生物细胞分析范文

导语：如何才能写好一篇生物细胞分析，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

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[关键词] 肝细胞癌；血清；代谢物组；LC-MS；主成分分析；模式识别

[中图分类号] R735.7 [文献标识码] C[文章编号] 1674-4721（2011）06（a）-085-02

目前，临床上诊断肝癌的主要方法为病理、影像和血清AFP检查。这些检测手段中，病理法属于有创性检查，对患者造成组织损伤，不能作为常规检查方法；B超、CT、磁共振成像对小肝癌灶检出率较低；血清AFP检查诊断肝癌灵敏度低，因此，建立一种无损、准确、灵敏的肝癌诊断方法具有重要的临床价值。代谢组学是一种通过考察生物体系受刺激或扰动后代谢产物随时间的变化，并以此来研究生物体系代谢途径的新技术[1-2]。代谢组学作为新兴的学科，已成功应用于疾病诊断、药物作用模型的鉴别和确证、药物作用机制研究等领域[3-6]。目前代谢组学分析中常用的两种检测手段是核磁共振（NMR）技术和质谱（MS）及其联用技术。相比于NMR灵敏度低、检测动态范围窄等弱点，现代MS技术的优势是具有很高的灵敏度和专属性，可以实现对多个化合物的同时快速分析与鉴定，现已成为生物分析中的首选方法。本研究采用LC-MS法检测肝癌患者和健康人血清中代谢物，比较分析两组血清代谢物组的差异，同时利用PCA对MS数据进行模式识别，以期建立肝癌的诊断模型。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

Agilent 1100型高效液相色谱仪，Agilent LC/MSD Trap XCT Plus 型质谱仪、高压二元梯度泵、二极管检测器、自动进样器、柱温箱、Chemstations化学工作站等（美国Agilent公司），日立20PR-52D型高速冷冻离心机，电热真空干燥箱（上海申光仪器仪表有限公司），KQ- 250 DE型数控超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司），Milli-Q纯化水制备系统(Millipore公司)。甲醇、乙腈均为色谱纯（美国fisher公司）。

1.2 样品的采集

分别采集30份男性肝癌患者以及30份健康男性 （无相关病史的健康人群)受试者静脉血5 ml 至促凝管中，室温下静置1 h后在4℃、13 000 g离心10 min），置-80℃贮存备用。采血前禁食12 h。肝癌诊断标准按照2001年中国抗癌协会肝癌专业委员会修订的肝癌临床诊断标准[8]，上清液LC-MSn分析。

1.3 LC-MS 条件

反向液相色谱（RP-LC），色谱柱：Prevail C18（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相A：10mM甲酸铵缓冲液（甲酸调PH 4.0）；B：0.1%甲酸乙腈，A与B梯度洗脱：0～5 min，B%10～30，5～9 min，B% 30～60，9～20 min，B%60～70，20～25 min，B%70～100；柱温：25°C；流速：0.8 ml/min；质谱条件：ESI离子源，离子源温度350℃，毛细管电压3.5 kV，雾化压力285.8 kPa，雾化压力60.0 Psi，干燥气流速11.0 L/min，质谱扫描范围75～800 m/z，正离子检出模式。

2 结果

2.1 血清样品检测总离子流图

按照以上实验方法，对血清样本进行了分析测定，图1中A、B分别是健康人和肝癌患者血清典型的LC-MS总离子流谱，图中可见，正常人血清样本的总离子流图与肝癌患者血清样本的总离子流图有明显区别。

A为健康人血清；B为肝癌患者血清

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2.2 肝癌的生物标记物

通过LC-MS检测，与正常人相比，肝癌患者血清中牛磺酸和组氨酸含量减少，而苯丙氨酸、酪氨酸含量增加。牛磺酸是重要的抗氧化物质，曾有研究报道，其在肝硬化患者血清中含量增加，而肝癌患者血清中牛磺酸含量没有改变[7]，但笔者研究发现牛磺酸在肝癌患者血清中含量减少，推测牛磺酸的含量与肝癌病情程度有关，需要进一步研究。

2.3 模式识别分析

利用PCA对正常人和肝癌患者两组血清LC-MS数据进行模式识别分析，得到相应血清标本的PCA得分图（3D PCA Scores plot)。得分图中每一个点代表了一个标本，见图2。从图2中可以直观地看出各血清标本在空间上的位置以及相互聚合程度，图2中肝癌和健康人标本显著分离，说明两者血清代谢物组确实存在显著差异。

3 讨论

为了探讨利用代谢组学技术结合模式识别分析诊断肝癌的可行性，对肝癌患者血清LC-MS数据进行PCA分析。结果表明肝癌患者可与健康人标本100%区分开来，利用基于LC-MS代谢组学技术结合PCA的模式识别方法诊断肝癌诊断结果可靠。有利于临床早期诊断、早期治疗肝癌。此外，由于代谢组学反应的是基因和蛋白表达终端的变化、是对基因组学和蛋白组学在代谢物研究上的放大，因此利用此技术诊断疾病更灵敏、快速。

[参考文献]

[1]罗和古，丁杰，岳广欣，等.大鼠肝郁脾虚证的代谢组学研究[J].中西医结合学报，2007，5(3):307-313.

[2]Jeffrey R，Idle1，Frank J，Gonzalez．Metabolomics[J].Cell Metabolism，2007， 12(6):348-350.

[3]Clayton，T.A，Lindon，J.C，Cloarec，O，et al.Pharmacometabonomic phenotyping and personalized drug treatment[J].Nature，2006，440(7087):1073-1077.

[4]黄成钢.中药研究的必然趋势—中药复方系统研究[J].中国药学杂志，2000，35(7):4331.

[5]周宏伟，谭凤仪，钟音，等.代谢组学及其在微生物领域的研究进展[J].分析化学，2007，35(2):309-314.

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    新课标和新教材最突出特点是以学生发展为中心,体现学生主体地位,面向全体学生,注重学生思维能力和学习方式的培养,倡导探究性学习和注重与现实生活的联系。所以在课堂教学设计中笔者采用以学生发展为本的主体性教学模式,从学生的认知水平出发,结合教学内容,精心设计问题,营造探究氛围,使学生在观察、讨论、探究、合作交流中相互启迪、自主学习、构建模型。

    二、教学分析

    1.教材分析

    “物质出入细胞的方式”是浙科版普通高中课程标准实验教科书生物必修1《分子与细胞》的第三章第二节的内容。第二章已经介绍了细胞膜的化学组成和细胞膜的功能,这一节是在此基础上探讨细胞膜控制物质进出的几种方式,在细胞膜的亚显微结构基础之后,带领学生继续探究细胞膜控制物质进出功能的方式和原理。这样的编排符合学生认知规律,有助于帮助学生建立结构与功能相适应的观点。

    2.学情分析

    通过前几章节的学习,学生对于细胞的分子组成、基本结构和探究的基本步骤已有了一定的认识,能理解细胞膜是系统的边界,并且大部分学生已经对生物有了较浓厚的学习兴趣,很渴望在此基础上进一步探究物质是怎样进出细胞的,有哪些方式等有关细胞功能方面的知识。

    3.教学重难点

    (1)教学重点:比较物质出入细胞的各种方式的异同。

    (2)教学难点:理解渗透作用原理。

    三、教学目标

    1.知识目标

    (1)简述扩散的特点。

    (2)阐明渗透的概念及原理。

    (3)比较说明红细胞吸水与失水的原因;概述被动转运和主动转运的概念;比较扩散、易化扩散和主动转运。

    2.能力目标

    (1)学会综合运用比较、分析、归纳、综合等科学思维方法。

    (2)设计实验,逐步领悟探究过程的一般方法与基本思想,培养自身的科学探究能力以及语言表达的能力。

    (3)通过构建模型和概念图,提高知识建构能力。

    3.情感、态度与价值观目标

    (1)通过分析扩散和渗透作用的过程,渗透生命活动不断发展变化以及适应的特性,逐步学会自觉地利用发展变化的观点认识生命。

    (2)领悟科学探究思想,体验探究活动中的成就感。

    (3)通过探讨问题,设计实验,培养合作意识和实事求是地对待实验结果的态度。

    四、教学策略与手段

    (1)改变过去单纯的教师讲授和学生接受的教学方式,以问题探究教学为主线,教师通过多媒体创设问题情境,引导学生运用讨论法、实验法、学案导学、模型建构等方法开展学习,充分调动学生学习的积极性,发挥学生主体的作用。

    (2)课前准备:

    ①学生预习本节课相关知识,提出相关问题;

    ②教师针对教学设计准备好相关的多媒体课件、学案,实验所需的材料和用具。

    五、教学过程

    1.导课

    教师组织引导学生思考(多媒体展示不同物质通过不含蛋白质的脂双层):

    (1)什么样的分子能够通过脂双层?什么样的分子不能通过?

    (2)氨基酸不能通过无蛋白质的脂双层,但是能进出细胞的原因是什么?

    学生活动:学生观察,思考问题,根据教师引导总结出不同物质通过细胞膜的几种方式。

    教学设计意图:创设问题情境,学生主动参与学习过程,激发学习兴趣。

    2.学习扩散

    教师组织引导学生亲手实验将墨水滴到烧杯中并观察现象,并引导学生讨论什么是扩散。

    学生活动:学生实验,观察实验现象,讨论、交流。

    师生共同总结出扩散是分子从高浓度处向低浓度处运动的现象。

    教学设计意图:学生实验,吸引学生注意力,体现学生在学习中的主体地位。

    3.学习渗透

    教师演示实验,实验装置如图1所示。

    教师设计问题串:

    (1)漏斗的液面为什么上升?

    (2)如果用一层纱布代替玻璃纸,液面还会升高吗?

    (3)如果烧杯中也是同样浓度的蔗糖溶液,结果会怎么样?

    学生在教师的指导下归纳出产生渗透现象两个必要条件以及渗透的方向是从低浓度溶液到高浓度溶液。

    教学设计意图:通过观察演示实验,学生经历“现象——问题——分析——结论”,主动构建出渗透作用的条件,提高归纳总结的能力。

    教师通过多媒体动画演示微观展示渗透实验。

    问题探究:

    (1)渗透是水分子跨过膜的扩散。扩散的方向是怎么样的?

    (2)那么渗透作用与扩散现象相矛盾吗?

    学生活动:思考、回顾前面扩散有关知识,通过相互讨论在教师指导下得出回答渗透是水分子跨过膜的扩散。

    教学设计意图:学生在实验的基础上通过多媒体的清晰展示,清楚观察到了微观的渗透现象,使抽象的知识具体化,从而得出渗透的概念,突破难点。

    4.学习被动转运

    教师通过多媒体动画演示氧和二氧化碳进出细胞的现象。创设问题情境:给出扩散的实验数据,请学生分析数据(表1),构建数学模型,绘出坐标曲线。

    学生活动:建构模型绘出曲线(图2)。

    教师用多媒体演示展示葡萄糖进入红细胞的现象。创设问题情境:给出葡萄糖跨红细胞膜的实验数据(表2),请学生分析数据,构建数学模型,绘出曲线。

    学生活动:建构模型绘出曲线。

    教师组织引导学生观察曲线后,评价扩散和易化扩散有何异同点。

    学生归纳总结。

    教学设计意图:用多媒体演示物质跨膜运输的各种方式,直观形象表现出事物的空间中的关系。学生构建模型,需要进行表格与曲线的相互转换,使抽象的问题直观化、具体化,能够变抽象思维为形象思维,有助于把握问题的本质。

    5.学习主动转运

    教师组织引导,创设问题情境:

    (1)海带中碘的浓度高出海水中碘浓度的200倍,但是海带照样从海水中吸收碘,由低浓度一侧向高浓度一侧运输。

    (2)人的红细胞和血浆中的各种离子浓度如下页表3所示。

    以上两种情况说明细胞对离子的吸收是从低浓度到高浓度,这种运输方式是主动运输。教师引导学生根据资料中思考主动运输与被动转运相比两者的区别。

    学生活动:思考、讨论回答,总结主动转运的特点。

    教学设计意图:创设问题情境,自然引入主动转运,提高学习兴趣。

    师生共同小结:设计表格对扩散、易化扩散、主动转运进行比较。

    6.课堂反馈

    教师组织引导一:实验探究:现有两瓶没有标签的蔗糖溶液,请学生利用所提供的材料(半透膜、漏斗、烧杯、橡皮筋),根据今天学习的知识,设计一种实验方案,比较两瓶溶液浓度的高低,并预期实验结果及得出相应结论。

    学生活动:分组讨论、设计实验方案并预期实验结果及结论。

    教学设计意图:充分发挥自身自主探究能力,培养自身的实验设计能力,逐步领悟探究过程的一般方法与基本思想,提高语言表达、分析归纳的能力。

    教师组织引导二:建构模型:请尝试画图表示随氧气浓度与离子运输速率的关系,并分析曲线各阶段的限制因素。

    学生活动:绘制曲线图(图4)。

    教学设计意图:通过模型建构复习巩固知识,突出教学难点。

    六、问题研讨

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[关键词] 翼状胬肉；角膜缘干细胞；生物羊膜；泪膜破裂时间

[中图分类号] R473.77 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2013）06（c）-0043-02

翼状胬肉是局部球结膜纤维血管组织增生并侵犯角膜的常见眼表疾病，不仅影响美观，还常伴眼红、异物感等不适症状。目前治疗以手术为主。为探讨初发性翼状胬肉采用手术切除联合生物羊膜移植及自体角膜缘干细胞移植治疗的临床疗效，该研究对自体角膜缘干细胞移植及生物羊膜移植治疗翼状胬肉这两种主流手术方法进行分析，探讨其临床疗效，现对该院2009年5月―2011年3月住院初发性翼状胬肉病例73例进行分析，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院住院初发性翼状胬肉病例73例（79眼），随机分为2组。自体角膜缘干细胞移植组35例（39眼），其中男17例20眼，女18例19眼，年龄38～65（46.7±6.8）岁；胬肉头部侵入角膜缘约2～4 mm，平均（2.6±0.4）mm。羊膜移植组38例（40眼），其中男20例20眼，女18例20眼，年龄36～68岁（44.5±7.4）岁；胬肉头部侵入角膜缘约2～4 mm，平均（2.5±0.5）mm。

1.2 泪膜稳定性测定（BUT）

荧光素钠滴入患者结膜囊后，在裂隙灯下用钴蓝滤光片观察一次瞬目到泪膜出现干斑所需要的时间。分别测量3次取平均值。

1.3 羊膜的取材与规格

采用成品独立包装的羊膜片。国食药监械字20043061180号，产品批准文号：规格：面积2.5 cm×2.5 cm，厚度0.1～0.3 mm，上皮面向上贴附于滤纸上。手术时用生理盐水复水10 min即可使用。

1.4 手术方法

1.4.1 角膜缘干细胞移植组 ①胬肉切除：0.5%爱尔卡因滴眼液表麻术眼，显微镜下操作，胬肉浸润麻醉采用0.1%肾上腺素+2%利多卡因适量进行，于胬肉颈部剪开球结膜，分离时向上、下方及鼻侧分离。胬肉头部前0.5 mm剖切，自角膜面完整干净的剔除胬肉头部，分离胬肉颈部至半月皱襞，将胬肉组织剪除。将巩膜表面筋膜组织清除，烧灼止住出血点出血。②角膜缘干细胞移植：将术眼上方球结膜与其下筋膜分离，切取一结膜瓣，要比受区结膜缺损大小形状略大，向下分离至角膜缘内1mm处剪除。平铺此带角膜缘干细胞的结膜瓣于受区巩膜表面。10-0尼龙线带巩膜浅层间断缝合固定角膜缘及植片两侧，余植片与结膜残端间断缝合。取材区结膜无需缝合自行修复。

1.4.2 羊膜移植组 ①胬肉切除：同角膜缘干细胞组。②羊膜移植：剪取复水后的羊膜，t要略>缺损范围1 mm大小，将上皮面朝上紧贴于暴露的巩膜区，球结膜和羊膜用10-0尼龙线间断对位缝合，对多余的羊膜进行修剪， 中央缝合羊膜植片2针固定在浅层巩膜上，角膜缘固定2针。

两组手术术前滴双氯芬酸钠眼液及典必殊眼液3～5 d，4次/d。术后术眼涂四环素可的松眼膏，绷带加压24 h后，典必殊眼液点眼，6次/d，持续1周后逐渐减量。术后8～10 d拆除缝线。同时两组患者于术后1周、1个月及3个月检查泪膜破裂时间。

1.5 疗效评定标准

痊愈：术区光滑洁净，角膜创面上皮覆盖，结膜无充血平整，无胬肉增生和新生血管；复发：结膜明显充血，局部增厚，角膜创面有胬肉增生及新生血管。

1.6 统计方法

采用SPSS10.0统计软件对数据进行处理，计量资料采用均数加减标准差表示（x±s）表示，进行t检验，计数资料进行χ2检验。

2 结果

术后2～3 d两组患者均有不同程度的植片及结膜充血、异物刺激感和水肿， 4～5 d后逐渐减轻。自体角膜缘干细胞移植组术后创面愈合时间3～7（4.4±0.8）d。生物羊膜移植组术后创面愈合时间5～8（6.5±0.6）d。两组比较差异有统计学意义（t=2.34， P

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【关键词】生物技术；现状；特点；环境保护；应用

由于工业化进程的飞速发展，工业“三废”、城市汽车尾气，饮用水的的污染，生态环境受到严重破坏。甚至影响到了人们的日常生活。人们疾病发病率急剧上升。因此加大对环境保护工作的投入是当前摆在面前十分严峻的问题，许多传统的环保工艺处理技术已不能适应现在环保工作的需求，迫切需要一种新的环保治理方式。而现代生物技术以其众多的优点，正越来越多地被应用到了环境保护处理过程当中。

一、我国现代环境面临的现状

当前，我国环境保护工作面临的形势十分严峻，集中表现在工业化学污染严重、农用化肥及农药污染、水资源严重短缺、饮用水源遭到污染情况严重、土地沙漠化趋势比较明显、耕地面积大量流失、森林草原等植被遭到严重破坏、许多珍稀物种动植物灭绝等等。这些问题都是事关我国经济社会发展的速度和水平及人民生产生活状况，必须得到我们的重视。

二、现代生物技术的特点

现代生物技术在生态环境中应用的很广泛，是因为，它有独特的优点：1、以生物为对象，不依赖地球上的有限资源，而针对再生资源的利用；2、在常温常压下进行，过程简单化，可持续操作，可以节约能源，减少环境污染；3、开辟了生产高纯度、优质、安全可靠的生物制品的新途径4、可解决常规技术和传统方法下不能解决的问题；5、可定向地按人们的需要创造新物种、新品种和其他有经济价值的生物类型。

三、现代生物类型在环境保护中的应用

因为现代生物可以有效地降低环境保护工作中的成本，不受天气气候、场地等的影响，可以随时发挥作用，可以创造可再生资源，能够彻底去除有害物质等，它凭借着这些优点，在环境保护中起到重要的作用。可以使现代生物技术的运用范围迅速扩展，可以对农村中的牲畜粪进行加工，产生清洁能源，不会对环境造成污染，彻底去除污染物，提高了环境保护的工作。

1、对污水的生物净化。要用生物技术对废水进行处理，可以应用酶联免疫技术、PCR技术、电子显微技术、基因差异显示技术、生物传感器等现代生物技术对环境进行检测与评估。应用酶联免疫技术对环境中的农药及其一些代谢物一一项新技术。国内外根据这项技术开发出了杀菌剂、除草剂、杀虫剂等农药和抗菌素等对污染物的酶联免疫的分析方法。而我国也在这方面取得了一些新发展，例如开展了生物监测方法的研究，研究了各种生物的综合指标，利用生物监测技术评价环境质量，利用冷冻干燥且发光的细菌，根据它的发光强度变化的特点来断定水质污染的程度，从而研究提出了上海苏州河水水质发光细菌测试和评价方法。污水中的有毒物质的成分十分复杂，包括各种酚类、氰化物、重金属、有机磷、有机汞、有机酸、醛、醇及蛋白质等等，是环境污染中最难治理并且必须治理的一种污染形势。微生物通过自身的生命活动可以解除污水的毒害作用，从而使污水中的有毒物质转化为有益的无毒物质，使污水得到净化。应用遗传工程的技术构建出符合人们需要的微生物高效菌和可以讲解很多种污染物功能的超级菌，从而提高对污染物的讲解能力，加快讲解的速度，增强净化污水的能力。当今固定化酶和固定化细胞技术处理污水就是生物净化污水的方法之一。固定化酶和固定化细胞技术是酶工程技术。固定化酶又称水不溶性酶，是通过物理吸附法或化学键合法使水溶性酶和固态的不溶性载体相结合，将酶变成不溶于水但仍保留催化活性的衍生物，微生物细胞是一个天然的固定化酶反应器，用制备固定化酶的方法直接将微生物细胞固定，即是可催化一系列生化反应的固定化细胞。运用固定化酶和固定化细胞可以高效处理废水中的有机污染物、无机金属毒物等。

2、对于那些固体废物，我们可以产用生物讲解的方法，例如焚烧、热处理等，这种办法具有成本低、操作简单、容易管理、运行费用低等优点。这也可以成为“生物反应堆”，与传统的挖坑填埋相反，可以允许适量的水分进入，增加湿度，微生物可以很好地生长和繁殖，从而加速了废物的降解和稳定。又分为好氧生物处理，这是指利用好氧生物在有氧的条件下新陈代谢，利用好氧生物技术将废物处理；坏氧生物处理，是指坏氧生物在无氧的条件下生长代谢作用处理废物；准好氧生物处理，这是使填埋场里具有某种好氧条件，靠垃圾分解产生的发酵热造成内外温差，空气可以自然的通过填埋体，促进垃圾的分解和稳定，它不需要通风，节省能量，减少对地下水的污染，可以使危险气体例如CH4、H2S等产量降低等；混合生物技术，是把好氧和坏氧生物技术综合起来，它主要的特点就是增加了挥发有机酸对空气具有危险性的污染物的讲解，并且降解的速度很快。

3、生物修复技术出现在80年代以来的治理环境污染的生物工程技术，主要是利用了生物本身的独特分解有机物的能力，去消除污染环境中的污染物，达到消除污染的目的。它包括微生物修复和植物修复。人们可以利用植物对某些污染物进行吸收，作为这些污染物的生存介质，达到净化的功能，而微生物被运用在去除土壤中的重金属污染、石油污染等多种污染物，具有典型的处理速度快、无二级污染、经济实惠等特点。

4、环境生物技术应用在预防污染上也十分广泛。利用分子遗传技术可以将生产过程中产生的废弃物直接转化为新能源或副产品，例如微生物化肥，利用DNA重组及蛋白质工程技术快速生成的酶，把它应用在生产环节中，减少使用化学无极品从而达到清洁生产的目的；利用分子生物种群、基因技术、DNA修复可以改变一些物质的分子结构，可以加大降解性或加速自然讲解的速度，这种降解途径彻底，一般不会带来副作用；有的是通过共代谢作用，将农药转为了避免负面效应，就需要用基因工程的方法对已知有降解农药作用的微生物进行改造，改变其生化反应途径，以希望获得最佳的降解、除毒效果。例如生物化肥、生物农药、生物可降解塑料膜等大量使用在实际生活中，取代了化学制成品农药、化肥的使用。它是无污染的，所以在农作物声中得到了广泛的应用。能降解农药的微生物，有的是通过矿化作用将农药逐渐分解成终产物CO2和H2O，要想彻底消除化学农药的污染，最好全面推广生物农药。

四、结论

我们现在的地球已经被我们伤害的遍体鳞伤，我们必须采取最有效又不伤害它的方法来帮地球治疗。更新环保理念，利用生物技术，我们要把治理变为提前预防的方针。利用新的成果技术，加强对没有受到污染的环境预防，对那些已经受到危害的环境，要做尽早的处理措施，从根本上解决环境保护的问题。随着我们的环保意识的逐渐增强，环境保护已经成为了社会关注的焦点。而现代生物技术是以集约化、商品化、国际化、集科学化和环保化为一体的基本特征，在高新技术革命中，占有最重要的地位，也必将会在将来对社会产生深远的影响。

参考文献

[1]张伟峰.现代生物技术在环境保护工作中的应用[J].时代报告,2011（9）

[2]赵淑兰.浅议现代生物技术在环境保护工作中的应用[J].科技信息，2010（16）

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一、合理辨别细胞有丝分裂各时期图形及染色体行为

要想合理辨别细胞有丝分裂各时期图形及染色体的行为，第一，需要了解动植物细胞器的中心体.第二，明确动物细胞分裂的后末期现象及一个细胞分裂成两个细胞的过程，植物细胞在分裂末期由中央赤道板位置形成细胞板，并向周围进行扩展，促使一个细胞分裂成两个细胞.第三，合理绘制动植物细胞有丝分裂后期图像，首先，正确画染色置，确保着丝点靠近两级.其次，确保染色体形状、大小及颜色与上面所附着的基因相同.最后，大多数生物在细胞的每一级均有成对存在的同源染色体.

例1图1中表示动物细胞在有丝分裂的分裂期各种距离或长度随时间的变化规律曲线，叙述正确的是（A）

A.曲线a代表两个中心体间的距离

B.曲线b代表姐妹染色单体共用的着丝点间的距离

C.曲线c代表染色体与细胞两级间的距离

D.曲线d代表染色体纺锤丝的长度

解析由于题中给出从有丝分裂的分裂期开始，两个中心体在前期分开，可用a曲线表示.两个着丝点是从后期分开，距离从0开始增加，因此10分钟开始进入后期，用c曲线表示着丝点间的距离.同时商兹旧体向两极移动，所以d曲线表示着丝点距细胞两极的距离.附着在着丝点的纺锤丝从前期形成到末期消失，因此b代表纺锤丝的长度.本题的答案为A.

二、正确认识与卵细胞形成过程

与卵细胞的形成过程既有相同点又有一定的区别，不同点是在细胞分裂后期产生，细胞质分裂具有均匀性特点.1个精原细胞能够分解为4个，精细胞分解为的过程不属于减数分裂过程.而卵细胞在形成过程中，细胞质分裂处于不均匀现象，能够由1个卵原细胞分解为3个极体，形成过程处于无变形阶段.两者的相同点是，染色体行为及染色体、DNA数量相同.

例2图2中哪个细胞是次级卵母细胞继续分裂过程中染色体平均分配的示意图（B）

解析试题分析：题中图A是卵原细胞在减数分裂第一次分裂过程中处于后期的初级卵母细胞图，判断依据是每个四分体中的同源染色体已彼此分开，开始分别移向细胞两极，但细胞质的分配是不平均的；图B是减数第二次分裂后期的次级卵母细胞图，判断依据是着丝点已分裂；图C是精原细胞在减数分裂第一次分裂后期的初级精母细胞图，判断依据是同源染色体已彼此分裂，正在移向细胞两极，但细胞质的分配是平均的；图D有两种可能，一种可能是精原细胞进行减数分裂第二次分裂后期图，第二种可能是卵原细胞减数分裂过程中第一极体的分裂后期图.故答案是B.

三、明确有丝分裂及减数分裂图形的区别

首先，需要对是否是减数的第一次分裂进行判断，对有丝分裂图像中的减数第一次分裂、第二次分裂及有丝分裂图像进行比较，在对第一次分裂的染色体进行判断时，需要结合染色体的行为来进行.其次，对减数第二次分裂及有丝分裂进行比较.最后，对细胞中染色体的奇数及细胞质分裂不均匀等现象进行判断.

例3二倍体生物细胞正在进行着丝点分裂时，叙述正确的是（C）.

A.细胞中一定不存在同源染色体

B.着丝点分裂一定导致DNA数目加倍

C.染色体DNA一定由母链和子链组成

D.细胞中染色体数目一定是其体细胞的2倍

二倍体生物细胞进行着丝点分裂时，细胞处于有丝分裂后期或减数第二次分裂后期，前者细胞中存在同源染色体；着丝点分裂导致染色体数目加倍，但DNA数目不变；DNA复制方式为半保留复制，则DNA中一定有一条母链和一条子链；有丝分裂后期染色体数目增加，是体细胞染色体数目的2倍，减数第二次分裂后期，染色体数也暂时加倍，但与体细胞中染色体数相等.故答案选C.

篇6

[关键词]干细胞；人牙周膜干细胞；免疫磁珠；流式细胞计量术；免疫细胞化学

[中图分类号]R783.5 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2008）05-04

Isolation, identification and bionomics of human periodontal ligament stem cells

PAN Feng1,DING Yin1,WANG Guang1,ZHAO Yu2,NI Hua2

(1.Department of Orthodontics,Stomatology Hospital,The Fourth Military Medical University,Xi'an 710032,Shaanxi,China; 2.Center of Tissue Engineering, Stomatology Hospital,The Fourth Military Medical University)

Abstract:ObjectiveTo isolate and identify the periodontal ligament stem cells and demonstrate its bionomics. MethodsPDLSCs were isolated by immunomagnetic method. The flow cytometry and immunocytochemistry procedure were used to disclose the cell cycle and surface marker of the PDLSCs.Osteoinduction and adipoinduction were done to conform the multidirectional differentiation of PDLSCs. ResultsThe acquired cells had clonality and low proliferation. Most of the cells were in phase G0 /G1 and there were high expression of CD146 and CD44 on these cells, meanwhile, CD34 and CD45 were of low expression. The cells were Vimentin and STRO-1 positive while their multidirectional differentiation ability was confirmed in vitro. Conclusionimmunomagnetic method was an effective way to isolate and purify the PDLSCs. The acquired cells showed the characteristics of stem cells.

Key words:stem cell;human periodontal ligament stem cell;immunomagnetic beads;flow cytometry;immunocytochemistry

研究证实牙周膜内存在具有横向分化能力的干细胞(牙周膜干细胞)，在体外微环境作用下还可分化为成牙骨质细胞或成骨细胞[1-2]。因此，牙周膜干细胞（PDLSCs）作为一种新发现的干细胞，在牙周组织工程研究中有较大的应用前景。但是牙周膜组织量小、分离困难，一直成为制约牙周膜干细胞研究的重要原因。已有的克隆筛选法操作程序繁琐，周期较长[1]，因此需要寻找简便、快捷的筛选方法来分离牙周膜干细胞。本研究应用免疫磁珠技术对人牙周膜干细胞进行筛选，并扩增培养，通过对牙周膜干细胞生长曲线、克隆形成率、细胞周期、细胞表面抗原标记物测定及多向分化能力的研究对其生物学特性进行研究，以期建立一种便捷有效的分离方法并明确牙周膜干细胞的生物学特性，为进一步研究牙周损伤的发病机理及临床治疗提供基础。

1材料和方法

1.1实验材料和设备：α-MEM培养基（Gibco，美国），羊抗小鼠磁珠试剂盒（Dynalbiotech，美国)，基质蛋白-l单克隆抗体(STRO-1，R&D，美国)， ABC型免疫组化检测试剂盒(Dkao，美国)；小鼠抗人波形丝蛋白单抗(Vimentin，Dkao，美国)；CD44-FITC、CD146-FITC、 CD34-FITC、CD45-FITC小鼠抗人单克隆抗体（Beckmen Coulter，美国）；CO2孵箱(Heraeus，德国)；YJ-875型超静工作台(苏州净化设备厂，中国)；流式细胞分析仪(Beckmen Coulter，美国)；倒置相差显微镜及照相系统(Olympus，日本)。

1.2实验方法

1.2.1 取材及细胞培养：收集临床拔除的正常人牙周健康、无龋的新鲜第3磨牙，刮取根中1/3牙周膜组织，移入10cm无菌培养皿内，滴加少许α-MEM培养液保持组织湿润，锐性分离牙周膜组织约1mm3组织块，将分离的组织块以1mm间距平铺于6孔板内，以无菌盖玻片覆盖组织块，加入培养液(含100ml/L 胎牛血清，100μmol/L2抗坏血酸，2mmol/L2谷胺酰胺，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素的α-MEM 培养液)，置入37℃、50ml/L CO2的孵箱中培养，待多数组织块周围有细胞游出后去除盖玻片，常规培养，每3天换液1次，细胞生长达80%汇合时传代。

1.2.2磁珠分离筛选牙周膜干细胞：将5μl磁珠剧烈振荡后移入离心管内，加入5ml含1％胎牛血清的PBS冲洗，放置于磁力架上静置2min后去上清，重复一次后重悬，置4℃备用。收集第4代人牙周膜细胞1×108个，以含1％胎牛血清的PBS重悬，加入小鼠抗人STRO-1抗体，4℃孵育60min，每隔10min轻振以防沉淀。以含1％胎牛血清的PBS清洗3次，去除残留抗体后重悬并加入磁珠，4℃孵育30min，每5min轻振一次。离心，去除含空白磁珠的上清液，以含1％胎牛血清的PBS重悬，将离心管置于磁力架上2min，缓慢弃除上清及未与磁珠结合的细胞。以含1％胎牛血清的PBS再次重悬并清洗与磁珠结合的细胞2次，弃上清，加入磁珠分离液，轻晃均匀2min后置于磁力架上2min，取上清液，重复2次以去除残存磁珠，离心，加入5ml含10％胎牛血清的α-MEM培养液，重悬，调整细胞浓度为1×104/ml接种于6孔板内，37℃、50ml/L CO2的孵箱中培养。

1.3 牙周膜干细胞生物学特性的研究

1.3.1细胞生长曲线测定：分别取筛选培养的牙周膜干细胞及牙周膜细胞，以1×103cells/孔接种于96孔塑料板，每组3孔，隔日换液。每天取一组，MTT法测各孔OD值，连续测10天，以时间为横轴、细胞数为纵轴绘制生长曲线。

1.3.2 克隆形成率测定：将收集的对数生长期牙周膜细胞的培养上清1 500rpm离心10min，经0.22μm直径的小滤器过滤后，与培养基以l:l比例混合作为适应性培养基。取筛选培养的牙周膜干细胞，调整细胞密度至10～15个/ml，100μ1/孔接种于96孔培养板中，培养12h后标记单个细胞孔，并补液至200μ1/孔，5天换液，光镜下观察克隆形成情况。

1.3.3 流式细胞仪分析

1.3.3.1细胞周期分析：取筛选培养的牙周膜干细胞，胰酶消化，调整细胞密度为1×107/ml， PBS清洗2次，加入0.01mol/LPBS重悬，再加入预冷的无水乙醇2ml吹打混匀，4℃过夜，离心弃乙醇，0.01mol/LPBS清洗2次，加入5ml/L碘化丙锭1ml，4℃30min，过300目的尼龙筛网，流式细胞仪上机，进行细胞周期检测。

1.3.3.2表面抗原测定：取筛选培养的牙周膜干细胞, 弃去培养液，PBS清洗两次，以含0.25% 胰蛋白酶的PBS液消化5 min，制成单细胞悬液，再以含2%牛血清白蛋白和0.1%偶氮钠的磷酸盐缓冲液(流式缓冲液)冲洗细胞, 调整细胞密度为3.0×109/L，每个Eppendof管加100μL细胞悬液，室温下分别与CD44-FITC、CD146-FITC、 CD34-FITC、CD45-FITC小鼠抗人单克隆抗体5μL避光孵育15min，再以流式缓冲液清洗细胞，1 000rpm离心5min，将细胞重悬于含1%多聚甲醛的流式缓冲液0.5ml固定。使用同型对照单克隆抗体确定背景标记。用流式细胞仪分析荧光细胞，专用配套软件计算细胞表面抗原阳性率，单位用%表示。

1.3.3.3 免疫细胞化学染色：取筛选培养的PDLSCs制备细胞爬片， 免疫细胞化学ABC法进行STRO-1及Vimentin染色，阴性对照以PBS替代一抗，进行细胞来源及表达检测，光镜下观察。

1.3.3.4体外多向诱导分化：①矿化诱导：取筛选培养的牙周膜干细胞制成细胞悬液，调整细胞密度为2×104/ml接种于6孔板中，以含10%胎牛血清的α-MEM培养24h后换矿化诱导液(100μg/ml链霉素、100U/ml青霉素、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μg/ml维生素C、1×10-8mol/L地塞米松、10ml/L胎牛血清、α-MEM培养液)培养，隔日换液。培养3周后吸弃培养液, PBS清洗, 95%酒精固定10min ,PBS清洗2次,加入0.1%茜素红(Alizarin Red-S)室温染色30min，去离子水清洗3次，光镜下观察。②成脂诱导：取筛选培养的牙周膜干细胞制成细胞悬液，调整细胞密度为1×105/ml接种于6孔板中，以含10%胎牛血清的α-MEM培养24h后换成脂诱导液（地塞米松10-6mol/L、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.5mmol/L、胰岛素10mg/L、消炎痛100mmol/L、α-MEM培养液）培养，隔日换液。培养3周后吸弃培养液，PBS清洗，10％中性甲醛固定10min，PBS清洗2次，油红O染色10min，去离子水清洗3次，镜下观察。

2结果

2.1形态学观察：所筛选细胞大部分呈类梭形，核为卵圆形、位于胞质中央，似成纤维样细胞（如图1）。

2.2 细胞生长曲线测定：牙周膜细胞及牙周膜干细胞生长曲线均呈倒“S”形，在接种后1天两者细胞量均减少，自第2天起，细胞生长均加速，第8天达到生长高峰，进入“平台期”，此后，细胞生长速度减慢。总体而言，干细胞生长速度明显低于牙周膜细胞（如图2）。

2.3 牙周膜干细胞生物学特性研究

2.3.1 克隆形成率：10～12天有细胞克隆形成，镜下观细胞呈集落状生长，细胞形态成梭形，体积较小，排列紧密，中心细胞界限不清，呈圆形或不规则形状，周边细胞呈梭形或多角形。共获得克隆株43株，克隆形成率为14.93％。

2.3.2细胞周期分析：细胞周期动力学结果显示：大多数细胞处于G0/G1期(78.2％)，即静止期和DNA合成前期。G2期为2.3％，S期为19.5％。表明细胞增殖缓慢，大多数处于静止期或缓慢增殖期(如图3)。

2.3.3 细胞表型特征鉴定：表面抗原CD146和CD44检测阳性率为92.8％及91.7％，CD34和CD45阳性率为1.6％及2.3％ （如图4）。

2.3.4 免疫细胞化学染色：筛选培养的牙周膜干细胞中STRO-1及Vimentin均为阳性染色，具有间充质干细胞的特征（如图5～6）。

2.3.5 成骨诱导：成骨诱导液继续培养8天后，细胞呈复层生长，局部增厚，12天左右中央出现许多颗粒样改变，并逐渐连接成片，密度增高。21天左右孔板底部出现肉眼可见针尖大小灰白色小结节，并逐渐增大。茜素红染色可见红色矿化结节（如图7）。

2.3.6 成脂诱导：经成脂诱导液培养至第10天左右，可见细胞形态发生改变，较培养初期更为饱满，至21天时油红O染色阳性，细胞胞浆内有大量脂滴形成（如图8）。

3讨论

以往成体干细胞的分离纯化常用方法有密度梯度离心法、贴壁培养法、克隆化培养筛选，但这些方法操作繁琐，且所需时间较长，不利于临床应用。根据干细胞表面特异性受体能选择性结合或粘附其它信号分子的原理，采用免疫磁珠筛选、流式细胞分选法分离和鉴定干细胞己广泛开展[3,9]。Seo[1]的研究结果显示人牙周膜干细胞表达间充质干细胞的特异性标志STRO-1，并利用免疫磁珠筛选首次成功获得人牙周膜干细胞。Gay等[4]使用STRO-1抗体对牙周膜细胞进行标记后，通过流式细胞仪对其进行筛选，获得27％STRO-1阳性细胞。在本实验中，我们通过使用包被二抗的免疫磁珠对复合STRO-1的牙周膜细胞进行分离纯化，获得牙周膜干细胞，筛选程序简单、迅速，细胞活性保持较好。经细胞生长曲线测定，牙周膜干细胞较同一来源的牙周膜细胞生长慢，符合干细胞慢增殖周期的特点。

克隆形成能力是干细胞的特点，高秦等[10]对人牙周膜细胞进行了克隆化培养，结果显示细胞培养10～15天有克隆形成，克隆形成率为0.62％。Gay等[4]对牙周膜干细胞及骨髓基质干细胞的克隆形成情况进行了比较，发现牙周膜干细胞有50个克隆形成，骨髓基质干细胞有35个克隆形成，证实牙周膜干细胞有较强的克隆形成能力。成体干细胞处于由周围间质细胞及其所分泌的相关生长因子或配体形成的微环境中，这些生长因子或配体与干细胞相互作用，控制干细胞的更新和分化。故为提高克隆形成率并尽可能的保持纯化后的细胞的未分化状态，本研究借鉴了高秦等[10]人牙周膜干细胞克隆化培养的方法，收集了牙周膜细胞的培养上清与普通培养基以一定比例混合，制备成适应性培养基，对所筛选的牙周膜干细胞进行了克隆化培养，共得到43个克隆，克隆形成率为14.93％，证实所获得细胞具有干细胞自我更新的特性。

细胞周期是反映细胞增殖动力学的重要指标。干细胞是处于相对静止状态的一群细胞，这种慢周期的特点是大多数成体干细胞的共同特征[11-12]。但在外界因素作用下，干细胞周期也会相应变化[13-14]。本研究对所筛选牙周膜干细胞的细胞周期分析显示，与高秦等[10]的结果有一定差异，可能原因有：①细胞来源不同，因不同个体的干细胞状态不会完全一致；②细胞获取方法不同，高秦等通过克隆化培养获取牙周膜干细胞，而本研究采用的是免疫磁珠直接筛选，不同的方法导致细胞所受外界条件刺激的不同，进而可能影响到细胞周期的变化。

目前，学者们还未找到牙周膜干细胞的特异性表面抗原标记物。Seo等[1]的研究结果显示牙周膜干细胞表达间充质干细胞表面抗原STRO-1及血管周围细胞表面标记物CD146及CD44。Nagatomo等[15]发现牙周膜干细胞表达细胞表面抗原CD105、CD166及STRO-1。Ivanovski等[16]发现牙周膜干细胞或骨髓基质干细胞均无CD14、CD45和CD34表达。高秦等[10,21]研究结果显示人牙周膜干细胞波形蛋白（Vimentin）及STRO-1呈阳性表达。在实验中我们对分离培养的细胞进行了表面抗原测定及免疫细胞化学染色，结果显示：Vimentin及STRO-l染色阳性，显示其间充质干细胞来源，此外，流式细胞分析结果显示间充质干细胞标记物CD44及CD146在牙周膜干细胞中高表达，而内皮细胞标记物CD34，造血系细胞标记物CD45的表达极低，从正反两方面证实了以往学者的结论。而多向分化研究结果也证实牙周膜干细胞可以经诱导分化为成骨细胞及脂肪细胞，符合干细胞特征。

综上所述，本实验所筛选培养的人牙周膜干细胞为多角形、成纤维型细胞外观，具备克隆形成能力及慢细胞周期特点，免疫细胞化学染色及流式细胞术检测证实所培养细胞表达CD44、CD146、Vimentin、STRO-1，不表达CD34、CD45，均与文献报道一致。此外，经诱导培养，所培养细胞可分化为成骨细胞及脂肪细胞，进一步证实牙周膜干细胞具有多向分化能力。

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[15]Nagatomo K,Komaki M,Sekiya I,et al.Stem cell properties of human periodontal ligament cells [J].J Periodont Res,2006,41:303-310.

篇7

1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。

2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。

二、实验原理

当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶 液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。由于原生质层比细胞壁的收缩性大，当细胞不断失水时，原生质层就会与细胞壁逐渐分离开，也就是分升了质壁分离当细胞液的浓度大于外界溶液的浓度时，外界溶液中的水分就透过原生质层进入细胞液中，整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态，使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。

三、材料用具

紫色洋葱鳞片叶、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、刀片、吸水纸、清水、0.3g/ml蔗糖溶液

四、实验过程（见书P60）

物理实验报告 ·化学实验报告 ·生物实验报告 ·实验报告格式 ·实验报告模板

五、讨论

1．如果将洋葱表皮细胞浸润在与细胞液浓度相同的蔗糖溶液中，这些表皮细胞会出现什么现象？

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关键词：财务分析；报告；认识

中图分类号：F276 文献标识码：A 文章编号：1001-828X（2012）07-0-01

当前，企业面临的市场竞争环境越来越激烈，企业生存、发展和获利也变得不确定，企业利益相关人为了自身利益的需要，希望及时、全面和客观了解企业的财务经营状况，以便做出正确的决策。而财务分析报告能直观的揭示企业经济内涵，满足管理层、债权人对企业经济活动的事前、事中预测和决策分析的需要。但作为财务工作人员，一般长于实务处理而短于财务报告的分析，苦于无问题可分析或拘囿于模式化分析。为此，笔者结合工作实际，谈谈自己对如何提升财务分析报告能力的认识。

一、财务分析报告概述

1.财务分析报告的类型

财务分析报告按内容划分为综合分析、专题分析和简要分析报告。综合分析报告是对企业整体财务情况进行分析，涵盖了企业所有财务报表的分析，主要用于年度、半年和季度财务分析，属于定期财务分析的范畴。它具有涉及面广，信息量大的特点，对财务报告使用者做出各项决策有深远的影响，也是企业财务分析报告最主要的内容。专题分析报告是对企业经济活动中的重大经济问题或薄弱环节进行专门分析，属于不定期财务分析的范畴。它具有时间不固定、分析事项单一的特点，利于财务报告使用者解决企业的特定问题。简要分析报告是对主要经济指标进行概要的分析，主要用于月度或旬的财务分析，属于不定期和定期财务分析的范畴。它具有简明扼要、重点分析的特点，主要反映企业特定财务指标的分析或预测今后发展趋势。

财务分析报告按分析时间可分为定期分析报告与不定期分析报告。定期分析报告主要受到财务制度强制性规定，主要向外部利益相关人提供企业一定时期的财务状况，如综合分析报告。而不定期报告不具有强制性规定，主要用于内部管理者对企业进行财务分析和财务决策，如专题分析报告。

2.财务报告的分析方法

财务分析方法主要有比较分析法、比率分析法和辨证分析法。比较分析法、比率分析法是基础的分析方法。比较分析法是通过对经济指标在数据上的比较来揭示经济指标之间数量关系和差异；比率分析法是将两个性质不同但相关的指标加以对比，找出客观联系。辨证分析法是财务报告分析最重要的分析方法，主要按照寻找差异-分析原因-措施建议的程序，揭示比较分析和比率分析中反映出企业财务报表中的变化和存在的问题的原因，通过对问题的深入分析，提出合理可行的解决办法并形成相应的财务分析报告。

二、财务报告分析常见问题或不足

1.财务分析报告高度不够

财务分析报告的编制是财务部门，而阅读者主要是企业管理层，由于受到部门的局限性，财务分析报告只能站在财务的角度，而难以站在企业管理的高度。易出现“就财务而财务、就数据而数据”的问题，财务分析视角难以拓展，不能将指标数据和数据背后的经营实质联系起来。这种与企业管理脱节，不能满足企业管理层“真正想了解的信息”，只能称为数据的罗列表述，而不是真正意义上的财务分析报告。

2.财务分析方法不科学

企业经营是一个动态的过程，财务报表数据虽然是静态的，但这种静态是相对的，而动态是绝对的，所以财务分析报告需要树立辨证分析法的观点来分析静态的数据。目前，存在问题是分析方法不科学，习惯于静态分析，靠经验来判断静态数据背后的动态问题。造成无法揭示问题的本质，结果只能是“抓大放小、避重就轻”。

3.财务分析整体性差

在进行财务分析时，只有将多种指标结合起来，从整体上进行分析，层层深入、递进式分析判断，才能深挖出指标背后的问题。财务报表分析人员在进行财务分析时，常常习惯于单项指标分析和判断，比如一个财务指标数值受到多种因素的影响，但分析时一般局限于一个指标进行反复分析，鲜于举一反三的分析。即使进行多个指标综合分析判断时，一般也只是将各个指标数值简单地加权计算，而没有将各个指标数值之间的因果关系有机地联系起来，更难以分析出指标背后的经济实质。

三、如何提升财务分析报告能力

1.充分了解财务分析报告的目的

首先，在撰写财务分析报告之前要明确分析报告的类型，有针对性的收集资料，以提高分析的效率和效果捕捉报表使用者希望“真正了解的信息”。其次，要辨证的进行财务分析，不同指标用于不同的财务分析目的，结果也不同，所以应辨证看待分析结果。比如资产负债率指标，当评价企业偿债能力时，是越小越好，但用于财务杠杆分析，高的资产负债率，可能表明企业充分利用财务杠杆效应，对企业财务最大化不是劣势而是优势。再次，要了解财务报告对象不同，对于对外公布的财务分析报告，应使用约定俗成的语言，注重分析的完整性，防止社会公众的误解。对于企业管理层使用的财务分析报告，语言力求通俗易懂，要重点进行问题分析。

2.注意财务分析报告格式的规范化

财务分析报告属于写作的范畴，但不同于一般的文学作品，其更倾向于公文类的模式。财务分析报告内容一般包括前言段、说明段、分析评价段和建议措施段，根据分析目的不同可能有所取舍。一是要先草拟提纲和段落层次，然后搜集整理相关资料，确定分析方法，按照找出差异—原因分析—建议措施步骤来反映问题和揭示问题。二是要注意分析的广度和深度，有所侧重。分析问题过广可能使财务分析报告抓不住重点，但分析的过窄可能使问题交代的不清楚。三是在财务分析报告形式上可以充分利用计算机应用技术，采用文字处理与图表相结合的方法，使财务分析报告形象生动、一目了然。在格式上力求简明扼要，对重大差异或重要的指标应标以特殊符号，以引起有关方面的重视。

3.财务分析报告应注意的事项

一是财务分析报告的写作人员要注重素材积累，多了解一些宏观经济情况，把握企业财务状况以外的客观原因。要重点搜集同行业竞争对手资料，因为同行是财务分析最好的“参照物”。二是要注意横向和纵向沟通，横向要和企业其他部门沟通，以全面了解企业经营情况，防止企业财务分析报告出现“坐井观天”现象。纵向要向企业管理高层多汇报、多请示，以了解企业未来经营战略的方向，吃透企业政策，使财务分析报告发挥“导航器”作用。三是要注重财务分析报告文字表达，行文要尽量流畅、简明，避免口语化。同时对财务数据多角度分析，避免轻易对财务数据下肯定结论，防止不准确的结论误导财务报告阅读者。

参考文献：

[1]张新民,钱爱民.企业财务报表分析[M].清华大学出版社,2007.

篇9

【关键词】 分娩； 无保护会阴接生； 会阴裂伤；

会阴产伤的发生率是评价产科质量的重要指标之一。对产妇而言，如何以痛苦最轻，影响最小的方式分娩是许多产科从业人员关心的重要问题，随着人们生活水平的提高和保健意识的增强，产妇及其家属对产科质量的要求也越来越高，采取有效的措施预防会阴产伤的发生，为患者提供安全的助产服务，具有重要的临床意义和社会价值。无保护会阴接生的少干预理念，给产妇和胎儿一个自然低创的分娩模式，本院于2012年底开展这项助产新技术，本文通过回顾性分析无保护会阴接生与传统托肛保护会阴接生法在会阴裂伤及第二产程时间、产后2 h出血量等方面进行比较，探讨无保护会阴接生的操作要点及临床疗效，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月-2013年3月本院采用无保护会阴接生产妇99例作为观察组，患者年龄（27.49±2.90）岁，孕37～41周，同时选取同期分娩的采用传统托肛法保护会阴产妇99例作为对照组，患者年龄（28.27±2.80）岁，孕37～41周，两组产妇均为经阴道分娩的足月、单胎、头位初产妇。骨盆测量均在正常范围，无会阴侧切指征，无第二产程延长及胎儿宫内窘迫，无妊娠期并发症、产前通过产检及B超排除巨大儿和生长受限儿等。

1.2 方法

1.2.1 观察组 采用无保护会阴接生法，产妇卧于多功能电动产床上，床尾抬高30°，呈半卧位，宫缩时产妇双手抱膝屈曲，贴近腹部，臀部抬高2～3 cm，臀裂以下离开床面，指导产妇正确运用腹压，在宫宿间歇时停止，当胎头拨露3 cm左右时，根据情况准备接生，待胎头拨露至会阴体后联合紧张时单手开始控制露头速度，同时不要有协助胎头俯屈的动作，不干预胎头娩出角度和方向。建议着冠前不超过1 cm的娩出速度，双顶径娩出时，指导产妇均匀短暂用力，一般都可在宫缩时娩出，无需刻意协助仰伸，放弃传统右手对会阴托压的保护动作，让胎头缓慢地以仰伸方式依次娩出顶骨、枕骨、额骨、鼻、口、颏。速度可较前略快，当胎头娩出后，挤净口鼻黏液，不要急于让胎肩娩出，耐心等待下一次宫缩，宫缩时双手托住胎头，产妇用力，尽量让胎肩自然复位，娩出，最后匀速出胎体。

1.2.2 对照组 采用传统的托肛法。胎头拨露至需要保护会阴时，消毒会阴巾放于阴道口与皮肤之间，以右手拇指与其余四指分开，利用手掌大鱼际肌及手腕部力量顶住会，宫缩时向上内方托压，间歇时保护会阴手稍放松.以免挤压过久引起会阴水肿，保护会阴直至胎儿娩出[1]。

1.3 评价标准 会阴裂伤评定标准：（1）会阴完整：会皮肤及阴道黏膜完整无裂伤；（2）Ⅰ度裂伤：会皮肤及阴道入口黏膜撕裂，未达肌层，一般出血不多；（3）Ⅱ度裂伤：指裂伤已达会阴体肌层，累及阴道后壁黏膜，甚至阴道后壁两侧沟向上撕裂，裂伤可不规则，出血较多；（4）Ⅲ度裂伤：裂伤向下扩展，外括约肌断裂[2]。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，两组产妇会阴撕裂程度比较采用秩和检验，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，以P

2 结果

3 讨论

无保护会阴接产法是利用分娩机转中胎头枕骨以耻骨弓为支点的仰伸动作，充分伸展以会阴体为核心的盆底组织，阴道口得以最大化，最后达到胎头双顶径娩出的径线，会阴整体的充分伸展与扩张保护了会阴，减少了撕裂伤发生[3]。无保护会阴接产法近零俯屈的方式让胎头持续、缓慢仰伸，盆底的各肌肉束向外、向两侧呈放射性伸展，下方会阴体完全伸展变薄，两侧充分扩张，胎头的娩出压力转向耻骨，同时接生过程中强调半卧位分娩，旨在将骨盆出口充分打开，以最大径线将胎儿娩出。上述资料中两组均无Ⅲ度会阴裂伤，其中无保护会阴接生法6例会阴完整，会阴裂伤多为表浅伤，会阴裂伤程度和传统会阴保护接产组相比，差异有统计学意义（P

虽然分娩是生理过程，但是许多产妇并不能很好地调整自己心态，对分娩存在内心恐惧和不安，情绪过于紧张，就会影响到整个产程进展，从而造成难产，无保护会阴接生法中助产人员与产妇的沟通以及助产士的耐心尤为重要，应该持续给予产妇心理及情感上的鼓励，消除产妇的内心恐惧感，宫缩间歇时应与产妇沟通使其均匀用力，胎儿双顶径娩出后应继续指导产妇注意控制呼吸节奏。2篇国外的RCT 发现，助产士在分娩过程中帮助胎头俯屈并保护会阴，不能减少会阴损伤，但可以减轻产后疼痛。一项多中心前瞻性RCT 发现，在纳入的1076例产妇中，协助分娩组会阴裂伤的发生率为32.5%，不协助组为35.8%，其中Ⅲ度裂伤的发生率分别为2.7%和0.9%；协助分娩组会阴侧切率为17.9%，不协助组为10.1%，新生儿结局两组间比较则无统计学意义[7]。另一项RCT纳入5471例产妇，协助分娩组产后24 h疼痛的发生率为31.1%，不协助组为34.1%，会阴侧切在不协助分娩组明显减少，但手取胎盘的发生率增加[8]。

对两组孕妇第二产程时间比较差异无统计学意义（P>0.05）。实际接产时，在胎头即将着冠时，无保护会阴接产注重控制仰伸速度，讲究单手控制防止露头速度过快，产力均匀的情况下，提倡宫缩时娩出胎儿，使胎头按顶骨、枕、额骨、面、下颏，依次娩出，同时复位、外旋转，胎肩下降、娩出，对于产力过强的产妇，则于宫缩间歇期缓慢娩出，整个胎体的娩出几乎都是一个自然而然的分娩过程，减少了人为手法干预的风险，预防了产伤的诱因。一项RCT纳入了252例采用硬膜外麻醉的孕妇，在其宫口开全后立即用力与休息后用力比较。宫口开全后休息后再用力能减少产妇用力时间，但对于胎儿的Apgar评分、脐带血pH值、会阴损伤发生率、器械助产的使用率，两者没有差别[8]，无保护会阴接产没有过快加速产程，也没有刻意阻挡胎儿的娩出，而是让分娩在胎儿和产道相互可适度的时限内完成。

无保护会阴接产对于助产人员的培训要求、产科服务模式的转变及与传统接产理念的撞击，尤其潜在的风险等影响因素还需要探索研究，无保护会阴接生操作方便，以产妇为中心，减少助产士颈椎、腰椎疲劳，避免职业病的发生，符合自然分娩、绿色分娩的理念[9]，会阴保护效果良好，值得临床研究推广。

参考文献

[1]项静.浅谈分娩中会阴保护[J].实用医技杂志，2005，12（10）：2827.

[2]夏海鸥，顾炜.妇产科护理学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2006：133.

[3]周国霞，栾香梅，朱梅仙.保护会阴方法与技巧[J].中国现代药物应用，2010，8（8）：236-237.

[4]李金科，许良智.分娩期会阴保护的证据[J].中国循证医学杂志，2008，8（8）：673-677.

[5] Aasheim V，Nilsen A B，Lukasse M，et al.Perineal techniques during the second stage of labour for reducing perineal trauma[J].Cochrane Database Syst Rev，2011，7（12）：66-72.

[6]马明华.无保护会阴接生法降低初产妇会阴侧切率的效果观察[J].青海医药杂志，2012，42（6）：73.

[7] McCandlish R，Bowler U，van Asten H，et al.A randomised controlled trial of care of the perineum during second stage of normal labour[J].Br J Obstet Gynaecol，1998，105（12）：1262-1272.

[8] Hansen S L，Clark S L，Foster J C.Active pushing versus passive fetaldescent in the second stage of labor：a randomized controlled trial[J].Obstet Gynecol，2002，99（1）：29-34.

篇10

一、调查目的

大学生是新新人类，对新鲜事物比较好奇，为了揭开网购的真实面目，让更多的人了解网购，对在校大学生进行此次调查。

二、调查对象及方法

1、调查对象:青岛理工大学经贸学院（由于调查的困难性，选取了本学院进行调查）

2、资料收集方法:采用问卷调查方法调查。向所取得的样本中的个体发放《大学生网上购物问卷调查》了解学生关于上网购物基本情形和情况。

3、调查方法：对经贸学院的全部学生（限于三年级以下）进行分层，分成大一，大二，大三三层，在总体中抽取容量为60的样本，在每层中进行系统抽样，根据每层样本量占总体的比重，在三层中分别抽取容量为22，22，16的样本。随机选定某一学号后，间隔10进行抽样，得到样本。

三、调查的内容：

（调查问卷附在最后一页）

四、调查结果分析

1、通过对样本中网购人数的调查，得到以下数据：大一学生样本中有9人进行网购，在该层中的比例为56.25%；大二的有15人，占该层的68.18%；大三的有11人，占该层的50%。

以95%的把握推断经贸学院中网购人数比例范围为45.36%～70.44%

2、在没有在网上购物的同学中，有近50%的同学认为网购不安全，而在有过网购行为的同学中有97%的同学觉得网购值得信任。另外，在前者中有92%的人会尝试网上购物。

3、在网购人群中，因为节约费用而选择网购的占网购人数的62%，还有一部分同学是出于好奇和寻找新奇商品而选择网购。在众多的购物网站中，消费者该如何选择呢？有48.57%的网购者会把网站商品是否齐全作为他们选择购物网站的主要标准。其中，淘宝网名列前茅，有87.3%的同学选择在淘宝购物。

4、大家都在网上买些什么呢？经调查，数码产品位居榜首，占到总消费的37.7%，其次是服装27.87%，在网上买书也是个不错的选择，占到总数的19.67%。相比之下，由于食品的特殊性（保鲜等问题），却几乎无人在网上购买食品。

5、本次调查中，还对同学们的网购消费水平进行了调查，有42%的同学每季网购一次，每月一次和每年一次的同学分别占总体的25.8%和27.5%。还有4.7%的网购达人平均每周一次。每次购物的平均交易金额在100以下和100～500之间的人数都占总数的42.8%，其他金额范围分布较少。

6、在网购过程中，难免会遇到一些困难，其中主要困难是商品描述不清楚，达到45%，其次是商品数目繁多和网站太多，网上市场太杂乱（21%），网购市场有待进一步提高。

五、调查结果总结

通过上述的调查报告，说明大学生在网上购物还不是很普及，但潜在很大的发展空间。阻碍他们开始网购的主要是安全因素，只要他们认为网购值得信任了，网购的方便，省时，商品齐群等优点一定会吸引绝大多数的人开始网购。目前，人们在网上消费的商品种类具有一定的局限性，网购要想得到更快更好的发展，就要优化购物体系，打破这种局限。购物网站是一个很好的平台，他能让我们实现资源共享，在网上我们可以找到最便宜的，质量最好的，最时尚的商品，坐在家里就可以买到世界各地的商品，未来网购一定会成为人们的主要购物形式之一。

附录

大学生网上购物调查问卷

1.您是否听说或接触过网上购物？

说明：如果您选择“A”或者“B”选项，请只回答第2、3题

A从来没听说过

B听说过但没有接触过

C偶尔在网上购买物品

D经常在网上购买物品

2.您没有网购经历的原因是什么？

A网购流程太复杂

B网购不安全

C其他

3.如果您没有网购经历，那么您接下来会考虑尝试网购吗？

A会B可能会C不会

4.您经常登陆哪个购物网站？

A淘宝B易趣C拍拍D当当E其他

5.你选择网上购物的理由是？

A节省时间、节约费用

B操作方便

C寻找稀有商品

D出于好奇，有趣

E追求时尚

6.您认为购物网站哪些最吸引您？

A打折优惠

B节日促销

C商品种类齐全

D商品介绍全面

E其他

7.在网上购物你经常选择的产品？

A图书B服装C化妆品D礼品E数码产品F食品

8.您平均一次购物金额大约在？

A5000元以上B1000-5000元C500-1000元D100-500元E100元以下

9.您对网上购物是否信任？

A非常信任B信任C一般D不信任E非常不信任

10在网上购物过程中，有无受骗经历？

A有B没有

11.您在网上购物的频率？

A每周一次B平均每月一次C平均每季一次D平均每年一次

12.您在网上购物遇到的主要困难是什么？

A商品描述不清楚

B品种类和网站数目太多

C面复杂，不易操作