边境法律法规范文

导语：如何才能写好一篇边境法律法规，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。

篇1

一、《安全生产法》第七十九条承担安全评价、认证、检测、检验工作的机构，出具虚假证明，构成犯罪的，依照刑法有关规定追究刑事责任；尚不够刑事处罚的，没收违法所得，违法所得在五千元以上的，并处违法所得二倍以上五倍以下的罚款，没有违法所得或者违法所得不足五千元的，单处或者并处五千元以上二万元以下的罚款，对其直接负责的主管人员和其他直接责任人员处五千元以上五万元以下的罚款；给他人造成损害的，与生产经营单位承担连带赔偿责任。

对有前款违法行为的机构，撤销其相应资格。

二、《安全生产法》第八十条生产经营单位的决策机构、主要负责人、个人经营的投资人不依照本法规定保证安全生产所必需的资金投入，致使生产经营单位不具备安全生产条件的，责令限期改正，提供必需的资金；逾

期未改正的，责令生产经营单位停产停业整顿。

有前款违法行为，导致发生生产安全事故，构成犯罪的，依照刑法有关规定追究刑事责任；尚不够刑事处罚的，对生产经营单位的主要负责人给予撤职处分，对个人经营的投资人处二万元以上二十万元以下的罚款。

三、《安全生产法》第八十一条生产经营单位的主要负责人未履行本法规定的安全生产管理职责的，责令限期改正；逾期未改正的，责令生产经营单位停产停业整顿。

生产经营单位的主要负责人有前款违法行为，导致发生生产安全事故，构成犯罪的，依照刑法有关规定追究刑事责任；尚不够刑事处罚的，给予撤职处分或者处二万元以上二十万元以下的罚款。

生产经营单位的主要负责人依照前款规定受刑事处罚或者撤职处分的,自行罚执行完毕或者受处分之日起，五年内不得担任任何生产经营单位的主要负责人。

四、《安全生产法》第八十二条生产经营单位有下列行为之一的，责令限期改正；逾期未改正的，责令停产停业整顿，可以并处二万元以下的罚款：

（一）未按照规定设立安全生产管理机构或者配备安全生产管理人员的；

(二)危险物品的生产、经营、储存单位以及矿山、建筑施工单位的主要负责人和安全生产管理人员未按照规定经考核合格的；

（三）未按照本法第二十一条、第二十二条的规定对从业人员进行安全生产教育和培训,或者未按照本法第三十六条的规定如实告知从业人员有关的安全生产事项的；

（四）特种作业人员未按照规定经专门的安全作业培训并取得特种作业操作资格证书，上岗作业的。

五、《安全生产法》第八十三条生产经营单位有下列行为之一的，责令限期改正；逾期未改正的，责令停止建设或者停产停业整顿，可以并处五万元以下的罚款；造成严重后果，构成犯罪的，依照刑法有关规定追究刑事

责任：

（一)矿山建设项目或者用于生产、储存危险物品的建设项目没有安全设施设计或者安全设施设计未按照规定报经有关部门审查同意的;

（二）矿山建设项目或者用于生产、储存危险物品的建设项目的施工单位未按照批准的安全设施设计施工的；

（三）矿山建设项目或者用于生产、储存危险物品的建设项目竣工投入生产或者使用前，安全设施未经验收合格的；

（四）未在有较大危险因素的生产经营场所和有关设施、设备上设置明显的安全警示标志的；

(五）安全设备的安装、使用、检测、改造和报废不符合国家标准或者行业标准的；

（六）未对安全设备进行经常性维护、保养和定期检测的；

（七）未为从业人员提供符合国家标准或者行业标准的劳动防护用品的；

(八）特种设备以及危险物品的容器、运输工具未经取得专业资质的机构检测、检验合格，取得安全使用证或者安全标志，投入使用的；

（九）使用国家明令淘汰、禁止使用的危及生产安全的工艺、设备的。

六、《安全生产法》第八十四条未经依法批准，擅自生产、经营、储存危险物品的，责令停止违法行为或者予以关闭，没收违法所得，违法所得十万元以上的，并处违法所得一倍以上五倍以下的罚款，没有违法所得或者

违法所得不足十万元的，单处或者并处二万元以上十万元以下的罚款；造成严重后果，构成犯罪的，依照刑法有关规定追究刑事责任。

七、《安全生产法》第八十五条生产经营单位有下列行为之一的，责令限期改正；逾期未改正的，责令停产停业整顿，可以并处二万元以上十万元以下的罚款；造成严重后果，构成犯罪的，依照刑法有关规定追究刑事责 任： （一）生产、经营、储存、使用危险物品，未建立专门安全管理制度、未采取可靠的安全措施或者不接受有关主管部门依法实施的监督管理的；

（二）对重大危险源未登记建档，或者未进行评估、监控，或者未制定应急预案的；

（三）进行爆破、吊装等危险作业，未安排专门管理人员进行现场安全管理的。

八、《安全生产法》第八十六条生产经营单位将生产经营项目、场所、设备发包或者出租给不具备安全生产条件或者相应资质的单位或者个人的，责令限期改正，没收违法所得；违法所得五万元以上的，并处违法所得一倍以上五倍以下的罚款；没有违法所得或者违法所得不足五万元的，单处或者并处一万元以上五万元以下的罚款；导致发生生产安全事故给他人造成损害的，与承包方、承租方承担连带赔偿责任。

生产经营单位未与承包单位、承租单位签订专门的安全生产管理协议或者未在承包合同、租赁合同中明确各自的安全生产管理职责，或者未对承包单位、承租单位的安全生产统一协调、管理的，责令限期改正；逾期未改正的，责令停产停业整顿。

九、《安全生产法》第八十九条生产经营单位与从业人员订立协议，免除或者减轻其对从业人员因生产安全事故伤亡依法应承担的责任的，该协议无效；对生产经营单位的主要负责人、个人经营的投资人处二万元以上十万元以下的罚款。

《矿山安全法》

十、《矿山安全法》第四十条违反本法规定，由下列行为之一的，由劳动行政主管部门责令改正，可以并处罚款；情节严重的，提请县级以上人民政府决定责令停产整顿；对主管人员和直接责任人员由其所在单位或者上级主管机关给予行政处分：

（一）未对职工进行安全教育、培训，分配职工上岗作业的；

（二）使用不符合国家安全标准或者行业安全标准的设备、器材、防护用品、安全检测仪器的；

（三）未按照规定提取或者使用安全技术措施专项费用的；

（四）拒绝矿山安全监督人员现场检查或者在被检查时隐瞒事故隐患、不如实反映情况的；

（五）未按照规定及时、如实报告矿山事故的。

十一、《矿山安全法》第四十三条矿山建设工程的安全设施未经验收或者验收不合格擅自投入生产的，由劳动行政主管部门会同管理矿山企业的主管部门责令停止生产，并由劳动行政主管部门处以罚款；拒不停止生产的，由劳动行政主管部门提请县级以上人民政府决定由有关主管部门吊销其采矿许可证和营业执照。

《矿山安全法实施条例》

十二、《矿山安全法实施条例》第五十二条依照《矿山安全法》第四十条规定处以罚款的，分别按照下列规定执行：

（一）未对职工进行安全教育、培训，分配职工上岗作业的，处4万元以下的罚款；

（二）使用不符合国家安全标准或者行业安全标准的设备、器材、防护用品和安全检测仪器的，处5万元以下的罚款；

（三）未按照规定提取或者使用安全技术措施专项费用的，处5万元以下的罚款；

（四）拒绝矿山安全监督人员现场检查或者在被检查时隐瞒事故隐患，不如实反映情况的，处2万元以下的罚款；

（五）未按照规定及时、如实报告矿山事故的，处3万元以下的罚款。

十三、《矿山安全法实施条例》第五十三条依照《矿山安全法》第四十三条规定处以罚款的，罚款幅度为5万元以上10万元以下。

《煤矿安全监察条例》

十四、《煤矿安全监察条例》第三十六条煤矿建设工程安全设施和条件未经验收或者验收不合格，擅自投入生产的，由煤矿安全监察机构责令停止生产，处5万元以上10万元以下的罚款；拒不停止生产的，由煤矿安全监察机构移送地质矿产主管部门依法吊销采矿许可证。

十五、《煤矿安全监察条例》第三十七条煤矿矿井通风、防火、防水、防止瓦斯、防毒、防尘等安全设施和条件不符合国家安全标准、行业安全标准、煤矿安全规程和行业技术规范的要求，经煤矿安全监察机构责令限期达到要求，逾期仍达不到要求的，由煤矿安全监察机构责令停产整顿；经停产整顿仍不具备安全生产条件的，由煤矿安全监察机构决定吊销煤炭生产许可证，并移送地质矿产主管部门依法吊销采矿许可证。

十六、《煤矿安全监察条例》第三十八条煤矿作业场所未使用专用防爆电器设备、专用放炮器、人员专用升降容器或者使用明火明电照明，经煤矿安全监察机构责令限期改正，逾期不改正的，由煤矿安全监察机构责令停产整顿，可以处3万元以下的罚款。

十七、《煤矿安全监察条例》第三十九条未依法提取或者使用煤矿安全技术措施专项费用，或者使用不符合国家安全标准或者行业安全标准的设备、器材、仪器、仪表、防护用品，经煤矿安全监察机构责令限期改正或者

责令立即停止使用，逾期不改正或者不立即停止使用的，由煤矿安全监察机构处5万元以下的罚款；情节严重的，由煤矿安全监察机构责令停产整顿；对直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予纪律处分。

十八、《煤矿安全监察条例》第四十一条分配职工上岗作业前未进行安全教育、培训，经煤矿安全监察机构责令限期改正，逾期不改正的，由煤矿安全监察机构处4万元以下的罚款；情节严重的，由煤矿安全监察机构

责令停产整顿；对直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予纪律处分。

十九、《煤矿安全监察条例》第四十二条煤矿作业场所的瓦斯、粉尘或者其他有毒有害气体的浓度超过国家安全标准或者行业安全标准，经煤矿安全监察人员责令立即停止作业，拒不停止作业的，由煤矿安全监察机构责令停产整顿，可以处10万元以下的罚款。

二十、《煤矿安全监察条例》第四十五条煤矿有关人员拒绝、阻碍煤矿安全监察机构及其煤矿安全监察人员现场检查，或者提供虚假情况，或者隐瞒存在的事故隐患以及其他安全问题的，由煤矿安全监察机构给予警告，可以并处5万元以上10万元以下的罚款；情节严重的，由煤矿安全监察机构责令停产整顿；对直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予撤职直至开除的纪律处分。

二十一、《煤矿安全监察条例》第四十六条煤矿发生事故，有下列情形之一的，由煤矿安全监察机构给予警告，可以并处3万元以上15万元以下的罚款；情节严重的，由煤矿安全监察机构责令停产整顿；对直接负责的主管人员和其他直接责任人员，依法给予降级直至开除的纪律处分；构成犯罪的，依法追究刑事责任：

（一）不按照规定及时、如实报告煤矿事故的；

（二）伪造、故意破坏煤矿事故现场的；

（三）阻碍、干涉煤矿事故调查工作，拒绝接受调查取证、提供有关情况和资料的。

《危险化学品安全管理条例》

二十二、《危险化学品安全管理条例》第五十七条违反本条例的规定，有下列行为之一的，分别由工商行政管理部门、质检部门、负责危险化学品安全监督管理综合工作的部门依据各自的职权予以关闭或者责令停产停业整顿，责令无害化销毁国家明令禁止生产、经营、使用的危险化学品或者用剧毒化学品生产的灭鼠药以及其他可能进入人民日常生活的化学产品和日用化学品；有违法所得的，没收违法所得；违法所得10万元以上的，并处违法所得1倍以上5倍以下的罚款；没有违法所得或者违法所得不足1O万元的，并处5万元以上50万元以下的罚款；触犯刑律的，对负有责任的主管人员和其他直接责任人员依照刑法关于危险物品肇事罪、非法经营罪或者其他罪的规定，依法追究刑事责任：

（一）未经批准或者未经工商登记注册，擅自从事危险化学品生产、储存的；

（二）未取得危险化学品生产许可证，擅自开工生产危险化学品的；

（三）未经审查批准，危险化学品生产、储存企业擅自改建、扩建的；

（四）未取得危险化学品经营许可证或者未经工商登记注册，擅自从事危险化学品经营的；

（五）生产、经营、使用国家明令禁止的危险化学品，或者用剧毒化学品生产灭鼠药以及其他可能进入人民日常生活的化学产品和日用化学品的。

二十三、《危险化学品安全管理条例》第五十八条危险化学品单位违反本条例的规定，未根据危险化学品的种类、特性，在车间、库房等作业场所设置相应的监测、通风、防晒、调温、防火、灭火、防爆、泄压、防毒、消毒、中和、防潮、防雷、防静电、防腐、防渗漏、防护围堤或者隔离操作等安全设施、设备的，由负责危险化学品安全监督管理综合工作的部门或者公安部门依据各自的职权责令立即或者限期改正，处2万元以上10万元以下的罚款；触犯刑律的，对负有责任的主管人员和其他直接责任人员依照刑法关于危险物品肇事罪、重大责任事故罪或者其他罪的规定，依法追究刑事责任。

二十四、《危险化学品安全管理条例》第五十九条违反本条例的规定，有下列行为之一的，由负责危险化学品安全监督管理综合工作的部门、质检部门或者交通部门依据各自的职权责令立即或者限期改正，处2万元以上20万元以下的罚款；逾期末改正的，责令停产停业整顿；触犯刑律的，对负有责任的主管人员和其他直接责任人员依照刑法关于危险物品肇事罪、生产销售伪劣商品罪或者其他罪的规定，依法追究刑事责任：

（一）未经定点，擅自生产危险化学品包装物、容器的；

（二）运输危险化学品的船舶及其配载的容器未按照国家关于船舶检验的规范进行生产，并经检验合格的；

（三）危险化学品包装的材质、型式、规格、方法和单件质量（重量）与所包装的危险化学品的性质和用途不相适应的；

（四）对重复使用的危险化学品的包装物、容器在使用前，不进行检查的；

（五）使用非定点企业生产的或者未经检测、检验合格的包装物、容器包装、盛装、运输危险化学品的。

二十五、《危险化学品安全管理条例》第六十条危险化学品单位违反本条例的规定，有下列行为之一的，由负责危险化学品安全监督管理综合工作的部门责令立即或者限期改正，处1万元以上5万元以下的罚款；逾期不改正的，责令停产停业整顿：

（一）危险化学品生产企业未在危险化学品包装内附有与危险化学品完全一致的化学品安全技术说明书，或者未在包装（包括外包装件）上加贴、拴挂与包装内危险化学品完全一致的化学品安全标签的；

（二）危险化学品生产企业发现危险化学品有新的危害特性时，不立公告并及时修订其安全技术说明书和安全标签的；

（三）危险化学品经营企业销售没有化学品安全技术说明书和安全标签的危险化学品的。

二十六、《危险化学品安全管理条例》第六十一条危险化学品单位违反本条例的规定，有下列行为之一的，由负责危险化学品安全监督管理综合工作的部门或者公安部门依据各自的职权责令立即或者限期改正，处1万元以上5万元以下的罚款；逾期不改正的，由原发证机关吊销危险化学品生产许可证、经营许可证和营业执照；触犯刑律的，对负有责任的主管人员和其他直接责任人员依照刑法关于危险物品肇事罪、重大责任事故罪或者其他罪的规定，依法追究刑事责任：

（一）未对其生产、储存装置进行定期安全评价，并报所在地设区的市级人民政府负责危险化学品安全监督管理综合工作的部门备案，或者对安全评价中发现的存在现实危险的生产、储存装置不立即停止使用，予以更换或者修复，并采取相应的安全措施的；

（二）未在生产、储存和使用危险化学品场所设置通讯、报警装置，并保持正常适用状态的；

（三）危险化学品未储存在专用仓库内或者未设专人管理的；

（四）危险化学品出入库未进行核查登记或者入库后未定期检查的；

（五）危险化学品专用仓库不符合国家标准对安全、消防的要求，未设置明显标志，或者未对专用仓库的储存设备和安全设施定期检的；

（六）危险化学品经销商店存放非民用小包装的危险化学品或者危险化学品民用小包装的存放量超过国家规定限量的；

（七）剧毒化学品以及构成重大危险源的其他危险化学品未在专用仓库存内单独存放，或者未实行双收发、双人保管，或者未将储存居剧毒化学品以及构成重大危险源的其他危险化学品的数量、地点以及管理人员的的情

况，报当地公安部门和负责危险化学品安全监督管理综合工作的部门备案的；

（八）危险化学品生产单位不如实记录剧毒化学品的产量、流向、储存量和用途，辅未采取必要的保安措施防止剧毒化学品被盗、丢失、误售、误用，或者发生剧毒化学品被盗、丢失、误售、误用后不立即向当地公安部门报告的；

（九）危险化学品经营企业不记录剧毒化学品购买单位的名称、地址，购买人员的姓名、身份证号码及所购剧毒化学品的品名、数量、用途，或者不每天核对剧毒化学品的销售情况，或者发现被盗、丢失、误售不立即向当地公安部门报告的。

二十七、《危险化学品安全管条例》第六十二条危险化学品单位违反本条例的规定，在转产、停产、停业或者解散时未采取有效措施，处置危险化学品生产、储存设备、库存产品及生产原料的，由负责危险化学品安全监督管理综合工作的部门责令改正，处2万元以上10万元以下的罚款；触犯刑律的，对负有责任的主管人员和其他直接责任人员依照刑法关于重大环境污染事故罪、危险物品肇事罪或者其他罪的规定，依法追究刑事责任。

二十八、《危险化学品安全管理条例》第六十三条违反本条例的规定，有下列行为之一的，由工商行政管理部门责令改正，有违法所得的，没收违法所得；违法所得5万元以上的，并处违法所得1倍以上5倍以下的罚款；没有违法所得或者违法所得不足5万元的，并处2万元以上20万元以下的罚款；不改正的，由原发证机关吊销生产许可证、经营许可证和营业执照；触犯刑律的，对负有责任的主管人员和其他直接责任人员依照刑法关于非法经营罪、危险物品肇事罪或者其他罪的规定，依法追究刑事责任：

（一）危险化学品经营企业从未取得危险化学品生产许可证或者危险化学品经营许可证的企业采购危险化学品的；

（二）危险化学品生产企业向未取得危险化学品经营许可证的经营单位销售其产品的；

（三）居隋化学品经营企业向个人或者无购买凭证、准购证的单位销售剧毒化学品的。

二十九、《危险化学品安全管理条例》第六十四条违反本条例的规定，伪造、变造、买卖、出借或者以其他方式转让居愤化学品购买凭证、准购证以及其他有关证件，或者使用作废的上述有关证件的，由公安部门责令改正，处1万元以上5万元以下的罚款；触犯刑律的，对负有责任的主管人员和其他直接责任人员依照刑法关于伪造、变造、买卖国家机关公文、证、印章罪或者其他罪的规定，依法追究刑事责任。

三十、《危险化学品安全管理条例》第六十五条违反本条例的规定，未取得危险化学品运输企业资质，擅自从事危险化学品公路、水路运输，有违法所得的，由交通部门没收违法所得；违法所得5万元以上的，并处违法

所得1倍以上5倍以下的罚款；没有违法所得或者违法所得不足5万元的，处2万元以上20万元以下的罚款；触犯刑律的，对负有责任的主管人员和其他直接责任人员依照刑法关于危险物品肇事罪或者其他罪的规定，依法追究刑事责任。

三十一、《危险化学品安全管理条例》第六十六条违反本条例的规定，有下列行为之一的，由交通部门处2万元以上10万元以下的罚款；触犯刑律的，依照刑法关于危险物品肇事罪或者其他罪的规定，依法追究刑事责任：

（一）从事危险化学品公路、水路运输的驾驶员、船员碟企附理人员、押运人员未经考核合格，取得上岗资格证的；

（二）利用内河以及其他封闭水域等航运渠道运输居情化学品和国家禁止运输的其他危险化学品的；

（三）托运人未按照规定向交通部门办理水路运输手续，擅自通过水路运输剧毒化学品和国家禁止运输的其他危险化学品以外的危险化学品的；

（四）托运人托运危险化学品，不向承运人说明运输的危险化学品的品名、数量、危害、应急措施等情况，或者需要添加抑制剂或者稳定剂，交付托运时未添加的；

（五）运输、装卸危险化学品不符合国家有关法律、法规、规章的规定和国家标准，并按照危险化学品的特性采取必要安全防护措施的。

三十二、《危险化学品安全管理条例》第六十七条违反本条例的规定，有下列行为之一的，由公安部门责令改正，处2万元以上10万元以下的罚款；触犯刑律的，依照刑法关于危险物品肇事罪、重大环境污染事故罪或者其他罪的规定，依法追究刑事责任：

（一）托运人未向公安部门申请领取剧毒化学品公路运输通行证，擅自通过公路运输剧毒化学品的；

（二）危险化学品运输企业运输危险化学品，不配备押运人员或者脱离押运人员监管，超装、超载，中途停车住宿或者遇有无法正常运输的情况，不向当地公安部门报告的；

（三）危险化学品运输企业运输危险化学品，未向公安部门报告，擅自进入危险化学品运输车辆禁止通行区域，或者进入禁止通行区域不遵守公安部门规定的行车时间和路线的；

（四）危险化学品运输企业运输剧毒化学品，在公路运输途中发生被盗、丢失、流散、泄露等情况，不立即向当地公安部门报告，并采取一切可能的警示措施的；

篇2

[关键词] 十二井穴放血；脑细胞外间隙；Gd-DTPA；脑组织液；磁共振成像

[中图分类号] R445 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）04（a）-0020-05

Changes of rat brain interstitial fluid flow speed after influence of blood-letting puncture of Twelve Jing-Well Points

ZHU Kai1，2 HE Qingyuan1，2 HAN Hongbin1，2

1.Department of Radiology， Peking University Third Hospital， Beijing 100191， China； 2.Beijing Key Lab of Magnetic Resonance Imaging Device and Technique， Beijing 100191， China

[Abstract] Objective To study the quantitative detection of the changes in the parameter of brain ECS （extracellular space） in the middle cerebral artery （MCA） territory after the influence of blood-letting puncture of Twelve Jing-Well Points using MRI （magnetic resonance imaging） and discuss the therapeutic role of blood-letting for the treatment of stroke. Methods 32male SD rats were randomly divided into blood-letting thalamus group （n=8）， blood-letting caudate nucleus group （n=8）， sham-control thalamus group （n=8） and sham-control caudate nucleus group （n=8）. Extracellular space （ECS） and interstitial fluid （ISF） drainage parameters were measured using Gd-DTPA tracing MRI method. Results The ISF flow speed of blood-letting thalamus group were depressed， the drainage time was lengthen， the Half-life of Gd-DTPA was （1.34±0.19） h， it was longer than that of sham-control thalamus group （0.51±0.13） h， the difference was statistically significant （P < 0.05）； the ISF drainage rates of blood-letting thalamus group [（7.60±4.18）×10-5/s] was less than that of sham-control thalamus group [（14.40±4.50）×10-5/s]， the difference was statistically significant （P < 0.05）； the tortuosity of the blood-letting thalamus group was （1.29±0.32）， compared with the sham-control thalamus group （1.28±0.17）， the difference was not statistically significant （P > 0.05）. Each parameter of blood-letting caudate nucleus group and sham-control caudate nucleus group was compared， the difference was not statistically significant （P > 0.05）. Conclusion A significant decrease in ISF drainage rate is revealed after blood-letting puncture of Twelve Jing-Well Points， but most of the middle cerebral artery of the brain tissue fluid drainage rate does not change. No difference is found in the tortuosity of the blood-letting thalamus， so， it is correlated to a lower metabolic rate of local neurons. The down-modulated excitatory state of neurons is assumed to be a beneficial protection for the ischemic neurons using blood-letting puncture of Twelve Jing-Well Points.

[Key words] Blood-letting puncture； Extracellular space； Gd-DTPA； Interstitial fluid； MRI

利用现代医学技术手段及理念，人们已经证实了十二井穴刺络放血法可改善脑血流，减轻因胞外K+、Na+失衡引起的毒性脑水肿的发展，从而阻止脑内不可逆损伤的发展，保护脑细胞[1-5]。从上述研究来看，将井穴放血治疗中风机制研究落脚于两个支撑点，一是对缺血神经元的保护作用，二是对神经元周围血供恢复的作用。手井穴刺络放血治疗脑病的记载源于黄帝内经《素问针解》：“菀陈则除之者，出恶血也。”通过刺络放血，使邪随血出，经脉疏通，从而达到急救的目的。《针灸大成》引《乾坤生意》说：“凡初中风跌倒，卒暴昏沉，痰涎壅滞，不省人事，牙关紧闭，药水不下，急以三棱针刺手十指十二井穴，当去恶血，又治一切暴死恶侯，不省人事，及绞肠痞，乃起死回生妙决[6]。”

《灵枢・本脏》中说：“经络是内属脏腑，外络形体，行气血，营阴阳，是气血运行必由的通路，贯穿于人体，互相衔接，由阴入阳，由阳入阴，从里走表，从表走里，气血流行，循环不息，如环无端”[7]。因此，经络的本质既非单纯的血管、血脉系统，也不是脏器中具体的组织或细胞群。从物理空间来看，位于细胞和血管周围的组织间隙的研究一直未被人们所重视，主要原因在于以往针对组织通道的研究技术手段的局限性。以往针对脑组织液的研究多集中于引流途径，而这些研究往往是离体实验的结果，无法显示活体脑内组织液的引流范围，并且缺少可以同时显示脑组织液流动以及同期可获得细胞周围间隙形态学参数指标的定量分析技术[8]。

本课题组近来建立了一种基于MRI示踪技术的脑细胞外间隙和脑组织液生理测量技术方法，是目前唯一可在活体上对全脑范围进行可视化定量分析的测量技术，不仅可以提供脑细胞生存的微观环境的形态学特征参数，还实现了脑细胞周围间隙内组织液流动性的动态可视化观察，并证实尾状核为起始点的脑组织液流动引流可基本覆盖大脑中动脉供血的脑区[9-10]。本研究应用MRI示踪技术对十二井穴放血的后脑卒中好发脑区的脑组织液流动及脑细胞外间隙（ECS）的生物物理特征改变进行定量分析与成像显示，讨论刺络放血后脑卒中好发脑区的脑细胞微环境变化的机制，探讨该法对脑中风神经保护的可能机制。

1 材料与方法

1.1 溶液制备及实验分组

溶液制备：用生理盐水稀释配制钆二乙三胺五乙酸（Gd-DTPA；马根维显，拜耳先灵制药，德国）溶液，Gd-DTPA至10 mmol/L。

实验分组：32只成年雄性SD大鼠，体重250～300 g。随机分为4组（每组各8只），分别命名为丘脑放血组、丘脑对照组、尾状核放血组、尾状核对照组。实验方案由北京大学医学部伦理委员会审批通过（批准号：LA 2009-008）。放血组：丘脑放血组及尾状核放血组用三棱针按“少商”、“商阳”、“中冲”、“关冲”、“少冲”、“少泽”的顺序，先左前肢后右前肢，点刺相当于人的手十二井穴解剖位置，使出一滴血，以不下滴为度[11]。丘脑对照组及尾状核对照组：不接受针刺放血步骤，其余均同于实验组。

1.2 MRI预扫描

四组大鼠（n=32）经腹膜内注射戊巴比妥钠、乙醇、水合氯醛、硫酸镁和丙二醇混合物（0.3 mL/100 g）麻醉后，置于MRI系统（MagnetomTrio，Siemens，德国）腕线圈中，用T1加权三维磁化准备快速采集梯度回波序列（T1 3D MP-RAGE）扫描。MRI扫描序列参数如下：回波时间（TE）=3.7 ms，重复时间（TR）=1500 ms，翻转角（FA）=12°，反转时间（TI）=1200 ms，层厚（SL）=1 mm，视野（FOV）=267 mm，体素=0.5 mm×0.5 mm×0.5 mm。所得结果即为0 h图像.

1.3 GD-DTPA脑内注射

剪去大鼠颅顶体毛，碘酒消毒，在头皮沿矢状缝从两耳间区域至两眼间区域做正中切口，小心分离脑膜暴露前囟。将大鼠置于立体定位仪（Stoelting，IL，美国）上，对照《大鼠脑立体定位图谱》确定丘脑区及尾状核区坐标，具体坐标参数为：丘脑：（前囟后2 mm，右旁开2 mm，深5.5 mm），尾状核（前囟前1 mm，右旁开3 mm，深4.5 mm）。根据上述坐标在立体定位仪上确定穿刺点，在颅骨表面定位钻孔，微量注射10 mmol/L Gd-DTPA溶液2 μL（注射时间5 min），注射完毕后缓慢退针，将大鼠从立体定位仪上取下后缝合头皮。32只大鼠分别重复上述操作。直肠温度计监测肛温，加热毯维持其体温在（38±0.5）℃。

1.4 手十二井穴刺络放血

参考《实验动物针灸手册》[12]、《实验针灸学》[13]、《大鼠穴位图谱的研制》[14]等论著关于大鼠十二井穴位置及进针手法的描述选取手十二井穴。即手太阴肺经井穴少商、手厥阴心包经井穴中冲、手少阴心经井穴少冲、手阳明大肠经井穴商阳、手少阳三焦经井穴关冲、手太阳小肠经井穴少泽，先左前肢后右前肢，三棱针（苏州环球针灸器械有限公司，批号040511），左手固定针刺部位，右手拇、食指夹持固定针柄，中指指腹抵住针身末端，将三棱针及毫针直刺入皮肤，深度限定在1 mm，刺入后立即出针，三棱针针刺放血，出血量为1滴，体积为15～20 μL。为了保证刺入深度为1 mm，在三棱针针尖往上1 mm处用胶带缠绕固定，即可保证进针1 mm时即停止进针，保证针刺井穴的准确性。放血后即刻将大鼠放入MRI接受扫描[11]。

1.5 MRI扫描

注射Gd-DTPA后不同时间点（0 h、15 min、30 min，1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h、7 h）行磁共振扫描成像。MRI扫描序列参数同前所描述。

1.6 图像处理和参数的定量计算

将上一步得到的图像与预扫描图像共同导入一款基于MATLAB平台开发的MR图像后处理软件，扫描后的每一个时间点图像分别与预扫描图像配准，然后与预扫描得到的图像对减[15]。

各参数定义为：迂曲度定义为λ=（D/D*）1/2，这里D*值是一个特定分子在脑ECS内的表观扩散系数，D值为该分子在自由溶液中的扩散系数（在笔者前期研究中，自由溶液：配制0.3%琼脂糖凝胶，通过测量Gd-DTPA在0.3%琼脂糖凝胶中的扩散得到D = 5.18×10-4 mm2/s[16]）。λ是ECS结构对分子扩散阻碍程度的量度。K′为一级清除速率常数（/s）[17]。

根据经典扩散参数模型，运用忽略扩散源的各向同性均匀介质的参数计算方法测量上述参数，具体参数测量方法在我们之前发表的文献中有详细描述[9，15-16]。

1.7 统计学方法

采用SPSS13.0 软件进行统计分析，正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 扩散参数的定量计算

丘脑区：丘脑放血组及丘脑对照组脑细胞周围间隙Gd-DTPA分子微观扩散与清除参数D*及K′测量结果见表1，丘脑放血组D*=（3.11±1.07）×10-4 mm2/s，丘脑对照组D*=（3.16 ±0.67）×10-4 mm2/s，两组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；因λ=（D/D*）1/2，D=5.18×10-4 mm2/s，可得到两组大鼠丘脑区迂曲度。丘脑放血组λ=1.29±0.32，丘脑对照组λ=1.28±0.17，两组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。清除速率K′：放血组K′=（7.60±4.18）×10-5/s，对照组K′=（14.40±4.50）×10-5/s，两组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；Gd-DTPA注射入脑后，丘脑对照组及丘脑实验组丘脑区T1信号增高（图1）。

尾状核区：尾状核放血组及尾状核对照组脑细胞周围间隙Gd-DTPA分子微观扩散与清除参数D*及K′测量结果见表2，尾状核放血组D*=（3.37±0.93）×10-4 mm2/s，尾状核对照组D*=（3.38±1.08）×10-4 mm2/s，两组之间比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；因λ=（D/D*）1/2，D=5.18×10-4 mm2/s，可得到两组大鼠尾状核区迂曲度λ。尾状核放血组λ=1.31±0.52，尾状核对照组λ=1.31±0.31，两组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；清除速率K′：放血组K′=（7.90±2.10）×10-5/s，对照组K′=（7.84±4.18）×10-5/s，两组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。

表2 尾状核放血组及尾状核对照组脑细胞周围间隙

Gd-DTPA分子微观扩散与清除参数的测量结果（x±s）

2.2 Gd-DTPA在脑内的扩散与清除

对照组：Gd-DTPA注射入大鼠丘脑区后，丘脑区MRI信号增高（图1B），0.5 h后信号开始逐渐衰减。Gd-DTPA在2.5 h内完全清除。放血组：Gd-DTPA注射入大鼠丘脑区后，丘脑区MRI信号增高（图1A），2 h后信号开始逐渐衰减，Gd-DTPA在丘脑区的沉积直到7 h才完全清除。运用Matlab软件拟合得到半衰期，放血组：（1.34±0.19）h，对照组：（0.51±0.13）h，拟合结果见图2。半衰期等具体数值详见表1。

3 讨论

近年来，随着西方医学针对脑卒中的各类神经保护药物研发的整体失败[18]，人们开始更多地关注中医理论体系中对脑卒中的治疗方法。西方医学的整理理论根基在于细胞学说，对于神经科学而言，亦即神经元学说。以往认为，神经元与血管共同构成了脑的基本功能单元（两室模型）[19-20]。学者们在离体细胞培养环境下，明确了神经元缺血、缺氧损伤的各个关键环节后，研发了一系列阻止各损伤环节的多种神经保护药物，在阻塞血管再通前或之后，保护受损神经元。几十年之后，人们无奈地发现，上述看似完美的神经科学药物研发没有取得任何实质性的成果。至今，全世界已有50多种神经保护药物被宣告无效，浪费了巨大的研发资金和人力。尽管2009年美国卒中圆桌会议已对神经保护研发的失败从临床前研发的角度进行了系统的总结和分析[18]，但结合本研究组近期对ECS的研究认为，他们的分析并未触及问题的核心和本质。

当将脑ECS纳入系统后，以三室模型对脑进行分析，可以发现以往脑神经保护药物研发思路所存在的致命问题：脑细胞占据活体脑70%～80%的容积空间，脑血管却只占3%～5%的容积[8]，ECS占据着余下的15%～20%的空间。当脑缺血发生时，由于相应脑区血流下降或者中断，神经保护药物无法有效到达需要保护缺血脑区内的神经元，加之血脑屏障的存在，药物在局部达到治疗浓度非常困难。并且即使药物可以顺利通过血脑屏障，药物如何通过占据着脑容积15%～20%的ECS空间达到缺血脑区，并对神经元发挥作用依然也是未知[21]。实际上，以往对ECS的认识相当局限，国内外神经解剖学、神经疾病诊治专著中都鲜有提及。

究其原因，主要是以往ECS研究技术的局限性。目前最为常用的测量技术RTI-TMA法，只能测量脑内距离100 μm两点间的ECS参数，而集成光学成像（IOI）法则由于所采用探测光的穿透能力的限制，只能探测脑浅表200 μm深度的组织液流动，并且，现有的测量技术无法在测量脑ECS迂曲度等参数的同时分析与显示脑ISF的引流情况[8]。近来，本课题组针对上述技术难题，采用MRI三维成像技术，利用镧系金属离子钆对其邻近水分子自旋弛豫的作用，发明了一项可特异性示踪脑组织液中水分子运动的测量技术。使得在活体脑内对脑组织液流动的测量、成像显示以及对脑ECS迂曲度的测量可同时完成。并且，利用该技术，发现大脑中动脉供血区脑组织液是由尾状核引流而来，并最终经脑CSF引流清除[9]。

根据上述发现，本课题组在前期已成功证实脑细胞外间隙可作为神经系统给药的新途径。应用简单扩散给药方法成功的将已被“宣布死刑”的CDPC复活：脑间质途径给予胞二磷胆碱（0.0025 g/kg，50 mmol/L）后（该剂量只是腹腔给药的1/800），其对大脑中动脉永久栓塞的大鼠模型缺血区神经元的保护作用可持续12 h以上[10]。

本研究证实在十二井穴刺络放血后，脑卒中的好发区中丘脑区[22]的组织液流速明显下降，这将为进一步阐明其治疗卒中的确切机制奠定基础。

在物理空间上来看，脑组织液位于脑细胞、血管壁构筑的组织间隙内。因此，组织液周围的任何因素都可能对脑组织液的产生、引流与清除产生影响。脑组织液包绕在脑细胞周围，其流速应该与邻近的脑细胞以及血管都有关系[23-24]。脑组织液被认为是神经元输送养料，运走代谢废物的重要方式，对于维持脑细胞微环境的稳定起重要的作用[25]。因此，从理论上，神经元的代谢率及兴奋状态会造成脑组织液的引流的变化，本研究也表明丘脑区脑组织液的引流速度快于尾状核区。同时，ECS的形态变化，如迂曲度的增加也是导致其流速下降的可能机制。Syková等[26]发现，在脑缺血区，由于细胞毒性水肿导致了ECS容积的下降和迂曲度以及陷阱的增加，而这些导致脑ECS的体积下降最高达75%。但是，本研究发现流速下降区域的脑细胞周围间隙的迂曲度并没有明显变化，因此，手十二井穴刺络放血后丘脑区的组织液流速下降并非由ECS的形态学变化造成。

井穴刺络放血的生物效应有：刺破皮肤放血，痛觉，少量组织液流出。丘脑内侧是感觉的初级中枢，因此由于痛觉刺激而造成丘脑局部区域的神经元兴奋性或代谢水平的变化有可能是造成脑组织液流动性变化的原因，文献也报道应用核医学技术方法证实了丘脑区代谢率较其他脑区相对为高[27]。所以，本研究所发现的井穴刺络放血后丘脑区组织液流动减慢，可能反映了该区域神经元代谢率的下降。如果是这样，井穴刺络放血疗法对中风的治疗作用机制应该是通过下调神经元代谢水平而造成了类似“麻醉休眠状态”来实现[28]。然而，是痛觉刺激的单一因素，或者是痛觉与放血等多种因素的综合作用导致的丘脑区组织液流动速度变化还需进一步的研究明确。

从本研究的结果来看，刺络放血后丘脑区与尾状核远端的大脑中动脉供血脑区的组织液流速变化并不一致，说明该法对脑卒中不同脑区的神经保护机制可能不同。

[参考文献]

[1] Duan GB.Clinical application of twelve well points in emergency treatment [J].World Journal of Acupuncture and Moxibustion，2000，10（2）：48-50.

[2] 姚凯，郭义，胡利民，等.针刺对大鼠脑缺血超早期脑细胞内外游离钙离子浓度的影响[J].中国中西医结合急救杂志，2005，12（5）：303-304.

[3] 图娅，郝晋东.十二井穴针法治疗局灶性脑缺血大鼠机理的时效相关性研究[J].北京中医药大学学报，2003，2（3）：5.

[4] 马岩，郭义，王秀云，等.“手十二井穴”刺络放血对实验性脑缺血大鼠缺血区脑组织钙调素活性影响的实验观察[J].针刺研究，1999，24（2）：105-107.

[5] 马岩，郭义，张艳军，等.手十二井穴刺络放血对实验性脑缺血大鼠缺血组织K+、Na+浓度影响的动态观察[J].中国针灸，1997，（9）：562-564.

[6] 杨继洲（明）.针灸大成[M].黄龙祥，整理.北京：人民卫生出版社，2006：246-247.

[7] 张弛，周章玲.刺络放血疗法探源：析《内经》刺血络法[J].中国中医基础医学杂志，2003，9（4）：5-6.

[8] Syková E， Nicholson C. Diffusion in brain extracellular space [J]. Physiological reviews 2008，88（4）：1277-1340.

[9] Han H，Li K，Yan J，et al. An in vivo study with anMRI tracer method reveals the biophysical properties of interstitial fluid in the rat brain [J]. Sci China Life Sci，2012， 55（9）：782-787.

[10] Han H，Xia Z，Chen H，et al. Simple diffusion delivery via brain interstitial route for the treatment of cerebral ischemia [J]. Sci China Life Sci，2011，54（3）：235-239.

[11] Yin Y. Blood-letting at a single point for treatment of acute diseases [J]. Journal of traditional Chinese medicine，1997，17（3）：214-216.

[12] 胡元亮.实验动物针灸手册[M].北京：中国农业出版社，2003：288.

[13] 林文注，王佩.实验针灸学[M].北京：上海科学技术出版社，2007：36-80.

[14] 华兴邦，周浩良.大鼠穴位图谱的研制[J].实验动物与动物实验，1991，（1）：1-5.

[15] Liu B， Bai X， Zhou F， et al. Mutual information based three-dimensional registration of rat brain magnetic resonance imaging time-series [J]. Computers & Electrical Engineering，2012，39（5）：1473-1484.

[16] 韩鸿宾.应用磁共振成像技术定量测量活体大鼠脑细胞外间隙的扩散参数[J].北京大学学报：医学版，2012， 44（5）：770-775.

[17] Li K，Han H， Zhu K，et al. Real-time magnetic resonance imaging visualization and quantitative assessment of diffusion in the cerebral extracellular space of C6 glioma-bearing rats [J]. Neuroscience Letters，2013， 543：84-89.

[18] Fisher M，Feuerstein G，Howells D W，et al. Update of the Stroke Therapy Academic Industry Roundtable Preclinical Recommendations [J]. Stroke. 2009，40（6）：2244-2250.

[19] Bjornsson MA，Norberg A，Kalman S，et al. A two-compartment effect site model describes the bispectral index after different rates of propofol infusion [J]. Journal of Pharmacokinetics and Pharmacodynamics，2010，37（3）：243-255.

[20] Le Bihan D，Breton E，Lallemand D，et al. Separation of diffusion and perfusion in intravoxel incoherent motion mr imaging [J]. Radiology，1988，168（2）：497-505.

[21] 韩鸿宾.神经元学说的补丁――脑细胞生存的微环境[J].科技导报，2012，30（26）：71-74.

[22] Dogousslavsky J，Barnett HJ，Fox AJ，et al. Atherosclerotic disease of the middle cerebral artery [J]. Stroke，1986， 17（6）：1112-1120.

[23] Iliff JJ，Wang M，Liao Y，et al. A paravascular pathway facilitates csf flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes，including amyloid beta [J]. Science Translational Medicine，2012，4（147）：147.

[24] Sloop CH，Dory L，Roheim PS. Interstitial fluid lipoproteins [J]. Journal of Lipid Research，1987，28（3），225-237.

[25] Michal A，Eloise H，Katharina E，et al. Interstitial fluid drainage is impaired in ischemic stroke and Alzheimer’s disease mouse models [J]. Acta Neuropathol，2013，126（3）：353-364.

[26] Syková E，Mazel T，Vargová L，et al. Extracellular space diffusion andpathological states Prog [J]. Brain Res，2000， 125：155-178.

[27] Heiss WD，Habedank B，Klein JC，et al. Metabolic rates in small brain nuclei determined by high-resolution PET [J]. J Nucl Med，2004，45（11）：1811-1815.