤、多环芳烃等转运活性与野生无异;Tamura等[13]研究证明F208S、S441N可能会影响蛋白的稳定性，并且F208S、S248P、F431L、S441N、F489L多态对SN-38、二羟蒽二酮、阿霉素、柔红霉素和依托泊苷的转运活性明显低于野生型;Lee等[3]在韩国人群ABCG2基因多态研究中发现，携带P269S多态者与野生型相比ABCG2蛋白对底物的活性下降了35%~40%，同时还证明ABCG2蛋白对底物活性下降与ATP酶抑制没有关系;Mizuarai等[6]发现导入421A的SF9细胞ATP活性比野生型下降1.3倍。表2ABCG2单核苷酸多态性位点在不同人群的分布
3ABCG2基因SNPs与药动学
ABCG2表达于胎盘、心脏、结肠、小肠、肾、肝等器官，影响着许多药物的体内药动学过程。ABCG2 基因SNPs通过影响ABCG2的表达水平、底物的转运效率、蛋白活性等，对许多药物在体内的药动学发挥着作用。Urquhart等[15]在研究C421A对吉非替尼(gefitinib)的药动学的影响中，发现421A多态是导致ABCG2蛋白活性减弱的原因，同时421A可能会增加药物毒性反应的风险，导致携带此多态的患者腹泻。Zhang等[4]研究发现，421A等位基因导致ABCG2蛋白表达下降会影响普伐他汀(pravastatin)的清除和吸收;同时还发现携带421A等位基因的中国健康男性血液中罗苏伐他汀(rosuvastatin)浓度比ABCG2野生型高约80%。Keskitalo等[16]用32位健康人，其中5个421AA，4个421CA，23个421CC基因型，分别注射单剂量40毫克氟伐他汀(fluvastatin)，普伐他汀和辛伐他汀(simvastatin)，洗脱期为1周。结果显示421CC、421CA基因型携带者血液中氟伐他汀浓度较421AA基因型携带者分别高出72%和97%，421CC基因型携带者血液辛伐他汀浓度比421AA基因型高111%，证明ABCG2基因C421A SNP显着影响氟伐他汀和辛伐他汀内酯的药动学，且对普伐他汀或辛伐他汀酸有显著影响。
ABCG2转运蛋白的底物包括一些药物，因此ABCG2基因SNPs可能会影响携带人群对某些药物的耐药性。Cusatis等[17]体外试验显示421A携带者在细胞表面的蛋白表达降低，健康志愿者的体内试验结果显示携带34GG/421CA的个体柳氮磺吡啶(sulfasalazine)的药时曲线下面积(AUC)比携带34GG/421CC 的个体的大2.4倍，表明ABCG2单核苷酸多态影响体内药物处置，引起ABCG2在肠道表达的个体差异，遗传性变异可能是药物个体间差异的决定因素。Morisaki等[18]发现，421A对二羟蒽二酮(mitoxantrone)、托泊替康(topotecan)或SN-38耐药性有一定降低。Imai等[10]研究表明421A细胞对二羟蒽二酮、盐酸托泊替康比野生型敏感2~3倍，421A表现为低耐药性;与前面的报道不同，De jong等[2]对84个欧洲患者血样DNA测序，结果发现ABCG2基因C421A对盐酸伊立替康药动学无影响。
4ABCG2基因SNPs与疾病的关系
截至目前，已有成千上万个SNPs在人类基因组中被发现并且被证实可以通过改变相应蛋白质的表达和活性，从而影响人体对疾病或肿瘤的易感性，影响不同类型肿瘤的临床生物学行为。Korenaga等[5]利用DNA探针分析法，分析200个肾细胞癌(RCC)患者和200个健康者的DNA样本，对比患者与健康者的ABCG2基因C421A SNP，结果显示421CC基因型在患者中频率明显高于健康者，表明421A等位基因是肾细胞癌的易感因素。Hahn等[19]人在前列腺癌患者中作生存分析发现ABCG2 421CC基因型携带者15个月生存率较421A等位基因携带者显著降低。王潇潇等[20]研究了ABCG2基因的单核苷酸多态性与弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的关系，以156例DLBCL患者作为实验组，376例健康人群作为对照组，统计分析BCRP基因G34A和C421A位点的SNPs分布频率。结果发现实验组421位点CA、AA、CA+AA基因型频率分别为51.3%、10.2%、61.5%;对照组CA、AA、CA+AA基因型频率分别为43.1%、8.8%、51.9%，ABCG2基因421位点基因型CA、AA对比于野生的基因型CC，患弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的风险增加，即A为相对不良因素，这种风险在年轻的病人表现更显著。此外，王潇潇等还发现ABCG2基因G34A和C421A SNPs联合影响DLBCL的预后：G34A位点AA基因型与GG/AG基因型相比生存较差，421位点的CC基因型与较差的生存显著相关。对比于携带34位点(GG+GA)421位点(AA+CA)的基因型，那些带有34AA421CC显示出非常差的生存。胡丽莉等[21]对ABCG2基因SNPs与弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)易感及预后的研究结果与王潇潇等的结果一致，同时胡丽莉等对ABCG2基因SNPs与肝细胞肝癌(HCC)的预后分析显示携带ABCG2 34AA基因型的患者比携带G等位基因的患者总生存差，携带BCRP 421CC基因型的HCC患者，其死亡危险度是含有A等位基因患者的2.85倍。
Kim等[22]在预测伊马替尼治疗慢性髓性白血病效果的研究中，229个慢性髓性白血病患者基因分型结果显示，ABCG2(G34A)GG基因型与伊马替尼治疗晚期不良反应显著相关。Woodward等[23]对14783人研究发现C421A与血尿酸水平显著相关，421A使尿酸的转运速率下降53.0%，从而导致血尿酸水平升高，影响痛风的发生，其中在男性中表现更为明显。与上述的研究报道不同，在ABCG2基因SNPs与疾病和肿瘤关系的研究中也存在一些阴性及相反的结果：胡丽莉等[21]构建了包括206个肝细胞肝癌(HCC)患者和265个健康人的病例—对照实验组，用于研究ABCG2基因SNPs与肝细胞肝癌(HCC)易感性。结果发现ABCG2基因C421A和G34A各基因型频率在对照组与HCC病例组差异不显著，证明ABCG2基因C421A和G34A与HCC易感性无关。Gardner等[24]研究发现C421A SNP与前列腺癌的发病率无关联;但ABCG2野生型的前列腺癌生存率明显要比携带421A的患者高，通过转染HEK细胞的研究也证明421A导致PhIP转运下降。Müller等[25]对以色列正常人群和急性骨髓性白血病(AML)患者的研究发现，ABCG2 C421A与AML的易感性和预后均无关; stergaard等[26]在克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)丹麦病例对照研究使用373例CD，541例UC，796例健康人结果显示ABCG2基因SNP与CD和UC无关联。Campa等和Andersen等的研究发现ABCG2 C421A与CRC的易感性无关[27-28]。
5结语
目前对ABCG2基因SNPs的研究结果出现了不一致的现象，例如大部分研究显示ABCG2单核苷酸多态不影响mRNA的表达水平，但也有一些研究证明mRNA水平受到ABCG2单核苷酸多态性影响;在与疾病相关的研究报道中也有类似的现象，例如C421A与前列腺癌的生存率的两个研究结果相反;此外一些ABCG2基因SNPs与肿瘤等疾病易感性的研究显示，ABCG2基因的某些SNPs在不同肿瘤及疾病中发挥着不尽相同的影响。总而言之，有关ABCG2单核苷酸多态性的研究尚属初级阶段，其SNPs对ABCG2功能的影响、药动学以及肿瘤等疾病的影响机制我们依然知之甚少。但是ABCG2单核苷酸多态性的有关研究报告已经显示，ABCG2单核苷酸多态性对疾病预防、诊断和患者药物的筛选的重要性是不可忽视的。ABCG2的药物基因组学研究刚刚起步，需要对其深入研究以了解SNPs对ABCG2功能、药动学以及肿瘤等疾病的影响。
参考文献
[1] DOYLE L A，YANG Wei-dong，ABRUZZO L V，et al. A multidrug resistance transporter from human MCF-7 breast cancer cells[J].Proc Natl Sci USA，1998，95(26):15665-15670.
[2] DE JONG F A，MARSH S，MATHIJSSEN R H，et al. Ethnic differences in allele frequency and assessment of influence on irinotecan disposition[J].Clin Cancer Res，2004，10(17):5889-5894.
[3] LEE S S，JEONG H E，YI J M，et al. Identification and functional assessment of BCRP polymorphisms in a Korean population[J].Drug Metab Dispos，2007，35(4):623-632.
[4] ZHANG Wei，YU Bang-ning，HE Yi-jing，et al. Role of BCRP 421C>A polymorphism on rosuvastatin pharmaco-kinetics in healthy Chinese males[J].Clin Chim Acta，2006，373(1-2):99-103.
[5] KORENAGA Y，NAITO K，OKAYAMA N， et al. Association of the BCRP C421A polymorphism with nonpapillary renal cell carcinoma[J]. Int J Cancer，2005，117(3):431-434.
[6] MIZUARAI S，AOZASA N，KOTANI H. Single nucleotide polymorphisms result in impaired membrane localization and reduced atpase activity in multidrug transporter ABCG2[J]. Int J Cancer，2004，109(2):238-246.
[7] COLOMBO S，SORANZO N，ROTGER M，et al. Influence of ABCB1，ABCC1，ABCC2，and ABCG2 haplotypes on the cellular exposure of nelfinavir in vivo[J]. Pharmacogenet Genomics，2005，15(9):599-608.
[8] KOBAYASHI D，IEIRI I，HIROTA T， et al.Functional assessment of ABCG2 (BCRP) gene polymorphisms to protein expression in human placenta[J]. Drug Metab Dispos，2005，33(1):94-101.
[9] BCKSTRM G，TAIPALENSUU J，MELHUS H， et al. Genetic variation in the ATP-binding cassette transporter gene ABCG2 (BCRP) in a Swedish population[J].Eur J Pharm Sci，2003，18(5):359-364.
[10] IMAI Y，NAKANE M，KAGE K，et al. C421A Polymor-phism in the human breast cancer resistance protein gene is associated with low expression of Q141K protein and low-level drug resistance[J].Molecular Cancer Therapeutics，2002，1(8):611-616.
[11] FURUKAWA T，WAKABAYASHI K，TAMURA A，et al. Major SNP (Q141K) variant of human ABC transporter ABCG2 undergoes lysosomal and proteasomal degradations[J].Pharm Res，2009，26(2):469-479.
[12] POONKUZHALI B，LAMBA J，STROM S，et al. Association of breast cancer resistance protein/ABCG2 phenotypes and novel promoter and intron 1 single nucleotide polymorphisms[J].Drug Metab Dispos，2008，36(4):780-795.
[13] TAMURA A，WAKABAYASHI K，ONISHI Y，et al. Re-evaluation and functional classification of nonsynonymous single nucleotide polymorphisms of the human ATP-binding cassette transporter ABCG2[J].Cancer Sci， 2007，98(2):231-239.
[14] KONDO C，SUZUKI H，ITODA M，et al.Functional analysis of SNPs variants of BCRP/ABCG2[J].Pharm Res，2004，21(10):1895-1903.
[15] URQUHART BL，WARE JA，TIRONA RG， et al. Breast cancer resistance protein(ABCG2)and drug disposition:intestinal expression，polymorphisms and sulfa salazine as an in vivo probe[J].Pharmacogenet Genomics，2008，18(5):439-448.
[16] KESKITALO J E，PASANEN M K，NEUVONEN P J， et al. Different effects of the ABCG2 c.421C>A SNP on the pharmacokinetics of fluvastatin，pravastatin and simvastatin[J]. Pharmacogenomics，2009，10(10):1617-1624.
[17] CUSATIS G，GREGORC V，LI Jing，et al. Pharmaco-genetics of ABCG2 and adverse reactions to Gefitinib journal of the national cancer institute[J].J Natl Cancer Inst，2006，98(23):1739-1742.
[18] MORISAKI K，ROBEY R W，OZVEGY-LACZKA C， et al. Single nucleotide polymorphisms modify the transporter activity of ABCG2[J].Cancer Chemoth Pharm，2005，56(2):161-172.
[19] HAHN N M，MARSH S，FISHER W，et al. Hoosier oncology group randomized phase II study of docetaxel，vinorelbine，and estramustine in combination in hormone-refractory prostate cancer with pharmacogenetic survival analysis[J].Clin Cancer Res，2006，12(20):6094-6099.
[20] 王潇潇. BCRP基因的单核苷酸多态性研究：弥漫大B细胞性淋巴瘤的易感性发生存分析[D]. 广州：中山大学，2007.
[21] 胡丽莉. MDRl及BCRP基因多态与肿瘤易感及预后的关系[D]. 广州：中山大学，2007.
[22] KIM D H，SRIHARSHA L，XU W，et al. Clinical relevance of a pharmacogenetic approach using multiple candidate genes to predict response and resistance to imatinib therapy in chronic myeloid leukemia[J].Clin Cancer Res，2009，15(14):4750-4758.
[23] WOODWARD O M，KTTGEN A，CORESH J，et al. Identification of a urate transporter，ABCG2，with a common functional polymorphism causing gout[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2009，106(25):10338-10342.
[24] GARDNER E R，AHLERS C M，SHUKLA S，et al. Association of the ABCG2 C421A polymorphism with prostate cancer risk and survival[J]. BJU Int，2008，102(11):1694-1699.
[25] MLLER P，ASHER N，HELED M，et al. Polymorphisms in transporter and phase II metabolism genes as potential modifiers of the predisposition to and treatment outcome of de novoacute myeloid leukemia in Israeli ethnic groups[J].Leuk Res，2008，32(6):919-929.
[26] STERGAARD M，ERNST A，LABOURIAU R，et al. Cyclooxygenase-2，multidrug resistance 1，and breast cancer resistance protein gene polymorphisms and inflammatory bowel disease in the Danish population[J].Scand J Gastroenterol，2009，44(1):65-73.
篇5
[关键词]雌激素α受体；雌激素β受体；慢性牙周炎
中图分类号：R78 文献标识码：A 文章编号：1006-0278（2013）03-177-01
一、研究背景及方法
遗传因素与慢性牙周炎的发生发展密切相关，不同个体牙周健康状态在很大程度上受遗传基因控制。近年来，很多的关联研究选用候选基因多态性方法，探寻基因变异与慢性牙周炎（chronicperiodontitis，CP）关系，包括抗炎细胞因子、免疫识别受体、一些骨代谢相关因子。迄今为止，牙周炎的发生发展和宿主反应应答机制尚未完全阐明，但可以肯定的是，慢性牙周炎非单基因影响疾病，相关基因的多态性研究为阐明慢性牙周炎易感性及骨代谢调节方面提供了有价值的工具。
二、研究结果
病例组检出的XX、Xx、xx基因型频率分别为22.02%、32.11%和45.87%，与对照组检出XX、Xx、xx基因型频率6.06%、57.58%、36.36%有显著差异（P=0.01）。病例组与对照组的差异在女性慢性牙周炎患者组与健康对照组中更为明显（29.82%、28.07%和42.11%与3.92%、62.75%和33.33%，P=0.01）。但是在男性病例组与对照组中未发现差异（P=0.08）。病例组检出的PP、Pp、pp基因型频率分别为27.52%、29.36%和43.12%，对照组检出的PP、Pp、pp基因型频率分别为27.27%、29.29%和43.43%。Pvu II基因型分布及等位基因频率在两组间无显著统计学差异（P=0.99）。同时，性别上也未见差异P=0.83，P=0.77。病例组检出的RR、Rr和rr基因型频率分别为11.01%、29.36%和59.63%，在对照组分别为14.14%、39.39%和46.46%，未发现病例组和对照组Rsa I基因型分布及等位基因频率有差异（P=0.16）。病例组检出的AA、Aa和aa基因型频率分别为4.59%、19.27%和76.15%，在对照组分别为2.02%、29.29%和68.69%。Alu I基因型分布及等位基因频率在2组间未见明显统计学差异（P=0.17）。
三、结论
篇6
【关键词】 缺血性脑卒中；基因多态性；候选基因
1 脑卒中概述
脑卒中是一种危害人类健康的常见病，在人类各种疾病死因的排序中居第二位[1]，具有高发病率高、致残率、死亡率、复发率和并发症多的特点。正因为如此，脑血管病的防治工作已成为当今世界医学的重要课题。
2 脑卒中的分子遗传学研究
缺血性卒中的发生和发展与脑血管危险因素密切关联，所以寻找缺血性脑卒中相关致病基因成为近年研究重点。
2.1 脂类代谢相关基因多态性
2.1.1 载脂蛋白E（ApoE）基因
ApoE是血浆脂蛋白的重要组成部分之一，是脂类代谢和心脑血管疾病的决定因子。马飞煜等[2]研究表明：ε4等位基因与I AA型脑卒中的发病相关，而与其他类型脑卒中无明显关系。
2.1.2 载脂蛋白B（apolipoproteinB， ApoB） ApoB基因定位于2p23～24，是LDL的重要组成部分。 Aalto-Setala[3]等报道， ApoB基因C7673T突变T等位基因频率在颈动脉粥样硬化的脑梗死及TIA患者中较无颈动脉粥样硬化者高，认为ApoB基因C7673T突变T等位基因与脑梗死及TIA患者动脉粥样硬化有关。
2.2 血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）基因多态性
PAF可导致慢性血管病理损害，促进LDL的氧化修饰。张雄等[5]分析汉族人PAF-AH基因-994G/T多态性，发现LAA 型脑卒中组TT基因型、T等位基因频率显著高于对照组。
2.3 5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因多态性
MTHFR是同型半胱氨酸代谢的关键酶，其会导致高同型半胱氨酸血症，而高同型半胱氨酸血症已被认为是脑血管疾病的一个独立危险因素[6]。
2.4 炎症反应的相关因子的基因多态性
2.4.1 细胞介素-6（IL-6）基因
IL-6是一种炎症细胞因子，在急性炎症反应的启动中起着关键作用。Chmaorro A[7]等研究发现IL-6基因的CC基因型与较高的动脉粥样硬化风险有关。Karahan ZC等[8]对SAA型脑梗死患者研究发现IL-6基因-174G/C多态性CC基因型相关。
2.4.2 IL-4基因 人IL-4基因中存在多个多态性位点。Robert等[9]报道IL-4 C590T是美国白种人血栓形成性脑梗死独立预知因子。
2.5 肾素-血管紧张素系统（RAS）相关基因多态性
2.5.1 肾素基因（REN）
人类REN基因位于染色体1q32。Frossard等[10]研究得出REN基因G10631A多态性是脑卒中的危险因素。
2.5.2 血管紧张素原（AGT）基因 AGT作为RAS的唯一底物AnglI形成的限速因子，是RAS活性的一个重要决定因素。Guo ZS等[11]在对RAS基因多态与腔梗关系的研究中发现，AGT基因-704T/C与SAA亚型中梗死病灶的数目密切相关，是脑卒中的独立危险因素。
2.6 一氧化氮合成酶基因多态性 一氧化氮合成酶基因家族均与动脉粥样硬化的过程相关。迄今为止，已有大量的研究探讨了NOS3基因多态性与缺血性脑卒中的关系，但所得结论不一。
2.6.1 NOS3基因 NOS3基因定位于染色体的7q36，编码eNOS。Elbaz等[12]研究发现，eNOS Glu298Asp T等位基因纯合子进行研究得出-922 G>A、-786 T>C与缺血性脑卒中显著相关。
2.6.2 NOS1基因 NOS1基因定位于染色体的12q24.2-q24.31[13]，编码nNOS。国内高鹏等[14]检测605例脑梗死患者和313例对照组人群的rs9658281和rs2682820位点基因型，得出神经元型一氧化氮合酶（NOS1）基因rs9658281位点多态性与脑梗死的发病可能有关。
研究缺血性脑卒中的易感基因一方面可以让我们从遗传学角度筛查高危人群，进行早期预防，另一方面，基于不同亚型的易感基因不同，我们可以从遗传学角度对缺血性脑卒中进行病因学分型，针对性进行个体治疗。
参 考 文 献
[1]
WHO.The World Health Report 1 999.Geneva：WHO，1999.
[2] 马飞煜，邬伟，王风，等.载脂蛋白E基因多态性及脂类代谢与缺血性脑卒中亚型关系的研究口].中华老年心脑血管病杂志，2006，8（8）：513-516.
[3] Aalto-setalaK， PalomakiH miettinenH， et al. Genetic risk factors and ischaemic cerebrovascular disease： role of common variation of the genes encoding apolipoproteins and angiotensin -converting enzyme. AnnMed， 1998， 30： 224-233.
[4] Gretarsdottir S，Sveinbj rnsdottir S，Jonesson HH，el a1.Localization of a susceptibility gene for common forms of stroke to5q12.Am J Hum Genet，2002，70（3）：593-603.
[5] 张雄，袁成林，张桁忠，等.血小板活化因子乙酰水解酶基因994（G T）突变与脑梗塞的关联性.中华医学遗传学杂志，2005，22（4）：450-452.
[6] Ho GY，Eikelboom JW，Hankey GJ，el a1.Methy-lenetetrahydr0fo1ate reductase
Singaporean stroke patients.Stroke，2006，37（2）：456-460.
[7] Chmaorro A，Revilla M，obaeh V，el a1.The-174G/C polymorphisms of the interleukin·-6gene is a hall-mark of lacunar stroke .Cerebrovase Dis，2005，1 9（2）：91-95.
[8] Karahan ZC，Deda G，SIPahi T，el a1.TNF-alpha一308G/A and IL-6-174G/C polymorphisms in the Turkish pediatric stroke patients.Thromb Res，2005，115（5）：393-398.
[9] Zee RY， Cook NR， Cheng S. Polymorphism in the P-select in and interleukin -4 genes as determinants of stroke： 2004，13 （4） ：389-396.
[10]
Frossard PM， Malloy MJ， Lestringant GG， et al. Haplo-types of the human ren in gene associated with essential hypertension and stroke.Hum Hypertens， 2001， 15： 49.
[11] Guo ZS，Hong JA，Irvine KR，el a1.De novo induetion of a cancer/testis antigen by 5-aza-2'-deoxycytidine augments adoptive immunotherapy in a murine tumor model.Cancer Res，2006，66（2）：1105-1113.
[12] 戴秀华，赵宝春.C一反应蛋白水平与基因型分析探讨不同类型炎症与脑卒中关系.中国综合临床，2005，21（9）：792-794.
篇7
【关键词】 急性高原反应;易感性;多态性
从平原快速进入高原极易受到急性高原病的威胁，包括急性高原反应(acute moutain sickness，AMS)，高原肺水肿和高原脑水肿，其中以AMS的发病率高，使很多人对高原有恐惧心理。近年报道未习服人员乘飞机到达3600 m左右地区的AMS的发病率为20%～50%不等，该病发病通常与到高原的速度、到高原方式，所到高度、高原的季节、个体差别密切相关[1]，提示遗传因素在AMS的发病环节中发挥着重要的作用。高原缺氧是发病的主要原因，发病机理主要是[2]：(1)低氧血症，高海拔地区空气稀薄，大气中氧分压降低，肺泡内氧分压也降低，直接影响到肺泡气体交换、血液载氧和氧合血红蛋白在组织内的释放速度，造成供氧不足，产生缺氧。(2)水钠潴留及体液重新分布，缺氧时机体对钠、水调节能力的改变，对于机体习服高原可能起着重要作用[3]。Bartseh等报道在4559 m的重度高原病患者血浆中，醛固酮和抗利尿激素明显升高，同时伴有尿量和尿钠减少;而健康人则醛固酮和抗利尿激素明显降低，尿量增加[4]，因而AMS的发生与进入高原后机体对水负荷调节能力障碍有关。AMS的常见症状和体征有：头昏、头痛、心慌、气促、食欲减退、眩晕、鼻衄、手足发麻、手足抽搐、关节痛，多在进入高原4～5小时后开始发病，48～72小时为发病高峰，到高原2周后较少患本病，返回平原后多不治自愈。关于急性高原病的诊断，世界各地均采用症状评分法，其症状内容均大同小异，可参考标准有《职业性高原病诊断标准GBZ92-2002》，《急性高原反应的诊断和处理原则GJB 1098-91》和《加拿大路易斯湖标准L15S》等[5]。当LLSS评分≥3分，则该人患有AMS，如果LLSS评分
1 肾脏-血管紧张素-转换酶系统相关基因多态性与AMS易感性的关系
肾素是一种水解蛋白酶，由肾脏入球小动脉的近球细胞合成，贮存并释放到血液中，它直接作用于肝脏所分泌的血管紧张素原，使血管紧张素原转变成血管紧张素Ⅰ。血管紧张素Ⅰ在血管紧张素转换酶(angiotensin-convertion enzyme， ACE)的作用下，形成血管紧张素Ⅱ。血管紧张素Ⅱ具有强烈的收缩血管作用，而且可通过刺激肾上腺皮质球状带，促使醛固酮分泌，潴留水钠，引起AMS。有学者对4380 m地区的44例AMS患者和59例健康对照的尼泊尔人ACE 缺失和插入多态性研究，以及ACE 基因的 rs4291(A/T)、 rs4343(A/G)， 血管紧张素原受体基因的rs17231380 (A/C) 的SNP研究发现，上述基因多态性与AMS的易感性无关[7]。血管舒张素与高原习服适应密切相关，可以有效的对抗血管紧张素的作用，在4380 m地区的100例AMS患者和相匹配的117 名健康对照的尼泊尔人中，血管舒张素基因受体基因2 (bradykinin receptor B2，BDKRB2)的rs5810761的 9bp缺失多态性和rs1799722(C/T)的SNP与AMS之间无关联性[8]。
2 Beta-2肾上腺素能受体基因多态性与AMS易感性的关系
Beta-2肾上腺素能受体(beta-2 adrenergic receptor，ADRB2)是在心肌细胞分布的肾上腺素能受体亚型，主要存在于心室和心房，并在蒲肯野氏纤维和窦房结有较高的比例分布，其中在窦房结的密度比右心房高2.5倍多，这决定了ADRB2更多地参与心率和心律的调节， 可能与AMS病人中上的心率加快有关[9]。有学者通过Hapmap数据库，选择了ADRB2基因的7个标签SNP：rs2400707(A/G)、rs253044 (A/G)、rs12654778 (G/A)、 rs11168070 (G/C)、rs1042713 (G/A)、 rs1042718(C/A)和rs1042719 (G/C)，发现在移居4380 m的103例尼泊尔(AMS病人22例，对照81例)中ADRB2的SNP与AMS的易感性无关[10]。
3 低氧感知相关基因多态性与AMS易感性的关系
缺氧诱导因子(Hypoxia-inducible factor，HIF) 和von Hippel-Lindau tumor suppressor protein (VHL) 是常见的低氧信号感知基因，可能与AMS的发病相关。Droma等对从3440 m移居到5000 m地区的104例夏尔本人(AMS病例组45例，对照组59例)的 HIF1A 基因的rs11549465位点，VHL基因 rs28940298、rs779805、 rs779808、 rs1678607、 A 1149 G的SNP分析发现，这些SNP与AMS的易感性不相关[11]。
4 谷胱甘肽转硫酶M 1和T1基因多态性与AMS易感性的关系
在缺氧暴露的小鼠肝脏和红细胞中谷胱甘肽转硫酶活力明显下降，发生AMS患者血浆中谷胱甘肽转硫酶活力明显下降。蒋等对谷胱甘肽转硫酶 (glutathione s-transferase，GST)的Ml和Tl (GSTM1/GSTT1)缺失多态性与AMS易感性的关系进行探讨。在43例AMS病例组和相匹配的80例对照组中， AMS病例组GSTT1非缺失型基因频率显著高于正常对照， GSTM1缺失型频率在AMS病例组中频率也显著高于对照组中的频率，提示GSTM1、GSTT1缺失多态性与AMS有关[12]。
5 热应激蛋白70基因多态性与急性高原反应的关系
从原核生物的细菌到真核生物的人类，当接触高温或其他应激因素时，可以合成一组被称为热应激蛋白(heat stress proteins，HSPs)的蛋白质。HSPs最重要的功能是帮助细胞适应一系列的应激反应，其多态性与疾病或机体遭受应激的易感性或耐受性有关[13]。李芳泽等采用PCR-RFLP(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism)的方法，通过在56例AMS患者和173例对照中探讨HSP70-1和HSP70-2基因多态性与AMS的关系，发现HSP70-1的多态性与AMS的易感性无关，HSP70-2 B/B基因型频率显著高于对照组，认为HSP70-2 B/B基因型与AMS易感相关[14]。
总之，近年来针对AMS发病环节，研究了一些基因的多态性与AMS易感性的关系，结果不全一致，有的相关(如GSTM1、GSTT1缺失多态性，HSP70-2 B/B基因型与AMS有关)，有的不相关(ADRB2，肾脏-血管紧张素-转换酶系统相关基因，低氧感知相关基因)，因而需要针对其他参与AMS发病基因展开大样本、多中心的研究，寻找出AMS的遗传标记，争取早日实现AMS的预测，更好的服务于高原经济。
参考文献
[1] Rupert JL， Kidd KK， Norman LE， et al. Genetic polymorphisms in the Renin-Angiotensin system in high-altitude and low-altitude Native American populations[J]. Ann Hum Genet， 2003， 67(Pt 1): 17-25.
[2] 高钰琪，高原军事医学[M].重庆：重庆出版社，2005：1-4.
[3] 黄庆愿，高钰琪，刘福玉，等. 急性高原反应相关因素的多元线性回归分析[J]. 第三军医大学学报， 2006， 28(12): 1269-1272.
[4] Bartsch P， Pfluger N， Audetat M， et al. Effects of slow ascent to 4559 M on fluid homeostasis[J]. Aviat Space Environ Med， 1991， 62(2): 105-110.
[5] 王 毅，范泉水，吴拾音，等. 急性高原病诊断和救治的数据库模块设计[J]. 高原医学杂志， 2008， 18(2): 1-4.
[6] Kruglyak L， Nickerson DA. Variation is the spice of life[J]. Nat Genet， 2001， 27(3): 234-236.
[7] Koehle MS， Wang P， Guenette JA， et al. No association between variants in the ACE and angiotensin II receptor 1 genes and acute mountain sickness in Nepalese pilgrims to the Janai Purnima Festival at 4380 m[J]. High Alt Med Biol， 2006， 7(4): 281-289.
[8] Wang P， Koehle MS， Rupert JL. No association between alleles of the bradykinin receptor-B2 gene and acute mountain sickness[J]. Exp Biol Med (Maywood)， 2010， 235(6): 737-740.
[9] 余 佳，范丽玲，唐 仪. β2肾上腺素能受体基因多态性与心血管疾病[J]. 卫生职业教育， 2007， 25(5): 143-145.
[10]Wang P， Koehle MS， Rupert JL. Common haplotypes in the beta-2 adrenergic receptor gene are not associated with acute mountain sickness susceptibility in Nepalese[J]. High Alt Med Biol， 2007， 8(3): 206-212.
[11]Droma Y， Ota M， Hanaoka M， et al. Two hypoxia sensor genes and their association with symptoms of acute mountain sickness in Sherpas[J]. Aviat Space Environ Med， 2008， 79(11): 1056-1060.
[12]蒋，李芳泽，何美安，等. 谷胱甘肽转硫酶M 1和T1基因型与高原反应的危险性[J].中华劳动卫生职业病杂志， 2005， 23(6): 188-190.
篇8
[关键词] 多囊卵巢综合征 基因 CYP17 多态性
[中图分类号] R34[文献标识码] A[文章编号] 1005-0515（2011）-08-025-03
Study on the Relationship Between the Polymorphisms in CYP17 Gene and Polycystic Ovary Syndrome in Jining City
Zhao ChangxingWang Fang
(Family Planning Service Stations of Jinxiang County in Jining, Jining,Shangdong,272200)
[Abstract] Objective To explore the relationship between the TC substitution of -34bp of the promotor of CYP17 gene and the pathogenesis of high testosterone homone in patients with polycystic ovary syndrome(PCOS) in Jining city.Methods 177 cases of PCOS and 159 nomal women as controls were studied in Jinxiang family planning service stations and the Affiliated Jinxiang Hospital of Jining Medical College from July 2007 to July 2010. Polymerase chain reaction and electrophoresis on polyacrylamidegel were employed to detect the TC substitution of -34bp of the promotor of CYP17 gene and its distribution.At the same time, the relationship between the mumations and high T of PCOS were compared. Results The levels of T、LH and LH/FSH were higher in PCOS group than in control group(P＜0.001);The prevalence rate of CYP17 genotype A1A1, A1A2,A2A2 and A1 and A2 in controls group respectively, Neither the genotype distributions nor the allele frequencies were statistically different between the two groups(P＞0.05);In PCOS group,the T levels of the genotype A2A2 group were statistically higher(P
[Keywords] Polycystic ovary syndrome; Gene; CYP17; Polymorphisms
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)是青春期及育龄妇女最常见的内分泌和代谢紊乱性疾病，发生率占生育妇女的4%-12%[1],其生理病理的主要特征为卵巢分泌过多的黄体生成素(LH)和睾酮(T),发病原因尚未明确，其高度的家族聚集性提示与遗传有关。Ehrmann等[2]研究认为，17-a羟化酶/17，20-裂解酶(码为P450c17a)调节异常是PCOS高雄激素血症的关键环节，这两种酶是卵巢雄激素合成过程中的限速酶，由CYP17基因编码。有研究[3]表明：CYP17基因-34bp碱基置换增加PCOS的易感性和血清睾酮水平，是PCOS的致病基因之一。但是也有研究[4]认为CYP17基因的碱基置换与PCOS的发病无明显关系，国内这方面的研究不多。本课题对CYP17基因翻译起点上游-34bp处的多态性与PCOS的关系进行了研究。
1 对象与方法
1.1 研究对象 选自2007年1月至2010年1月在金乡县计划生育服务站女性门诊和济宁医学院附属金乡医院不孕不育门诊就诊的金乡及周边各县区(均为济宁地区)PCOS患者177例，年龄(29.98±5.10)岁，同时排除其他内分泌紊乱所造成的高雄激素血症。选择同期在两处门诊因输卵管阻塞或男方因素就诊患者159例作对照组，年龄(31.74±5.88)岁，至少有一次妊娠史，月经周期正常，无内泌紊乱及糖尿病家族史。以体重指数[BMI=体重(kg)/身高(m)[2]≥25作为肥胖标准。
1.2 诊断标准 照美国生殖医学年会(ASRM)鹿特丹工作组修正的诊断标准[5]，具备以下3条中的2条就可诊断为PCOS, 即：(1)无排卵或排卵不规则；(2)有雄激素水平升高的临床(如多毛，痤疮)或生物化学改变的依据；(3)卵巢增大，每侧至少有直径2-9mm的小卵泡12个以上；并排除产生高雄激素的其它内分泌疾病，如柯兴氏综合症，肾上腺肿瘤等。
1.3 主要仪器及试剂 Taq DNA聚合酶，dNTP，50 bp DNA、100bp DNA Marker购自宝生物工程(大连)有限公司，限制性内切酶MspA1I购自美国Promega(普洛麦格)公司, 引物由上海博亚生物技术工程有限公司合成。PCR扩增仪由德国Eppendorf(艾本得)公司生产。
1.4 方法
1.4.1 DNA抽提 于月经第2-3天或闭经患者任何时期，抽取外周静脉血5ml，取500μl全血，用EDTA抗凝，用DNA提取试剂盒按药盒说明进行操作，无水乙醇沉淀，提取基因组DNA，自然干燥后-20℃保存备用。
1.4.2 内分泌指标检测 所有参与者均在月经周期的第1-3天抽取肘静脉血，用化学发光法测定卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平。
1.4.3 引物设计 参照文献[6]报道的序列设计引物。引物1：5’-CATTCGCACTCTGGAGTC-3’,引物2：5’-AGGCTCTTGGGGTACTTG -3’, 扩增CYP17基因含-34bp多态位点的一段DNA，片段大小为419bp。
1.4.4 PCR反应 反应体系25μl，含基因组DNA0.7μl，25mmol/L Mgcl21.5μl，2.5 mmol/L dNTPs 2μl, 50pmol/μl引物各0.25μl,Taq DNA聚合酶(5U/μl)1.5μl。循环条件：94℃，预变性5min, 94℃ 1min, 66.2℃1min, 72℃1min, 35个循环；最后72℃延伸10min。
1.4.5 电泳分离DN断 先经10g/L琼脂糖凝胶电泳显示扩增效果, 然后以限制性内切酶MspA1I酶切 PCR扩增物，取酶切产物于3%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭(EB)染色，紫外投射反射仪下观察、摄像并保存，50bpDNA Marker作参照。CYP17基因-34bp处TC的碱基置换后产生一个MspA1I酶的酶切位点，因此MspA1I酶切扩增产物后，正常无碱基置换者(A1A1)无酶切位点，仍为419bp；TC碱基置换纯合子(A2A2)含一个酶切位点形成295bp和124bp 2个片段；杂合子(A1A2)形成419 bp、295bp和124bp 3个片段。
1.5 统计学处理 SPSS13.0软件包进行统计分析，用方差分析t检验比较组间性激素水平、BMI、年龄等，x2检验比较基因突变率、基因型频率和等位基因频率。检验水准：a=0.05。
2 结果
2.1 PCOS组与对照组年龄、BMI、和基础性激素水平比较 PCOS组T、LH、LH/FSH均显著高于对照组(P＜0.01)。两组间FSH、PRL、E2和BMI差异无统计学意义，PCOS组较对照组稍年轻，两组之间年龄无统计学差异(P＞0.05)，见表1
表1PCOS与对照组年龄、BMI和性激素比较（X±S）
2.2 CYP17基因经MspA1 I酶切后的基因型和等位基因频率分布 CYP17基因型A1A1、A1A2和A2A2频率分布在PCOS组与对照组间无统计学差异(P＞0.05)。A1、A2等位基因频率分布PCOS组与对照组间无统计学差异(P＞0.05)，见表2
表2PCOS组与对照组CYP17基因型和等位基因频率比较
2.3 PCOS组和对照组CYP17各基因型间睾酮(T)水平比较 PCOS组CYP17 A2A2型T水平显著高于A1A2型和A1A1型(P＜0.05),并且含A2等位基因组(突变组)的T水平(1.85±0.42) nmol/L显著高于不含A2等位基因组(无突变组)的T水平(1.41±0.55)nmol/L (P＜0.05)。对照组CYP17各基因型之间的T比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。PCOS各基因型组的T值均高于对照组相应基因型组的T值，见表3。
表3PCOS和对照组各基因型间睾酮(T)水平(nmol/L)比较
注:与A1A1组比较, P＜0.05; 与A1A2组比较, P＜0.05;a与对照组比较, P＜0.05。
3 讨论 越来越多的证据证明PCOS具有一定的遗传学基础,而且PCOS临床表现的多样性提示它可能有多种基因参与其发病[7]，高雄激素血症是PCOS突出的临床特征，参与合成类固醇激素合成的酶活性的改变可能是PCOS高雄激素形成的原因之一。
P450c17a是卵巢和肾上腺雄激素合成的限速酶,具有17a-羟化酶和17,20-裂解酶双重活性,在雄激素的生物合成中起着重要的作用。Rosenfield等[8]用GnRH(促性腺激素释放激素)类似物nafarelin对高雄激素血症和PCOS妇女进行研究，结果发现高雄激素血症和PCOS患者肾上腺和卵巢对GnRH类似物敏感性增加，并且P450c17a酶活性增强与雄激素的过度合成和分泌有关。用ACTH(促肾上腺皮质激素)做肾上腺刺激试验和长效GnRH类似物triptorelin做卵巢刺激和抑制试验，结果表明大部分高雄激素血症的妇女卵巢和肾上腺P450c17a活性增高[9].而且，与非高雄激素血组对比，PCOS妇女卵泡膜细胞中P450c17a表达和活性增高。因此，P450c17a活性增高在PCOS高雄激素血症的发生中起重要作用。该酶由CYP17(17a-羟化酶/17,20-裂解酶)基因编码，CYP17基因的突变或变异将可能导致P450c17a酶活性的提高，从而增加卵巢或肾上腺雄激素的分泌。
CYP17基因位于染色体10q24.3，在其翻译位点上游-34bp处含有一个TC碱基置换多态性位点。Dinamanti-Kandarakis等[1]对希腊50名PCOS患者和相同数量的对照妇女研究发现, TC的碱基置换与高雄激素血症密切相关, PCOS患者A2A2基因型的血清T水平高于A1A2组和A1A2组，认为CYP17基因-34bp处TC碱基置换引起该基因的表达异常，导致P450c17a酶活性增加，进而导致PCOS高雄激素血症的形成。Marszalek等[4]亦发现PCOS患者纯合C等位基因表现为血清睾酮水平的升高。但也有研究认为CYP17基因在-34bp处TC的碱基置换与PCOS高雄激素血症无关[10]。Gharani等[10]研究发现, PCOS患者基因型分布与健康对照妇女无统计学差异, 与高雄激素血症亦无关联性。Kahsar-Miller 等[11]在扩大样本后的研究结果与Gharani等[10]研究结果一致。
本研究结果显示，CYP17基因型A1A1、A1A2和A2A2频率分布在PCOS组与对照组间无统计学差异，A1、A2等位基因频率分布PCOS组与对照组间无统计学差异。PCOS患者中A2A2组T水平显著高于A1A2和A1A1组，含A2等位基因组的T水平显著高于不含A2等位基因组，与文献[4]报道相符，对照组CYP17各基因型之间的T比较,差异无统计学意义，说明A2等位基因的存在与PCOS高雄激素血症之间有一定的关联性。CYP17基因5，端调节区包含4个CCACC Sp1识别位点，一般认为调节区转录因子识别组件的数目与该基因启动子区域活性有关，而-34bp处TC碱基置换则产生一个新的Sp1识别组件(CCACTCCACC)，从而引起该区域转录活性升高，P450c17a酶活性增高，导致雄激素合成增多，因此从分子遗传学的角度可以揭示PCOS患者高睾酮血症可能的发病机制之一。国内曹云霞等[12]研究也发现，PCOS患者高雄激素血症组中A2等位基因的频率显著高于无高雄激素血症组，认为CYP17基因多态对于高雄激素血症的形成有重要的辅助作用。本研究发现CYP17基因型分布及等位基因分布在PCOS组和对照组间无明显差异，不同的是，国外Garey等[3]研究发现,正常对照人群含A2等位基因的A1A2基因型分布频率也很高,可能因CYP17基因型分布存在种族和地域差异。因此结合文献报道，我们认为CYP17基因-34bp处的碱基置换很常见，A2等位基因可能增加P450c17a酶活性，与PCOS 高T之间有一定的相关性，可能是PCOS的重要致病基因之一。
参考文献
[1] Diamanti-Kandarakis E,Kouli CR,Bergiele AT,et al.A survey of the polycystic ovary syndrome in the Greek island of Lesbost:hormonal and metabolic profile[J].J Clin Endocrinol Metab,1999,84(11):4006-4011.
[2] Ehrmann DA,Rosenfield RL,Barnes RB,et al.Detection of functional ovarian hyperandrogenism in women with androgen excess[J].N Engl J Med,1992,327(3):157-162.
[3] Garey AH, Waterworth D,Patel K,et al.Polycystic ovaries and premature male pattern baldness are associated with one allele of the steroid metabolism gene CYP17[J].Hum Mol Genet,1994,3(10):1873-1876.
[4] Marszalek B,Lacinski M,Babych N,et al.Investigations on the genetic polymorphism in the region of CYP17 gene encoding 5’-UTR in patients with polycystic ovarian syndrome[J].Gynecol Endocrinol,2001,15(2):123-128.
[5] The Rotterdam ESHRE/ASRM-sponsorde PCOS Consensus Workshop Group.Revised 2003 consensus on diagnostic criteria and longterm health risks related to polycystic ovary syndrome(PCOS)[J].Hum Reprod,2004,19(1):41-47.
[6] Kadonaga JT,Jones KA,Tijan R.Promoter-specific activation of RNA polymerase II transcription by Sp1[J].Trends Biochem Sci,1986,11(1):20-23.
[7] 刘金勇,刘嘉茵.多囊卵巢综合征与癫痫及其治疗研究进展[J].国外医学妇产科学分册,2006,33(3):196-200.
[8] Rosenfield RL.Ovarian and adrenal function in polycystic ovary syndrome[J].Endocrinol Metab Clin North Am,1999,28(2):265-293.
[9] Escobar-Morreale HF,Serrano-Gotarredona J,Garcia-Robles R,et al.Lack of an ovarian function influence on the increased adrenal androgen secretion present in women with functional ovarian hyperandrogenism[J].Fertil Steril,1997,67(4):654-662.
[10] Gharani N,Waterworth DM,Williamson R,et al.5’polymorphism of the CYP17 gene is not associates with serum testosterone levels in women with polycystic ovaries[J].J Clin Endocrinol Metab,1996, 81(11):4174-4178.
篇9
关键词：胃癌；基因多态性；细胞色素P450；CYP2E1
胃癌是常见的恶性肿瘤之一；每年新发的胃癌患者，在全世界约为100万，在我国约20万[1]。人群中存在易感个体是由于一些肿瘤发生相关的基因存在多态性，而针对某一个体，一个基因座位可以存在多个等位基因，且无法用突变来解释。其中代谢酶的基因多态现象是肿瘤易感性的重要方面，它决定了个体对环境中致癌物的不同易感性[2]。目前在肿瘤研究中代谢酶的遗传多态性对环境致癌物的致癌效应的作用受到日益重视[3]，其中Ⅰ相代谢代谢有关的CYP2E1多态性与增加胃癌的发生、进展的风险有密切联系[4]。现将CYP2E1基因多态性与胃癌易感性的相关性研究作一综述。
1 CYP2E1基因概述
机体对外来化合物的代谢过程包括Ⅰ相反应和Ⅱ相反应，Ⅰ相反应主要对外来化合物进行生物转化。Ⅱ相反应则对Ⅰ相反应代谢活化后所产生的亲电子中间体与体内的化合物进行结合反应。至今已经发现了7种CYP基因的遗传多态现象，它们是CYP1A1、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C18、CYP2C19、CYP2D6和CYP2E1。这些多态与不同部位的肿瘤危险相关。其中与胃癌发生有关的有CYP1A1、CYP2E1、CYP2C19[5]。人CYP2E1基因定位于染色体10q24.3- qter。YP2E1基因包括9个外显子和8个内含子，cDNA全长1497bp，由11413个碱基对组成，编码由493个氨基酸所组成的功能蛋白质，主要参与乙酰氨基酚、氯唑沙宗、乙醇、苯碱、亚硝胺的代谢。除在肝脏含量丰富外，近年发现在食道、胃、肠、肾等肝外组织有不同程度表达，活性受诸多因素影响。临床研究发现， CYP1A1，CYP2E1 基因的多态性与胃癌遗传易感性有内在的联系[6]。其中 CYP2E1编码的二甲基亚硝胺 D- 脱甲基酶是参与亚硝胺及其前体物和低分子量卤代烃类化合物在体内代谢的主要酶类[7]。
2 CYP2E1基因致胃癌发病的机制
CYP2E1基因表达的二甲基亚硝胺D一脱甲基酶主要在肝脏表达，参与亚硝胺及其前体致癌物N一亚硝基二甲胺和N一亚硝基四吡咯烷的代谢[8]。CYP2E1主要参与亚硝胺及前致癌物的代谢，还参与黄曲霉素及四氯化碳的活化代谢，使前致癌物变成活化的终致癌物[9]。CYP2E1 基因存在 6 种限制性内切酶片段长度多态性，分别为 Taq I、Rsa I、Dra I、Msp I、RFLP 多态以及 5' 端调控区 Rsa I/Pst I 多态。其中最常见的，也是影响 CYP2EI基因表达的是 Dra I 多态和 5' 端的 Rsa I/Pst I 多态[10]。Dra I 多态是由于野生型基因（用D表示）在第6个内含子区域存在酶切位点，而突变型基因（用C表示）在此区域第7668位点发生TA的替换点突变，Dra I 酶切位点消失[11]。因此，CYP2E1 Dra I 多态存在 3 种基因型，分别为野生基因型DD、杂合基因型CD和纯合突变型CC基因型。Rsa I/Pst I 多态是位于 CYP2E1 基因 5' 端的 2个连锁多态。Rsa I/Pst I多态存在3种基因型，分别为野生纯合型A（cl/c1）、杂合型B（c1/c2）和突变纯合型C（c2/c2）[12，13]。
3 CYP2E1基因多态性与胃癌关系的相关研究
CYP2E1 基因多态性与胃癌的发生、发展有着密切关系。已知大多数环境致癌物原先并不具备致癌活性，其进入人机体后需经体内微粒体混合功能氧化酶活化，转变成带有电子基团的终致癌物[14]。燕速[15]等对世居青海地区的新发胃癌的研究发现，CYP2E1 DraⅠ各基因型与不同分化程度的胃腺，CYP2E1基因DraI多态性位点携带突变基因型（C/D、D/D）者与高/高中分化胃腺癌的发生相关，是青海地区发生高/高中分化胃腺癌的危险因素；携带CYP2E1 DraⅠ野生纯合子（C/C）者与低分化胃腺癌的发生相关，是发生低分化胃腺癌的危险因素。周涛等[16]研究表明，胃癌组 c1/c1 基因型的分布频率高于对照组，揭示了 CYP2E1 c1/c1 基因型与胃癌遗传易感性相关。陈元鸿等[17]研究显示，携带 CYP2E1 c2/c2 基因型个体的 CYP2E1 酶活性比 c1/c1 型或 c1/c2 型携带者的酶活性高，携带 CYP2E1 c1/c2 或 c2/c2 基因型的个体比 c1/c1基因型携带者患胃癌风险低，进一步说 CYP2E1 c1/c1 基因型是肿瘤易感基因。王雨[18]等研究发现CYP2E1基因Rsa I位点等位基因c1与胃癌易感性相关联，某些饮食因素与胃癌的发生有关。但也有研究报道 CYP2E1 基因多态性不是胃癌的危险因素[19]。究其原因，可能与CYP2E1多态性位点，在不同民族、不同地区、不同人群中的分布，以及不同学者所采用的入组标准不同等因素有关。因此，CYP2E1 多态性与胃癌易感性的关系还需要进一步的探讨。
4 问题与展望
在胃癌的发生过程中，遗传因素与环境因素均起着不容忽视的作用。目前代谢酶基因多态性与胃癌的发生的研究处于初步阶段，且研究结果不一致，有的结果还相互矛盾。主要原因可能有：①不同民族的生活习惯及环境致癌物的暴露因素不一样，这些致癌物在胃癌发生发展中可能起的作用不同；②检测的基因多态性位点太少；③较多注重基因多态性识别，忽略了基因与环境的交互作用。因此，对于 CYP2E1 多态性的研究还需要进一步的扩大样本数量，而且必须结合当地人种、民族的特点和主要病因联合起来分析。探索 CYP2E1 多态性与肿瘤易感性之间的联系将有助于阐明肿瘤病因及发病机制，对于肿瘤的防治尤其是肿瘤高危人群的早期筛查方面有很重要的现实意义。
参考文献：
[1]孙秀娣，牧人，周有尚，等.中国癌症死亡率20年变化情况分析及其发展趋势预测[J].中华肿瘤杂志，2004，26（1）：6-9.
[2]黄雪.代谢酶基因多态性与胃癌遗传易感性的进展[J].上海交通大学学报（医学院）2007， 27（5 ）：485- 487.
[3]Zhan P，Wang J，Zhang Y，et al. CYP2E1 Rsa I/Pst I polymor-phism is associated with lung cancer risk among Asians [J]. Lung Cancer，2010，69（1）：19-25.
[4]Feng J， Pan X， Yu J， Chen Z， et al. Functional PstI/RsaI polymorphism in CYP2E1 isassociated with the development， progression and poor outcome of gastric cancer[J]. PLoS One，2012，7（9）：e44478.
[5]Dong LM，Potter JD，White E，et al.Genetic susceptibility to cancer；the role of polymorphism in candidate genes [J].JAMA，2008，299（20）：2324-2336.
[6]Dong LM， Potter JD， White E，et al.Genetic susceptibility to cancer： the role of polymorphism in candidate genes [J]. JAMA， 2008， 299（20）： 2423-2436.
[7]Wang Y，Yang H，Li L，et al. Association between CYP2E1 ge-netic polymorphisms and lung cancer risk：a meta-analysis [J]. Eur J Cancer，2010，46（4）：758-764.
[8]王春兰，陈洁，吴小南，代谢酶、DNA修复酶基因多态性与胃癌遗传易感性[J]. 海峡两岸预防医学杂志，2007，13（4）：（32-34）.
[9]Shi W X，Chen S Q .Frequencies of poor metaholizer of cyto-chrome P450 2C19 in esophagus cancer， stomach caner ， lung cancer and bladder cancer in Chinese population [J].World J，2004，10：1961-1963.
[10]Neafsey P，Ginsberg G，Hattis D，et al. Genetic polymorphism in CYP2E1：Population distribution of CYP2E1 activity [J]. J To-xicol Environ Health B Crit Rev，2009，12（5-6）：362-388.
[11]陈敏斌，高长明，吴建中，等.细胞色素 P4502E1 基因多态性与结直肠癌易感性的关系 [J]. 中华肿瘤防治杂志，2007，14（6）：409-411.
[12]谢瑞莲，管晓翔，陈龙邦，等.细胞色素 CYP2E1 基因 RsaI/PstI 位点多态性与肺癌易感性的系统评价 [J]. 南京医科大学学报，2007，27（9）：911-915.
[13]Cantor KP，Villanueva CM，Silverman DT，et al. Polymor-phisms in GSTT1，GSTZ1 and CYP2E1，disinfection bypro-ducts，and risk of bladder cancer in Spain [J]. Environ Health Perspect，2010，118（11）：1545-1550.
[14]张绍轩，王长青，金刚，等.吉林女性人群 GSTMl 及 CYP2E1Pst I 基因多态性分析 [J]. 吉林医药学院学报，20011，32（2）：76-78.
[15]燕速，等.CYP2E1 DraⅠ基因遗传多态性与青海地区人群胃癌易感性的相关性研究[J].中国癌症杂志，2013，23（4）：273-278.
[16]周涛，樊薇，韩炜，等 . 基因多态性及常见危险因素与胃癌易感性的研究 [J]. 中华消化杂志，2007，27（3）：145-149.
[17]陈元鸿 . GSTM1 基因缺失在胃癌发病中的临床意义 [J]. 中华现代内科学杂志，2009，6（4）： 8-10.
篇10
[关键词] 抵抗素；基因多态性；2型糖尿病
[中图分类号] R541 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2012）21-0048-04
人的抵抗素基因存在多种单核苷酸多态性（SNP）现象，而SNP与2型糖尿病间的相关性，目前并无统一定论，可能与研究样本的数量、病例及位点的选取有关，更可能与不同种族间的糖尿病易感性及个体差异有关。我们研究抵抗素水平和抵抗素基因rs34861192位点多态性与T2DM的关系，分析此抵抗素基因是否为2型糖尿病的易感基因，为2型糖尿病的早期预测、诊断、治疗及预后提供分子生物学依据。
1材料与方法
1.1材料
仪器与试剂 ① 实验仪器：质谱检测仪（MassARRAY Analyzer Compact），点样仪（MassARRAY Nanodispenser），384 孔双头 PCR 仪（GeneAmp PCR System 9700 Dual 384-Well Sample Block Module），6mg 384纯化板（SEQUENOM 公司），STAR全自动样本工作站和FAME全自动酶标分析仪，罗氏cobase 411 全自动电化学发光免疫分析仪。 ② 主要试剂：通用基因组DNA提取试剂盒（广州市达晖生物技术有限公司），iPLEX PCR反应试剂盒（SEQUENOM 公司），384-well SpectroCHIP 生物芯片（SEQUENOM 公司），HOTSTART Taq酶（SEQUENOM 公司），虾碱性磷酸酶（SAP酶，SEQUENOM 公司），阳离子交换树脂（SEQUENOM 公司），阳性质控YH（深圳华大基因研究院培育的“炎黄一号”细胞株DNA），抵抗素（RapidBio Lab Calabasaa），胰岛素（Abbott Japan CO，LTD），葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯（中生北控生物科技股份有限公司），高密度脂蛋白胆固醇（日本第一化学药品株式会社），低密度脂蛋白胆固醇（DiaSys Diagnostie Systems GmbH，德赛）。
1.2 对象
（1）正常对照组（CON组）：健康体检的150例个体，无T2DM（均检测空腹及餐后2 h血糖），无冠心病（无主述史并且心电图无异常），体重指数（body mass index，BMI）11.1 mmol/L（200 mg/dl）；②空腹血浆葡萄糖（FPG）水平>7.0 mmol/L（126 mg/dl）；③OGTT试验中，餐后2 h血糖水平>11.1 mmol/L（200 mg/dl）。未用过胰岛素，噻唑烷二酮类及其他口服降糖药物，并排除继发性2型糖尿病的可能。
