基因编辑范文

导语：如何才能写好一篇基因编辑，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

现在研究人员已经能用CRISPR基因剪刀来编辑猪、鱼、猴子、羊、兔子、老鼠、蝴蝶等动物的基因。下面可以梳理一下CRISPR基因剪刀编辑动物基因产生了哪些对人类有益的典型动物。

治疗杜兴氏肌萎缩小鼠

杜兴氏肌肉营养不良症（又称杜兴氏肌萎缩，DMD）是遗传性肌肉萎缩疾病。该病的致病基因存在于X性染色体中（Xp21），是通过性连锁隐性遗传而致病。该病由表达肌萎缩蛋白的基因受损引发。肌萎缩蛋白能够增强与保护肌纤维，当肌萎缩蛋白缺失时，骨骼肌与心肌将会发生退化。

男性只有一个X性染色体，因此该病患者大多为男性，患者经常需要坐轮椅，利用呼吸机辅助呼吸，寿命一般在25岁左右。若女性的一对X性染色体中的一个携带有变异的杜兴氏肌萎缩基因，便成为一个杜兴氏肌萎缩的携带者，其儿子有二分之一的机会成为患者，其女儿则有二分之一机会成为杜兴氏肌萎缩基因携带者。

目前，对于这种疾病还没有有效的治疗方法，CRISPR基因剪刀的出现为根治这种疾病带来了希望。CRISPR基因剪刀需要与Cas9配合操作，后者是一种由核糖核酸（RNA）指导的细菌核酸内切酶家族，被CRISPR系统用来在特异性的基因序列位点上识别和切割双链DNA，因此通常称为CRISPR- Cas9基因剪刀。

CRISPR-Cas9基因剪刀当然不能先在人身上使用来治疗疾病，而是要进行动物试验。现在，研究人员利用CRISPR-Cas9基因剪刀对患杜兴氏肌萎缩的小鼠进行试验，获得了较好的效果。

对小鼠治疗杜兴氏肌萎缩的原理是，CRISPR-Cas9基因剪刀可通过一节RNA将Cas9酶移动到基因组中导致该病的致病基因位置，然后该酶能够将特定的致病DN段切除，随后细胞通过损伤修复机制将断裂的DNA链连接，或者利用DNA模板创造新的序列。

现在，美国西南医学中心的研究人员利用腺病毒将CRISPR-Cas9基因剪刀导入杜兴氏肌萎缩小鼠胚胎中，以切除有缺陷的编码肌萎缩蛋白的基因片段，结果使得出生后的小鼠能够产生新的肌萎缩蛋白，改善了小鼠杜兴氏肌萎缩的症状。

另外，美国杜克大学的另一个研究小组也利用CRISPR-Cas9基因剪刀，直接对成年小鼠的腿部肌肉进行治疗，结果让小鼠的肌肉产生了正常的肌萎缩蛋白，力量得到增强，而且还改善了小鼠心脏等其他部位的肌肉力量。

这些研究结果也意味着，CRISPR-Cas9基因剪刀可以用来治疗人的杜兴氏肌萎缩，但是，还需要先进行人体试验，并且需要得到伦理批准。

人血白蛋白（HSA）是人血浆中的蛋白质，其作用既广泛又重要，因为它们在体液内可以运输脂肪酸、胆色素、氨基酸等，同时能维持血液正常的渗透压。人血白蛋白还可用于治疗休克与烧伤，用于补充因手术、意外事故或大出血所致的血液丢失，也可以作为血浆增容剂。

但是，如果人血白蛋白只从人体获取，如从献血者的血液中提取，不仅数量有限，而且价格昂贵。因此，研究人员一直希望利用基因工程改造动物，如猪或羊来生产人血白蛋白。现在的CRISPR-Cas9基因剪刀为实现这一想法提供了理想的工具，因为通过基因编辑动物，如编辑猪，可以让猪生产人血白蛋白。

但是，基因编辑猪也会有两种结果，既产生猪血白蛋白，也可产生人血白蛋白，要解决这个问题，就只能是在编辑猪的基因时，把敲入的人类基因放在位于猪血白蛋白产生基因的下游。北京蛋白质组研究中心的研究人员通过使用CRISPR-Cas9基因剪刀，将人血白蛋白的基因敲入到猪血白蛋白基因位点下游起始密码子，希望人血白蛋白基因能在猪内源性白蛋白基因的转录调控下表达，同时阻止猪内源性白蛋白基因的表达。

研究人员在10只巴马母猪体内植入了300个改造过的受精卵，之后有5只猪成功怀孕，产下了16只巴马猪仔。结果发现，这16只猪仔都带有预期敲入的生产人血白蛋白的基因，在它们的血液中也能检测到人血白蛋白。不过，各只幼猪体内的人血白蛋白含量有所不同。因此，这只是一个初步的成功。

更重要的是，要在未来的繁殖试验中查验敲入的人血白蛋白基因是否能在这些猪的后代中遗传下去。如果能稳定遗传下去，或许未来能让这些基因编辑的猪生产人们所需要的人血白蛋白。

人体器官供不应求制约了器官移植治疗疾病和挽救人的生命，因此，一直以来，研究人员在想方设法采用动物的器官供给病人移植，猪的器官就被视为是一个很好的人类器官的代用品。

但是，采用猪的器官要解决两大问题：一是猪的器官可能引发器官受者的免疫排异反应，二是猪身上的一些隐藏的病毒和微生物可能对人有害。

猪的器官对于人是异种器官，异种器官移植面临的免疫学排异反应表现为超急性排斥反应（HAR）、急性血管排斥反应（AVR）、细胞介导的排斥反应和慢性排斥反应。1993年，美国匹兹堡大学的外科医生库珀等人发现，大多数人类免疫反应的肇事者就是源自猪血管内皮细胞上的抗原，称为α-1，3-半乳糖，这是一种糖分子，能在几分钟内引发器官排异。但是，一种名为α-1，3-半乳糖基转移酶的物质对于产生这种糖是必需的，将产生这种酶的基因敲除，就有可能缓和免疫排异反应，从而让猪器官供人类移植。

另一个问题是，猪体内有多达几十种潜藏的或休眠的逆转录病毒（PERV）。尽管对猪的这些逆转录病毒是否对人类有害存在争议，但较为普遍的看法是，如果使用猪的器官，就应当消除这些隐患，以免移植猪器官后引发其他疾病。因此，如果要使用猪的器官，就必须敲除猪体内这些逆转录病毒的基因，以确保万无一失。

于是，去除或修改猪的α-1，3-半乳糖基转移酶和其他几十种逆转录病毒基因就历史地落到CRISPR-Cas9基因剪刀的肩上。美国哈佛大学的丘奇教授领导的团队在2015年10月宣布，他们的两个研究小组已经能完成去除或修改猪的α-1，3-半乳糖基转移酶基因和其他几十种逆转录病毒基因的任务。

一个研究小组利用CRISPR-Cas9基因剪刀对一组猪胚胎进行了20多个基因的改造，其中就包括编码猪的α-1，3-半乳糖基转移酶的基因，从而阻止了猪细胞表面的α-1，3-半乳糖产生，也就消除了猪器官上面的抗原，可以避免猪器官移植到人体时触发免疫反应。

另一个研究小组利用CRISPR-Cas9基因剪 刀编辑猪胚胎中的62个猪内源性逆转录病毒基因，让这些病毒失活。这项工作非常重要，因为这些病毒嵌入在所有猪的基因组中，无法进行处理或是被中和。由于担心它们有可能给人类患者带来疾病，猪器官迟迟不敢用于人类。

现在，由于解决了这两个问题，即消除了引发免疫反应的α-1，3-半乳糖基转移酶基因和猪内源性逆转录病毒基因，下一步将有可能把猪的器官移植给人。不过，在对人进行移植前，还要通过动物试验来验证，例如，对狒狒和猴子移植经过CRISPR-Cas9基因剪刀编辑的猪的器官，如肺、心脏和肝脏。

美国马里兰大学医学院的外科医生已经在做这种动物试验。他们从一头经过CRISPR-Cas9基因剪刀编辑的成年猪身上摘下肺，移植给一只6岁的狒狒。未来，这一研究结果将会公布，以此论证，猪的器官是否可以移植给人。

大力士和天狗

除了猪与人的生理和代谢相似、器官大小差不多之外，狗与人的生理也比较接近，因此，研究人员一直希望建立狗的动物试验模式，为人类服务。现在，CRISPR-Cas9基因剪刀的出现让中国研究人员创造了一种特殊的狗，一只称为大力士，一只称为天狗。

中国科学院广州生物医药与健康研究院的赖良学团队利用CRISPR-Cas9基因剪刀敲除狗的肌肉生长抑制素基因，以增强狗的肌肉能力，因为该基因对骨骼肌生长具有抑制作用，被敲除后，肌肉生长发育能力就会增强。

研究人员最初利用CRISPR-Cas9基因剪刀对60多个狗胚胎进行编辑，然后把胚胎植入母狗体内孕育，诞生了27只小狗，但只有2只（一公一母）小狗的肌肉生长抑制素基因被敲除。肌肉生长抑制素基因被敲除的狗的肌肉在4月龄时就显得比普通狗更为发达，研究组将两只狗分别命名为大力士（公）和天狗（母）。

预计这种基因敲除狗在成年后将具有更强的运动能力，适合狩猎以及军事应用。由于狗与人的代谢、生理以及解剖特征相似，这类由CRISPR-Cas9基因剪刀编辑的狗会被用于治疗人类的一些遗传病，如帕金森病、重症肌无力、肌萎缩侧索硬化症（ALS，渐冻人症）的试验。

篇2

农业时代的开启

“遗传”，听起来是个人人都能理解的名词。中国人说“种瓜得瓜，种豆得豆”，英美人说“like father like son”。这些俗语里反映的生物代际之间的相似性，就是遗传。先人们大概早就发现，不管是动物还是植物，不管是生物的外形、行为，还是性格，这些性状都能在一代代的繁衍中顽强地延续和保留下来。

实际上，早在人类文明开始之前，人类就已经充分―尽管也许是下意识―观察到了遗传现象的存在，甚至已经开始利用遗传规律改善自己的生活了。

现代人类的祖先可以追本溯源到数百万年前的非洲大陆。在两百多万年的无尽岁月里，先祖们在非洲大陆上采集植物果实、捕获动物，过着靠天吃饭、随遇而安的日子。人类文明的曙光出现在距今十几二十万年前。那时，现代人的直系祖先―人属智人种―出现在非洲大陆，并且很快一批批地走出非洲，在全世界的各个大陆和主要岛屿上开枝散叶，也把采集和狩猎的固有天性带到了世界各地。在那个时候，还压根看不出我们这些身材矮小、面相平凡的先祖会在日后成为整个地球的主宰。

然而，就像突然拥有了某种未知的魔力一般，差不多从一万年前开始，在世界各地快乐采集和狩猎的智人先祖们，几乎在一眨眼间就改变了赖以生存的生活方式。这些变化开启了农业时代，也最终催生了今天建立在发电机、汽车、互联网和生物技术基础上的全新人类社会。而这一切变化的开端，就是祖先们对于遗传规律的利用。

在贾雷德・戴蒙德的名著《枪炮、病菌与钢铁》中对此有着生动详尽的讨论。就在人类先祖走出非洲的必经之路上，地中海东岸生长着繁茂的野生小麦，它们的种子富含蛋白质和淀粉。不难想象，当生活在中东新月沃地的人类先祖们在偶然间发现这种植物后，一定会如获至宝地将它们作为日常采集和储藏的对象。对于先祖们来说，这和他们数百万年来在非洲大陆的日常采集工作并无分别。

但是如果先祖们想要把这些野生小麦挖出来，为他们提供稳定的食物来源，就会遇到一些棘手的问题。野生小麦的麦穗会在成熟后自动从麦秆上脱落，将种子尽力播撒到周围的泥土里。这是这些禾本科植物赖以生存繁衍的性状之一，但这也使得人类先祖想要大规模收获小麦种子变得非常困难。后来，在某个不知名的具体年代，生活在中东地区的远古居民们无意间发现了一些遗传变异小麦。这些小麦的麦穗即便成熟以后，也不会自动脱落。

泛生子的概念

从理性高度思考遗传本质

很容易想象，如果这些变异小麦出现在野外，我们只有死路一条。因为它们完全无法通过脱落的麦穗散播自己的后代。但这些变异植株对于我们的先祖们来说却无比珍贵，因为这样的遗传突变小麦会大大方便他们在固定时间大批收割麦穗、储存麦粒！更要紧的是，先祖们一定也在无意间发现了遗传的秘密―种瓜得瓜，种豆得豆，因此这些仿佛是上天赐予般的神奇的小麦种子，也将会顽强地保留这种对人类先祖而言―而不是对小麦自身，极其有利的性状。所以我们可以想象，先祖们可能会将这些奇怪的植物小心移植到村庄周围，用心呵护，直到收获第一批成熟的种子。这些种子将成为下一年扩大种植的基础。就这样，伴随着一代代人类先祖们的细心发现、栽培和收获，符合人类需要的优良性状被保留了下来，一直保留到今天。这些无意间发现的遗传突变小麦，可能标志着人类农业社会的开端。

最早从理性高度思考遗传本质的，是同样生活在地中海边的古希腊人。在古希腊哲学家德谟克利特和希波克拉底看来，遗传现象必然有着现实的物质基础，不需要用虚无缥缈的神来解释。在他们的想象里，遗传的本质是一种叫作“泛生子”的微小颗粒。这种肉眼不可见的颗粒，在先辈的体内无处不在，忠实记录了先辈从形态到性格的各种性状，并且会在过程中进入后者体内。以泛生子颗粒承载的信息为蓝图，子代得以表现出对先辈们的忠实模仿。

必须承认，泛生子的概念本身，其实并没有解决任何实际问题。或者刻薄点说，这只是把人们习以为常的遗传现象用一个听起来晦涩难懂的名词概括了出来而已。但是这个从现象到概念绝非毫无用处。至少，借用这个概念，人们可以把许多看起来很不一样的现象联系起来。

例如，无性生殖―微小的细菌和酵母能够一分为二产生两个后代；有性生殖―雌雄家畜后会产生出一群嗷嗷待哺的小崽儿；甚至还包括果树的嫁接―为什么果树嫁接后的果实会带有接穗和砧木的共同特征，不就是因为泛生子颗粒能够从砧木毫无障碍地流动到接穗里面去，和接穗的泛生子合二为一嘛。

因此，这个生命力顽强的概念从古希腊时期一直流传到了近代。甚至在19世纪中期，在达尔文创立进化论，为地球生命和人类的起源找到科学解释的时候，他仍然借用泛生子的概念作为自然选择理论的遗传基础。

进化论遭到的批评

宗教人士的攻击与严肃的科学批评

在达尔文看来，一个生物个体的所有器官、组织乃至细胞，都碛凶约鹤ㄊ舻姆荷子颗粒。手的泛生子记录着每个动物的手掌大小、宽窄、掌纹乃至毛发的生长位置，眼睛的泛生子当然少不了记录眼睛的大小、虹膜的颜色等。在的过程中，来自父母双方的泛生子融合在一起，共同决定了后代们五花八门的遗传性状。

更要紧的是，泛生子携带的生命蓝图一旦出错，就会导致后代遗传性状的“突变”，而这些突变，就是达尔文进化论中自然选择和适者生存的物质基础。正是因为有突变，一代代生物个体才会具有微小但能够稳定遗传的差异，而这些遗传差异影响着生物个体在环境中生存和繁衍的能力，并最终导致适者生存。

达尔文的进化论在诞生后遭到了猛烈攻击，特别是在宗教界人士和虔诚的信徒们看来，达尔文的学说亵渎了人类万物之灵的神圣性，也把传说中按照自己的模样造人的上帝置于可有可无的尴尬地位。但很少有人知道的是，进化论同样遭遇了严肃的科学批评。热力学创始人之一、物理学家开尔文勋爵当时估算出地球的年龄至多不会超过一亿年，而这点时间远远不够积累出达尔文进化所需要的五花八门的遗传突变（当然，后来人们意识到地球的年龄远大于此）。

古生物学家们对此发出了诘难，按照进化论，地球上必然存在许许多多物种之间的中间形态，但是它们的化石又在哪里呢？有一个批评可能是最致命的，因为它声称发现了进化论和遗传融合理论的深刻矛盾，换句话说就是，达尔文辛辛苦苦为进化论找到的遗传基础，可能根本不支持进化论的声明！这一批评来自苏格兰工程师、爱丁堡大学教授亨利・弗莱明・詹金。他评论说，按照达尔文的进化论，生物的遗传物质需要经历漫长、微小的突变过程，才能产生足够显著的形状变化，最终造就地球上千万种五花八门的物种。

新书速递

冷暴力

作者：[法国]玛丽-弗朗斯・伊里戈扬

出版社：后浪丨北京联合出版公司

出版日期：2017年6月

定价：38.00元

本书首次提出了“精神虐待”这一概念，它广泛发生在婚姻、家庭和职场中，施虐者通过拒言语歪曲、讽刺、嘲笑、轻蔑、否定人格等常用手段来欺凌、控制受虐者，使这种关系持续下去，让受虐者无法逃脱。

日本新中产阶级

作者：[美国]傅高义

出版社：上海译文出版社

出版日期：2017年5月

定价：60.00元

傅高义在学术生涯之初被斥为“乡下人”后，意识到一个社会学家如果从未在另一种文化中生活过，何谈理解本国社会？1958年至1960年，他来到东京市郊展开田野研究，描写日本社会快速变迁之际的“新中产阶级”―工薪族和他们的家庭。此书是他的成名作。

外婆的道歉信

作者：[瑞典]弗雷德里克・巴克曼

出版社：天津人民出版社

出版日期：2017年5月

篇3

“队长，那些病毒体已经冲上来了。”

“什么？那些东西竟然突破了我们的五道防线？”

“是的，他们拥有尖利的爪子和极快的奔跑速度，而且那些大的病毒体还有能发出一种毒气！”。

“你去让01号小队带一些重武器和弹药，我们只带了轻武器和少量的子弹，对付那些病毒体还远远不够。”

“是，队长。”

“队长，那些病毒体已经快突破到我们这里了，根本出不去啊！”

“那我们只好搏一搏了，告诉队员们，让他们放近了病毒体再打，不要浪费子弹，我们的子弹不多了。“

“队长！“

“哦，原来是K博士啊，有什么事吗？”

“队长，我知道这栋楼里有隐形通道，离我们这里不远，可以出去。”

“那好，你先带队员们出去，我和02小队留下掩护你们”

“不行队长，你得先出去，要不然我们谁能安下心啊？”

“你们快出去！我一会就出去。”

“砰！”

“队长，那些病毒体已经冲破了我们的最后一道防线，你快走啊！”

“啊…………”

“不好了，队长被感染了，大家快走啊！”

第二章

“怎么办，队长被那些东西感染了，我们一定要为队长报仇啊！”

“我们还是先问问K博士这到底是怎么回事吧，一会还要与那些病毒体战斗呢。”

“嗯。”

“K博士！”

“哦，原来是队长手下的两位得力干将啊，有什么事吗？”

“我们是想问问这些病毒体是怎么回事？”

“哦，是这个问题啊，我也一直在研究这些病毒体，在刚才与那些病毒体战斗时，我发现从病毒体内飞溅出的液体不是血液，而是含有X成分的混合液体，这种液体一旦沾附在人的皮肤上，会被感染成与母体相同的傀儡，这些傀儡与其它病毒体不一样的一点在于被感染成傀儡后20个小时就会蒸发成有Z成分的蒸气。据说是一种叫SLX的病毒气体被人吸入体内后，会改变人体的基因，仅仅几秒钟就会变成病毒体。”

“那我们怎样才能将这些病毒体的基因改变成人的基因呢？”

“要改变这些病毒体的基因只能把一种叫FK的液体与X成分混合，才能将病毒体的基因改变，而这两种东西只有地表20000米以下的地方才有，想拿到这两种东西跟本就是妄想。”

“如果我们一直与病毒体战斗，我们必定失败，使地球陷入终极黑暗啊！”

“还是用最后的办法，G计划，虽然能让那些病毒体全部死亡，但是我们也会死亡。”

“那就是舍小家保大家。”

两个人回到队中了，把这个计划与队友们讲了，没有一个人反对。

尾声

K博士把G计划完成了。

病毒体、队员们和他们亲爱的队长在一时间内都化为了乌有。

G计划是什么呢？

就是投掷一颗F-SX型中子弹……

篇4

人类在追求美的过程中，创造了许多美的载体，琴棋书画，无一例外。所谓“琴棋书剑诗酒花”，“琴”首当其冲，古琴之声近于天籁，琴是极清幽高洁之物，弹奏时须静，环境静和人心静，“独坐幽篁里，弹琴复长啸”，琴韵是古今文人墨客不可或缺的精神生活的重要组成部分。陈源在《听琴》里幽默地说：（英国人）不爱莎士比亚你就是傻子，（中国人）不爱古琴你逃不了做牛。

叶灵凤《憔悴的弦声》，却传递了这样奇特的信息：两个互不相识的人，可以通过琴声成为知音，产生“同是天涯沦落人”的共鸣。让人联想到俞伯牙与钟子期的传说，联想到浔阳江边江州司马的故事。

对比琴的庄重与繁文缛节，“叶笛”这一小巧的乐器则显得亲切随意。中国人口众多，历史悠久，音乐形式自然也是多样的，拈一枚叶子，吹出动听的音乐，或许更贴近自然，更贴近我们回归自然的梦想。缪崇群的《叶笛》超越了笛声的空灵，深化的主题，使文章厚重起来。

对比这些轻灵的或是沉重的声音，“安塞腰鼓”则是“生命的赞歌、力量的赞歌。”文章和鼓声，同样气势磅礴，同样酣畅淋漓。使人为之振奋，让人感受到来自黄土高原的纯朴而年轻的力量，一种让人激动不已的崇高感。

音乐源于什么？我想，音乐一是源于人们对美的追求，对自然的改造；二是源于自然本身。大自然赐于我们许多无价的财富，天籁就是其一，天籁给我们创作音乐的灵感，因为只有这种声音，才堪称“天然去雕饰”，我们才能层层剥去浮躁的现实世界的外衣，寻找到“真”。周同宾的《天籁》不止写声音，还写人。写天籁的自然优美，写人的纯朴善良。

篇5

按照银监会2014年12月向商业银行下发的《商业银行理财业务监督管理办法（征求意见稿）》（下称“《征求意见稿》”）的意见，理财资金服务实体经济是国家支持实体经济的一大基调，在这一精神要求下，银监会鼓励商业银行设立直接融资工具，对接企业融资需求。目前商业银行理财资金投资于实体经济主要通过以下直接或间接方式：债券、非标准化债权类资产、部分权益类资产、理财直接融资工具、信贷资产流转项目、商品类以及部分其他资产。数据显示，目前理财资金投资商业、金融等服务业较多。

监管新规打破刚性兑付

目前，监管层对商业银行理财资金入市持谨慎态度，并不断要求银行理财资金服务实体经济。《征求意见稿》对银行资金入市有如下规定：理财资金投资不得有以下行为：第一，投资于境内二级市场公开交易的股票或与其相关的证券投资基金;第二，投资于未上市企业股权和上市公司非公开发行或交易的股份;第三，对于具有相关投资经验，风险承受能力较强的高资产净值客户、私人银行客户及机构客户的产品，不受本条控制。

另外，考虑到银行资金通过券商、信托等通道入市的可能性。《征求意见稿》规定，理财资金运用应以直接投资为主，确实需要利用通道投资的，原则上仅可嵌套一级通道业务，杜绝多重嵌套多重投资模式，进一步约束银行理财资金入市。

当前情况下，银行理财资金入市主要通过三种曲线渠道：券商两融受益权、伞形结构信托和股票结构化投资产品。

券商两融受益权一般都有高质量资产作保证，风险较低，收益率较高，是银行、基金、资管青睐的投资品种。但是目前监管条例规定不允许银行使用表内资金投资券商两融受益权，但是表外资产不受约束。据估计，银行理财资金投资两融受益权规模为3000亿元，在近期股市行情持续走强的情况下，券商融资需求也在增加，未来银行理财资金投资于两融受益权的规模将随着股市的走强而扩大，需要警惕的是，监管层对于股市高杠杆的严格控制。

投资伞形结构信托，即由银行发行理财产品认购信托计划优先级收益权，获取优先固定收益，融资客户认购劣后收益权，根据证券投资信托投资的表现，获取剩余部分收益。优先级买入方主要为银行，劣后级投资者主要为私募和高净值股票投资者，伞型结构信托杠杆最低为1：2，最高为1：5。数据显示，目前伞形结构信托规模为1500亿元，因此，粗略估计银行理财资金通过伞型结构信托入市规模约为750亿元到1250亿元，整体规模不大，但是发展速度很快，近期部分地区证监局开始叫停新增伞型信托，表明监管层对于股市杠杆的担忧。

二级市场股票结构化投资产品是指银行筹资资金作为优先级，财务投资者作为劣后者，二者形成资产管理计划，进行二级市场买卖。这一产品和伞形结构信托类似。

此次《征求意见稿》的出台，市场主要关注点包括“打破刚性兑付”和“允许商业银行以理财产品的名义开立资金账户和证券账户等相关账户，鼓励资产产品开展直接投资”。而且，2015年《商业银行法》的修改也有可能对这些方面进行重新立法，这将为银行理财业务的发展带来新的机遇。

当前，中国商业银行理财产品仍以封闭式非净值型为主，截至2014年6月30日，其占比已经达到了77.08%，这种封闭式非净值型理财产品经常存在刚性兑付。一方面投资者缺乏相应的投资知识，传统的思想使得投资者在购买银行理财产品时，对理财产品的购买条款理解不足，误以为银行理财产品预期收益率就是保证收益率，在收益率不及预期甚至出现本金亏损的情况下，就会出现投资者与银行的纠纷;另一方面，银行在开展理财业务时也存在不尽职的情况，投资者教育不到位，在理财产品投资收益率不及预期甚至出现本金亏损的情况下，银行为避免纠纷也多做出兜底等刚性兑付行为，投资者也会不再关注理财产品的风险，将其当作存款一样进行投资。此外，中国利率管制和高利率也为银行理财资金提供了较好的投资收益保障，一旦利率市场化加速导致利率降低，银行理财产品当前的高收益也会面临挑战。

打破银行理财产品刚性兑付的重要措施之一是实现理财产品净值化。数据显示，截至2014年6月30日，银行理财产品中非净值化产品占比为94.87%，净值化产品占比为5.13%。净值化产品有利于提高理财资金投资的透明度，有利于投资者理解理财产品的风险。目前，理财产品净值化受到诸如投资品种的限制。数据显示，截至2014年6月30日，理财产品资产约有68.49%投资于债券及货币市场、现金及银行存款，非标债权约占22.77%，协议存款和非标债权由于缺乏良好的流通市场，其风险定价不够成熟，未来改革的方向是资产证券化，为其提供资产定价和交易的平台，促进理财产品的净值化。

2013年10月，部分商业银行开始试点债权直接融资工具和银行发行资产管理计划。通过与理财产品的对比可以看出，银行资产管理计划主要特点有：定期公布净值、客户承担风险、透明度高。这也是《征求意见稿》要求的体现，实现理财业务真正回归到代客理财，达到“卖者有责，买者自负”的效果。在试点过程中仍然有一些问题，诸如，预期收益率仍然继续误导投资者，信息披露不完善。

结构型理财产品是将存款、零息债券等固定收益产品与各类金融衍生品组合在一起而形成的新型金融产品。结构性理财产品越来越受到银行的重视，主要有以下三点原因：第一，结构性产品的固定收益投资部分在会计核算上可计入结构性存款，有利于增加银行存款规模;第二，结构性理财产品有助于打破银行刚性兑付，受到银行欢迎;第三，结构性理财产品从原理上是把高风险和低风险的金融产品组合在一起，满足了中等风险偏好投资者的喜爱。

银行理财业务困境

中国目前的理财人群以中小投资者为主，中短期理财产品受欢迎程度较高。在这种情况下，商业银行把一般类的理财业务放到个人金融业务板块，以充分发挥商业银行大零售的优势，主要提供标准化产品;同时针对富裕阶层，商业银行一般设有理财中心，提供半标准化、半个性化的理财产品;对于超高端客户，商业银行一般设立私人银行或者财富中心，突出其私密性、专业性和专属性，全面提供个性化、定制化产品，目前，中国商业银行私人银行业务刚刚起步，方兴未艾。同时，商业银行针对不同群体，根据客户分层，结合其他业务部门，推出不同的卡服务和套餐。

从总体情况看，中国商业银行大零售理财发展快速，而且这部分理财需求占到全部理财业务的绝对多数，各大商业银行也争相布局大零售，拓展理财业务。但是针对富裕阶层和高端净值客户的服务还有待发展，这块业务主要受到以下因素的制约：首先，专业人才缺失，尽管高端理财服务前景很好，但是受传统观念影响，优秀人才从事此项业务的积极性不高，而且当前，私人定制化服务不到位，仍然以销售理财产品为主，这无法体现和发挥优秀人才的价值;其次，由于国外私人银行等高端理财服务主要通过全权委托，但是中国商业银行才刚刚试水，短期内难以取得客户信任;第三，当前商业银行收入以利息收入为主，中间业务收入由于利润占比较低，在全行业务板块中不受重视;最后客户分层不明晰，大部分大型、中型商业银行只有零售理财和私人银行两个部门，对于中间富裕阶层没有分层。

中国商业银行理财资管业务一般包括财富管理部门、资产管理部门、资产托管部门以及私人银行部。一般情况下，商业银行财富管理的组织模式分为三种：挂靠模式、平行模式和独立模式，目前中国商业银行财富管理处于刚起步阶段，财富管理多数挂靠于零售部门或者个人金融业务板块下，未来发展方向是专业化，品牌化。

一般而言，挂靠在零售部门的财富管理业务属于二级部门，国内多数商业银行属于这种情况，鲜有商业银行把财富管理与私人银行作为一级部门或者大事业部。美国商业银行经历较多的重组和并购，业务整合明显，因此将业务设置成大板块模式，类似于大事业部制，大中型银行把全球财富管理与私人银行作为一大业务板块，与商业银行、零售业务等平行。

私人银行起源于欧洲，已经历百年历史，中国私人银行业务才刚刚开始，但是发展很快，截至2014年6月30日，16家上市银行已经有13家开通私人银行业务，私人银行所在地多为上海和广州。据不完全统计，目前国内商业银行的私人银行管理的资产达到4.5万亿元，私人银行客户数量也达到35万人，人均管理资产规模超过1000万元。

目前，16家上市商业银行中有13家开设私人银行部，南京银行鑫梅花理财中心类似于私人银行，未来估计会有其他中小股份制银行推出私人银行。私人银行门槛规模为600万元或800万元，部分大行达到1000万元。从网点数量来看，截至2014年6月30日，中国银行设立33个私人网点，农业银行设立23个，建设银行10个，招商银行34个，平安银行12个;建设银行设立财富中心338个，中国银行设立财富中心273个，招商银行设立财富中心55个。

中国商业银行私人银行发展时间较短，目前处在起步阶段，业务不够成熟，由于受到监管制度的束缚、管理经验不足、缺乏业务人才等原因，中国商业银行私人银行业务下一步发展面临较大挑战。在经历了几年快速扩张之后，目前私人银行业务已经滑落到私人银行关注度的第六名，而排在前三名的分别是个人消费贷款、财富管理和个人经营性贷款。但是在西方，私人银行业务一般排在一级或者二级，地位足够重要，比如汇丰银行的全球私人银行就作为四大业务板块之一在全球开展业务。

2013年，国内商业银行私人银行规模大幅增长，中行私人银行业务收入增长超过70%，民生银行私人银行业务手续费和佣金净收入增长122.97%，并没有形成良好的业绩增长点。资产管理业务发展较好的招商银行披露，其私人银行业务在2010年实现净利润4亿元，占当年净利润的1.6%。

近两年成立的私人银行亏损不断，在跑马圈地的背景下，面临“福矿不富”的困局。目前私人银行的富豪客户主要是创一代、富一代，多为企业主，留住这些客户，就将给银行带来更多的公司业务资源，而且有利于降低银行和企业之间的信息不对称，这对于商业银行更加重要。

总体上看，中国私人银行还没有发生质变，如何突破传统的理财销售模式是当前私人银行发展的关键，而突破的关键又在于银行经营全面化，即拥有全牌照的银行将具有优先发展的条件，国内目前平安银行、中信银行依托背后金融控股集团，可以为私人银行客户跨越银行、资管、保险、信托、税务等全方位服务，真正做到专属性和专业性。招商银行的理财业务发展最为可观，其私银客户远超其他中小股份制银行，并与国有大行齐头并进，而且其创新基因更强。

当前中国私人银行的发展情况与银行业发展阶段密不可分，在利率市场化不断推进和金融自由化趋势的引导下，银行业越来越重视中间业务收入，比如投资银行、理财资管等。目前私人银行业务仍然处于挂靠于零售部门，部分商业银行抱有不落后的态度开展私人银行业务，并没有形成良好的利润增长点，相反它却成为了非私人银行业务收入增长的保障。

银行理财转向资管

从2004年光大银行推出首款理财产品算起，商业银行理财业务已经走过了10年历程，理财业务规模不断扩大，满足了不同层次投资者的需求，实现了居民财富的保值增值。2013年以来，互联网金融的崛起，吸纳了部分居民储蓄和理财资金，给商业银行理财业务带来竞争压力，2014年数据显示，商业银行储蓄存款和理财资金规模同时下降。在降息通道已经打开的情况下，商业银行理财产品的预期收益率出现微降，发行数量也有小幅减少。单纯依靠投资债券和货币市场，很难再为投资者取得满意的投资回报。此外，在利率市场化和民营银行的冲击下，国有银行和股份制商业银行也在积极拓展中间业务收入，理财资管业务是其中重要一项。

银行业开展理财资管业务最大的优势在于产品销售和客户数量，最大的劣势在于资产管理能力。基金和券商拥有相对完善的投研体系，经营比较成熟，但是银行的销售渠道对基金而言不可或缺。未来中国商业银行理财资管业务的发展方向主要是着力发展个人理财业务。

《征求意见稿》对商业银行开展理财业务做了进一步规定，鼓励商业银行直接投资，最多使用一层通道，避免层层嵌套，降低投资和交易成本，减少杠杆。据初步估计，券商托管的通道类业务高达8万亿元，银行理财资金是主要的来源。去除通道、转向直接投资对商业银行提出了更高的要求，尤其体现在投资和研究能力。

研究分析、投资和交易能力是银行理财业务转型资管业务不可或缺的能力，较强的研究能力为投资和交易提供了基础保障，这也是投资者非常看重的一面。与基金、券商相比，银行业由于长期受到严格监管，对资产管理涉足深度无法与基金、券商相比，这也是制约银行业资管业务的重要因素。当前理财资金主要投资债券和货币市场，权益类投资较少，而且商业银行多借助通道进行多元化投资，而资管业务投资方向几乎覆盖所有市场投资品种，商业银行需要在投研方面提前布局，不断提升代客理财的能力。可以考虑的一种形式是，银行资管投研可以模仿基金公司，在建立自身投资和研究部门的基础上，依托券商研发部门，等于壮大了买方力量。

目前，商业银行开展理财资管业务与券商、基金和信托等专业性资管机构相比，有明显的劣势，首先是监管层的限制很严，尤其是对权益类投资品种的限制，这极大限制了商业银行对产品线的丰富。从金融自由化趋势来看，商业银行理财资金投资股票、金融衍生品等权益类资产的限制将会打破。目前，按照监管允许的原则，商业银行可以在开放式净值型理财产品和结构化理财产品方面发力，一方面可以打破刚性兑付，减轻商业银行兑付压力;另一方面迎合投资者需求。商业银行在自身投研基础上，开发针对高净值人群的理财产品，比如招商银行针对金葵花客户推出的“金葵花”焦点联动系列产品，产品覆盖股票、债券、存款、黄金等品种。在多样化产品的基础上，为客户提供全面的服务，囊括财富管理、养老、旅游娱乐等多重领域。

理财直接融资工具是一种新型的创新金融工具，2013年银监会开始组织部分商业银行试点理财直接融资工具业务，2014年，试点范围进一步扩大，已有20多家商业银行参与试点。中国银行新推出理财直接融资工具对接中铁二十三局，以期支持实体经济发展。《征求意见稿》第三十七条对商业银行开展理财直接融资工具提出要求，商业银行发起设立理财直接融资工具，应坚持投资资金与企业融资需求的直接对接，单独建账管理和风险隔离，资金投向明确，直接服务实体经济。由于理财直接融资工具对于银行贷款具有替代功能，监管层乐于看到理财资金投向实体经济，这也是政策性金融的体现。但是商业银行在从事理财直接融资工具时，会考虑利润因素。

中国商业银行理财资管部门多隶属于零售或者个人金融板块，独立性和重要性地位不高。理财业务部门改革应伴随着商业银行业务变革而进行，在非利息收入不断受到重视的条件下，理财业务部门，包括资管部门和私人银行部门应该获得更多的独立地位。因此，在部门设置上把大资管部门作为一个整体作为一级部门，按照客户分层的原则，个人理财业务可以放在个人金融或者零售金融板块，为个人客户提供标准化金融产品;为私人银行部门配备专业私人银行家，并提供业务后台支持，以保证私人银行的私密性和专属性;资产管理部门可以更好的发挥与其它业务部门的联动效应，包括产品开发和销售，为该类客户提供半标准化、半定制化的服务。

另外一个重要的改革思路是子公司制度，实现法人独立运营。目前监管层对于理财业务、私人银行部门的子公司制改革已经取得一致意见，未来将主要进行试点。2013年底，交通银行资产管理部宣布探索事业部制改革，2014年7月，银监会下发《关于完善银行理财业务组织管理体系有关事项的通知》，银行理财实业部制改革开始全面推动。数据显示，目前，已经有450多家银行完成理财业务事业部改制。

事业部制改革对银行理财业务部门的单独核算、风险隔离、行为规范、归口管理等方面提出了新的要求，明确了理财业务部门经营决策权和一定程度的人、财、物支配权。从实际效果看，改革之后，银行理财部门仍然为银行内部，没能实现真正的风险隔离和独立经营决策，内部考核和薪酬激励机制仍受制于银行业平均水平，这使得银行理财资管无法与资管同业展开更好竞争。

银行理财业务部门和私人银行部门下一步将从事业部制过渡到子公司制。目前中信银行等银行拥有资管子公司，子公司制改革带来的好处主要有以下几点： 第一，独立经营决策，子公司制具有更好的风险控制的效果，可以将破产风险控制在银行外部;另外更高的独立性也有利于理财资管业务真正回归“代客理财”，消除投资者心目中的银行保本的影子，打破“刚性兑付”。

第二，回归本源，强化激励。银行理财资管业务作为非传统银行业务，通过子公司制独立运营，有利于理财资管业务回归本源，以往银行为了存款而冲时点，手段之一就是通过理财业务。理财业务的回归有利于同业竞争和分业监管，银行理财业务独立法人经营，有利于理财资管与券商、基金等资管公司展开公平竞争，同时也有利于分业监管。此外，作为理财资管公司，其薪酬考核也将更多按照同业标准，这将对从业人员薪酬待遇有所提升，同时对从业人员的要求也会更高。

过去十年，银行理财实现了从小到大的变化，2014年理财规模已经达到了约18万亿元。受政策套利和监管影响，银行理财呈现出畸形的发展路径，未来十年，理财产品低风险、高收益的情况一去不复返，银行理财业务回归代客理财、转型资产管理业务已经成为业内和监管层的一致共识，这既是一种回归正路，也是向更高层次的迈进。

在新的局面下，大银行和中小银行以及城商行开展理财资管业务应区别对待，未来十年，大银行在市场中仍将占主导地位，主要以开放式、净值型和结构类为主，其客户优势更加显现，信誉优势也将对客户产生吸引作用，传统渠道优势在客户服务方面会有新的作用，但同时，产品净值化以后，管理规模大也将是大行资产管理的一大难题，规模太大，势必会影响产品收益率;相反，小行具有更好的灵活性，资产管理规模小，而且未来资产管理业务拼的是管理能力和投资能力，规模并不是最主要的，小行的劣势主要是客户渠道和信誉无法与大行相比，以及产品工具偏少，因此，小银行更需要努力提升投资和研究能力。

小银行做资产管理需要突出差异化特色。第一，做强固定收益率资产，向净值型产品转变。固定收益率产品具有较高安全性，通过净值化，又可以提高产品流动性，形成安全性和流动性兼备的差异化特色，在留住现有客户的基础上，吸引新的客户。第二，跨界合作，拓展销售渠道，丰富产品线，通过券商、信托等渠道，拓展投资品种，弥补工具不足的缺陷，同时通过其他商业银行，拓展销售渠道。大银行具有强大的国家信誉以及客户优势，拥有广泛的销售渠道和产品线，良好的信用风险控制。国内大行一般都会有下属子公司，包括信托、基金、保险、券商、资产管理公司等，这也是大行开展理财资管业务的独特优势。

篇6

【关键词】 小睑裂综合征； FOXL2； 卵巢功能早衰； 突变

FOXL2基因是一个2.7 kb的单外显子基因，编码376个氨基酸，预期的蛋白质属于翼状螺旋/叉头型转录因子调节家族，包含一个特有的101个氨基酸的forkhead DNA结构域和一个与此分离但功能尚未阐明的多聚丙氨酸肽段。小睑裂综合征（BPES）是表现为睑裂狭小、上睑下垂和倒转型内眦赘皮等一系列症状的常染色体显性遗传病。临床上分为两型：Ⅰ型：女性患者不育，原发闭经或提前绝经、小子宫和卵巢功能早衰；Ⅱ型：男女患者均可生育。目前研究证实FOXL2基因与BPES的发病密切相关，是首选致病基因。

1 材料与方法

1.1 材料 参考The human FOXL2 mutation database（http：//medgen.ugent.be/foxl2/）[1]，搜集所有报道过的突变，共发现有144个变异位点，其中包括15个单核苷酸多态位点。对这些突变进行统计学处理并分类，同时进行蛋白表达谱分析，各功能区分析，以及患者的临床特征与突变相关性分析。

1.2 突变位点的研究方法 （1）直接测序；（2）多重性连接依赖的探针扩增法；（3）微卫星位点分析和单核苷酸多态性分析；（4）荧光原位杂交技术分析。

1.3 前期实验结果的分析 笔者对一期收集到的29例BPES患者血样进行FOXL2基因突变研究，并将前期实验中所得的突变结果进行分析归类[2-3]。

2 结果

2.1 FOXL2的功能区 FOXL2的功能区包括forkhead DNA结合域（第52～152残基区域）、功能尚未阐明的多聚丙氨酸肽段（221～234位氨基酸残基区）以及转录激活区（第280～320残基区域）。

2.2 分类结果 突变谱共分10型，具体分型如下：A：蛋白截短，无forkhead DNA结合域及其后的所有氨基酸；B：蛋白截短，包含部分forkhead DNA结合域；C：蛋白截短，包含完整forkhead DNA结合域，无多聚丙氨酸肽段及转录激活区；D：蛋白截短，包含完整forkhead DNA结合域和完整的多聚丙氨酸肽段，无转录激活区；E：转录激活区域突变，蛋白截短或延长，包含完整forkhead DNA结合域和完整的多聚丙氨酸肽段；F：转录激活区后的突变，蛋白截短或延长，包含完整forkhead DNA结合域、多聚丙氨酸肽段及转录激活区；G：多聚丙氨酸肽段框架内移码突变，蛋白延长或截短；H：只有错义突变，单个碱基的替换或颠换；I：包括微缺失及FOXL2基因与其他基因的染色体重排；J：其他突变，包括5′-UTR和3′-UTR区域变异。

2.3 患者的临床特征与突变相关性分析结果 所有发现突变的患者均为典型的BPES，两型BPES存在着基因型和表现型的相互关联。同一个突变可导致明显的家系内和家系间的表型多样性，即表现型和基因型的多样性。

A组突变由于forkhead区域的破坏致DNA结合能力的下降，从而导致FOXL2的单型缺陷；由于缺乏相关的信息，对B组不能作出相关性判断；C组，蛋白截短，无多聚丙氨酸肽段及多聚脯氨酸肽段，发生POF几率非常高，多为BPESⅠ型；D组，具有完整的forkhead和聚丙氨酸区域，蛋白截短，家系内存在表现型的多样性；E组，具有完整的forkhead和聚丙氨酸区域，移码突变导致蛋白延长，导致Ⅰ型和Ⅱ型BPES；F组的基因型与表现型亦不能作出相关性判断；G组的多聚丙氨酸肽段突变框架移码突变，导致聚丙氨酸扩增，发生在Ⅱ型BPES家系和类型不明确的家系中。多聚丙氨酸肽段延长，导致聚丙氨酸扩增，多发生在Ⅱ型BPES家系；H组错义突变，由于病例数量少及缺乏相关的信息，不能作出判断；I组发生在散发的患者和家族性BPES，多伴发智力低下；J组未引起任何蛋白变异，由于病例数量少及缺乏相关的信息，不能作出相关性判断。

单纯的卵巢功能早衰（POF）患者中发现的FOXL2的变异均为单核苷酸多态性（SNP），笔者对30例单纯性上睑下垂患者的FOXL2基因进行突变分析时未发现此基因的突变。

2.4 前期实验中的突变的分析及归类 笔者对一期收集到的29例BPES患者及100例眼睑发育正常的人的血样提取FOXL2基因进行突变研究，发现的3个突变位点分别为892C>T、951～953delC及901～930dup30。

892C>T为无义突变，蛋白截短，包含完整forkhead DNA结合域，但无多聚丙氨酸肽段及多聚脯氨酸肽段，属于C组；951～953delC为缺失突变后引起移码突变，蛋白截短，包含完整forkhead DNA结合域和多聚丙氨酸肽段，无多聚脯氨酸肽段，属于D组；901～930dup30为重复突变，多聚丙氨酸肽段框架内移位突变，蛋白延长，属于G组。

另外，据报道的中国人BPES患者中FOXL2基因的突变共有24种，除去笔者报道的3种[2-3]，其余21种分组情况如下：475dupC属于B组；704delG及804dupC属于D组；1091 delC属于E组；1041～1042 insC属于F组；909～938 dup30及933～965dup33属于G组；H组突变比较多，分别为425 T>C；773C>G；655C>T；370 A>G；340A>G；384G>A；241T>C；650C>G；50CTA及2293-2294insT属于J组；其中672～701dup30；663～692dup30以及858～874dup17不属于以上突变分型的任何分组，提示在这些突变区域可能存在其他功能部位[4-13]。

3 讨论

转录因子的转录激活区分为3类：酸性激活区、谷氨酰胺富含区和脯氨酸富含区。国内外学者对FOXL2功能区的研究只提出其forkhead DNA结合区和一个与此分离的多聚丙氨酸区域，并未提及转录激活区。通过对FOXL2功能域的分析，未发现明显的酸性区及谷氨酰胺富含区，只有一个脯氨酸富含区，即280～320区域，此区内脯氨酸含量高达45%，因此，笔者认为此区为FOXL2的转录激活区。另外，突变谱的结果亦显示此区域为突变高发区，认为是由于转录激活区的突变使转录因子失去转录功能而导致其作用蛋白的功能异常，从而导致疾病的发生。

突变类型的分组与De Baere等[14]的分组略有不同，笔者主要是根据FOXL2功能区进行突变类型的分组，如此可以更好的了解FOXL2突变与功能的关系，从而为明确FOXL2的确切致病机理提供依据。De Baere等[14]在对多例BPES家系研究后提出由同一个突变可导致明显的家系内和家系间的表型多样性，即表现型和基因型的多样性，笔者认为主要是由于基因背景不同和基因的相互作用造成的。

FOXL2控制睑裂发育的目标基因尚不清楚。据推测，FOXL2很可能是控制某些基因，如TGF-α、EGFr、Inhbb、控制睁眼及睑裂的基因位点，而这些基因与其他与眼前节发育有关的转录因子共同影响睑裂的发育，如Pax6、Bmp4、Bmp7等[15-16]。另外，有研究发现，FOXL2的一个同源基因FOXO对某些调节细胞周期的抗凋亡或促凋亡基因有调节作用。FOXL2可能参与了对胚胎早期眼睑及眼周肌肉发育过程中某些调节细胞周期的抗凋亡或促凋亡基因的调节，其具体的作用机制，还有待于进一步地研究证实。

综上所述，FOXL2的突变与BPES发病密切相关，任何区域的突变都可以导致其功能异常，从而导致BPES。多聚丙氨酸区域的丧失与Ⅰ型BPES密切相关。FOXL2的突变与单纯性POF及上睑下垂的发病关系并不密切。

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篇7

北师大版普通高中课程标准试验教科书生物《必修2》第5章第1节。

2 教材分析

2.1 教材分析

基因突变是高中生物学课程内容标准是北师大版必修2“遗传与进化”模块第5章“遗传信息的改变”第1节内容。本节内容介绍了变异的类型、基因突变的概念、特点、意义、基因突变发生的原因及人工诱变在育种上的应用。教材镰刀型细胞贫血症为实例实例引出基因突变现象，既便于学生理解，又从不同的角度分析了基因突变的概念、原因及基因突变的特点。

重点：基因突变的概念、产生原因、结果和基因突变的特点。

难点：归纳总结基因突变的概念和原因；基因突变与性状的关系；变异的不定向性与总是突变为原基因的等位基因的关系。

前后知识的联系：与前面DNA的结构和碱基对的排列顺序代表了遗传信息，基因的概念和表达相联系。与生物进化和育种联系。

2.2 学情分析

学生通过有丝分裂、减数分裂、遗传的物质基础、基因的表达和遗传的基本规律的学习，对生物的遗传有了较深入的理解，对于生物的变异现象在生活中也有一定了解，但是对为什么会发生变化？怎样变化？发生的变化对生物会产生什么影响？，还不知道。因此，根据班级学生的实际情况，在教学过程中需要联系生活经验，前面已有知识基础，适时启发，及时设疑，经分析、归纳总结，力争让学生自己得出结论并理解。

3 设计思想

教学活动围绕着对基因突变的实例展开，理解基因突变的内涵，把握基因突变的外延、特点以及与生物变异和进化的关系；强化核心概念的教学，注重知识与生活、实践应用的联系。

4 教学目标设计

知识目标

4.1 概述基因突变的概念、产生原因和结果；

4.2 举例说明基因突变可以自发产生，也可以诱发产生；

4.3 举例说明基因突变有普遍性、随机性、不定向性、自然突变频率低和多害少利等特点。

能力目标

4.3.1 自我收集资料并探究和讨论，实现自主学习和合作学习的能力。

4.3.2 收集有关人工诱变育种、太空育种等事例，进一步理解基因突变的特点，了解人工诱变在育种上的应用。

情感态度与价值观目标

（1）探讨生物遗传病的发生是诱发基因突变的结果，预防遗传病的发生。

（2）收集我国有关人工诱变的事例，培养学生的探究、创新精神和爱国情怀。

5 学法指导

从实例分析入手，按照认知的规律从现象到概念，从宏观到微观来归纳总结出基因突变的概念和特点；利用绘图、前后联系以及跨学科类比等方法引导学生不断地探究、思考、分析和讨论，帮助学生理解基因突变概念、结果以及与性状的关系。最后通过概念图的形式将所学内容进行整合。

6 教学过程

导入：

设疑：自然界生物多种多样，子代性状与亲代相似的叫遗传，同时又有子代性状与亲代不同的。这种现象在遗传学上称为什么呢？

（学生思考）――变异

提问：在生活中既有父母单眼皮而生了个是双眼皮的女儿，也有武汉一爱美的女性通过手术整形将自己变成了美女，这是否变异？这种性状的改变能否传递给后代呢？

（学生思考）――是，前者能，后者不能

（教师展示图片，联系前面生物表现型与基因型、环境的关系）学生活动：学生观察图片并分析讨论。

教师总结并板书：变异分为不可遗传的变异（仅由环境因素引起的性状改变）和可遗传的变异，包括基因突变、基因重组和染色体变异。

这节课我们来探讨学习可遗传变异中的基因突变。

板书：第5章 遗传信息的改变

第1节 基因突变

教师介绍镰刀型细胞贫血症的发现过程，联系到细胞呼吸探讨贫血的原因，再展示正常红细胞与镰刀型细胞贫血症患者的红细胞图片，证实镰刀型红细胞携带氧气的能力不足，联系血红蛋白的作用进一步推测血红蛋白结构可能不同。

1956年，英格拉姆等人分析，发现正常的血红蛋白和镰刀型细胞的血红蛋白有一个肽段的位置不同。幻灯展示正常和异常血红蛋白分子的部分氨基酸顺序。

正常……缬氨酸―组氨酸―亮氨酸―苏氨酸―脯氨酸―谷氨酸―谷氨酸―赖氨酸―

异常……缬氨酸―组氨酸―亮氨酸―苏氨酸―脯氨酸―缬氨酸―谷氨酸―赖氨酸―

设疑：

1、哪个氨基酸发生了改变？氨基酸的种类和排列顺序由什么来决定？

2、密码子的碱基排列顺序又由什么决定？

3、镰刀型细胞贫血症的直接原因是？根本原因是？

教师总结：镰刀型细胞贫血症直接原因是血红蛋白的一个氨基酸发生了替换，根本原因是基因中一个碱基对的替换导致基因结构的改变。

设疑： 联系DNA的结构思考除了碱基对的替换外，还有哪些变化会引起基因结构的改变？基因结构改变一定会导致性状改变吗？

（学生思考讨论并回答）――碱基对的增添或缺失

类比理解：遗传物质DNA一样不同的碱基（A G C T）排列顺序代表不同的信息。与英文句子由一个个字母组成，如有这样一个英文句子“The cat sat on the mat”。随机叫一小组的同学抄下来，每位同学可随意的替换或增添或减少字母，最后让学生看变后的意思是否改变，又是否一样，体会基因突变的方式和根本原因。

练习：就下面已经给出正常的DNA分子的碱基序列，分析当碱基分别发生如下变化时，翻译成的氨基酸序列将如何变化？ （1）第1个位点上的碱基A被碱基G或碱基C所替代；（2）第5个位点上的T发生了缺失；第5、6两个碱基发生缺失；第4、5、6三个碱基都发生缺失；（3）第5个位点和第6个位点之间插入一个碱基A；插入两个碱基A、C；插入三个碱基A、C、G。

问题：从中你能得出哪些结论？

（1）DNA分子中发生碱基对的替换、增添或缺失，都能引起基因结构的改变。

（2）碱基对的替换不一定会引起氨基酸排列顺序的改变。

（3）缺失或增加1个碱基或2个碱基比缺失3个碱基的影响大。

1、概念

由于DNA分子中碱基对的增添、缺失或改变都会引起基因结构改变。因此，基因突变的实质就是基因结构的改变。

引入下一知识内容：DNA的结构具有稳定性，复制会解旋为单链，那么什么时候容易发生基因突变呢？

2、时期：有丝分裂间期和减数第一次分裂间期

癌症就是原癌基因与抑癌基因的发生突变逐渐的结果，在生活中有什么因素容易引发发生基因突变呢？

物理因素：在强日光照射下容易得皮肤癌；在医院放射室工作的医生容易得癌症等；

化学因素：咸菜等腌制食品必须检测亚硝酸盐的含量，亚硝酸盐含量过多可能会致癌等）

教师总结诱发基因突变的因素：

3、引起基因突变的因素

1、外因：

（1）物理因素：紫外线、X射线、中子流、激光等；

（2）化学因素：亚硝酸盐、碱基类似物等；

（3）生物因素：某些病毒、细菌的代谢产物等。

2、内因： DNA复制过程中出错。

4、基因突变的结果：

（1）产生新基因，是变异的根本来源。

（2）总是突变为原基因的等位基因（在染色体上的位置和控制对象没变）。

（3）基因突变生物性状不一定改变（密码子的简并性）。

5、基因突变的特点：

自然界中，肝炎病毒会突变；动物、植物、真核、原核等都能突变。说明基因突变在生物界中是广泛存在的。

（1）：普遍性

资料：几种生物不同基因的自然突变率

生物名称 突变类型 突变频率 单 位

大肠杆菌 组氨酸缺陷型 2×10 ―6 每个配子的突变频率

玉米 皱缩种子 1×10 ―6 每个配子的突变频率

果蝇 白眼 4×10 ― 5 每个配子的突变频率

学生分析：各种生物的突变频率的数量级别在10―5到10―6，说明突变频率极低。

（2）基因突变的低频性――DNA具有稳定性

展示4个幻灯片，引导探究：残翅果蝇、短腿安康羊、玉米白化苗、图片。

（3）：基因突变的随机性

基因突变可以发生在生物个体发育的任何时期；可以发生在细胞内不同的DNA分子上；同一DNA分子的不同部位。

（4）：基因突变的不定向性和可逆性。

以基因A为例，它不但可以突变成为a1，而且还可能突变为a2、a3等一系列的等位基因。如：控制果蝇野生型红眼的基因（w+）可以突变成白眼（w），也可以突变成杏色眼（wa）、浅黄色眼（wb）、樱红色眼（wc）。

（5）基因突变多害少利性――可能破坏与环境协调

引导学生思考分析：生物发生的基因突变一般是利少害多不是绝对的，取决于环境。

教师说明：一个物种在漫长的进化历程中，由许多个体构成物种，生物发生的基因突变是不少的，其中也有不少的有利变异，所以可以促进生物的进化是很有意义的。

6、基因突变的意义和应用

基因突变是新基因产生的途径，是生物变异的根本来源，是生物进化的原始材料。

应用一：在培育农作物新品种方面的应用。

举例：我国培育的太空椒、“黑农五号”大豆等。

学生思考：（1）为什么选择萌发的种子或幼苗（分裂旺盛）

（2）太空遨游后的种子是否都发生了突变？是否都变得更好了？是否按人们希望的方向在变？已变好的又是否会变回去呢？

归纳总结：应用二：在为生物育种方面的应用。

篇8

[关键词] DNA甲基化；MGMT基因；qPCR；DNA探针；锯齿状病变

[中图分类号] R735.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）01（b）-0011-06

Expression and significance of MGMT gene methylation status in colorectal serrated lesions

XU Chunwei WANG Luping GE Chang

Department of Pathology， the Military General Hospital of Beijing PLA， Beijing 100700， China

[Abstract] Objective To discuss patients with serrated lesions tissues MGMT gene methylation status and MGMT protein expression and cancer pathways and the role and clinical significance of MGMT gene in different age paragraph methylation level. Methods From 2007 to 2013 in the Military General Hospital of Beijing PLA， 225 cases of serrated lesions [96 cases of hyperplastic polyp （HP）， 61 cases of sessile serrated adenoma/polyp （SSA/P） and 68 cases of traditional serrated adenoma （TSA）]， 54 cases of tubular adenoma （TA）， 69 cases of colorectal cancer （CRC） and 42 cases of normal colorectal mucosa tissues were selected； MGMT gene methylation status of CpG island was detected by qPCR applications Taqman probe （MethyLight） methods， methylation state of amplification target fragment was verified by by sequencing method， at the same time， MGMT protein expression in 116 cases of serrated lesions （including 52 cases of HP， 41 cases of SSA/P， 23 cases of TSA）， 20 cases of TA， 24 cases of CRC， 24 cases of normal colorectal mucosa tissue was detected by immunohistochemical method. Results The differences of MGMT gene promoter methylation state and degree of abnormal MGMT protein positive degree in the serrated lesions and the control group were statistically significant （P < 0.05）， the negative correlation was found； the positive correlation was found between frequency of MGMT gene promoter methylation and different age paragraph， but the difference was not statistically significant （P > 0.05）. Conclusion Organization MGMT gene methylation may induce the protein expression in the main reason for the downgrade， it plays an important role in serrated canceration pathway of hyperplastic polyps-serrated adenoma-carcinoma.

[Key words] DNA methylation； MGMT gene； qPCR； DNA probe； Serrated lesions

锯齿状病变是一组具有锯齿状（波浪状或星状）结构的异质性上皮病变，包括增生肉（hyperplastic polyp，HP）、广基（无蒂）锯齿状腺瘤/息肉（sessile serrated adenoma/polyp，SSA/P）、传统型锯齿状腺瘤（traditional serrated adenoma，TSA）。新近统计发现，结直肠癌（colorectal cancer，CRC）中60%的来自普通腺瘤，35%来自“增生肉-锯齿状腺瘤-癌”这条锯齿状通路[1]，特别是锯齿状病变的CpG岛甲基化表型（CpG island methylator phenotyp，CIMP）。锯齿状通路涉及一系列异常的表观遗传学修饰[2]。这些异常修饰中以DNA甲基化最常见。DNA异常甲基化分为A型和C型，前者与年龄因素有关，年龄越大，甲基化频率越高，后者与肿瘤相关，通过引起相关基因表达下调或沉默，促进肿瘤的发生发展[3]。

MGMT为DNA损伤修复基因，定位于人类染色体10q26，全长170 kb，由5个外显子，4个内含子组成。启动子富含GC碱基，顺式作用元件有CpG岛中的6个Spl位点、2个糖皮质激素反应元件（GRE），AP-I元件等。cDNA长约769 bp，编码207个氨基酸组成的蛋白质。MGMT序列具有相对稳定性，从结肠杆菌到哺乳动物均含有结构一致的“-异亮氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-组氨酸-精氨酸-缬氨酸-”（IPCHRV）活性基序列，活性位点在145位半胱氨酸残基上[4]。本研究通过MethyLight方法，一方面分析锯齿状病变中MGMT基因启动子区CpG岛甲基化状态和免疫组化中MGMT蛋白的表达情况，在基因层面和蛋白层面对MGMT进行初步探究，另一方面分析锯齿状病变中MGMT基因启动子区CpG岛甲基化状态和年龄相关因素情况，在甲基化和年龄上对MGMT进行初步探究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本 收集总医院2007～2013年病理诊断为各类结直肠息肉和腺瘤切片4810例，从中筛选出腺体具有锯齿状特征的息肉及腺瘤，进行组织学诊断及分类。由3名病理医师按WHO（2010）消化系统肿瘤分类及文献标准[5-9]4～5轮回顾性阅片。从中筛选出225例锯齿状病变（96例HP、61例SSA/P和68例TSA）作为实验组，并以54例管状腺瘤（tubular adenoma，TA）、42例正常结直肠黏膜组织和69例CRC作为对照。

1.1.2 主要试剂和仪器 DNA提取试剂盒购自德国QIAGEN公司，甲基化修饰试剂盒为美国ZYMO公司产品，核酸蛋白质浓度测量仪B-500购自上海创萌生物科技有限公司，甲基化阳性/阴性对照为美国ZYMO公司产品，qPCR反应试剂ROX购自TaKaRa公司，Mix购自上海辉睿生物科技有限公司，MGMT抗体购自中杉金桥公司（1∶500稀释），内参基因β-肌动蛋白（β-actin）引物和探针参照文献[10]设计，甲基化引物和探针由上海辉睿生物科技有限公司合成。Mx3000P定量PCR扩增仪为美国Stratagene公司产品。

1.2方法

1.2.1 甲基化引物和探针设计 MGMT基因序列参照GenBank（http：//ncbi.nlm.nih.gov），GenBank Accession：NC_000010。甲基化引物和探针由Beacon Designer7.9软件设计，设计标准：引物扩增片段大小在80～150 bp范围，引物长度17～25 bp，GC含量在40%～70%，两条引物的Tm值尽量接近。避免引物内部或之间形成3 bp以上的互补序列。探针长度20～30 bp，探针的Tm值比引物高5～10℃，探针内标或探针与引物之间避免形成3 bp以上的互补序列，对其进行BLAST检查，引物和探针符合要求，并由上海辉睿生物科技有限公司合成。见表1。

1.2.2 DNA提取 采用QIAamp DNA FFPE Tissue Kit试剂盒提取组织DNA，将含有DNA组织的蜡块连切5张10 μm的厚蜡膜，严格按照试剂盒说明步骤进行操作。并测定其纯度和浓度备用。

1.2.3 甲基化修饰 采用EZ DNA Methylation-GoldTM Kit（D5005）试剂盒，严格按照试剂盒说明步骤进行操作。经此步后，DNA序列中未甲基化的胞嘧啶（C）转变为尿嘧啶（U）。

1.2.4 MethyLight PCR反应体系（20 μL）：2×Taq PCR Master Mix 10 μL；修饰后的DNA模板2 μL；上、下游引物各1 μL（10 pmol）；探针FAM 0.4 μL（10 pmol）；ROX 0.3 μL。反应条件：94℃预变性5 min；94℃ 30 s，56℃ 45 s，72℃ 45 s，共50个循环；72℃延伸5 min，4℃冷却5 min。每例标本设两个复孔，经亚硫酸氢盐修饰的Human Methylated & Non-methylated DNA Set作为阳性、阴性对照，水为空白对照。

1.2.5 测序法验证扩增序列 PCR扩增产物送北京金唯智生物科技有限公司测序，由于扩增序列（94 bp）过小，连接到质粒作为载体后，用通用引物的方法测序，结果如图1所示，测序目的片段和Beacon Designer 7.9软件设计序列吻合。

甲基化片段中CpG二核苷酸的胞嘧啶保持不变

图1 MGMT基因扩增片段部分测序图

1.2.6 免疫组织化学染色 所有标本常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片，60℃温箱烘烤90 min。采用EnVision二步法，实验过程严格按照试剂盒说明书进行，高温高压抗原修复，DAB显色，磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗为阴性对照，已知阳性的结肠腺体组织为阳性对照。

1.2.7 结果判断标准 MethyLight结果判断标准[11]：同时扩增目的基因（MGMT）和内参基因（β-actin），根据标准曲线得到两者的原始拷贝数，计算标准甲基化指数（normalized index of methylation，NIM）其定义为：NIM=[（MGMT sample/MGMT positive）β-actin sample/β-actin positive）]×100，其中MGMT sample指样本中甲基化MGMT基因的拷贝数，MGMT positive指阳性对照中甲基化MGMT基因的拷贝数，β-actin sample和β-actin positve与上述相同。NIM≥4为甲基化，NIM25%～50%为2分，Ⅲ级>50%～75%为3分，Ⅳ级>75%～100%为4分。染色强度计分：Ⅰ级淡黄色为1分，Ⅱ级棕黄色为2分，Ⅲ级棕褐色为3分。每张切片两种评分之乘积为该切片最后的表达强度：0分为（-），1～3分为（+），4～6分为（++），≥7分为（+++）。

1.3 统计学方法

所有数据采用SPSS 19.0统计软件，正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示。甲基化结果运用χ2及Fisher确切概率法，免疫组化结果使用多组有序秩和检验，两组间比较运用Bonferroni检验，甲基化和蛋白表达相关性及甲基化和年龄相关性运用Pearson相关法进行统计学处理，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床资料特征

225例锯齿状病变中HP 96例、SSA/P 61例、TSA 68例，分别占锯齿状病变的42.67%、27.11%和30.22%，96例HP中，男63例，女33例，男性多见，年龄31～88岁，平均（56.052±12.448）岁；61例SSA/P中，男43例，女18例，男性多见，年龄23～84岁，平均（56.665±14.976）岁；68例TSA中，男46例，女22例，男性多见，年龄30～85岁，平均（59.470±12.506）岁。

2.2 MGMT基因标准曲线分析

将阳性对照按10的倍数稀释成1～1×10-6 7个浓度梯度制作标准曲线（其拷贝数为103～109/mL），各浓度梯度反应均做复孔。MethyLight的线性范围为104～108拷贝/mL，R2为0.942。

2.3 MGMT基因启动子CpG岛甲基化状态

MGMT基因启动子CpG岛甲基化阳性表达率在正常组、TA组、HP组、SSA/P组、TSA组和CRC组分别为0.00%（0/42）、46.30%（25/54）、26.04%（25/96）、60.66%（37/61）、76.47%（52/68）和68.12%（47/69），各组差异有高度统计学意义（χ2 = 112.790，P = 0.000）。正常组与SSA/P、TSA、TA、CRC组之间差异有统计学意义（P < 0.05），HP组与SSA/P、TSA、CRC组之间差异有统计学意义（P < 0.05），其余各组差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2、图2（见封三）。

表2 MGMT基因CpG岛甲基化阳性率统计结果[n（%）]

注：与正常组比较，P < 0.05；与HP组比较，P < 0.05；HP：增生肉；TA：管状腺瘤；SSA/P：广基（无蒂）锯齿状腺瘤/息肉；TSA：传统型锯齿状腺瘤；CRC：结直肠癌

2.4 MGMT蛋白阳性表达率

MGMT蛋白阳性表达率在正常组、TA组、HP组、SSA/P组、TSA组和CRC组分别为100.00%（24/24）、80.00%（16/20）、98.08%（51/52）、78.05%（32/41）、69.57%（16/23）和70.83%（17/24），差异有高度统计学意义（χ2 = 26.641，P = 0.000）。正常组与HP、SSA/P、TSA、TA、CRC组之间差异有统计学意义（P < 0.05），HP组与SSA/P组、TSA组、TA组和CRC组之间差异有统计学意义（P < 0.05），其余各组差异无统计学意义（P > 0.05）。见表3、图3。

2.5 MGMT基因甲基化与MGMT蛋白相关性分析

经统计学分析显示，TA、SSA/P、TSA、CRC三组中MGMT甲基化与MGMT蛋白表达结果差异有统计学意义（P < 0.05），且相关性为负相关，相关系数分别为r = -0.500、-0.361、-0.437、-0.412；HP中MGMT甲基化与MGMT蛋白表达结果差异无统计学意义（P > 0.05），但相关性为负相关，相关系数为r = -0.220。见表4。

2.6 MGMT基因甲基化与年龄相关性分析

经统计学分析显示，TA、HP、SSA/P、TSA四组中MGMT基因甲基化与年龄差异均无统计学意义（P > 0.05）。MGMT基因甲基化与年龄相关性为正相关，与TA、HP、SSA/P、TSA相关系数分别为0.042、0.009、0.087、0.138。见表5。

3 讨论

CRC是最常见的恶性消化道肿瘤之一，全球CRC每年新发病例数达123万，死亡约为发病率的1/2。近年研究表明，CRC发病率目前仍呈持续增长态势，其原因之一就是对结直肠锯齿状病变认识不足[2，13]。2010年WHO消化系统肿瘤病理学和遗传学分类中对锯齿状病变的分类比以往更为详细[9]，HP在锯齿状病变中最常见，占所有病变的75%以上，根据组织学上的微小差别分为微泡性增生肉（microvesicular hyperplastic polyp，MVHP）、富于杯状细胞的增生肉（goblet-cell rich hyperplastic polyp，GCHP）、寡黏液型增生肉（mucin-poor type，MPHP）[14]。SSA/P占锯齿状病变的15%～25%，根据细胞异型性分为伴/不伴有细胞异性增生型[14-16]。TSA不常见占锯齿状病变的1%左右，特征为具有整体复杂结构域纤维状生长方式，常显示细胞异型特点，与TA及伴细胞异型的SSA不同[14，17]。TSA一般与高MSI癌无关，可能与低MSI有关[6]。近年来从分子遗传学角度对锯齿状病变进行研究发现，结直肠锯齿状病变通路是一个多因素、多阶段、多基因连续累积发生的过程，在此演变过程中有众多CRC相关基因参与。锯齿状通路分为：①无蒂（广基）锯齿通路：以SSA/P和MVHP为代表，癌变机制为BRAF突变，引起错配修复基因h-MLH-1甲基化和高水平CpG岛甲基化现象，导致腺体不同程度异型性增生直至癌变。②传统锯齿状通路：包括TSA和GCHP，癌变机制为K-RAS基因突变，引起DNA修复基因MGMT甲基化和低高水平CpG岛甲基化现象等。MGMT基因甲基化后，引起一些基因沉默，导致腺体异型性增加，进一步发展为癌。锯齿状通路中有众多异常基因甲基化，若能深入研究并加以利用，不仅可以用于CRC的早期诊断、高危人群的监测、癌变风险评估等，还可为CRC靶向治疗药物提供理论依据支持[1，18]。

在本实验基因层面研究中发现正常黏膜组织、TA、HP、SSA/P和TSA中均有MGMT基因启动子CpG岛甲基化，实验组锯齿状病变HP、SSA/P和TSA甲基化率为26.04%（25/96）、60.66%（37/61）和76.47%（52/68），对照组正常黏膜组织、TA和CRC的甲基化率为0.00%（0/42）、46.30%（25/54）和68.12%（47/69）。Dhir等[18]在18例TA中检测到甲基化率为47.1%，29例不伴异型性的SSA/P中检测到甲基化率为29.63%，19例伴有异型性的SSA/P中检测到甲基化率为52.63%，在9例HP中检测到甲基化率为14.29%，本研究中对照组的TA和实验组的SSA/P的甲基化率与以上研究结果基本符合，但实验组HP的甲基化率明显高于Dhir等[18]研究，这可能与样本量、样本来源、引物在CpG岛的位置不同等因素引起系统误差有关。本研究对照组与实验组组间比较过程中，对照组正常黏膜组织与实验组SSA/P（P = 0.000）和TSA（P = 0.000）有显著性差异，与实验组HP（P = 0.230）差异性不显著；对照组CRC与实验组HP（P = 0.000），与实验组SSA/P（P = 0.375）和TSA（P = 0.275）差异性不显著；对照组TA与实验组HP（P = 0.012）和TSA（P = 0.001）有显著性差异，与实验组SSA/P（P = 0.123）差异性不显著；实验组组组间比较过程中，HP和SSA/P（P = 0.000），HP和TSA（P = 0.000）组间有显著性差异， SSA/P和TSA（P = 0.053）组间差异性不显著。在本实验蛋白层面运用免疫组化方法研究中发现实验组HP、SSA/P和TSA蛋白表达阳性率为98.08%（51/52）、78.05%（32/41）和69.57%（16/23），对照组正常黏膜组织、TA和CRC中蛋白表达阳性率为100%（24/24）、80.00%（16/20）和70.83%（17/24）。与Sawyer等[19]对39例SA运用免疫组化方法发现MGMT阳性表达率为18%（7/39）相比，在本实验中，SSA/P蛋白阳性表达率[78.05%（32/41）]和TSA蛋白阳性表达率[69.57%（16/23）]明显高于Sawyer等[9]研究，具体原因可能与甲基化引物设计、样本来源、样本量大小等因素有关。本研究对照组与实验组组间比较过程中，对照组正常黏膜组织与实验组HP（P = 0.001）、SSA/P（P = 0.000）和TSA（P = 0.000）有显著性差异；对照组CRC与实验组HP（P = 0.001）有显著性差异，但SSA/P（P = 0.515）和TSA（P = 1.000）差异性不显著；对照组TA与实验组HP（P = 0.029）有显著性差异，但与实验组SSA/P（P = 1.000）和TSA（P = 0.434）差异性均不显著；实验组与实验组组间比较过程中，HP和TSA（P = 0.001），HP和SSA/P（P = 0.006）中组间有显著性差异，但在SSA/P和TSA（P = 0.452）中组间差异性均不显著。在本实验MGMT基因甲基化与蛋白表达相关性研究中，发现在实验组HP、SSA/P和TSA中分别呈弱相关（P = 0.117，r = -0.220）、弱相关（P = 0.020，r = -0.361）及中等程度相关（P = 0.037，r = -0.437），对照组正常黏膜组织、TA和CRC中，正常黏膜组织运用Pearson法无法计算相关性，TA中呈中等程度相关（P = 0.025，r = -0.500），CRC中呈中等程度相关（P = 0.046，r = -0.412）。通过数据可以看出，在实验组中HP、SSA/P和TSA基因甲基化和蛋白表达有显著性差异，相关性分别为弱相关、弱相关和中等程度相关；在对照组中TA和CRC基因甲基化和蛋白表达有显著性差异，相关性都为中等程度相关。通过基因层面和蛋白层面及两者相关性的探究，推测在锯齿状病变通路中MGMT基因启动子甲基化有诱导MGMT蛋白表达下调，在锯齿状通路的发生发展中起重要作用。在年龄相关性甲基化研究方面，在基因目的序列（-107～-200）这部分的位点上实验组HP（P = 0.931，r = 0.009）、SSA/P（P = 0.763，r = 0.042）和TSA（P = 0.263，r = 0.138）及对照组TA（P = 0.763，r = 0.042）中差异性均不显著（P > 0.05），且相关性为弱正相关。

综上所述，MGMT基因启动子CpG岛甲基化可能导致MGMT蛋白表达下调，与锯齿状病变的发生、发展密切相关，在无蒂（广基）锯齿通路和传统锯齿状通路中起重要推动作用，是CRC发生重要的分子事件。

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篇9

2、耳筒有零件坏了,貌似修理换零件也找不到配件吧。

3、解锁打开iphone，进入主屏幕HOME，找到设置应用，触摸点击设置。

4、打开设置后，下拉，找到通用设置，打开通用。

5、打开后下拉滑动，找到听觉这栏，如下图所示，看到有左——控制钮——右，我们可以滑动这个控制按钮向左或者向右，到最左时候就是做左耳机声音最大，右耳机没有声音，反向同理相反。控制按钮在中间控制线处声音是均衡的！

篇10

图一，图二

所谓乌铜是铜与金的合金，表面乌黑而富有光泽。乌铜走银法则是将银屑嵌入乌铜器表面已錾刻好的花纹内，再加热将银屑熔化，使银与铜成半合金状态，稍待冷却，用手急擦，使汗汁浸渍到走银处，使铜、银结合处更加稳定和富有光泽。而一般“金银错”工艺是将金、银屑或丝嵌入铜器表面镂刻的纹路内，再用错石将其打磨光滑即可。乌铜走银法来源于“金银错”，但工艺更为精湛，所嵌银丝更细，图案更为生动传神，较同时期福建铜嵌银丝器质量更优，在中国近代铜制品中，堪称一绝。

乌铜走银技术起源于清末云南石屏县。据传石屏一岳姓铜匠在冶炼紫铜时，不慎将所戴金戒指落入所炼铜中，后来发现其所铸铜器表面乌黑如煤，遂在铜器表面錾刻花纹，嵌入银屑，制成了最早的乌铜走银器。由于所嵌银屑与乌铜背景形成鲜明的黑白对比，风格独特，有较高的艺术价值。

图1椭圆形乌铜走银墨盒，长12.7厘米，宽9.2厘米，高5.6厘米。底铭“岳恒”二字。盒面为双凤纹，盒周为高士松下对弈图，所嵌银丝极细，构图饱满，是早期乌铜走银器中精品。由于乌铜器中含金，生产成本非常高，后来的乌铜走银器则以紫铜为胎，仅将其表面处理为乌铜，成本大为降低。尽管如此，乌铜走银器价格在当时仍十分昂贵，非一般人所能问津。乌铜走银技术在民国年间得到了极大发展，声名远播。

图2为方形乌铜走银墨盒，边长9.6厘米，高2.2厘米，底铭“云南岳应”四字。盒面用极细银丝镶嵌出一幅江南山水图，画面构图饱满、细腻，错落有致，景物自然和谐。盒四周饰以梅花、竹叶及蝙蝠纹，工艺精湛，是晚期乌铜走银器精品。

图三，图五

乌铜走银技术岳家秘不外传，民国后期岳家绝后，乌铜走银技术随之失传。当时也有依照生产者，质量稍次。图3为方形乌铜走银墨盒，边长5.8厘米，高2.6厘米，底铭“陈贞”二字。盒面为行草诗一首：“著书悬日月，筮《易》洽风雷。一旦迷津悟，千秋宝镜开。古句。丁巳季夏书。”字流畅、潇洒，盒周饰以松、竹、梅、兰图，工艺细致，虽非岳家所制，亦不逊色。

图四

解放后云南老艺人杨用宾反复研究，使乌铜走银工艺得以恢复，但产品质量远不如岳家所制。北京人民大会堂云南厅里，巨型屏风“五百里滇池”和“大观楼长联”就是这一时期的名作。由于乌铜走银器成本高，技术复杂，现早已停止生产，真品难觅。

乌铜走银器以墨盒及烟膏盒居多，亦有花瓶、碗、盘、杯、壶、笔筒等，但存量已十分稀少。图4为乌铜走银碗，口径10.7厘米，高5.9厘米。底铭“岳炳”二字。碗周饰以松树、仙鹤，隐喻松鹤延年。图5为乌铜走银勺，长12.7厘米，宽4.3厘米，器表面为蝙蝠、梅花及竹叶图，器形虽小，但工艺精湛，与图4碗配套，极为难得。

乌铜走银器数量稀少，精品更为难得，目前市场赝品居多，收藏时一定要慎重。现将一些鉴别要点简述如下：1.真品表面包浆自然、沉着，乌铜黑如煤色；而赝品包浆浮浅，有“贼光”，表面黑色浅而薄，极不自然；2.真品所嵌银丝极细，图案及文字传神、生动；而赝品线条较粗，图案及文字呆板，构图比例失调；3.真品擦洗后表面呈淡红色，把玩后器表面很快变黑如初，这是由于手中汗渍含有油脂和盐分，能和乌铜反应使其变黑；赝品表层并非乌铜，故不能变黑。这是鉴定乌铜走银器真伪的关键。但应提醒收藏者不可过度擦洗，否则可能损伤器表面之乌铜层，使品相破坏。