医学影像和医学影像技术范文
时间：2023-08-10 17:34:35
导语：如何才能写好一篇医学影像和医学影像技术，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
【关键词】医学；影像；物理；技术
【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2015）03-0272-02
当前时代背景下的医学影像物理和医学影像技术发展以依靠功能成像为主，核心点即为人体心理生理成像和人体心理功能成像。我们通常所说的生理成像也就是基础性参数成像，此项内容以生理参数形式在人体内部进行分布，上述分布形式需要相关人员进行数据重建才能获得，之后在此基础上还要给予其数次分析和详细计算。心理成像技术的复杂性显而易见，由于多少会联系到实验设计的准确性，成像设备设定过程中要对其进行被试控制以达到预期效果。但是心理成像临床精神疾病诊疗实验才会起突破最大的一个点，内生物法分析动态成像和反义核酸水动态成像是现下医学领域多次讨论和研究的科学问题之一，上述成像方法和成像技术会对医疗机构改革造成重大影响。
一、医学影像物理要点分析
1.X射线成像要点分析
1970年之后出现了X射线断层成像技术，X射线断层成像技术是较为传统的影像技术之一，以也是最为成熟的成像方法之一，X射线断层成像技术速度之快足可以完成对心脏进行动态成像，将显像增强剂XCT成像技术进行科学合理融入，可对血管病变进行检查，同时也可对血脑屏障病灶破坏与否进行适时检查，此项技术实质上归属于功能成像的基本范畴之内。需要注意的是，病人体内剂量接收和病人片厚接收过程中，医生均应进行折中筛选，对比度因素提高和相关空间分辨率提高，二者会受到一定制约因素影响，但是多模态集成成像基本装置中，新型PET和MRI都相继问世，在某种程度上为用户提供质量方法选择权限，软件水平元素和硬件水平元素之上的医学影像集成有时呈多模态发展趋势，此类状况也是未来发展趋势之一。
2.核磁共振成像要点分析
采集技术以成为操作主选，其发展态势偏于良性化，但是气体成像确是商业首选，肺部现象中的体现尤为突出，当下MRI基本功能成像设备应用范围内，主要分为人脑认知功能成像内容，此种内容旨在对人体大脑工具机制进行实时性的心理测量，并在诊断过程中可以为肿瘤疾病等提供相应可靠治疗信息，之后在此基础上为体内肿瘤发展阶段信息以及相关体内肿瘤扩散程度信息等且进行及时准确判断，一般情况下，其以人脑功能可视化工具形式产生。MRI设备通过不断更新与调整，其已然达到了10Tesla的高超操作水准，具体性结构系统发杂程度相对于设备维护因素和设备功能开发因素而言，其是及其重要的。单从数据采集角度而言，微电子技术会被适当应用到体素水平研究上，通过并行采集技术完成编码技术脱离，使得MRI成像速度得到稳步提升。
3.超声波成像要点分析
UI实质上以非电离辐射成像模态形式产生，主要分为平面成像产品和对应断层呈现产品两种，因为二维成像才是其重要组成部分和重点操作环节，还有就是血液流动彩色杜普勒成像仪器设备的合理接入，此项产品便难以流通，三维成像技术和相关三维技术产品普及程度不高，但是我们此处所谈及的三维也并不是真正意义上的三维，其主要是指将二维切片进行叠加，在叠加之后得到所需的准三维图像。需要注意的是，UI仪器设备发展过程中极有可能超过X射线成像，并会成为医学影像工作中的首选医学工具。应该了解到，超声波成像具备成像安全可靠和操作价格低廉等优异性，所以诊断治疗和介入治疗以及相关影像检测环节等都会得到不断发展与完善，其数量基础性增长速度已然超乎人类想象。
二、医学影像技术要素分析
处于首位层次上的工作和与处于首要层次上的硬件相关的软件关系尤为密切，二者主要对成像装置操作部件控制内容进行承担，与此同时，数据采集内容和图像预处理内容以及相关图像重建内容等也被包含在内，并且也需要将临床数据信息进行采集，之后在此基础上对其加以分析。依据长远角度而言，医学软件和医学硬件的结合是医学领域发展过程中的必然需求，以此种模式便可有效提高医学水平的竞争力度。次要层次软件核心针对环节是对机械数据进行分析和处理，需要医护人员相互配合才能完成正规操作，现下我国没有形成三位一体合作机制，现有商业软件开发仍旧落后与他国。PACS技术的出现有力补漏了技术空缺，节点设置将成像设备作为主要内容，多模态形式之上的医学影像资料信息会被不同类型专业图像处理平台加以处理以有效满足基础性医院临床工作需求。上述软件与图像工作平台相互联系，之后在此基础上在于与PACS进行对接，以此种模式来完成局域网节点创建，适时通过与医院就医病人接诊过程进行病人具体信息录入，完成优良性质为主的图像站创建。此时需要在作出科学合理病情诊断的同时打印出相关病情报告，图像站中的工作人员可以对同意病人进行数据信息采集，然后与图像配准环节有机融合，只有这样才能在一定程度上提高医院对病人的治疗质量和诊断效率。
结束语
综上所述，医学影像物理和医学影像技术是当前物理学整体中的核心分支结构，需要对成像问题和图像处理问题以及相关医学图像临床应用问题等有所了解。与此同时，物理问题内容和算法内容以及对应软件设计内容也是其中重点，疾病诊断医学影像内容和疾病治疗医学影像内容以及疾病科研医学影像内容都是重要人体信息载体，合理分析影响物理和技术可促进行业内部的稳定发展。
参考文献：
[1]周洁，白木.21世纪的医学影像[J]. 医疗保健器具. 2001（02）
[2]陈卫国，黄信华，张雪林，王晋豫.医学影像存储与传输系统构建策略和实施的初步体会[J]. 中华放射学杂志. 2002（10）
[3]威廉・亨达.21世纪的医学影像[J]. 医疗保健器具. 2003（06）
篇2
关键词： 医学影像技术专业 校院结合 工学交替 实施方案
医学职业教育是直接为地方卫生事业服务、融知识传授和技能培养于一体的职业教育，承担着健康所系、性命相托的责任，具有实践性很强的行业特点。而影像技术专业又是一门技术性很强的学科，且该课程涉及理、工、医等领域，课程技术种类多，学习内容抽象难懂，不易理解，因此，此项学科的实践就显得尤为重要。医学影像学具有自己独立的理论体系，是理、工、医结合的产物。现在培养医学影像复合型人才的问题，已经引起教育工作者、教育理论界和国家教育行政部门越来越密切的关注。
计算机技术的飞速发展使人类数据存储与处理的硬件环境有了质的飞跃；人工智能、模式识别、计算机视觉、图像处理、计算机图形学和数据库等学科的发展，又为数据处理提供了有力的软支持。因此，借助于已有的各种计算方法，更加充分、高效和客观地提取出医学图像中的有用信息，提高医生的诊断效率己势在必行。计算机辅助医学图像分析正是基于上述背景产生的一门充满活力的交叉学科。
为了缩短教学与临床的距离，以更好地适应临床实践的需要，我们对周口市市、县、乡各级医院医学影像科室进行了调查，确定临床对中职影像人才的需要，在此基础上，我们为使“校院结合、工学交替”教学模式顺利进行，以更好地与临床影像工作对接，特制定了符合中职教学特点的医学影像技术人才培养方案，培养目标定位为各级医疗机构X线、CT等医学影像技术岗位培养知识技能型人才，课程围绕医学影像技术岗位的医学影像检查技术、医学影像诊断学及医学影像设备学进行设置，课程改革基于影像技术岗位工作过程，突出“教、学、做”一体化，最终形成“校院结合、工学交替”的人才培养模式，即学生第一年的基础课程教育、专业思想教育在校内进行；第二年的专业课教学在我校医学影像实训基地和临床教学医院（周口市中心医院）交替进行，且学生利用周六、周日时间，分批次进入教学医院完成专业课技能见习，强化训练临床基本技能。医院临床指导教师一对一地对学生开展真实病例教学，学生直接接触患者进行临床实践，这使见习效果明显得到增强，既缩短了学生进入医院实习的适应期，又为其临床顶岗实习打下了扎实的基础。并且通过让学生早期接触临床，将课堂教学改为临床真实教学环境，利用先进齐全的仪器、设备，加上医学影像技术人员丰富的工作经验和充足的临床病例资源，师生共同参与教学和临床实践，以增强教学效果。第三学年的顶岗实习在实习医院进行，由实习医院实训指导老师带教，按照实习的教学大纲，明确实习操作项目，强化学生对专业技术的实践，指导学生把专业知识与技能应用于临床工作中，并接受医院和学校的双向考核。实习结束以后，由各科带教教师按照项目操作给出各科成绩，医院根据学生的操行表现评出优秀、良好、合格、不合格的等级。实习返校后参加毕业综合考试，这样培养的学生能适应医学影像岗位的工作。
同时注重理论教学与临床实践的结合。理论教学应为临床实践服务，学好该课程的根本目的是更好地为临床诊断奠定基础。教学和临床实践相结合是医学教育的总趋势和最终目标，应将目前医院检验科常规应用的检验技术与开展的检验项目作为检验岗位需求的技能标准，做到教学内容与临床岗位需求的接轨，使理论教学更好地适应当代临床的发展。
医学影像领域作为一个完整的体系，其教学课程的设置应遵循连续性和系统性。例如，应先让学生掌握信号分析基础理论知识，然后进一步提高专业技能。在硬件方面，完成各种电子技术知识的学习之后，重点掌握医学成像设备的特点与成像原理；软件方面，完成计算机应用和基本语言程序设计的学习后，结合医学图像处理技术重点培养医学图像分析技能。因此，要合理安排以上相关课程的顺序，使学生循序渐进地掌握较为熟练的操作技能和应用能力，达到在具有较广知识面的同时具备一定专业深度的水平。
现代医学影像技术学借助各种不同的成像原理与方法，使医生能观察到肉眼不及的人体内部器官结构，并了解其生理功能和病理变化，在影像监视下采集活体标本，达到活体诊断和介入治疗的目的。因此，基础专业理论和临床相关学科知识及专业本身各内容如何合理安排教学和突出重点至关重要。以理论联系实际、教学与临床相结合为重点，在教学过程中尽量采用多媒体教学，其获取的丰富影像资料、体现计算机强大后处理和图像重建能力都是传统放射学无法比拟的。多媒体影视资料可以更直观地显示设备的检查过程，部分甚至可代替现场实习，缓解教学实习与临床工作的矛盾，在临床教学过程中取得良好的效果。
为了真正做到“校院结合、工学交替”，我校特指定了本学年的实施方案，我们将组织2011级学生进行阶段培养，通过理论教授，实验室练习，到实习医院实地操作演示及练习，医院实地操作考试等途径，使学生学习兴趣提高，理论知识易于理解。
总体框架如下：
第一步：2012年9月～2012年10月15日
进行理论教授与实验室实践练习
第二步：2012年10月15日～11月15日
到周口市中心医院进行现场教授与独立操作
第三步：2012年11月15日～12月15日
到周口市中心医院进行现场操作考试
第四步：2012年12月15日～2013年1月
篇3
关键词：信息技术；英语教学
信息技术是现代经济和社会发展的必然趋势。21世纪，以计算机网络和多媒体技术为核心的信息技术，在各领域充分运用的同时，也在教育领域对传统教育模式提出了全新挑战，使教育面临着前所未有的深刻变革。通过整合信息技术与课程的教学方式，指的是利用多媒体等信息技术优势辅助学科教学，实现信息技术和其它学科教育双赢的教学模式。“信息技术与课程整合”的研究与实施，也为学生的自主性、创造性奠定了良好的基础，促进了素质教育的全面实施与发展。
1信息技术与课程整合的特点
1.1从计算机辅助教学到信息技术与课程整合，推进了教学手段的多样化
计算机辅助教学（CAI）的产生和发展以及在教学中的广泛应用，丰富了教育教学的方法和手段，提高了教与学的效率和质量，形成了现代教学的发展的重要推手。信息技术与课程整合包括学科整合、媒体整合和角色整合三个内容。北京师范大学的何克抗教授曾说：“在先进的教育思想、理论指导下，尤其是在‘主导—主体’教学理论指导下，把计算机、网络和多媒体技术作为促进学生自主学习的认识工具、情感激励工具与丰富的教学环境的创设工具，并将这些工具全面应用到各学科教学过程中去，使各种教学资源、各个教学要素和教学环节经过整理、组合，相互融合，在整体优化的基础上产生聚集效应，从而达到培养学生创新精神与实践能力的目标。”不难看出，信息技术与课程的整合从其本身特点来看，就具有先天的多样性优势和发展应用活力。
1.2完善的技术手段为信息技术与学科教学的整合提供了技术保障
目前，绝大多数院校建设有较为完备的校园网络，并全面服务于教育教学和科研学术的整个过程。门户网站提供常用教育网站的链接；主服务器提供工具软件库、电子图书馆、虚拟化计算机辅助教学软件；WWW服务器则为利用互联网资源提供了方便。另外，校园网的资源库还提供了海量的音频、视频、动画等各种资源供师生使用，其中包括大量的英文一手资源。这些都为信息技术和英语教学的整合提供了得天独厚的便利，形成了软、硬件环境和资源支持，为校园网和互联网以及相关软件应用在常规英语教学中，并及时、快速服务课堂教学提供了良好环境。
2信息技术与英语教学整合的实践
2.1英语教学的内容和方式更适合与信息技术的整合
整合可以从教师的教学、学生主体、教学媒介即教材和教学评价反馈、学生的学习、教学科研等途径来实现，而教师和学生是整合的关键因素：1）教师在课程整合中的角色；2）学生在课程整合中的角色；3）教材在课程整合中的角色；4）整合在教学评价中的应用。
2.2信息技术与学生学习整合可以使学习的过程直观便利
信息技术与英语教学的整合是教师学生的学习策略指导与学生的自主学习的结合。通过信息技术学习英语则是一条新颖、有效的创新途径。首先，关注英语语言学习规律的把握；其次，关注如何运用多媒体技术和互联网辅助学习。对于前者，我们可以通过课堂教学和课外辅导、讲座、讨论等方式指导学生加强英语学习，教师也可以把平时在互联网上收集到的英语学习资源分类整理共享给学生，为他们的自主学习和运用网络学习英语提供有力帮助。在课堂学习中，学生可以较好地利用从这些网站中获取的信息，拓展有限的教学内容，并通过信息技术手段制作电子作品，丰富课堂学习内容，使英语学习个更有趣味性。
2.3信息技术与教学科研整合能方便快捷的拓宽教师视野
通过互联网搜集各种有关英语学习和教学的网站，一方面搜集积累教学和学习素材，丰富课堂教学材料，同时还通过较好的英语教学研究网站进行网络在线学习，拓展教师教学研究视野，提升自己的专业水平和业务能力。
3思考和启示
3.1更新观念
信息技术在教学中的应用重在信息获取、筛选和运用，同时，技术还是获得和加工信息的工具。实现课程整合最重要的是教育观念的革新，课程整合将信息技术比作各学科学习的有机组成部分，它要在己有课程的学习活动中有机结合使用信息技术，从而更好完成课程教学目标和人才培养方案。
3.2积极开展理论学习
在日新月异的信息时代，教师必须不断“充电”才能满足科技进步和社会发展的需要，所以，教师要做终身学习者。作为一种新的课程设计思想和教学模式，信息技术与课程整合有着深刻的理论背景。教师要不断学习新的理论，努力搞好教育教学。
篇4
【关键词】肿瘤放疗；现有核医学显像技术；骨转移；99mTc-MDP
【中国分类号】R817【文献标识码】A【文章编号】1044-5511（2011）11-0370-01
骨转移是临床中常见的恶性肿瘤，在治疗上可以通过放疗和化疗的的方法进行治疗，但大多数患者对化疗次数难以耐受。据国内外相关文献介绍，全身骨骼显像经典的全身骨骼显像剂是99mTc-MDP(亚甲基二膦酸盐)相较于其他治疗方式，可以缓解患者骨转移破坏带来的疼痛，放疗后减少镇痛药剂量，副作用较小，临床效果好［1］。为此我科室应用99mTc-MDP进行骨转移性肿瘤筛查和辅助诊断，现将结果报道如下。
1资料与方法
1.1临床资料:选择2007年2月~2011年2月我院收治80例多发骨转移患者，均经过MR、CT及骨核素扫描确诊，且骨转移照影学证据均在2个以上。其中男43例，女37例，年龄40~82岁，平均年龄59.2±2.3岁。骨转移癌原发肿瘤为消化道肿瘤10例，乳腺癌22例，肺癌33例，前列腺癌6例，其他恶性肿瘤9例。
1.2治疗方法:取200mg的99mTc-MDP(亚甲基二膦酸盐)加入500ml的0.9%氯化钠注射液，静脉滴注2小时，每天1次，5天位1治疗周期，休息28天，连用3个周期，为一个疗程。在持续静脉滴注后，观察患者情况再适时接受化疗和放疗。
1.3疗效评定及观察:治疗前后的疼痛评分、PS评分和血清钙、WBC、PLT、碱性磷酸酶、Hb等相关检查。治疗后疼痛缓解情况应用VAS测评。
1.4统计学方法:应用Excel表格做统计分析，计量资料应用t检验，计数用x2检验。
2结果
2.1治疗前后结果:80例患者治疗前后的疗效对比发现，治疗后的血清钙进一步降低，大部分患者骨转移疼痛程度明显减轻，PS评分情况较好。（详见表1）
表1 80例患者治疗前后的疗效分析
2.2不良反应情况:在对WBC、PLT、碱性磷酸酶、Hb等相关检查时，也未出现下降，无毒性反应；也未出现恶心、呕吐、腹泻、发热、肾功能损伤等不良反应。
3讨论
99mTc-MDP具有较强的稳定性，有效避免降解患者体内的磷酸酶，减少骨溶解，有利于修复骨质；客观上，可抑制PG1和PG2的合成，抑制乳酸、减少肿瘤转移带来的疼痛和骨质破坏。这是由于当癌细胞骨转移的时候，会使局部骨骼出现溶骨反应，99mTc-MDP早期参与骨反应，在病灶部位形成放射性浓缩［2］。
若99mTc-MDP骨显像出现下列情况，则考虑为恶性病变：新病灶增大、增浓；不对称；中央想由稀疏转为浓聚；病灶X像呈阴性；肾脏放射性减少；病灶位于骨髓腔；椎体病向椎弓根延伸；肋骨上下缘索状浓聚；软组织放射性摄取［3］。
若99mTc-MDP骨显像出现下列情况，则考虑为良性情况：椎间盘、肋软骨交界处等关节旁骨质，椎骨之横突、棘突和椎小关节等部位的病变，以及相邻肋骨同时出现多个病灶。少部分骨转移表现为独立的病灶，一些在5个月后或更长时间才会发展多发性病灶。本文研究中的33例肺癌患者，有肺性肥大性骨关节病，临床表现为双侧下肢长骨皮质条索状增强，部分患者还会出现双侧掌指多发性局灶性增强表现，X线表现为阴性，经过99mTc-MDP静脉滴注治疗后，上述症状均消失。6例前列腺癌、22例乳腺癌、10例消化道肿瘤及9例其他恶性肿瘤在经过治疗后骨显像异常加重，3个月之后才好转，个别患者半年后才出现好转。
经过全身骨显像后，针对上述可能可疑病灶部位进行CT断层采集，对解剖部位精确定位，加深临床中对病灶病变性质、范围的了解，对软组织异常摄取进行诊断，排除正常放射性分布干扰。结合CT扫描骨骼的图像信息，提高病变性质的临床诊断质量，以此降低骨转移诊断出现假阳性率［4］。
本文研究的患者在99mTc-MDP治疗10天后，大部分患者骨转移疼痛明显减轻。99mTc-MDP可清除患者体内的自由基，减少自由基对组织的损伤，抑制胶原酶的活性，减轻胶原酶对关节软骨的损害，保护患者体内的SOD活性，抑制病理性复合物，并且还可以对受损的骨滑膜进行修复。在减轻疼痛的同时，进一步降低血清钙，预防肿瘤在骨转移中形成高钙血症；抑制骨吸收、对肿瘤的骨破坏进行修复，有效预防出现病理性骨折。
在对WBC、PLT、碱性磷酸酶、Hb等相关检查时，均未出现下降，表明99mTc-MDP未发生骨髓抑制反应，也未出现恶心、呕吐、腹泻、发热、肾功能损伤等不良反应，临床治疗安全性高。
综上所述，经典的全身骨骼显像剂是99mTc-MDP(亚甲基二膦酸盐)，可用于筛查和辅助诊断骨转移性肿瘤，有助于肿瘤治疗前分期和了解骨骼转移性肿瘤放疗情况，通过现有的核医学显像技术在肿瘤放疗方面可发挥良好的诊治作用。
参考文献
［1］肖国有，李党生，欧阳南梅，等．89SrCI联合云克治疗转移性骨痛38例疗效评价［J］．广西医学，2006，38(2)：197．199．
［2］顾兆祥，蒋茂松.核医学显像在三维适形调强放疗中的应用［J］.核技术，2003，14（11）：245.
［3］厉红民，李前伟，黄定德，等.18F-FDG PET/CT显像与99mTc-MDP全身骨显像诊断骨转移的价值［J］.重庆医学，2005，10（8）：178.
篇5
关键词 教师资格，职业发展，数学成绩，混合模型。
分类号B844.2
1 前言
影响学生学业成绩的因素一直是教育与心理学研究的重要问题。影响因素有很多，依据Bronfen-brenner提出的“生态系统论”的观点。可以从学生、教师和学校等层面来探讨。其中，在学生层面和教师层面上国内外研究者已做了大量研究。得到了丰富的研究成果。
一直以来。研究者较多关注学生层面因素的影响。已有研究表明学生的家庭背景、学习策略、学生班级集体效能、考试焦虑、以及学生对数学的态度、学习的动机和兴趣等对其数学学业成绩都有重要影响。
近年来，教师层面的因素对学生学业成绩的影响日益受到广泛关注。如有研究表明，作为教师素质的基本要素的年龄、性别、学历、教龄等资格变量并不能完全决定学生的学业成绩，但有研究者认为教师是否有教师资格证对学生成绩没有影响，教师的学历类型和经历对学生成绩有明显的影响。另有研究者认为教师的学科知识(knowledgeof subject matter)和关于学科的知识(knowl-edge about subiect matter)以及学科教学知识均对学生学业成绩有重要影响。
在教师层面的因素中，关于教师职业发展活动的影响也是研究热点之一。如早期研究表明教师的职业发展经历可以帮助他们理解学生如何更好地学习数学，教师的职业发展经历能够使他们有效地处理班上不同学生的需要，从而提高学生学业成绩。近期有人更深入研究教师职业发展训练对一些具体方面的影响，如有研究表明受过职业发展训练的教师所教学生在问题解决活动中的表现要显著好于未受过职业发展训练的教师所教的学生。而且两组学生在问题解决行为上也存在显著差异。受过职业发展训练的教师所教学生显示出更强的数学自信心，更倾向于认为数学是对现实世界的强有力的思考方式。最近Vescio等在对教师参加职业学习的影响研究的回顾后认为教师参加职业学习活动有助于提高教师职业知识和提高学生成绩。
但是，教师职业发展因素中职业发展活动内容以及在校与其他教师的交流方式有多种。其影响如何尚不清楚。因此，本研究采用严格的国际比较教育研究TIMSS2003中美国、瑞典、日本和香港这四个国家(地区)的数据，采用混合模型进行分析，来深入探讨教师资格因素和职业发展因素与学生数学成绩的关系。
2 研究方法
2.1数据来源
采用TIMSS2003的数据，原因如下：(1)TIMSS2003的学生问卷和教师问卷有自身明确的构想。含有本次研究所需要的学生变量和教师变量；(2)TIMSS2003测试的学生成绩是通过数学内容(数、代数、测量、几何和数据)和认知能力(知道事实和过程、使用概念、解决常规问题和推理)所获得，这对本研究来说具有一定的代表性；(3)由于其研究设计严谨、测试过程严格，因此其搜集到的数据具有很高的可靠性。
本研究所用数据均来自TIMSS2003官方网站(htw://timss.bc.edu/timss2003i/PDF/t03_spssl.zip，htw://timss.bc.edu/timss2003i/PDF/t03_spss_2.zip)。
2.2被试选择
选择了美国、瑞典、日本和香港八年级学生及其教师作为国际比较的对象，原因是：在国际比较研究中，美国作为最大的多文化的移民国家，其数据受到独有的重视：瑞典和日本分别是欧洲国家和东亚国家的代表，且其学生平均成绩在欧洲和东亚处于中等水平：香港的教学传统与中国大陆有一定的相似性，中国大陆没有参与TIMSS2003的研究，因此希望从香港的数据中得到一些对中国有益的启示。
2.3研究方法
选择了上述四个国家(地区)八年级的学生背景档案、教师背景档案和学生一教师链接档案。因变量是学生的数学成绩。自变量有两层，第一层是4个学生变量，包括年龄、性别、对数学的自信和对数学的态度；第二层是教师变量，包括5个教师资格因素和8个教师职业发展因素。教师资格因素包括教师的性别、教龄、受教育水平、数学专业和教师资格。教师职业发展因素包括教师职业发展活动内容和在校与其他教师交流方式，其中内容有4类：基本数学内容(包括数学内容和数学课程)、教学方法(包括数学教育/指导和数学评估)、将信息技术整合进数学中和改进学生的判断思维或问题解决技能；方式有4种：与在校其他教师讨论一个特殊的概念、集体备课、听其他教师讲课和其他教师听自己的课。通过分别控制学生一教师链接档案中的学生ID和教师ID，链接学生背景档案和教师背景档案，并使学生ID唯一。班级ID与教师ID一一对应。
本研究有关变量的描述及编码方式见表1。
3 研究结果
本研究所选择的四个国家(地区)的学生和教师人数统计情况见表2。
3.1学生变量和教师变量的描述统计情况学生变量和教师变量的描述统计情况见表3。
从表3中可以看出学生数学成绩以香港最高，日本次之，且与美国和瑞典学生成绩之间存在较大差异，但均处于国际平均成绩(467)之上，这与TIMSS2003的官方报告显示的结果是一致的。学生年龄的均值亦与TIMSS2003官方报告一致。瑞典和美国学生对数学的自信较高，美国学生对数学的正面评价较高。
在教师变量上四个国家(地区)之间还存在一些差异。如香港教师的教龄最短，美国教师的受教育水平最高，日本教师基本上都拥有教师资格证。在参加教师职业发展活动内容方面。瑞典教师参加的最少，美国教师参加的最多，而与在校教师交流方式上，瑞典教师讨论如何讲授一个特殊概念和集体备课较多，香港教师和日本教师集体备课较少，四个国家(地区)教师互相听课均较少。
3.2零模型结果
为了更好地分析学生变量和教师变量对学生数学成绩的影响，根据混合模型原理，将学生变量设置为第一层变量，教师变量设置为第二层变量。首先建立零模型，分析在不加入任何预测变量的情况下教师间变异对总变异的贡献率。结果见表4。
从表4可以看到四个国家(地区)的教师间变异占总变异的比例分别是58％、14％、46％和56％，教师间变异均达显著水平。
3.3完整模型结果
将学生变量，教师资格因素和职业发展因素加入到模型中建立完整模型，各个变量对学生数学成绩的影响结果见表5。
结合表5可以看出，加入了第一层学生变量后香港、日本、瑞典和美国的教师内变异均有一定程度的下降，下降比例分别是19％、24％、25％和15％。香港、瑞典和美国学生在年龄方面均表现为年龄越大其数学成绩越差(r1=-2.75***，r2=-7.89**。r3=-11.91***)。四个国家(地区)学生在数学自信方面均表现为对数学越自信其数学成绩越好(r1=23.57***，r2=44.13***，r3=38.51***，r4=26.38***)。在香港和日本。对数学正面评价越高的学生其数学成绩越好(r1=7.04***，r2=13.57***)。在日本和瑞典。女生成绩要好于男生成绩(r1=-8.85***，r2=-7.66***)。
加入了第二层教师变量后香港、瑞典和美国的教师间变异出现了不同程度的下降，下降比例分别是13％、30％和21％，但日本的教师间变异没有降低，反而有所增加(约3％)。总的来说，教师的性别、教龄、受教育水平、专业和教师资格等教师资格因素对学生数学成绩的预测力较弱。在这些因素中，香港教师的受教育水平影响显著(r=18.32*)，表现为教师的受教育水平越高，其学生的数学成绩越好。在瑞典和美国教师中。是否数学专业影响非常显著(r1=19.57**，r2=16.23**)，均表现为数学专业的教师所教学生的数学成绩要好于非数学专业。瑞典男教师所教学生的数学成绩要好于女教师(r=14.59*)。
在教师职业发展活动内容中，瑞典教师参加教学方法方面的职业发展活动显著提高其学生数学成绩(r=11.44*)。在交流方式中，美国教师听其他教师授课显著降低了其学生数学成绩(r=-20.40*)，在香港其他教师听课的频率越高，学生的数学成绩越好(r=23.62*)。基本数学内容、将信息技术整合进数学中和改进学生判断思维/问题解决技能三方面的职业发展活动以及与在校其他教师讨论如何讲授一个特殊的概念和集体备课两种交流方式对香港、日本、瑞典和美国学生数学成绩均无显著影响。总的来说，由教师职业发展活动内容和在校教师交流方式组成的教师职业发展因素对学生数学成绩的预测力较弱。
4 讨论
4.1学生变量的影响
学生对数学的自信心越高，其数学成绩越好，这与前人研究结果是一致的。但是学生对数学的态度只在香港和日本产生了显著影响，而从表3可以看出，香港学生对数学的正面评价并不是最高的，最高的是美国，但是美国学生对数学的高评价并没有带来其数学成绩的提高。根据TIMSS的研究，美国八年级的数学教学内容只相当于其他国家的七年级水平，在这种低要求下，学生学习数学比较轻松，因此对数学的正面评价会比较高，但也不会提高其数学成绩。香港学生与中国大陆学生相似，只有对数学没有学习困难、学有余力、对数学有兴趣、不厌恶数学的学生才能学好数学。
4.2教师资格和职业发展因素的影响
教师的性别、教龄、受教育水平、专业和教师资格等教师资格变量对学生数学成绩的预测力较弱，这与Xin等人的研究结果一致㈣。教师的受教育水平仅在香港对学生成绩有显著影响，这可能与香港教师岗前的教学实践经历有关。香港教师的岗前教学实践经历和良好的学习成绩是其取得不同水平学历证书的前提。数学专业的教师在瑞典和美国均对其学生成绩产生显著影响。这可能与美国和瑞典重视教师的“专业化”有关。总体来说教师资格变量对这几个国家(地区)学生的数学成绩的预测力是比较弱的。
在教师参加职业发展活动内容中，教学方法方面对瑞典学生的数学成绩的影响达到显著，这可能是因为瑞典在过去的15年时间里一直采用的是程序教学法，很少有师生间的交流，因此尽管瑞典是一个非常富裕的国家，但其学生的数学成绩也不是很好。瑞典教育界已经开始认识到教师的指导作用和学生的交流作用的重要性，因此在瑞典，教师参加教学方法方面(包括数学教育/指导和数学评估)的职业发展活动能有效地提高学生的数学成绩。在交流方式中，常有其他教师听其课的香港教师显著提高其学生数学成绩，这可能是因为在香港，教师上课太多，基本上没有集体备课、教研活动、继续教育和教师合作，因此其他各项教师职业发展活动内容和方式均未能显著提高其学生数学成绩，但若常有其他教师听其课，则该教师势必需要更全面更深入地去备课和讲课。因此学生掌握知识更全面更深入，有利于提高其数学成绩。但在美国，听其他教师授课较多的教师所教学生数学成绩较差，且达到了显著水平，这部分教师占所有样本教师的3.6％，进一步分析发现这一部分教师的平均教龄仅为2.32年，而在其它三个国家(地区)中都没有发现这样的现象，那么。是否是由于这部分教师尚处于入职适应期，自身学科知识和教育学知识等不能较好地应用于实践。导致所教学生成绩较差，所以需要经常去听其他教师授课呢?这需要进一步的研究和分析。
在本研究中，日本的教师资格因素和职业发展因素对其学生的数学成绩的影响均不显著。在零模型中亦可看出，日本学生数学成绩的差异主要来自学生自身的一些因素，与教师因素关系不大。在日本，教师只传授基本知识和技能，绝大多数学生会在课后参加补习班或寻求个别辅导，因此学生自身的一些因素更能解释其数学成绩之间的差异。而在加入了教师资格和职业发展因素后日本的教师间变异反而比未加入这些变量时要微大一些，这是因为在SAS混合模型中教师间变异与教师内变异同时进行估计，而教师变量的影响原本极低。教师资格和职业发展因素无一对学生数学成绩产生影响，教师间变异的估计值在较小范围内波动亦属正常。
篇6
【关键词】 急性缺血性中风；中药小续命汤；NO；NOS；实验研究
〔Abstract〕
Objective
To observe the change of the level of nitric oxide (NO) and the activity of nitric oxide synthase (NOS)， and to discuss the mechanism of curing function in the acute cerebral infarction(ACI).
Methods
Using suture methods to induce rats mode of acute cerebral infarction， giving a certein Xiaoxuming decoction by intragastric administration. And determinting the level of NO and the activity of NOS.
Results
There were the reduction of the level of NO and the activity of NOS in treatment group. Compared to model group， there were significant difference (P < 0.01).
Conclusion
Traditional Chinese medicine of Xiaoxuming decoction can lower the level of NO and the activity of NOS obviously. It can suppresses the ischemic brain damage.
〔Key Words〕
Acute ischemic stroke; NO; NOS; Experimental study
急性缺血性中风是急性脑血管病，其病因及诱发因素较多，但与免疫学的关系已逐渐受到重视。 NO 是近年来发现的一种具有神经元之间的信使物质作用的分子，能广泛参与和调节多种生理和病理活动，对脑缺血的病理生理改变起着非常重要的介质作用。高浓度 NO 对细胞有直接毒性作用。脑组织中 NO 介导的细胞死亡可通过坏死性和凋亡性细胞死亡两种途径。最近研究提示 NO 和 NO2- 的毒性作用主要是 ONOO- 所致，缺血中晚期（≥2 h）缺血区产生 NO，加剧损伤[1]。本研究通过制备急性缺血性中风大鼠模型，运用中医祛风助阳治疗法则，采用中药小续命汤观察影响梗死大鼠血浆 NO 和 NOS 含量的变化，探讨其可能作用机制及意义。
1
材料和方法
1.1
实验动物
Wistar 大鼠，雌雄各半，月龄 12 月，体重（240±20）g，共 75 只，由广西中医学院实验动物中心提供。实验期间，动物室温度控制在 15~20℃，大鼠需于术前在实验室喂养 1 周，自由饮水、进食，术前一晚需禁食，每天清洁垫料，5 只/笼，雌雄分笼饲养。
1.2
药物制备及试剂
1.2.1 药物组成
（麻黄、桂枝、杏仁、人参、甘草、黄芩、广防己、川芎、白芍）各一两，附子一枚，防风一两半，生姜五两。
1.2.2
药物制备
小续命汤按《备急千金要方》所载药物剂量比例，取常用量，然后煎煮浓缩至 1:1（即每 l mL 药液含生药 1 g）混悬液冰箱保存备用。以上药物均由广西中医学院附属第一医院制剂室提供。
1.2.3
主要实验试剂
NO 试剂盒、NOS 试剂盒由江苏南京建成生物工程研究所提供。
1.3
实验仪器
721 分光光度仪、流式细胞仪、手术包、灭菌设备等。
1.4
局灶性脑缺血中风大鼠模型的建立[2]
线栓制备，取 3-0 单尼龙线 50 mm，一端加热使之成光滑球面，并在距球面 18 mm 处作标记，酒精清洁后置生理盐水中备用。10% 水合氯醛（35 mg/kg）腹腔麻醉，取颈腹侧旁正中切口，钝性分离并暴露右侧颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉并结扎颈总动脉和颈外动脉。于颈内动脉近端备线并打一活结，远端用微动脉夹夹闭。在右侧颈总动脉分叉部取一小切口，将与体重相应直径的栓线插入，打开动脉夹。当线端进入 17~21 mm 时感到一定阻力即可停止，扎紧备线，固定纤维缝合。假手术组做同样手术，但不阻断动脉血流[3]。
1.5
分组及干预方法
将 75 只大鼠随机分为假手术组（A）（只分离动脉，不结扎插线）15 例，造模组（B）15 例；实验组低剂量组（C）15 例，中剂量（D）15 例，高剂量（E）15 例。①实验组：按照《中药药理研究方法学》上的剂量估计换算方法，取人的常用量，算得 200 g 大鼠对应于人的常用剂量为 3 mL/d，即作为低剂量组（C）的剂量；中剂量（D）为常用量的 2 倍，即 6 mL/d；高剂量（E）为常用量的 4 倍，即 12 mL/d。各给药组均于造模后 3 h 后进行中药灌胃治疗，3 次/d，连续 10 d。②假手术组和模型组术后分置普通笼中养，1 g/100 g 体重盐水灌胃，3 次/日，连续 10 d。③各组大鼠均在 10 d 后，开胸暴露心脏，心脏取血 3 mL，离心制备成血清以备检测。
1.6
观察方法
1.6.1
动物功能评定
右侧 MCAO 后 1.5 h，大鼠已清醒。参照经典的 Zea Longa 法 5 级 4 分法[4]。0 分：无神经功能缺损症状；1 分：轻微神经功能缺损，不能完全伸展对侧前爪；2 分：中度局灶性神经功能缺损，向对侧转圈；3 分：重度局灶性神经功能缺损，向对侧倾倒；4 分：不能自发行走，意识水平下降。
造模成功标准：评分 1~3 分者。
1.6.2 血浆 NO 测定
使用 721 分光光度仪，采用硝酸酶还原法测定。
1.6.3 血浆 NOS 测定 NOS 催化精氨酸（L-Arg）和分子氯反应生成 NO，NO 与亲核物质生成有色化合物，在 530 nm 波长下，测定吸光度。根据吸光度大小计算出 NOS 活力。
1.7
统计学处理
采用 SPSS 11.5 软件包完成，计量资料用 x±s 表示，进行单因素方差分析（组间比较）。
转贴于 2
结
果
2.1
中药治疗对大鼠血浆 NO 的影响
见表 1。
2.2
中药治疗对大鼠血浆 NOS 的影响
见表 2。
3
讨
论
中药复方小续命汤用多味入太阳经的药物平足太阳经之逆气，更以人参补气，附子、桂枝生阳、温经，芍药、川芎活血消癖，黄芩清上焦之热，如此寒热相济、消补共施，使真气自生、邪热自清、逆气得平、经络以顺、气血得行。
有学者采用现代方法对这个古老的方剂进行了一系列的研究，证明了该复方中组分的活性和作用[5]。生姜在原方中用量最大，用至五两。现代研究表明：生姜对中枢神经系统有抑制作用，可显著减少人血小板标记花生四烯酸（AA）生成血栓素（BZ）及前列腺素（PG）的量，降低 PG 体内的过氧化物的形成，并强烈抑制血小板聚集作用[6，7]。生姜还能显著提高大脑总抗氧化活性以及减轻脑水肿[8]。人参、芍药、川芎，益气活血，能够改善急性缺血性中风的自由基损伤、血液流变学异常以及组织形态学的异常。目前认为复方小续命汤具有改善局部脑血流、降低脂质过氧化物的活性、防止细胞外 Ca2+ 内流，以控制、减轻脑水肿的作用；还有调整血液流变学、抑制血小板聚集显著的降脂，抗动脉粥样硬化等作用[9]。王月华[10]在复方小续命汤抗 AD 有效成分组研究中也证实了中医的“异病同治”的药理学基础，以及小续命汤对 AD 和脑卒中的有效成分。
血浆中一氧化氮（NO）是在一氧化氮合酶（NOS）作用下由 L - 精氨酸氧化而成，NO 在缺血性损伤中的作用仍有争议，部分原因是因为 NO 的复杂生物学特性，对受损脑存在着利和害两方面作用。NO 作为有效的血管扩张剂和血小板聚集、白细胞黏附的抑制剂可通过增加侧支循环，阻止血小板和白细胞对微血管的阻塞而改善缺血后血流；另一方面，NO 作为一种细胞毒素可通过多种机制负面影响脑缺血。但最新报道称，NO 在缺血早期（< 2 h）可能因其促进血管扩张，抑制血小板黏附，增加半暗区血流而对组织有益，但缺血后 2 h 即无保护作用，在脑缺血中晚期随着 NOS 活性上调，产生大量 NO 导致组织损伤加重，NO 介导的细胞死亡可通过坏死性和凋亡性细胞死亡两种途径产生，NO 具有神经元之间的信使作用，介导谷氨酸等兴奋性氨基酸的细胞毒性作用，高浓度的 NO 对细胞尚有直接毒性作用。本实验显示：B 组大鼠血浆 NO 含量和 NOS 活力均有所升高，与 A 组比较，有显著差异（P < 0.05），而 C 组经小续命汤治疗后两指标均下降，与 B 组比较差异显著（P < 0.01）。C 组、D 组、E 组组间比较无显著性差异（P > 0.05），但是随着剂量的增大而表现出 NO 含量和 NOS 活力的呈缓慢下降。中药小续命汤通过降低血浆 NO、NOS 间接抑制缺血性损伤。因此说明：中药小续命汤降低大鼠脑缺血时，因 NOS 活力上调诱导性血浆 NO 的大量生成，减轻 NO 对脑细胞的毒性作用，降低 NO 大量生成引起的神经细胞死亡。这提示中药复方小续命汤具有一定临床指导意义和应用意义。
参考文献
〔1〕 史树贵， 邵淑琴， 东康宁， 等. 大鼠局灶性脑缺血后NO与细胞凋亡的关系的研究〔J〕. 第三军医大学学报， 1999， 21(4):249-252
〔2〕 何秋， 刘美洁， 朴英善， 等. 栓线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的研究〔J〕. 中国医科大学学报， 1998， 27(4):343
〔3〕 戴炯， 文立. 改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型〔J〕. 上海交通大学学报(医学版)， 2007， 27(10): 1218
〔4〕 Longa EZ， Weisntein PR， CarisoinS， et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats〔J〕. Strock， 1989， 20(1):84-89
〔5〕 李忠红， 倪坤仪， 杜冠华. 高效液相色谱-质谱法鉴定中药复方小续命汤有效成分组中醇溶性成分〔J〕. 分析化学研究报告， 2007， 35(2):233-239
〔6〕 何丽娅， 张雪飞， 吴和平， 等. 生姜对脑缺血再灌注损伤的总抗氧化活性的影响〔J〕. 中药药理与临床， 1996， (5):36-37
〔7〕 阴健， 郭力弓. 中药现代研究与临床应用〔M〕. 北京:学苑出版社， 1983. 253
〔8〕 叶映月， 尚锦秀， 涂晋文， 等. 小续命汤对出血性中风脑水肿作用机理探讨〔J〕. 中国实验方剂学杂志， 1999， 5(3):48-49
篇7
【关键词】 Ghrelin;Obestatin;学习;记忆;海马;大鼠
[ABSTRACT] Objective To explore the effects of Ghrelin and Obestatin on the ability of learning and memory in rats. Methods Rats were randomly pided into six groups as: highdose Ghrelin (HDG)， lowdose Ghrelin (LDG) and control1; highdose Obestatin (HDO)， lowdose Obestatin (LDO) and control2. Different doses of Ghrelin and same amount of normal saline were given by microinjection into the hippocampus CA3 in Ghrelin group; Different doses of Obestatin and same amount of normal saline were given by lateral cerebroventricular injection (icv). The ability of learning and memory was tested by Morris water maze. Results The latency of swimming time and distance in the HDG were decreased significantly compared with that in the control group. In the probe test， the rats in HDG stayed longer time and swimming distance in the origin quadrant were longer than that of the control group. The results showed no difference between Obestatin groups and control group in the hiding platform test and probe test. Conclusion Microinjection of Ghrelin into the hippocampus has an effect of improving the ability of learning and memory in rats， whereas icv injection of Obestatin has no such effect.
[KEY WORDS] Ghrelin; Obestatin; Learning; Memory; Hippocampus; Rats
Ghrelin是1999年KOJIMA等[1]发现的生长素促分泌素受体1a(GHSR1a)的内源性配体。大量实验表明，Ghrelin具有很强的刺激生长激素释放、促进摄食、减少脂肪分解等作用[2]。由于Ghrelin在机体饥饿状态下主要由胃黏膜泌酸腺A细胞分泌，因此大量实验集中于Ghrelin对摄食的启动作用和能量平衡的调节作用的研究。最近的研究结果表明，脑室和外周给予Ghrelin具有促进正常大鼠学习记忆的能力[3，4]。Obestatin与Ghrein是来源于同一个基因的肽类激素，对它的报道目前有许多争议。ZHANG等[5]指出，大鼠腹腔和脑室内注射Obestatin均可以抑制摄食。但是有研究表明，Ghrelin可借助特殊的转运系统通过血脑脊液屏障，而Obestatin却不能通过该屏障，并且它在血液中很快地被降解[6]。HOLST等[7]甚至认为，Obestatin并非GPR39的配体。GOURCEROL等[8]报道，腹腔内注射Obestatin (30、100、300 mg/kg)并不影响累积摄食量。关于Obestatin对学习记忆能力的影响，VALERIA等[9]通过跳台实验和十字迷宫实验证实，Obestatin有增强记忆和促焦虑的作用。本实验采用双侧海马CA3区微量注射Ghrelin、侧脑室微量注射Obestatin，用水迷宫的方法观察其对大鼠空间学习记忆能力的影响。
1 材料与方法
1.1 动物及分组
选用健康成年雄性Wistar大鼠48只，体质量为250～280 g，由青岛市药检所提供。置25 ℃室温下，昼夜循环光照，自由饮水。大鼠随机分为6组：对照组1、Ghrelin低剂量组和高剂量组;对照组2、Obestatin 低剂量组和高剂量组，每组8只。
1.2 双侧海马侧脑室埋管术
术前动物禁食15～20 h，采用80 g/L水合氯醛(400 mg/kg)腹腔注射麻醉，肛温维持在(37±1)℃。用耳杠将大鼠头部固定在立体定位仪上，使前后囟位于同一水平。充分暴露颅骨，以牙科钻于颅骨表面双侧海马CA3区(前囟后3.0 mm，正中线旁2.8 mm，埋管深度3.2 mm)和侧脑室(前囟后1.0 mm，正中线旁1.4 mm，埋管深度2.7 mm，参照PaxinosWatson图谱，1998)钻透颅骨，注意切勿损伤大脑皮质，清除硬脑膜后将长14 mm、内径相当于7号针头的不锈钢外套管置入双侧海马CA3区。以502胶和牙托粉固定外套管，外套管内置入内芯，防止堵塞。术后腹腔注射青霉素10万单位一次。分笼饲养5 d，自由饮食进水。
1.3 给药方法
手术后第6天开始注药，动物在无束缚状态下给药。注药管内径为0.2 mm，CA3区注药深度为3.3 mm，注药时间为2 min，然后停针2 min。侧脑室注药深度为3.8 mm，注药时间2 min，然后停针2 min。对照组1双侧海马微量注射无菌生理盐水各1 μL; Ghrelin 低剂量组大鼠双侧海马微量注射0.03 mmol/L的Ghrelin各1 μL;Ghrelin高剂量组双侧海马微量注射0.3 mmol/L的Ghrelin各1 μL。 Obestatin低剂量组侧脑室微量注射Obestatin为0.03 nmol(5 μL);Obestatin高剂量组侧脑室微量注射Obestatin为0.3 nmol (5 μL);对照组2侧脑室微量注射无菌生理盐水各5 μL。每天注药一次，连续给药5 d。
1.4 Morris水迷宫实验
用于测量大鼠对水迷宫学习和记忆的能力。实验共历时5 d，测试前1 d让大鼠自由游泳2 min;第1～4天，每天上午10:00～12:00进行训练，以避免日节律差异。每天训练4次，每次训练90 s。训练时随机选择一个入水点，将大鼠面向池壁放入水中，观察并记录大鼠寻找并爬上平台的路程、所需时间(潜伏期)。4次训练大鼠分别从4个不同的入水点入水，如果大鼠在90 s内未找到平台，需将其引至平台，并使其在平台上停留30 s。这时潜伏期记为90 s，每次训练间隔30 s，统计4次的潜伏期的平均值。在第5天撤除水中平台，然后在原平台象限的对侧象限，将大鼠面向池壁放入水中，测其在90 s内在各象限的游泳时间、游泳距离及其占总时间、总距离的百分比。
1.5 统计学分析
应用SPSS 10.0及PPMS 1.5[10]统计学软件进行处理，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用方差分析。
2 结 果
2.1 Ghrelin的水迷宫实验
用药组与对照组大鼠每天双侧海马微量注射Ghrelin和生理盐水20 min后进行水迷宫隐匿平台训练，历时4 d。在训练过程中，大鼠寻找水中隐匿平台所需平均游泳时间和路程潜伏期见图1。从潜伏期变化可见，三组大鼠训练前2 d潜伏期迅速下降，从第3天开始趋于平稳，维持在一较平稳水平。前3 d三组之间时间和路程潜伏期比较，差异无统计学意义。第4天高剂量组的平均时间潜伏期为(9.12±0.93)s，明显低于对照组的(21.02±5.36)s(F=9.31，q=4.08，P
2.2 Obestatin的水迷宫实验
用药组与对照组大鼠均每天侧脑室微量注射Obestatin和生理盐水，20 min后进行水迷宫隐匿平台训练，历时4 d。在训练过程中，大鼠寻找水中隐匿平台所需平均游泳时间和路程潜伏期见图2。从潜伏期变化可见，三组大鼠训练前2 d潜伏期迅速下降，从第3天开始趋于平稳，维持在一较平稳水平。前4 d三组之间比较，差异无统计学意义。 第5天撤除水下平台，三组大鼠在各象限游泳时间及游泳距离占总时间、总距离的百分比各组之间也无统计学意义。
3 讨 论
海马是大脑内侧颞叶的主要结构，与人陈述性记忆的形成关系密切。啮齿类动物的海马是空间学习的必需结构，Morris水迷宫任务与空间学习直接相关; 海马在接受高频传入冲动时突触效能发生改变，如长时程增强(LTP);当动物处于新的环境中时，海马个别的锥体细胞因位置改变而特异性放电。CARLINI等[3]研究显示，侧脑室注射Ghrelin引起焦虑并促进记忆。我们推测Ghrelin很可能通过海马部位起作用，所以选择把Ghrelin注射到海马。实验中双侧海马微量注射Ghrelin对正常成年大鼠的空间学习和记忆有改善作用，表现在隐匿平台实验中，高剂量组的游泳时间和路程都明显低于对照组。空间搜索实验中，高剂量组在原平台象限的游泳时间、距离占总时间、总距离的百分比都明显高于对照组。这与CARLINI等脑室注射Ghrelin通过跳台实验所得的结论一致，而且本实验是将Ghrelin直接注射到海马部位，说明Ghrelin可以通过海马的神经环路发挥作用。
Ghrelin影响记忆的确切机制并不完全清楚。原位杂交技术表明除了下丘脑外，海马CA1区、CA3区和齿状回中均存在GHSR mRNA[11];外周注射131I标记的Ghrelin表明，除下丘脑、皮质外，海马CA1、CA3区及齿状回均有Ghrelin的结合位点。所以，Ghrelin很可能与海马区的GHSR结合提高大鼠的学习记忆能力。DIANO[4]通过形态学和电生理等技术证实，外周的Ghrelin可明显提高海马CA1区树棘突密度，增强LTP效应，所以Ghrelin很可能是通过提高树棘突密度和增强LTP效应来影响学习记忆的。
本文Obestatin的水迷宫实验结果并没有显示出它可以提高大鼠的学习记忆能力。这与CARLINI等的报道不相符合。可能的原因是CARLINI采用的是跳台实验，它是揭示动物记住某一行为的不良后果，在下次行动时有所犹豫，这主要反映了动物的非陈述性记忆。而我们的水迷宫实验主要反映动物的空间学习记忆能力，可能因为实验方法的不同而产生了不同的结果。另外，从Obestatin的生物学活性和受体方面考虑，它不能通过血脑脊液屏障，并且它在血液中很快被降解， 受体也不能确定是GPR39， 所以Obestatin是否可以增强学习记忆能力有待进一步讨论。
综上所述，双侧海马微量注射Ghrelin可以提高大鼠的空间学习和记忆能力，Ghrelin的这种作用与激活海马部位有关;但是侧脑室注射Obestain并不能通过水迷宫实验观察到大鼠的学习记忆能力的提高。
【参考文献】
[1]KOJIMA M， HOSODA H， DATE Y. Ghrelin is a growth hormone releasing acylated peptide from stomach[J]. Nature， 1999，229：291.
[2]董静，唐明. 神经肽ghrelin及其生物学特性[J]. 青岛大学医学院学报， 2005，41(4)：366368.
[3]VALERIA P， CAELINI. Ghrelin increases anxietylike behavior and memory retention in rats[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications， 2002，299:739743.
[4]DIANO S. Ghrelin controls hippocampal spine synapse density and memory performance[J]. Nature Meuroscience， 2006，9(3):381388.
[5]ZHANG J V， REN P G， AVSIANKRETCHMER O， et al. Obestatin， a peptide encoded by the ghrelin gene， opposes ghrelin’s effects on food intake[J]. Science， 2005，310:996999.
[6]PAN W， TU H， KASTIND A J. Ifferential BBB interactions of three ingestive peptides: obestatin， ghrelin， and adiponectin[J]. Peptides， 2006，27(4):911916.
[7]HOLST B， EGEROD K L， SCHILD E， et al. GPR39 signaling is stimulated by zinc ions but not by obestatin[J]. Endocrinology， 2007，148(1):1320.
[8]GOURCEROL G， MILLION M， ADELSON D W， et al. Lack of interaction between peripheral injection of CCK and obestatin in the regulation of gastric satiety signaling in rodents[J]. Peptides， 2006，27(11):28112819.
[9]VALERIA P，CARLINI. Obestatin improves memory performance and causes anxiolytic effects in rats[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications， 2007，352(4):907912.
篇8
[关键词] 心肌缺血/再灌注损伤；细胞凋亡；依达拉奉；乌司他丁
[中图分类号] R541[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）04（c）-0018-04
The influence of edaravone combined with ulinastatin on ischemia/reperfusion myocardial cell apoptosis in rats
WANG Yuan-yuan1 CAO Jian2 DENG Li1 CHEN Qin1 OUYANG Xian-guo1
1.Department of Cardiology,the Third Hospital of Nanchang City,Nanchang 330009,China;2.Department of Anesthesiology,the Second Affiliated Hospital to Nanchang University,Nanchang 330006,China
[Abstract] Objective To explore the influence of edaravone combined with ulinastatin on ischemia/reperfusion myocardial cell apoptosis in rats.Methods 50 cases of experimental rats were randomly divided into sham group,ischemia/reperfusion (I/R) group,I/R+edaravon group,I/R+ulinastatin group and I/R+edaravon+ulinastatin group.The experimental model of myocardial ischemia/reperfusion in rats was established by ligating coronary artery with capsule.The content of myocardial tissue glutathione (GSH) and malondialdehyde (MDA) were determined.The cell apoptosis was detected by TUNEL and the expression of apoptosis factors Caspase-3 and Caspase-9 were determined by Western-blot.Results Compared with sham group,GSH in I/R group reduced remarkably (P
[Key words] Myocardial ischemia/reperfusion injury;Apoptosis;Edaravone;Ulinastatin
心肌缺血/再灌注损伤（myocardial ischemia/reperfusion injury，MIRI）指短时间心肌血供中断，一定时间内恢复血供，原缺血心肌发生较血供恢复前更严重的损伤。研究表明氧自由基、钙超载、心肌纤维能量代谢障碍、血管内皮细胞、细胞凋亡等因素均可能参与MIRI的发病过程[1-3]。本研究在冠状动脉再灌注前给予注射依达拉奉、乌司他丁、依达拉奉联合乌司他丁进行药物后处理，与缺血后处理对照，观察其对大鼠MIRI的作用效果，并探讨其机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物及材料
取10周左右雄性SD大鼠50只，体重（200±20） g，由南昌大学动物实验中心提供。依达拉奉注射液（南京先声药业有限公司生产，国药准字20031342）10 mg/支，乌司他丁（广东天普生化医药股份有限公司生产，批号03080806）100 000 U/瓶，谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）检测试剂盒购自武汉亚法生物制品有限公司，Caspase-3、Caspase-9多克隆抗体购自美国Bioworld生物技术公司，碱性磷酸酶（AP）显色底物，anti-NF-κB，小鼠单抗辣根酶标记兔抗山羊IgG；anti-β-actin山羊单抗（SantaCruz 产品）。
1.2 模型制作及分组
将实验动物50只随机分为5组，假手术组（n=10），丝线穿过冠状动脉左室支但不结扎，经尾静脉注射生理盐水。其余4组参考赵秀梅等[4]的垫扎球囊法制作大鼠体心肌缺血/再灌注模型。将充盈的球囊（215 mm×10 mm）垫于冠状动脉前降支与结扎线之间，用力结扎，观察结扎区域变白，局部心肌运动减弱，两个以上导联上出现ST段明显上抬，提示结扎成功，45 min后将球囊快速抽空便可即刻实现前降支血流再灌注（以心电图相关导联ST段明显回落为标准），并持续再灌注3 h。缺血/再灌注组（n=10），结扎冠状动脉后5 min分别通过尾静脉接受静脉注射生理盐水，45 min后放松扎线使冠状动脉再通形成再灌注3 h至实验结束；缺血/再灌注+依达拉奉组（n=10），结扎冠状动脉后5 min通过尾静脉接受静脉注射依达拉奉1.5 ml/（kg・h），其余同缺血/再灌注组；缺血/再灌注+乌司他丁组（n=10），结扎左冠状动脉左室支前30 min静脉注射乌司他丁（50 000 U/kg），其余同缺血/再灌注组；缺血/再灌注+依达拉奉+乌司他丁组（n=10），结扎左冠状动脉左室支前30 min静脉注射乌司他丁（50 000 U/kg），结扎冠状动脉后5 min通过尾静脉接受静脉注射依达拉奉1.5 ml/（kg・h），其余同缺血/再灌注组。实验结束后取大鼠左心室游离壁心肌组织迅速置液氮中冷却并于-80℃冻存。
1.3 GSH、MDA含量测定
实验结束后即刻分别取缺血区及正常供血区左心室心肌组织1.0 g，低温状态下生理盐水冲洗干净，制成心肌匀浆液，离心后取上清液，按GSH、MDA试剂盒说明书操作，检测GSH、MDA的含量。
1.4 细胞凋亡的检测（TUNEL法）
心脏标本用中性甲醛溶液固定，石蜡包埋，制片，切片按试剂盒进行细胞凋亡检测。凋亡指数为计数1000个心肌细胞中染色阳性的凋亡细胞。
1.5 Western-blot法检测Caspase-3、Caspase-9蛋白水平
分别取5组心肌组织，提取总蛋白，收集上清液，考马斯亮蓝法进行蛋白定量。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离样品后电泳转移至硝酸纤维膜上，TBST常温下封闭过夜后，分别加入anti-NF-κB小鼠单抗（一抗）、室温下免疫沉淀1 h，加入辣根酶标记兔抗山羊IgG（二抗）2 h。洗膜，显色。用Gel-ProAnalyzer分析软件分析通道蛋白的灰度值。
1.6 统计学分析
采用SPSS 16.0统计软件对实验数据进行分析，计量资料用x±s表示，多组间比较应用单因素方差分析，组间两两比较应用q检验，以P
2 结果
2.1 各实验组GSH、MDA水平的比较
与假手术组比较，缺血/再灌注组的GSH含量明显降低，差异有统计学意义（P
表1各实验组GSH、MDA水平的比较（x±s，n=10）
与假手术组比较，*P
2.2 缺血/再灌注心肌凋亡细胞TUNEL法染色结果
凋亡的细胞核呈现为黄色、棕黄色或棕褐色，主要是心肌细胞，少数为浸润的淋巴细胞和血管内皮细胞。假手术组仅见极少数散在的凋亡细胞；缺血/再灌注组凋亡细胞明显增加，凋亡细胞多位于心肌梗死区与非梗死区交界处，它主要来自于心肌细胞；缺血/再灌注+依达拉奉组、缺血/再灌注+乌司他丁组及缺血/再灌注+依达拉奉+乌司他丁组与缺血/再灌注组比较，凋亡细胞明显减少。与假手术组比较，缺血/再灌注组心肌凋亡指数明显增加（P
表2 各实验组心肌细胞凋亡指数的比较（x±s，n=10）
与假手术组比较，*P
2.3 各实验组Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平的比较
采用Western-blot法检测Caspase-3、Caspase-9蛋白水平，用Gel-ProAnalyzer分析软件分析通道蛋白的灰度值。与假手术组比较，缺血/再灌注组Caspase-3、Caspase-9蛋白增加，差异有统计学意义（P
表3 各实验组Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平的比较（x±s，10）
与假手术组比较，*P
3 讨论
MIRI患者心肌再灌注过程中细胞凋亡及氧自由基爆发性产生是造成再灌注损伤的主要因素之一，也是内皮细胞损伤的主要机制[5-6]。本实验制作大鼠缺血/再灌注模型，并给予依达拉奉、乌司他丁干预处理，发现药物处理后，可以减轻氧化应激、降低心肌细胞凋亡指数，联合治疗组优于单独药物治疗组。
心肌缺血/再灌注时随着大量氧的涌入，致使氧自由基大量产生，使膜电位不稳定，触发严重的心律失常[7-8]。缺血心肌再灌注时产生的大量氧自由基是导致心肌缺血/再灌注的主要因素。缺血/再灌注后由于氧自由基、髓过氧化物酶及弹性蛋白酶的大量产生和许多炎症介质如激活的补体C5a、白介素、肿瘤坏死因子（TNF）等大量释放[9-10]，产生炎症反应，诱导中性粒细胞穿内皮迁移以及对缺血心肌的浸润及损伤。依达拉奉是自由基最强的清除剂[11]，通过清除自由基起到抑制细胞膜过氧化作用[11-12]。乌司他丁是从健康人尿中提取精制的糖蛋白，研究表明乌司他丁对于降低炎性介质白细胞介素-6和白细胞介素-8有明显的作用[13]，能减轻炎症反应。
本实验发现依达拉奉、乌司他丁及联合干预处理后，心肌细胞凋亡指数下降，同时凋亡因子Caspase-3、Caspase-9蛋白表达下降。Caspase-3是凋亡发生过程中所需要的一种重要的蛋白酶，也是介导细胞凋亡的核心蛋白酶。在某些应激损伤因素下，可激活Caspases的启动子，主要是Caspase-9，Caspase-9接受到凋亡活化信号后通过被酶催化或自剪接而激活然后引起Caspase级联反应。Caspase-9在级联反应的上游，活化的Caspase-9进一步激活其下游的Caspase-3促使细胞发生凋亡[14]。通过GSH、MDA的检测，提示依达拉奉及乌司他丁均具有抗氧化损伤的作用，并且两药合用具有协同作用。凋亡因子Caspase-3、Caspase-9蛋白表达下降，心肌细胞凋亡指数降低，两药均可以通过抗氧化损伤，减少细胞凋亡的途径，对大鼠缺血/再灌注心肌起到保护作用。联合药物治疗组优于单独药物治疗组，合用可以同时发挥依达拉奉清除氧自由基的能力及乌司他丁改善炎症反应的作用，更好地改善MIRI，值得进一步研究，并应用于临床。
[参考文献]
[1]刘胜中.心肌缺血/再灌注损伤机制研究进展[J].实用医院临床杂志，2007，4（1）：88-90.
[2]李凯.心肌缺血/再灌注损伤与心肌细胞凋亡的研究进展[J].医学综述，2008，14（1）：6-8.
[3]Ito T，Muraoka S，Takahashi K，et al.Beneficial effet of taurine treatment against doxorubic induced cardiotoxicity mice[J].Adv Exp Med Biol，2009，12（7）：65-74.
[4]赵秀梅，孙胜，刘秀华.垫扎球囊法复制大鼠在体心肌缺血/再灌注模型[J].中国微循环，2006，10（3）：206-208.
[5]Chen JX，Zhao T，Huang DX.Protective effects of edaravone against cobalt chloride induced apoptosis in PC12 cells[J].Neurosci Bull，2009，25（2）：67-74.
[6]Isotani E.Pathophysiology of acute respiratory distress syndrome[J].Crit Care Med，2012，40（7）：2233-2234.
[7]Koid SS，Ziogas J，Campbell DJ.Aliskiren reduces myocardial ischemia-reperfusion injury by a bradykinin B2 receptor-and angiotensin AT2 receptor-mediated mechanism[J].Hypertension，2014，63（4）：768-773.
[8]Cao L，Huang C，Wang N，et al.ET-1/NO：a controversial target for myocardial ischemia-reperfusion injury[J].Cardiology，2014，127（2）：140.
[9]Hadi NR，Al-Amran F，Yousif M，et al.Antiapoptotic effect of simvastatin ameliorates myocardial ischemia/reperfusion injury[J].ISRN Pharmacol，2013，2013：815094.
[10]Poh KK，Xu X，Chan MY，et al.Safety of combination therapy with milrinone and esmolol for heart protection during percutaneous coronary intervention in acute myocardial infarction[J].Eur J Clin Pharmacol，2014，70（5）：527-530.
[11]Yang T，Zhang J，Sun L，et bined effects of a neutrophil elastase inhibitor （sivelestat sodium）and a free radical scavenger （edaravone） on lipopolysaccharide-induced acute lung injury inrats[J].Inflamm Res，2012，61（6）：563-573.
[12]Kawasaki T，Ishihara K，Ago Y，et al.Edaravone （3-methyl-1-phenyl-2-pyra-zolin-5-one），a radical scavenger，prevents 1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrah-ydropyridine-induced neurotoxicity in the substantia nigra but not the striatum[J].J Pharmacol Exp Ther，2007， 322（4）：274-282.
[13]Song JE，Kang WS，Kim DK，et al.The effect of ulinastatin on postoperative blood loss in patients undergoing open heart surgery with cardiopulmonary bypass[J].J Int Med Res，2011，39（4）：1201-1202.
[14]Martin JG，Jo T.Genetic differences in airway smooth muscle function[J].Proc Am Thorac Soc，2008，5（1）：73-79.
（收稿日期：2014-03-03本文编辑：郭静娟）
篇9
【关键词】 血管平滑肌细胞
关键词: 反义寡核苷酸;血管平滑肌细胞;再狭窄;血小板衍化生长因子;受体;细胞核增殖抗原
摘 要:目的 研究血小板衍化生长因子β受体（PDGFR-β）反义寡核苷酸（AODN）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响. 方法 建立大鼠血管平滑肌细胞体外增殖模型.将细胞分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组，其中反义组按浓度又分为1，2.5，5，10和15μmol L-1 5小组.在加药后24，48和72h以流式细胞仪测定细胞周期，免疫细胞化学染色分析细胞核增殖抗原的表达，MTT（四唑盐）比色法测定细胞增殖活力. 结果 10μmol L-1 PDGFR-βAODN干预VSMC48h后，处于DNA合成前期（G0 /G1 ）细胞数分数（0.70）高于空白对照组（0.07，P
Keywords:antisense oligonucleotide;vascular smooth muscle cell;restenosis;platelet derived growth factor;receptor;proliferating cell nuclear antigen
Abstract:AIM To study the effect of PDGFR-βAODN on proliferation of cultured rat aortic vascular smooth muscle cells（VSMC）.METHODS Cultured rat aortic VSMC mod-el was established in vitro.The cells were pided into antis-ese oligonucleotide（AODN）group，sense oligonucleotide（SODN）group，scrambled oligonucleotide（CODN）group and control group.The cells in AODN group were subpided into five small groups by concentration of1，2.5，5，10，15μmol L-1 .MTT assay，flow cytometry，immunohis-tochemistry for proliferating cell nuclear antigene（PCNA）were used to determine the effects of PDGFR-βAODN on proliferation of VSMC.RESULTS The percentage of quies-cent cells（G0 /G1 ）of AODN group at48h（0.70）were much higher than that of control group（0.07），P
0 引言
经皮冠状动脉腔内成形术（PTCA）和冠状动脉旁路移植术（CABG）是治疗冠心病的有效手段，但30%～50%术后再狭窄严重影响手术疗效［1，2］ .研究证明再狭窄的实质就是血管中层平滑肌细胞向内膜下迁移和增生
［3］ .血小板衍化生长因子及其β受体（PDGFR-β）在血管平滑肌细胞（VSMC）的迁移增生过程中起重要作用
［4］ .我们拟探讨在大鼠体外VSMC增殖模型中，PDGFR-β反义寡核苷酸（AODN）对VSMC增殖的影响.
1 材料和方法
1.1 材料 SD大鼠清洁级，4wk龄，雌雄不限，体质量（250±20）g，4～8wk龄，由第四军医大学实验动物中心提供;抗大鼠PCNA mAb、混合胶原酶、胰蛋白酶、MTT购于Sigma公司;96孔培养板、6孔培养板购于Costar公司;PDGFR-βAODN链（18bp）5’TAT CAC TCC TGG AAG CCC3’，正义寡核苷酸链（SODN）5’GGG CTT CCA GGA GTG ATA3’，无关寡核苷酸链（CODN）5’GTG ATA GTA TGC CGA GCA3’，由加拿大上海Sagon公司合成并进行全硫代磷酸化修饰和电泳鉴定;SABC试剂盒购于武汉博士德生物工程公司;胎牛血清购于浙江金华犊牛研究所;流式细胞仪（EFICS ELITE法国）;酶联免疫检测仪（DG5031，华东电子仪器厂）;SD大鼠颈椎脱臼法处死后，采用胶原酶法分离取得VSMC进行原代培养和传代培养，经α-SMactin免疫细胞化学染色鉴定确为VSMC、纯度>95%，采用5～10代细胞为实验对象.
1.2 方法
1.2.1 VSMC细胞增殖活力的测定 取生长融合期细胞制成1×104 L-1 密度的单细胞悬液接种于96孔板，待细胞完全贴壁伸展后，无血清DMEM培养液驯化24h.采取不同的加药方案:①单加不同浓度的反义寡核苷酸;②加入5.0μmol L-1 反义、正义、无义寡核苷酸;③空白组加等量培养液，设调零孔.每24h各取8孔，每孔内加入MTT20μL，37℃继续孵育4h后小心吸去培养液.每孔加入二甲基亚砜（DMSO）150μL，震荡器震荡10min，用酶联免疫检测仪（波长490nm）测定各孔的吸光度值［5］ .细胞增殖抑制百分率=（1-试验组A值）/对照组A值均数×100%.
1.2.2 PCNA免疫细胞化学染色 将5×105 L-1 密度细胞悬液，接种于已置盖玻片的6孔培养板中，待细胞完全贴壁伸展后，无血清DMEM培养液驯化24h后，加入含不同干预因素（同1.2.1）的200mL L-1 胎牛血清DMEM，每24h各取5孔，取出盖玻片，按SABC试剂盒说明进行其余步骤操作，最后DAB显色，常规系列脱水、透明.镜下观察.PCNA染色阳性标准:细胞核内出现棕黄色颗粒.随机计数5张盖玻片中5个以上高倍镜视野500个细胞，计算平均每100个细胞中阳性百分率，根据染色强度和范围分为:阴性（-）:阳性细胞50%.
1.2.3 流式细胞仪测定细胞周期 将细胞制成2×105 L-1 密度的单细胞悬液，接种培养瓶，48h后弃去 培养液，无血清驯化24h，细胞周期同步化后，分别加入5.0μmol L-1 反义、无义寡核苷酸，继续培养，48h后停止培养，0.01mol L-1 PBS（pH7.4）洗2次，2.5g L-1 胰酶消化后离心，以700mL L-1 的冷乙醇制成1×10
6 L-1 密度单细胞悬液，30min后，PI染色，流式细胞仪检测.
统计学处理:实验数据用x ±s表示，组间进行t检验，P
2 结果
2.1 寡核苷酸对VSMC增殖活力的影响 相同浓度（10μmol L-1 ）各种寡核苷酸对血管平滑肌作用24h后，各加药组与空白对照组相比MTT A值无明显差异（P>0.05），各加药组之间也无明显差异（P>0.05）;在加药后48h反义组与空白组之间有显著性差异（P0.05），5μmol L-1 以上浓度的PDGFR-βAODN对细胞有明显增殖抑制作用，表明PDGFR-βAODN增殖抑制作用有明显的浓度依赖效应.
表1 寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的影响 略
2.2 PDGFRβAODN对细胞周期的影响 与空白对照组相比10μmol L-1 AODN作用于VSMC24h后细胞G1 期（DNA合成前期）比数分数达到0.70，而空白对照组G1 期细胞只占0.50明显低于AODN组（P
2.3 PCNA免疫细胞化学染色 空白对照组PCNA染色呈强阳性（Fig1A）;5μmol L-1 PDGFR-βAODN作用于VSMC48h后细胞PCNA染色呈阳性;10μmol L-1 以上AODN作用于VSMC48h后细胞PCNA染色呈阴性（Fig1B），阳性率与对照组比较有明显差异（P
图1 PCNA染色 略
表2 不同寡核苷酸对血管平滑肌细胞PCNA表达的影响 略
表3 反义寡核苷酸浓度对血管平滑肌细胞PCNA表达的影响 略
3 讨论
PDGF对VSMC是一种强烈的促增殖剂和趋化剂，并且PDGF对VSMC的作用有一定的组织特异性［6］ .当大量PDGF和β型受体结合后通过络氨酸激酶启动细胞的增殖信号，最终导致VSMC大量增生和再狭窄的发生［7，8］ .PDGF的主要作用是使细胞从非分裂状态的G1 期进入分裂周期，起着一种“获能因子”（competence factor）的作用，其他生长因子如成纤维细胞生长因子（FGF）可以促进细胞从G1 期进入DNA合成期［9］ .反义寡核苷酸可以通过其特异的碱基序列与目的基因相结合阻止目的基因的表达［10］ .因此PDGFR-β反义寡核苷酸可以阻止VSMC的PDGFR-β蛋白的表达从而阻断其与PDGF的结合，使细胞停留于G1 期，最终抑制VSMC的增殖.另外我们在实验中发现PDGFR-βAODN作用于VSMC24h对VSMC无明显增殖抑制作用，这与AODN虽被细胞摄取，但尚未能与目的基因达到充分结合等原因有关;过去的研究证明PCNA是DNA复制和细胞分裂过程中DNA多聚酶最重要的辅助因子.PCNA位于细胞核内，它的表达量与VSMC的增殖活力呈正相关［11］ .因此我们在实验中以PCNA的表达强度侧面反映VSMC的增殖活力，结果间接证明了PDGFR-βAODN对VSMC增殖抑制作用.另外也有少数人认为寡核苷酸的作用无需任何序列特异性，而是与各种生长因子或膜蛋白相结合，抑制细胞的迁移、增殖.这与目前大多数同仁的观点不符，与本实验的研究结果也不相符.我们发现正义寡核苷酸和错义寡核苷酸对VSMC的增殖均无明显抑制作用.这说明寡核苷酸对细胞的影响有严格的序列特异性.
PDGFR-βAODN作为基因工程和分子生物学的产物对体外培养VSMC的增殖可以产生很大程度的抑制，另外因为该反义寡核苷酸对于VSMC具有一定的组织特异性，所以PDGFR-βAODN有望能在体内成功抑制血管损伤后VSMC的异常增生和再狭窄的形成.
参考文献:
［1］Gonsalves C，Bandyk DF，Action AJ.Duplex features of vein grafts stenosis and the success of percutaneous transluminal an-gioplasty ［J］.J Endovasc Surg，1999;6:66-72.
［2］Espinola Klainc，Rupprecht HJ.Impact of restenosis10years after coronary angioplasty ［J］.Eur Heart J，1998;19:1047-1053.
［3］Zhu HL，Yang JX，Zhang WD，Cui Q，Chen WS.Correlation between extracellular matrix and stenosis of autologous vein grafts in rabbit mAel ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2001;22（5）:407-409.
［4］Hart CE，Clowes AW.Platelet derived growth factor and arteri-al response to injury ［J］.Circulation，1997;95:555-556.
［5］Zhao HL，Ling SX，Jia B，Li J，Zhang LL，Zhang SF.Inhibito-ry effects of salidroside on hypeoxia-induced proliferation of rab-bit pukmonary arterial smooth muscle cells ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2000;21（2）:186-190.
［6］Ren YS，Chen Q，Jia GL，Jing Y，Dong SZ.Expression ofβre-ceptor of palelet derived growth factor in human coronary artery ［J］.Di-si Jinyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1998;19（60）:652-655.
［7］Waltenberger J，Andreallecker D，Kroll J，Frank H，Mayr U，Jeffrey D，Donald B，Fujita D，Gazit A，Hombach V，Levitzki A，Frank-D，Bǒhmer.A dual inhibitor of platelet-derived growth factorβ-receptor and Src kinanse activity potently inter-feres with motogenic and mitogenic responses to PDGF in vascu-lar smooth muscle cells ［J］.Circ Res，1999;85:12-22.
［8］Tan SJ，Jin LR，Chen WC.Effect of kallikrein on PDGF-in-duced proliferation of cultured rat aortic vascular smooth muscle cells ［J］.Shanghai Yixue（J Shanghai Med），1999;22:112-114.
［9］Gao W，Huo Y，Zhu GY.The cellular and molecular biology of restenosis ［J］.Zhongguo Jieru Xinzang Binxue Zazhi（Chin J Interv Cardiol），1997;5（2）:84-91.
篇10
[关键词] 溃疡性结肠炎；整肠生；血小板计数；血小板平均体积
[中图分类号] R574.6 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2017）15-0037-03
[Abstract] Objective To study the clinical effect of probiotics combined with mesalazine on mild and moderate ulcerative colitis （UC） and their influence on blood platelet count （PLT） and mean platelet volume （MPV）. Methods 46 UC patients treated in our hospital were selected and randomly divided into control group and study group， each with 23 cases.Patients in the control group were given mesalazine enteric-coated tablets（1.0 g/time， qid） as routine therapy， while patients in the study group were additionally given Bacillus Licheniformis Capsules（0.5 g/time， tid）. The clinical effects and levels of PLT and MPV before and after treatment were compared between two groups. Results There was no significant difference in overall response rate between two groups（P>0.05），but the marked effective rate was significantly higher in the study group than in the control group （P
[Key words] Ulcerative colitis； Bacillus licheniformis capsules； Blood platelet count； Mean platelet volume
⒀裥越岢ρ祝ulcerative colitis，UC）是临床常见的一种肠道慢性非特异性炎性病变，以反复发作的黏液脓血便、腹痛、腹泻为主要临床表现，具有病程长、易复发等特点，严重影响患者的生活质量。研究表明，活动期UC患者血液呈高凝状态，可导致肠道微循环功能障碍及微血栓形成，从而引起肠黏膜缺血坏死，甚至溃疡形成，使其迁延不愈或病情加重[1]。目前，美沙拉嗪是治疗轻中度UC的有效药物，益生菌可辅助美沙拉嗪提高疗效，但益生菌辅助美沙拉嗪能否改善患者血液高凝状态尚未见报告。本研究旨在观察整肠生联合美沙拉嗪治疗轻中度UC的临床疗效及其对患者外周血血小板计数（platelet，PLT）、血小板平均体积（mean platelet volume，MPV）的影响，以期为临床疗效评估提供依据，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取山西省汾阳医院消化科2016年5月～2017年1月住院治疗的初治UC患者46例，入选患者均符合中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组制定的《中国炎症性肠病诊断治疗规范的共识意见（2012・广州）》[2]。其中男30例，女16例，年龄23～71岁，平均（37.4±4.6）岁。其中轻度UC 19例，中度UC 27例。纳入标准：（1）不合并外周关节炎、原发性硬化性胆管炎等自身免疫性疾病；（2）不合并妊娠、肿瘤、精神疾病、严重的心肺等重要脏器疾病；（3）除外重度UC、肠结核、慢性细菌性痢疾、阿米巴肠病、结肠克罗恩病、抗生素相关性肠炎、缺血性结肠炎、放射性结肠炎；（4）除外对美沙拉嗪或整肠生过敏者；（5）近1个月未使用过激素等对UC治疗有影响的药物。将患者随机分为对照组和研究组，各23例，对照组男14例，女9例，平均年龄（38.1±4.9）岁，轻度9例，中度14例。研究组男16例，女7例，平均年龄（36.8±4.2）岁，轻度10例，中度13例。两组患者在性别、年龄、病情程度方面均无统计学差异（P>0.05）。本研究所有受试对象均签署知情同意书。
1.2 方法
对照组给予口服美沙拉嗪肠溶片（1.0 g/次，4次/d，德国Losan Pharma GmbH生产），研究组在口服美沙拉嗪肠溶片（剂量同对照组）基础上加用整肠生（0.5 g/次，3次/d，东北制药集团沈阳第一制药厂生产）。两组疗程均为2个月。
1.3 检测
1.3.1 UC患者临床疗效及安全性 依据改良的Mayo评分系统[2]，分别于患者入院后次日及采用美沙拉嗪或美沙拉嗪联合整肠生治疗2个月后进行评估。显效指治疗后Mayo评分降幅在51%～100%；有效指治疗后Mayo评分降幅在30%～50%；无效指治疗后Mayo评分降幅
1.3.2 UC患者外周血PLT、MPV的检测 所有患者入院后次日及用美沙拉嗪或美沙拉嗪联合整肠生治疗2个月后，清晨空腹采集2 mL外周静脉血送本院检验科行血细胞分析，PLT、MPV采用SYSMEX公司的XE2100全自动血液分析仪检测。
1.4统计学方法
应用SPSS17.0统计软件分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，计数资料以百分率（%）表示，配对资料及组间均数比较采用t检验。计数资料比较采用χ2检验。P
2 结果
2.1 两组治疗后临床疗效比较
对照组显效率、总有效率分别为43.5%、82.6%，研究组显效率、总有效率分别为73.9%、91.3%，两组治疗总有效率无明显差异（χ2=0.14；P>0.05），但研究组显效率高于对照组，差异有统计学差意义（χ2=4.39；P
2.2 两组治疗前后PLT、MPV水平变化
两组治疗后PLT水平均较治疗前明显下降（对照组、研究组t分别=2.604、5.135；P均
2.3 不良反应情况
治疗期间，通过电话随访或门诊就诊等方式记录患者的不良反应。对照组出现恶心、腹部不适3例，腹胀1例、消化不良，发生率为17.4%；研究组出现上腹不适1例，头晕1例，发生率为8.7%，两组不良反应发生率差异有统计学意义（P
3 讨论
近年来，UC在我国的发病率有升高的趋势，具体病因及发病机制尚不很清楚，可能与饮食、环境、遗传、免疫、肠道菌群失调等多种因素有关。随着对UC研究的深入，发现肠道微血栓形成与UC患者症状加重有关，而血小板凝聚、凝血-抗凝系统、纤溶-抗纤溶系统参与了肠道微血栓的形成[3]。在反应高凝状态的指标中，PLT尤为重要，PLT数量增加及活化可导致PLT聚集功能增强，同时PLT还可释放多种生物活性物质，如PLT激活因子、PLT源性生长因子、PLT因子4、P-选择素、血栓素A2等，促进炎症细胞聚集、趋化，进一步加重病情[4]。可见，PLT不仅与血栓形成有关，还与炎症的发生发展有关。Zubcevic等[5-6]报道活动期UC患者MPV明显下降，MPV在一定程度上反映了PLT激活水平。还有国内外报道显示[7-8]，与缓解期UC及健康人群相比，活动期UC患者处于血栓前高凝状态，血液中PLT明显升高、MPV明显降低，PLT升高及MPV下降水平与UC病情轻重和病变累及范围明显相关。因此，PLT、MPV在一定程度上还可以作为评价UC疾病活动性及严重性的指标[9]，而改善高凝状态成为治疗UC的一个重要方面。
目前，UC的治疗尚无特效药，临床根据病情的不同，常用到5-氨基水杨酸制剂、益生菌、糖皮质激素、免疫抑制剂、生物制剂等。其中，美沙拉嗪属于5-氨基水杨酸类药物，可抑制结肠黏膜释放白三烯，减少血管内皮细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等刺激下IL的分泌与释放，有效清除自由基和活性氧，并能减轻炎症递质对肠黏膜的损伤[10]。同时，美沙拉嗪还有抑制血小板活化和聚集的作用[11]。临床研究显示[12]，康复新液灌肠联合口服美沙拉嗪治疗UC疗效更好，可明显降低血清TNF-a、IL-lβ、IL-6、IL-8水平，同时显著降低纤维蛋白原、PLT而升高凝血酶原时间、MPV水平，即明显减轻炎性反应同时有效改善了凝血功能。随着对肠道菌群及益生菌作用的研究，益生菌对UC的辅助疗效得到了肯定。霍丽娟等[13]通过观察单用美沙拉嗪及联用双歧三联活菌治疗UC的疗效，证实在美沙拉嗪基础上联用益生菌可更好地改善UC患者临床症状，可能与益生菌协同美沙拉嗪通过调节促炎因子和抑炎因子水平，有效抑制UC患者免疫炎性反应等有关。
整肠生为地衣芽胞杆菌活菌制剂，临床常利用其生物夺氧、迅速定植肠道并分泌抗菌活性物质等特性，在抑制或拮抗葡萄球菌、白色念球菌、酵母菌等致病菌同时促进双歧杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌、消化链球菌等有益菌生长，从而l挥以菌制菌效应[14]。本研究结果显示，整肠生联合美沙拉嗪能提高轻中度活动期UC患者的临床疗效，且不良反应少，使用安全性高，与既往研究一致[15]。那么，整肠生联合美沙拉嗪是否有助于协同改善活动期UC患者的高凝状态呢？本研究结果显示，与治疗前相比，两组治疗后PLT均明显下降，MPV均明显升高，且研究组PLT上升水平及MPV下降水平更明显。可见，整肠生在辅助改善轻中度活动期UC患者临床症状同时，还有助于协同改善血液的高凝状态，可能与抑制炎症反应同时抑制血小板活化有关，具体机制尚有待于进一步研究。
综上所述，PLT、MPV水平不仅可以作为评估病情严重程度、疾病活动度的指标，也可以作为评估疗效的辅助指标。鉴于UC病程长，经常需要对患者病情及疗效进行评估，行血细胞分析比较治疗前后PLT、MPV水平不失为良好选择，但仍不能替代肠镜检查，需经临床医师评估决定。
[参考文献]
[1] Giannotta M，Tapete G，Emmi G，et al.Thrombosis in inflammatory bowel diseases：What′s the link[J].Thromb J，2015，13（1）：103-107.
[2] 中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组.炎症性肠病诊断与治疗的共识意见（2012 年・广州）[J].胃肠病学，2012，17（12）：763-781.
[3] Bouma BN，Mosnier LO. Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor（TAFI） at the interface between coagulation and fibrinolysis[J]. Pathophysiol Haemost Thromb，2004， 33（526）：375-381.
[4] 常英，刘闻莺，刘欣艳，等.活动期溃疡性结肠炎凝血功能分析[J].胃肠病学，2013，18（10）：615-618.
[5] Zubcevic N，Mesihovic R，Zubcevic S.Usefulness of laboratory data in estimation of Crohn’S disease activity[J].Med Arh，2010，64（1）：33-36.
[6] Kapsoritakis AN，Koukourakis MI，Sfiridaki A，et a1.Mean platelet volume：A useful marker of inflammatory bowel disease activity[J].Am J Gastroenterol，2001，96（3）：776-781.
[7] Beata P，Joanna MK，Halina K. Assessment of the influence of the inflammatory process on the activation of blood platelets and morphological parameters in patients with ulcerative colitis （colitis ulcerosa）[J]. Folia Histochemica Et Cytobiologica，2011，49（1）：119-124.
[8] X佶，董时洁，陈国昌.溃疡性结肠炎患者血小板计数、血小板平均体积和D-二聚体检测的临床意义[J].南通大学学报（医学版），2016，36（1）：72-74.
[9] Kapsoritakis AN，Koukourakis MI，Sfiridaki A，et a1.Mean platelet Volume：A useful marker of inflammatory bowel disease activity[J].Am J Gastroenterol，2001.96（3）：776-781.
[10] 张玉萍，黄梅芳.溃疡性结肠炎患者血浆肠型脂肪酸结合蛋白、超敏C-反应蛋白水平变化及意义[J].山东医药，2015，55（44）：57-58.
[11] Carty E，MacEy M，Rampton DS.Inhibition of platelet activation by 5-aminosalicylic acid in inflammatory bowel disease[J].Aliment Pharmacol Ther，2000，14（9）：1169-1179.
[12] 周叶萍.康复新液联合美沙拉嗪治疗老年溃疡性结肠炎的效果及对炎症因子和凝血功能的影响[J].中国医药，2016，11（9）：1329-1332.
[13] 霍丽娟，安丽婷，师永盛，等.美沙拉嗪联合双歧三联活菌治疗溃疡性结肠炎的临床疗效观察[J].中华消化杂志，2012，32（8）：523-527.
