自动化免疫分析范文

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【摘要】目的 评价贝克曼全自动化学发光免疫分析仪检测甲状腺激素的效果。方法 测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,分别计算批内精密度、批间精密度、回收率和线性范围。结果 T3、T4、FT3、FT4、TSH的批内精密度分别为4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%,批间精密度分别为6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%,回收率分别为96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%,线性范围分别为0.15～12.3 nmol/L、3.9～387.0 nmol/L、0.3～30.8 pmol/L、1.3～155.0 pmol/L、0.01～150.0 mIU/L。结论 贝克曼全自动化学发光免疫分析系统测定甲状腺功能具有重复性好、准确度高、可报告范围宽、测定速度快等优点,适合于临床应用。

【关键词】化学发光免疫分析法;甲状腺激素

化学发光免疫分析法是20世纪80年代以来发展起来的一项新的标记免疫技术,在临床上有广泛的应用,包括内分泌激素、肿瘤标志物、血药浓度、传染病、心血管疾病标志物、贫血及过敏原等,特别是在甲状腺激素检测中应用更为广泛[1]。本文采用贝克曼全自动化学发光免疫分析仪检测T3、T4、FT3、FT4、TSH,对其方法学进行综合评价。

1 材料与方法

1.1 仪器贝克曼全自动化学发光免疫分析仪。

1.2 试剂发光试剂、质控品、标准品由贝克曼公司提供。

1.3 血清来源试验所需血清样本采自本院门诊和住院患者,每例取3ml血,离心3000 r/min,10分钟,取血清-70℃保存备用。

1.4 检测方法利用化学发光技术和磁性微粒分离技术相结合的测定方法,其反应原理与放免和酶免中的双抗夹心法、竞争法相似,严格按试剂盒操作说明书操作。

1.5 评价指标

1.5.1 批内精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三种浓度的血清样本,每种浓度同批平行测定10次,计算平均变异系数(CV)。

1.5.2 批间精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三种浓度的血清样本各10份,每天各测定1次,共测定10天,计算平均变异系数(CV)。

1.5.3回收率:由贝克曼公司提供原装3个浓度的标准品,分别测定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,每个浓度平行测定3次,计算平均回收率。

1.5.4 线性范围收集患者血清标本,取T3、T4、FT3、FT4、TSH浓度高于厂家提供线性范围上限作为高值浓度水平(H),厂家提供稀释液作为低值浓度水平(L),用稀释液稀释高值浓度血清,形成如下系列浓度检测标本:1H+0L、4H+1L、3H+2L、2H+2L、2H+3L、1H+4L、0H+1L。用配制成的系列浓度标本平行测定各项指标含量,取平均值作图,取在坐标纸上呈明显直线趋势的各点值进行直线回归统计,取回归系数r大于0.9的浓度范围为可报告的浓度线性范围。

2 结 果

2.1 批内精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均变异系数分别为4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%。

2.2批间精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均变异系数分别为6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%。

2.3 回收率T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均回收率分别为96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%。

2.4 线性范围T3所测结果得到回归方程为y=1.069x-0.2468,r=0.9966,截距经t检验,ta=1.36,0.95,截距经t检验,ta=0.36,

3 讨 论

血清中三碘甲状原腺氨酸(T3)、四碘甲状原腺氨酸(T4)、游离三碘甲状原腺氨酸(FT3)、游离四碘甲状原腺氨酸(FT4)、促甲状腺激素(TSH)的测定对甲状腺疾病的诊断具有重要价值。以往国内实验室多采用RIA、MIRA检测血清甲状腺激素水平,此法虽较准确,仪器与试剂也较为低廉,但对操作人员水平要求较高,对实验条件及环境有较多要求,且随着标记抗原的放射性衰减,而使计数不稳定及曲线失真,导致结果偏离,结果重复性差,且可产生放射性污染[2,4]。

近年来发展起来的全自动化学发光免疫分析系统是利用化学发光技术和磁性微粒分离技术相结合的测定方法,其反应原理与放免和酶免中的双抗体夹心法、竞争法相似。其优点是[3,5]:(1)成熟的单克隆抗体技术或独特的磁性微粒子技术,保证了反应的高特异性;(2)检测范围宽,具有良好的稀释线性;(3)试剂稳定性好,不需酶促反应,有效期可长达半年;(4)操作简便,分析过程采用全自动化,减少了人工操作误差,重复性好;(5)试剂及标本均采用无吸附材料,故相互间的交叉污染率低,干扰因素少;(6)真正的随机连续检测,样本随到随测,具有急诊优先插入功能。因此全自动化学发光免疫分析系统是目前检测甲状腺激素等指标的较好方法。

【参考文献】

[1] 陶义训.免疫学和免疫学检验[M].第1版.北京:人民卫生出版社,1997:174.

[2] 叶任高,陆再英.内科学[M].第6版.北京:人民卫生出版社,2004:725.

[3] 罗炜,王慧,陈柏铭.化学发光免疫法与放射免疫法测定血清AFP的比较[J].上海医学检验杂志,2000,15(3):149.

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doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.17.168

工作人员英语水平及业务素质的要求

人员的因素是保证生化检验质量的前提。医院各级领导要提高认识,引起重视。进口全自动生化分析仪的操作界面大都是英文,对工作人员的英语水平就要有一定的要求,以适应工作的需要,科室领导要能合理安排工作人员;经过专门的技术培训,应掌握仪器的性能工作原理,仪器的参数设置和试剂的准备,熟悉仪器各部件结构,仪器的保养与维护及一般故障的排除,培训完毕考核合格后才能上岗。近两年,我国正在逐步实行大型仪器使用培训的上岗考核制度,这也能进一步提高我们工作人员的业务素质。

为全自动生化分析仪提供良好的工作环境

全自动生化分析仪的运行必须要有一个好的工作环境。包括稳定的电流、电压和接地保护的电源系统。适应仪器工作范围的温度和湿度,实验室的洁净度等。应当配置UPS保护电源,用来应对突然断电的情况。要有一个相对独立稳定的工作环境。任何环境的变化都有可能影响到仪器的稳定性,从而影响到检测结果的精密度和准确度,因此要及时观察做好记录以便出现问题及时得到纠正。

全自动生化分析仪的维护与保养

全自动生化分析仪的维护与保养包括仪器的清洁、清洗液的配制、每天光度计的检测,杯空白的测定、每天开机、关机对石英比色杯的清洗,加样针头的定期彻底清理等。工作人员应有高度的责任心,严格按照操作规程操作。仪器在使用间隔一段时间后,要为其工作轴承元件抹油,保护工作元件的正常运行。建议在每隔一年使用期限与供应商取得联系,派专职的工程师为仪器做一个全面的保养以维护仪器的性能稳定及延长仪器的使用寿命。同时每年定期对仪器进行了校准,以保证其灵敏度达到试验的要求。

标准品的正确选择和使用

由于生化试剂存在批间差异,在使用不同批次的试剂时,应及时校准仪器。实践证明,使用定值洪冻干标准血清比使用水溶液标准要好,原因可能是定值冻干血清与样品(血清)成分更接近,水溶液标准不具有血清的黏稠性,在吸样针吸样时血清与水溶液在吸样针的黏度不一样会造成误差;另一方面反应速度不同,水溶液反应速度比血清快,而造成误差。在使用定值冻干标准血清时,准确吸取重蒸水稀释复溶,轻轻颠倒混匀,避光放置30～60分钟使用。

试剂的管理

目前试剂种类较多,仪器配套试剂、进口试剂、国家试剂等等,不同的生产厂家、不同型号的全自动生化分析仪对试剂的要求不完全相同。原则是建议使用仪器配套的系列试剂产品。使用其他试剂,应先进行样准,使仪器性能做到最佳。总的来讲,进口试剂优于国家试剂,表现在试剂的稳定性、线性,储存使用前配置等。试剂的存放要有专用冰箱,建立冰箱温度每日登记制度,以保证试剂的贮存条件达到要求,对试剂要定期清理,及时处理过期试剂。

完善室内质控制度

室内质控是各实验室为了监测和评价本室工作质量,以决定常规检测报告能否发出所采取的一系列检查、控制手段。旨在检测和控制本室常规工作的精密度,并检测其准确度的改变,提高本室常规工作中批间和日间标本检测的一致性。因此,室内质控工作每天必不可少。一段时间内必需选择同一厂家性能稳定的质控品。质控品的稳定性受到多种因素影响,比如质控品的运输条件、贮存条件、检测条件等。在试剂质量和标准品得到保证的前提下,对每一批质控品多次检测,获得本室的检测均值作为其靶值,建立本室的质量控制体系,厂家经出的靶值可作为参考。为了避免有些标本结果偏离线性范围而导致失控,应采用高、低不同浓度的质控血清。在完善室内质控的基础上积极参加室间质评,只有认真做好室内质控才能保证获得好的室间质评成绩。

正确对待室间质量工作及反馈的信息

目前在我国的医院等级评审制度中将检验科室间质评成绩作为医院达标的指标之一。室间质量评价由第三方机构采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试验结果,并发现实验室本身不易发现的不准确性,了解各实验室之间结果的差异,帮助其校正,使其结果具有可比性。我们在认真做好室内质控的同时[1],一定要正确对待室间质评工作及反馈的信息。每次室间质都要由科室认真独立完成,并如实报告检测结果。当收到反馈单后要认真分析反馈单中所反映出的问题,积极查找原因,采取措施提高测定结果的准确性,提高不同实验室之间测定结果的可比性。

标本分析前的质量管理

标本分析前的工作由各科医师、护士及检验科人员等共同完成。因环节较多是很容易出问题的,也是全面质量控制工作中最难控制的环节,我们要主动与临床沟通,包括患者的准备、标本采集的方法、数量,特殊样品的留取、按时送检等。当检验科工作人员接到标本时要认真核对,不合格的标本要重新采集。发现标本有黄疸、脂血、溶血等对检测结果有影响的情况,应注明在报告单上,以便医师在分析报告时可结合标本信息去分析。

建立检测结果审核制度

在审核报告单之前,要认真分析室内质控情况,对当天检测结果的可信度作出判断,对报告单逐一审核,检查数据有无不合理的情况。符合复查条件的一定要进行复查后再发报告。遇到特殊情况,应与临床及时沟通,查找原因,确保结果的可靠性。

以上几个方面是一个整体,分析前、中、后环环相扣,缺一不可,只有全面做好各环节的质量管理,才能为患者发出真实可靠的报告[2]。

参考文献

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参考文献：

[1]李群.公共图书馆常用自动化管理系统比较研究[J].图书情报工作，2013（57）：275-277

[2]百度文库.汇文图书管理系统与别的图书管理系统分析[EB/OL].，2015/9/15

[3]吴锦冲.国内外图书馆自动化管理系统比较研究[J].科技情报开发与经济，2009（11）：19-11

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【关键词】胰岛素（IRI）；光量子数；前胰岛素原；胰岛素原；化学发光免疫法

【Abstract】ObjectiveToexploreareliablemethodforthedeterminationofinsulin.MethodsGatherfastingagglutinatingblood,centrifugalizethemrespectivelytogettheserum,whichweredirectlysetoninstrumenttodetermine.ResultsLinearrang:0～335.0mIU/L，senitivity:themeanquantumof0mIU/LIRI,10.1mIU/LIRI,152.0mIU/LIRIand335.0mIU/LIRIwere3808,30350,357399and684567.Specificity:whenthecontrolserumwasdetermined,themeasurevlaluewaswithinthestandarddeviation（SD）,95%-105%.Precision:N=60CV≤5%.ConclusionChemiluminescenceisareliable,stablemeasurementmethodfordeterminationofinsulinwithhighsensitivity,precisionandspecificity.

【Keywords】insulin;quantum;preproinsulin;proinsulin;chemiluminescence

胰岛素（IRI）是一种蛋白质激素，这是由胰岛中的β细胞所合成、储存和分泌的。IRI的功能是调节血液中葡萄糖的浓度水平。IRI初期是在β细胞中，以一种大分子量（分子量为1200）前胰岛素原的形式存在。前胰岛素原是一条由110氨基酸组成的单链前体。前胰岛素原被切除掉24个氨基酸序列后形成胰岛素原（分子量为9000），胰岛素原是胰岛素和C-肽的前体［1］。IRI是由两条氨基酸链组成的。最初，IRIA链是由21个氨基酸组成，B链是由30个氨基酸组成；而C-肽是由31个氨基酸组成。IRI是随餐后血液中葡萄糖的浓度高低而产生应答的。

IRI水平虽然不是糖尿病患者常规诊断方法，但是IRI水平的检测对于空腹低血糖患者、普通人群中的胰岛素耐受患者、β细胞分泌功能异常患者的意义非常大［2，3］。

1材料与方法

1.1原理IRI的测定是一种直接化学发光技术和双抗体两点夹心免疫分析法相结合的测定方法。第一种抗体称为标识抗体，是由单克隆抗胰岛素抗体标记吖啶酯形成的；第二种抗体称为固相化抗体，是由单克隆抗胰岛素抗体以共价键的方式与顺磁性颗粒相结合形成的。血清中的胰岛素与相应抗体发生免疫反应后产生光量子，其光量子数的多少与血清中胰岛素的浓度成正比，经标准曲线计算即可求得血清IRI的浓度水平。

1.2仪器与试剂仪器：BAERACS-180型全自动化学发光免疫分析仪。试剂（双试剂）及标准液由广州宝迪有限公司提供。

1.3方法取血清于样品杯中，置全自动化学发光免疫分析仪上，调整好检测参数：血清25μl+第一试剂50μl于37℃孵育5min，加第二试剂250μl于37℃孵育2.5min，用蒸馏水对反应杯进行分离、抽吸、清洗，最后分别加300μl酸试剂和碱试剂到反应系统中进行反应发光，读取光量子数，再根据标准曲线，计算出结果。

1.4标准曲线制备采用两点定标法，将标准血清0.0mIU/L和138.0mIU/L安放于仪器的定标位置上，编入测定程序，上机测定自动打印出标准曲线。

2结果

2.1精密度取混合血清分成两份，一份当天测定60次，结果IRI的值为22±0.8mIU/L，其对应的CV值为1.8%；另一份做批间试验，测定10次，测定统计值为21±1.2mIU/L，其对应的CV值为2.8%。

2.2灵敏度0mIU/L的IRI，其平均光量子数为3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子数为30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子数为357399，335.0mIU/L的IRI，其平均光量子数为684567。IRI测定的范围为0～335.0mIU/L。

2.3回收试验在IRI为25mIU/L的血清中分别加入浓度为1mg/L的胰岛素原、浓度为500μg/L的C-肽、浓度为1mg/L的胃泌素、浓度为1mg/L的胰高血糖素、浓度为1mg/L的胰泌素进行回收试验,分别测得其回收率为:100.8%，95.1%，96.6%，100.2%，101.6%。

2.4线性分析对一份定值血清稀释不同浓度，观察测定体系光量子数的变化量，即为IRI与光量子数的关系。结果显示：IRI在本法的测定范围是0～335.0mIU/L。当IRI大于335.0mIU/L时，开始偏离线性。因此对浓度高的标本必须先进行适当的稀释，然后测定。

2.5干扰试验当溶血（Hb>5g/L）、黄疸（胆红素>0.2g/L）时,对结果干扰甚微。

2.6正常参考值取100份经我院体检合格者的血清，其中男50份，女50份，年龄19～55岁，平均37岁。检测结果IRI：20.5±17.5mIU/L。男女之间差异无显著性（P>0.05）。

3讨论

目前定量测定IRI的方法不多，过去一般用放射免疫法，该法测定步骤繁琐，为半自动化操作，测定时间长达3天，测定范围窄，且使用试剂具有放射性，对操作人员造成身体伤害及对周围环境形成污染。现在基本已被化学发光免疫法所代替，该法测定步骤简单，为全自动化操作，测定时间短，全过程最短为半小时即可完成，而它使用的试剂安全无放射性，为一般化学试剂，对操作人员无伤害，对周围环境污染甚微。不过它也有缺点：其试剂为抗体试剂，有效期短，容易失效，定标周期短，一般为2周。在试剂的有效期内和定标周期内，对血清标本进行测定，其结果非常准确可靠。综上所述，化学发光免疫法测定胰岛素（IRI）是目前首选的方法。

【参考文献】

1康格非,巫向前.临床生物化学和生物化学检验，第2版.北京:人民卫生出版社,2001，256.

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关键词：维生素D；钙代谢；25.羟基维生素D；全自动生化

中图分类号：R446.112 文献标志码：A 文章编号：1008―2409（2016）04―0171―06

维生素D是人体必需的营养素，其营养状况影响着人体钙和磷的正常代谢，与人体健康密切相关，因此，准确测量维生素D水平对于多种钙代谢相关疾病的预防和治疗有重要意义。维生素D在血液中主要以25-羟基维生素D[25-（OH）D]的形式运输，是评价体内维生素D营养状况最为有效的指标。高效液相色谱法、液质联用法、放射免疫法、酶联免疫法、化学发光免疫法、电化学发光免疫法、全自动生化法等方法均可检测血清25-（OH）D浓度，并根据测定结果对人体维生素D的营养状况做出评价。笔者就常用的血清25-（OH）D浓度的检测方法和各自特点作一综述。

1维生素D概述

维生素D是人体必需的营养素，在自然状态下，日光照射或植物性食物是维生素D的重要来源。维生素D是类固醇衍生物，其家族最重要的成员是维生素D2和维生素D3。维生素D2多含于植物性食物中，它是由植物的麦角固醇经阳光照射而合成的，维生素D3可由人体皮肤和脂肪组织在7-脱氢胆固醇经过阳光照射合成，这两种形式的维生素D均无生物活性，必须在体内经过两次羟化后方能发挥生物效应。维生素D属脂溶性维生素，来自食物中的维生素D2与脂肪一起经小肠吸收，在胆汁协助下形成乳糜微粒，由淋巴管进入血液，与阳光照射合成的维生素D，一起转运入肝脏。维生素D在肝脏中经干细胞微粒体中的25-羟化酶作用下，转化为25-羟基维生素D_[25-（OH）D]，再经过肾脏中线粒体1α羟化酶系统的作用下转变为有生物活性的1，25-羟基维生素D[1，25-（OH）2D]。维生素D、25-（OH）D、1，25-（OH）：D在人体内的半衰期分别为24 h、2周和4h。维生素D在血液中主要以25-（OH）D的形式运输，其浓度最高，最稳定，而且半衰期最长，能反映食物摄入和日光照射合成的维生素D总量，因此，血清25-（OH）D浓度是评价体内维生素D营养状况最为有效的指标。通常将维生素D缺乏定义为血清25-（OH）D水平低于20ng/ml，不足为20～30ng/ml，充足为30ng/ml以上。

维持正常的维生素D水平对调节钙磷代谢至关重要。具有生物活性的1，25-（OH）2D可以促进肠道钙结合蛋白的合成，通过下述3个方面使血清钙、磷含量增高；首先，促进肠道内钙、磷的吸收和运转，增加在体内的留存；其次，提高肾小管对钙、磷离子的再吸收，使尿钙、磷排出减少；最后，当低血钙膳食中缺钙时，在甲状旁腺素（PTH）的作用下促进钙、磷的吸收，动员骨中钙、磷释出。在维生素D缺乏的情况下，食物中的钙只有10%―15%能够被吸收，磷只有60%能够被吸收。1，25-（OH）2d通过与维生素受体结合，可提高肠道对钙磷的吸收效率，使钙吸收增加至30%～40%，磷增加至80%左右。众所周知，维生素D具有传统意义上的骨骼效应，近年来研究显示，维生素D不仅能够调节钙磷平衡和骨骼代谢，还具有调节免疫、抗肿瘤、调控细胞增殖、防治代谢综合征、抗炎、保护心血管健康等多种生物学功能。

然而，维生素D缺乏或不足的状况在全球范围内普遍存在，按照国际上对维生素D状态评价的普遍标准，全球已有50%的人口存在维生素D缺乏的风险。维生素D缺乏可能导致儿童佝偻病、新生儿低血钙、甲状腺功能减退、中老年人骨质疏松、骨软化症等多种钙代谢异常疾病，而且可使患高血压、冠心病的危险性增加。但长期或大剂量过多使用维生素D也会发生中毒，过量维生素D可导致高钙血症及多种衰老相关疾病，因此，有必要探索建立可靠、高效的测定方法，为维生素D的检测、相关疾病的诊断和预防提供有力的科学依据。

2维生素D的检测方法

现有多种方法用于测定血清25-（OH）D浓度来评价机体维生素D的营养状况，根据方法原理不同，可分为色谱分析法和免疫分析法。色谱分析法包括高效液相色谱法（HPLC）和液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS），可分离并检测不同的分析物，能区分并分别定量25-（OH）D2和25-（OH）D5。免疫分析法包括放射免疫法（RIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）、化学发光免疫测定法（CLIA）、电化学发光免疫测定法（ECLIA）、全自动生化分析法等，由于所有的维生素D羟化物都能发生抗体抗原结合反应，因此，只能测定25-（OH）D总量，无法同时测定25-（OH）D2和25-（OH）D3的浓度。

2.1高效液相色谱法（HPLC）

高效液相色谱法（HPLC）是早期应用较多的色谱法之一，可以同时检测25-（OH）D2和25-（OH）D3，其灵敏度、特异性和准确性都较高，与LC-MS/MS法的结果一致性较好。与免疫法相比，HPLC的相对不确定度小，分析操作省时省力，具有分离效能高、分析速度快、重复性好、节约成本、精确度高、可自动化等优点。但是HPLC的不足之处是设备较贵，检测通量小，所需样品量大，标本前处理过程复杂，对操作人员要求较高等，目前临床使用较少。而且，HPLC虽然能够分开25-（OH）D2和25-（OH）D3，但25-（OH）D2浓度太低，HPLC检测限达不到要求。随着监测技术及精度的发展，FIPLC逐步被LC-MS/MS法所替代。

王剑建立HPLC法测定正常儿童血清25-（OH）D3含量并评价其应用。样品用甲醇沉淀蛋白，以10%二氯甲烷-正己烷提取；甲醇―水（88：12）为流动相，选用DiamonsilTm（250 min×4.6 mm，5μm）色谱柱进行分离，流速为1 ml/min，检测波长为265 mm，柱温30℃。以25-（OH）D3标准品外标法建立标准曲线，结果发现，该方法在10～200μg/L浓度范围内线性关系好（r=0.9971），方法回收率为93.4%～106.2%，提取回收率为88.8%～94.1%。同时也获得了较好的精度，日内变异系数（CV）为3.5%～4.4%，日间CV为3.9%～4.7%，最小检测范围为5 μg/L。刘怡欣利用HPLC法测定健康成年人血清25-（OH）D3含量，建立方法学与上一研究类似，结果发现，25-（OH）D，在线性范围8～160μg/L内与其响应值线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为92.5%～109.5%，日内精密度（RSD）为2.0%～4.6%，日间RSD为2.9%～5.2%，最小检测范围为4μg/L。此方法检测25-（0H）D具有较高的回收率、较好的精密度和准确性，可用于临床实验室开展血清25-（OH）D含量测定。

2.2液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）

液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）是色谱法中最为常用的25-（OH）D检测方法，样品经处理后采用液相色谱分离，检测器为串联质谱仪，在多反应监测扫描模式下，实现分子离子和碎片离子2次质量选择，可同时检测25-（OH）D2和25-（OH）D3，具有非常高的灵敏度、特异性和准确性，被国际公认为检测的金标准。虽然LC-MS/MS在25-（OH）D检测特异性具有明显的优势，但需要样品量较大，样品前处理复杂耗时长，仪器操作较复杂，对操作人员的要求较高，仪器昂贵，而且需要自己开发方法等，一定程度上限制了LC-MS/MS的临床推广使用。

Tai等采用液-液萃取反相LC-MS/MS法检测已知浓度的25-（OH）D标本，考察和评价方法学。结果显示，25-（OH）D2和25-（OH）D3的回收率为99.0%～101.0%，绝对回收率分别为92%和97%。而且，研究显示方法的精度非常高，当25-（OH）D>1ng/g时的CV为0.2%～0.6%；25-（OH）D

2.3放射免疫法（RIA）

放射免疫法（RIA）是最为经典的测定血清25-（OH）D的方法。目前应用较广泛的试剂盒采用125I-25-（OH）D3作为示踪物，与待测样品中25-（OH）D竞争性结合抗25-（OH）D山羊抗体，用两步抗原抗体反应以实现固液分离，并用Gamma计数器检测沉淀中125I的放射量以计算样品中25-（OH）D的浓度。该方法不需要复杂的样品预处理纯化过程，操作简单，解决了HPLC法操作复杂不适于临床检测应用的问题。RIA试剂盒目前应用比较广泛、方便，灵敏度高，特异性强，精密度好，所需要的仪器要求较低，是基层单位对超微量物质测定的主要手段。但是RIA法不能区分检测25-（OH）D2和25-（OH）D3，还具有放射性污染的潜在风险，对实验人员和环境都有损害，放射性废物的处理也比较复杂。而且测量需要设立平行样，花费较多，每次检测的数量有限。

多项研究报道，对于血清25-（OH）D的测定，RIA法与LC-MS/MS法测定结果的相关性较好。Van denOuweland等比较了Diasorin RIA法与LC-MS/MS法检测来自国际维生素D室间质评计划（DEQAS）的室间质控标本，同时也分析比较了其他使用LC-MS/MS方法的实验室检测结果，结果发现，RIA法与LC-MS/MS法结果符合度高，相关系数，r2=0.90，平均偏差为1.61nmol/L。Farrell等对170例随机选取的患者标本分别采用RIA法和LC-MS/MS法检测，连续5 d取2份血清重复测量5次，以评估批内及批外的精密度，结果显示，LC-MS/MS法的一致相关性（CCC）为0.99，平均偏差为1.4 nmol/L，RIA法与LC-MS/MS，法相当，其CCC为0.97，平均偏差为2.7 nmol/L。郑晓艳对53例血清样本分别采用RIA法和LC-MS/MS法检测25-（0H）D，结果显示两者相关性良好，相关系数，为0.883。RIA法与金标准LC-MS/MS法检测的相关性好，使用方便，适合于常规临床实验室开展。

2.4酶联免疫吸附法（ELISA）

酶联免疫口及附法（ELISA）是早期维生素D测定的主流方法，是将可溶性的抗原或抗体结合到固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法：ELISA法在自动化操作、节省人力、无污染等方面具有一定的优势，适合于常规临床实验室开展.但是该法只能用于检测25-（OH）D总的含量，当受试者服用维生素D2时，ELISA法测定会存在偏差，可能造成临床决策的失误，使维生素D中毒风险增大

另外，ELISA法的主要缺陷是对基质敏感，容易与其他非目标化合物发生交叉反应，导致方法特异性不足。而且，酶促反应受反应温度、时间、加样准确性、洗板等因素影响.批内和批间的变异系数相对较大

高玲娟采用ELISA试剂盒检测25-（OH）D水平，对ELISA方法学进行系统评价，结果发现，ELISA测定25-（OH）D的批内CV为2.13%～4.32%，批间CV

2.5化学发光免疫测定法（CLIA）

化学发光免疫测定试剂盒使用连接有异鲁米诺衍生物的25-（OH）D与样品中25-（OH）D竞争性结合包被了25-（OH）D特异性抗体的磁珠，反应终止后加入激发剂，使用光电倍增管检测产生的化学荧光信号。CLIA法的优点是操作简单、快速，无同位素污染，而且容易自动化，现已有多家厂商开发出相关自动免疫分析仪；缺点是仪器价格高、只能用于检测25-（0H）D总的含量。

单咏梅对LIAISON全自动化学发光仪测定25-（OH）D的检测性能进行验证和评估，实验结果表明线性范围为6～131 ng/ml，批内RSD为5.23%，批间RSD为1.06%，总RSD为6.57%，分析灵敏度为2.5 ng/ml，功能灵敏度为3.0 ng/ml，可以满足临床使用需要，Frenzel等。对比了LIAISON CLIA法与Dia RIA法和LC-MS/MS测定25-（0H）D的结果相关性，CLIA法测定的结果与RIA检测结果的相关系数为0.94，与LC-MS/MS的相关系数为0.95。CLIA测定结果准确性和特异性高，自动化、可控性强，适合大规模维生素D营养状况监测。

2.6电化学发光免疫测定法（ECLIA）

电化学发光免疫测定试剂盒使用生物素标记的25-（OH）D与样品中25-（0H）D竞争性结合钉标记的维生素D结合蛋白（DBP）后，用包被r链霉亲和素的磁珠将生物素标记的25-（0H）D-钌标记的维生素D结合蛋白复合体固定，光电倍增管检测钉的电发光信号强度回算样品中的25-（OH）D浓度。该法具有高灵敏度，且所受影响因素较少，能自动化批量操作÷

何国坚应用罗氏CS E170分析仪采用ECLIA法检测维生素D，结果显示，其线性范围为3～70 ng/ml（r=0.9881，检出限为3.0 ng/ml；2种不同浓度的定值质控血清在准确度评估中相对偏差均

2.7全自动生化分析法

全自动生化分析法利用全自动生化仪，根据光电比色原理来测量血液中25-（OH）D的总含量。由于其操作简单、测量速度快、准确性较高、消耗试剂量小，在各级医院得到广泛应用。其缺点是仅能检测25-（OH）D的总含量，精密度和特异性稍差，仪器间的性能差异大，容易造成样品间交叉污染。

篇6

结果显示在仪器厂商声明的测试范围内, cTnI、Myo、CK-MB的相关系数r均优于判断标准, 符合要求。见表2。

表2 线性范围试验结果

2.3 M16磁敏免疫分析仪的正确度评价结果

仪器正确度测试结果如表3所示, 可知M16磁敏免疫分析仪测试的cTnI、Myo、CK-MB参考物质指定值均包含在测试结果95%置信区间内, 且相对偏倚均低于15%, 其检测的准确性符合厂商声明标准。见表3。

表3 M16磁敏免疫分析仪准确度测试结果

2.4 对比试验

由于Roche Cobas E602全自动电化学发光分析检测仪检测指标为Myo、CK-MB, 因此本研究仅采用了Myo、CK-MB进行对比分析。M16磁敏免疫分析仪和Roche Cobas E602电化学发光检测仪分别测定30份临床样品结果对比见图1。图1A和图1C显示两种方法测量的结果相关性良好, 其中, Myo的R2=0.984;CK-MB的R2=0.986。残差图波动范围稳定, 说明残差方差齐性, 线性拟合结果可靠, 见图1B和图1D。

图1 M16磁敏免疫分析仪和Roche Cobas E602电化学发光检测仪测定Myo和CK-MB的相关性分析

注:A为Myo线性拟合曲线;B为Myo残差图;C为CK-MB线性拟合曲线;D为CK-MB残差图

3 讨论

临床POCT产品的检测性能直接关系到患者的诊断、治疗和预后, 因此POCT产品进入临床前必须对其检测性能进行评估[5]。笔者实验室自行设计试验, 对第3代全定量POCT产品M16磁敏免疫分析仪的检测性能进行独立评价。为验证仪器的检测性能, 本研究以cTnI、Myo、CK-MB心肌梗死标志物测试为例进行评价。精密度试验显示, cTnI、Myo、CK-MB的CV15%, 均在仪器厂商声明的测试范围内, 3种指标的测量值和理论值密切相关, 相关系数r正确度评估试验显示质控液指定值均在cT-nI、Myo、CK-MB检测结果的95%置信区间内, 且相对偏倚15%, 结果均符合仪器厂商的声明性能。同时, M16磁敏免疫分析仪检测性能指标均优于其他文献报道第2代心肌损伤标志物检测POCT[6,7,8]。在心肌损伤蛋白标志物临床检测中, 电化学发光法被认为是检测金标准[9]。本研究对30份临床患者外周血液标本的Myo、CK-MB浓度分别进行M16磁敏免疫分析仪和Roche Cobas E602电化学发光检测仪测定, 结果显示两者结果间具有良好的相关性, 且相关性能优于文献[6,7,8]报道的第2代POCT产品。

人血浆中cTnI、Myo、CK-MB蛋白水平测量在临床上已广泛用于心肌梗死辅助诊断[10,11]。相比中心实验室检测 (如全自动化学发光检测仪) , POCT产品应用直接缩短样品周转周期 (TAT) , 极大地提高心肌梗死的临床诊断效率和急救成功率[12]。目前, 市场上cTnI、Myo、CK-MB检测POCT产品主要基于侧向流层析技术, 结合荧光、胶体金标记和读数仪系统实现对蛋白标志物水平的定性或半定量检测[13,14]。尽管基于侧向流层析技术的POCT产品价格便宜、操作简单且应用广泛, 但存在重复性差 (CV为20%～40%) 、缺少精确定量的多项检测能力和自动化的文件编制[15]。M16磁敏免疫分析仪是一款基于巨磁电阻生物传感器的临床POCT分析装置。其检测原理采用双抗体夹心免疫反应, 其检测主要流程如下:首先将检测一抗包被在传感芯片上, 进行检测一抗-待测抗原-表位二抗的夹心反应。表位二抗上连接有生物素标记物, 能够通过链霉亲和素/生物素体系将修饰有链霉亲和素的磁颗粒固定在传感芯片上, 进而通过GMP传感器对芯片上的磁信号检测实现对样品中待测抗原水平的定量测定。此外, 为方便临床进行POCT和提高检测精确度, 检测试剂盒采用检测卡样式, 通过集成微通道、阀和泵完成对免疫夹心反应的全自动控制, 减少人为操作误差, 克服侧向流层析技术的批间差异大的缺陷, 最大程度上提高测试可重复性。兼具全定量巨磁电阻生物传感器阵列和主动式微流控芯片技术赋予了M16磁敏免疫分析仪第3代全定量POCT的典型特征。

综上所述, 本文以cTnI、Myo、CK-MB心肌损伤蛋白标志物测定为例, 对M16磁敏免疫分析仪的精密度、线性和正确度进行评价, 结果与厂商声明的性能参数相符;通过对比试验证实了其测定结果与中心实验室检测结果间具有较好的一致性。此外, M16磁敏免疫分析仪总体设计新颖合理, 操作简便, 质量控制方式完善, 测量速度快 (15min) , 溯源性好, 是一款值得临床推广使用的第3代全定量POCT产品。产品不足之处在于检测成本相比第1代和第2代POCT产品的检测成本高, 如何让医疗机构和患者接受存在一定程度的挑战。同时, 在产品精密度、加样自动化和数据云端化应用等方面还存有一定提升空间。

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篇7

【关键词】 胰岛素（IRI）；光量子数；前胰岛素原；胰岛素原；化学发光免疫法

【Abstract】 Objective To explore a reliable method for the determination of insulin.Methods Gather fasting agglutinating blood， centrifugalize them respectively to get the serum，which were directly set on instrument to determine.Results Linear rang: 0～335.0mIU/L，senitivity: the mean quantum of 0mIU/L IRI，10.1mIU/L IRI， 152.0mIU/L IRI and 335.0 mIU/L IRI were 3808，30350，357399 and 684567.Specificity:when the control serum was determined，the measure vlalue was within the standard deviation （SD），95%-105%.Precision:N=60 CV≤5%.Conclusion Chemiluminescence is a reliable，stable measurement method for determination of insulin with high sensitivity，precision and specificity.

【Key words】 insulin;quantum;preproinsulin;proinsulin;chemiluminescence

胰岛素（IRI）是一种蛋白质激素，这是由胰岛中的β细胞所合成、储存和分泌的。IRI的功能是调节血液中葡萄糖的浓度水平。IRI初期是在β细胞中，以一种大分子量（分子量为1200）前胰岛素原的形式存在。前胰岛素原是一条由110氨基酸组成的单链前体。前胰岛素原被切除掉24个氨基酸序列后形成胰岛素原（分子量为9000），胰岛素原是胰岛素和C-肽的前体［1］。IRI是由两条氨基酸链组成的。最初，IRI A链是由21个氨基酸组成，B链是由30个氨基酸组成；而C-肽是由31个氨基酸组成。IRI是随餐后血液中葡萄糖的浓度高低而产生应答的。

IRI水平虽然不是糖尿病患者常规诊断方法，但是IRI水平的检测对于空腹低血糖患者、普通人群中的胰岛素耐受患者、β细胞分泌功能异常患者的意义非常大［2，3］。

1 材料与方法

1.1 原理

IRI的测定是一种直接化学发光技术和双抗体两点夹心免疫分析法相结合的测定方法。第一种抗体称为标识抗体，是由单克隆抗胰岛素抗体标记吖啶酯形成的；第二种抗体称为固相化抗体，是由单克隆抗胰岛素抗体以共价键的方式与顺磁性颗粒相结合形成的。血清中的胰岛素与相应抗体发生免疫反应后产生光量子，其光量子数的多少与血清中胰岛素的浓度成正比，经标准曲线计算即可求得血清IRI的浓度水平。

1.2 仪器与试剂 仪器：BAER ACS-180型全自动化学发光免疫分析仪。试剂（双试剂）及标准液由广州宝迪有限公司提供。

1.3 方法 取血清于样品杯中，置全自动化学发光免疫分析仪上，调整好检测参数：血清25μl+第一试剂50μl于37℃孵育5min，加第二试剂250μl于37℃孵育2.5min，用蒸馏水对反应杯进行分离、抽吸、清洗，最后分别加300μl酸试剂和碱试剂到反应系统中进行反应发光，读取光量子数，再根据标准曲线，计算出结果。

1.4 标准曲线制备 采用两点定标法，将标准血清0.0mIU/L和138.0mIU/L安放于仪器的定标位置上，编入测定程序，上机测定自动打印出标准曲线。

2 结果

2.1 精密度 取混合血清分成两份，一份当天测定60次，结果IRI的值为22±0.8mIU/L，其对应的CV值为1.8%；另一份做批间试验，测定10次，测定统计值为21±1.2mIU/L，其对应的CV值为2.8%。

2.2 灵敏度 0mIU/L的IRI，其平均光量子数为3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子数为30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子数为357399，335.0mIU/L的IRI，其平均光量子数为684567。IRI测定的范围为0～335.0mIU/L。

2.3 回收试验 在IRI为25mIU/L的血清中分别加入浓度为1mg/L的胰岛素原、浓度为500μg/L的C-肽、浓度为1mg/L的胃泌素、浓度为1mg/L的胰高血糖素、浓度为1mg/L的胰泌素进行回收试验，分别测得其回收率为:100.8%，95.1%，96.6%，100.2%，101.6%。

2.4 线性分析 对一份定值血清稀释不同浓度，观察测定体系光量子数的变化量，即为IRI与光量子数的关系。结果显示：IRI在本法的测定范围是0～335.0mIU/L。当IRI大于335.0mIU/L时，开始偏离线性。因此对浓度高的标本必须先进行适当的稀释，然后测定。

2.5 干扰试验 当溶血（Hb>5g/L）、黄疸（胆红素>0.2g/L）时，对结果干扰甚微。

2.6 正常参考值 取100份经我院体检合格者的血清，其中男50份，女50份，年龄19～55岁，平均37岁。检测结果IRI：20.5±17.5mIU/L。男女之间差异无显著性（P>0.05）。

3 讨论

目前定量测定IRI的方法不多，过去一般用放射免疫法，该法测定步骤繁琐，为半自动化操作，测定时间长达3天，测定范围窄，且使用试剂具有放射性，对操作人员造成身体伤害及对周围环境形成污染。现在基本已被化学发光免疫法所代替，该法测定步骤简单，为全自动化操作，测定时间短，全过程最短为半小时即可完成，而它使用的试剂安全无放射性，为一般化学试剂，对操作人员无伤害，对周围环境污染甚微。不过它也有缺点：其试剂为抗体试剂，有效期短，容易失效，定标周期短，一般为2周。在试剂的有效期内和定标周期内，对血清标本进行测定，其结果非常准确可靠。综上所述，化学发光免疫法测定胰岛素（IRI）是目前首选的方法。

参考文献

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2 Chevenne D，Trivin F，Porquet D.Insulin assays and reference values.Diabetes Metab，1999，25（6）：459-476.

篇8

    随着检验医学的发展,临床生化、临床免疫等亚专业学科都取得了长足进步,分子生物学等学科更是引起实验医学领域的革命性突破[2]。医学院校对新兴学科的重视不言而喻,与之相对的是临床检验基础学科的教育逐渐薄弱。笔者在带教工作中发现,部分实习生对聚合酶链反应技术比较熟悉,对牛鲍式血细胞计数板进行细胞计数的原理却比较模糊。虽然当前全自动血细胞分析仪已经普及,但仍无法完全取代人工计数,一些基础技术是仪器分析的重要补充,在检验医学中仍占有相当重要的地位[3]。在实习期间,带教老师应加强对基础技术的指导,避免实习生走入重高端、轻基础,重仪器、轻人工的误区。

    2仪器设备自动化导致实习内容减少

    当前,实验室自动化程度越来越高,全自动生化仪、血细胞分析仪、化学发光仪等先进的自动化设备承担了检验科的大部分日常工作,从而使实习内容减少、技术趋向简单化。例如全自动生化仪与化学发光仪虽然实验原理不同,但操作的步骤方法大致相同,实习生在单调重复的操作中可能会产生检验工作简单、容易的错误想法。针对这种情况,带教老师应该改变教学重点、丰富教学内容,在实习生能够熟练操作仪器后,转为指导学生进行仪器的设置维护工作。当前,室内质量控制已经成为实验室质量保证体系的重要组成部分,带教老师还应该带领学生熟悉质量控制程序,掌握Levey-Jennings质控图、即刻法质控图及Westgard多规则质量控制方法等,为以后的质量控制工作打好基础。带教老师还可以指导学生尝试编写SOP文件,制作简单的教学PPT,使实习内容多元化。

    3检验与临床疏离对实习生带教的影响

    卫生部人事司2001年正式设立检验医师岗位,可参与临床诊疗工作[4]。至今十余年过去了,检验医师在大部分三级医院并没有发挥预期的作用,他们很少参与查房、会诊等临床医疗活动,检验科与临床科室在医疗、教学、科研等方面的合作情况也不容乐观。2004年姜梅杰等[5]提出的医学院校检验医学专业设置进一步规范化,重点培养检验医师系列人才的设想依然任重道远。在这种背景下,实习生对检验工作的理解偏向简单与狭隘,例如,对检验结果的解释仅限于是否处于正常范围,没有结合临床综合判断的意识。在实习生管理工作中,带教老师除了指导学生操作实践,还应该指导学生根据不同的临床状况对实验报告进行解读,让实习生树立检验必须结合临床的正确理念。

    4工作任务与带教任务的冲突

    目前中国医疗资源不足、医护人员工作繁忙,工作任务的繁重易使带教老师对实习生的管理产生不放手或过度放手的倾向。例如,免疫荧光技术等手工项目,操作繁琐,易出现人为误差,带教老师需付出极大的精力指导和监督才能使学生顺利完成实验,为了保证报告的按时发出,部分带教老师会减少教学内容,只让学生了解、观看实验而不放手学生进行实践;对于一些操作判定比较简单的实验技术,如胶体金免疫技术,有些带教老师又会忽略监督指导,放手实习生独立完成而不加审核,这些都是错误的。不放手会使实习生丧失学习兴趣,学无所得;过度放手则可能让带教老师失去纠正错误的机会,造成严重的后果。

    5忽视对实习生思想与情商的培养

    受社会上拜金主义错误思想的影响,部分学生实习态度不端正,认为实习不过是免费为医院打工,在工作中不积极、不主动,缺乏学习热情。对于这种观念带教老师不能一笑置之,应该及时批评教育。实习是学生进入社会前的试练,正确的态度才能有正确的结果,认真学习带教老师教授的知识和经验,对自己、对社会都将有极大的帮助。除了操作技能的培训,情商的培养也应纳入带教老师的教学范畴。在教学工作中,带教老师应注重学生沟通能力、协作能力的培养,指导学生如何与患者正确沟通交流,带领学生处理简单的医疗纠纷。

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关键词：免疫学检验；教学改革；项目教学法

《免疫学检验》是三年制医学检验技术专业主干课程之一，是研究免疫学技术及其在医学领域中应用的一门学科。免疫学发展非常迅速，在检验上的应用更是日新月异，其相关理论和技术已渗透到《寄生虫学及检验技术》、《微生物学及检验技术》、《临床基础检验》、《临床血液学检验》和《生物化学检验》中。著名的教育学家陶行知先生说过，"教、学、做"不是三件事，而是一件事，在做中学才是真正的学，在做中教才是真正的教。实验教学是免疫学检验教学的重要环节，是理论联系实际，培养学生实际操作技能、分析问题、解决问题的能力的重要途径。但是之前实验教学依然以传统的实验为主，学生实习后抱怨实验课内容与实际工作联系不大。为了改变这种现象，笔者以项目为载体进行《免疫学检验》实验教学改革。

1实验教学目的

免疫学实验教学目的是通过实验教学环节，促进学生对课堂理论知识的理解，在"动手"操作专业基本技能之中培养学生严谨的科学态度、分析问题和解决问题的能力与创新思维。具备对免疫学检验技术的正确选择与应用评价的基本素质，了解免疫学检验学科的发展方向，为将来临床免疫学检验奠定基础。

传统的免疫学实验教学模式，学生只是按照老师的思路进行机械性操作，学生的学习是被动的，没有解决问题的主动性，违背了实验教学的目的。基于项目教学法的实验教学改革就是将实验分为与临床疾病相关的不同项目，学生完成项目检测的同时掌握相关免疫学基础知识和免疫学技术原理、方法学评价以及该项目与临床疾病的关系。充分调动学生学习积极性，综合应用各种实验技术原理及方法，最大限度挖掘学习潜力。

2实验教学内容安排

免疫学检验技术发展迅速，新型免疫学技术不断出现，是检验医学发展最活跃的一项技术和研究内容。临床免疫学的应用已涉及多种疾病的发病机制研究、疾病的诊断、治疗选择与治疗效果的评估。现在，应关注临床免疫学检验新技术、新方法与临床的结合与应用，不断提高本专业人员的知识结构与应用能力，以便为临床医疗和患者健康提供更好的服务[1]。但目前《免疫学检验》的教学实验内容多数还停留在经典免疫学技术，内容陈旧，因此必须对实验内容进行重新调整，淘汰临床已经不开展的项目，增添新内容，开展临床新项目。比如我们新增了免疫荧光抗体染色技术，淘汰了溶血空斑实验。检验系学生进入临床工作任务主要是对各种临床项目进行检测，首先要求学生必须掌握好基本理论和基本操作，还要培养学生对实验项目检测的意识。因此基于项目教学法实验改革将教学内容分为三个模块：①基本技能模块：内容包括凝集反应、沉淀反应、免疫电泳技术、ELISA、斑点金免疫层析技术、荧光免疫技术、免疫细胞检测技术等各种免疫学检验技术。②临床检验项目模块：内容包括：免疫细胞检测，感染性疾病的检测如梅毒、乙肝、伤寒等，自身免疫病的检测如SLE，肿瘤标志物的检测，特种蛋白的检测等[2]。③临床见习内容：大型自动化仪器构型、操作，实验室没有开展的临床项目以及质量控制的具体实施。

3项目教学法的实施

3.1优化实验室配置 增添新内容，开展临床新项目必须加强软件、硬件建设，购置先进仪器设备，同时避免重复建设，最大发挥仪器利用率，实现资源共享，为实验项目的开展创造充分的实验环境[3]。实验室的仪器设备大多是适合手工操作技术类实验，自动化程度不高，适合培养学生掌握免疫学检验技术的基本操作技能，如酶标仪、荧光显微镜等。大型自动化仪器适合于临床批量检测标本，如化学发光自动免疫分析、自动化免疫比浊分析、流式细胞仪等，仅用于教学使用频率低，造成资源浪费，相关技术的教学可应用多媒体课件及临床见习。在实验教学过程中，多媒体教学可以让学生直观的观察到先进仪器的原理、构造、操作等。运用多媒体可以各种素材将实验原理、过程及结果观察等生动的展示给学生，加强学生对实验原理及过程的理解及掌握，节省实验时间。因此必须完善多媒体教学资源库。

3.2基本技能模块项目实施方法 正确的实验技能操作是实验质量的保证，培养学生严谨的科学作风，是以后工作的保障。在实验教学中，要注重学生操作技能的培养，包括基本实验操作手法，基本仪器操作，维护以及生物安全意识等。项目包括凝集反应、沉淀反应、免疫电泳技术、ELISA、斑点金免疫层析技术、荧光免疫技术、免疫细胞检测技术。教学过程：老师提出项目，学生进行实验项目准备包括实验器材准备、试剂的配制，仪器的校准等，这就要求学生对实验内容提前预习。实验过程中保证人人动手，老师随时纠正错误和解答问题，实验结束前老师与学生一起进行实验结果分析及实验方法评价。

3.3临床检验项目模块实施方法 依据临床免疫学检验的工作任务设计了5个实验模块：免疫细胞检测，感染性疾病的检测，自身免疫病的检测，肿瘤标志物的检测，特种蛋白的检测。每个模块又选取典型，临床常用的检验项目7个教学项目，包括单个核细胞分析及检测、IgG的检测、梅毒血清学诊断、伤寒血清学诊断、乙肝血清标志物检测、自身抗体检测等。教学实施过程：教师展示病例，提出问题，发放临床标本；学生4人一组进行检测，评价检测结果。病例的选取要符合实践性、针对性，更重要的是具有启发性[4]。如：病例：患者李某某，女，18岁，主述"不规则发热伴大小关节疼痛月余，伴面部蝶形红斑1个月"。患者1个月前无明显诱因出现乏力，发热，体温37～38℃，日光照射后出现皮疹。患病以来，精神饮食差，体重下降5kg。体温37.8℃，脉搏100次/min，呼吸频率20次/min，血压120/90mmHg，口腔溃疡。血清IgG 24.5g/L，IgA 3380mg/L，IgM 2960mg/L，C3补体 0.53g/L，C4补体0.08g/L，RF

3.4临床见习模块 实验室开展的实验的内容不可能包含所有临床项目，为了尽量避免实验教学滞后于临床免疫学检验发展的实际情况，在学习与临床实验相关内容时，组织学生去检验科参观学习和见习，以了解临床免疫学检验的动态及最新检测方法和发展趋势，既避免了实验教学和临床脱节，又让学生熟悉、了解临床免疫学检验常用仪器的操作规程和实验步骤，同时在见习的过程当中，还将临床实验室控制内容介绍给学生，为今后从事免疫学检验方面的实习和工作奠定良好的基础。

4教学效果

项目教学法在整个实施过程中达到了较好的教学效果，对学生多方面的能力进行了培养。学生由传统实验教学中的被动接受信息、机械性操作、不求甚解，到主动查阅资料、思考问题、讨论问题、解决问题，自学能力、独立思考问题的能力得到了很大的提高。另外，学生四人一组来进行一个项目的检测，在整个实验过程中，学生们必须分工合作，才能顺利的在有限时间内完成本次实验，培养了合作意识、团队精神。学生得到项目以后需要设计实验路线，摸索实验条件，并且利用有限资源，合理安排实验，还需要严谨的工作态度最终才能取得好的结果，培养了学生科学思维和实践的能力。这些能力为学生走向临床打下坚实的基础。

项目教学法的实施促进教师素质提高。项目实施过程中，学生会查阅大量资料，设计实验路线，在试验过程中若发现问题肯定会向老师请教，教师必须具备扎实的理论基础，丰富的实验技能，有更高的水平的判断力，对于实验中的问题的均能给予解释指导。另外，目前没有适合的教材进行项目教学，因此教师必须自己选择合适的项目内容进行实施，这要求教师选取具有临床价值，难易程度适中，能激发学生学习兴趣，并且能有效的将专业理论与实践结合起来的内容，这就要求教师必须有较高的综合素质。

总之，《免疫学检验》实验实施项目教学法对于培养学生扎实的操作技能、创新能力、综合能力及团队精神具有很大的作用。学生的学习兴趣得到很大提高。学生通过完成对项目的检测过程，锻炼多方面能力，如文献检索、查阅资料的能力，思考问题、解决问题的能力，主动学习，终身学习的能力等。项目教学法选取教学内容均是临床常见检测项目，接近临床实际工作，为学生顺利走上工作岗位做好了铺垫，为临床医疗和患者健康提供更好的服务。

参考文献：

[1]王兰兰.临床免疫学检验的现状与发展趋势[J].中华检验医学杂志，2013，36（1）：29-31.

[2]代林远，王利平.以检验项目为载体实施免疫学检验课程改革[J].卫生职业教育，2011，29（12）：153-154.

篇10

关键词：医学监测仪器，自动化与集成化，模块化，智能化，便携化，环保化，国产化

中图分类号：R826.2+2 文献标识码：B 文章编号：1005-0515（2013）4-138-02

引言：

随着社会与科学技术的不断发展和进步，医学检验也有了质的飞跃，由以往的纯手工转变为仪器检测。在电脑、微电子以及新型材料不断更新引进的情况下，医学检验仪器也在与时俱进而且品种日渐增多，但多少都存在着一定的不足与局限性。随着计算机、生物化学、电子技术、分子生物学、物理学以及仪器材料学等领域高科技、新技术的出现，医学检测仪器将向自动化与集成化、模块化、智能化、便携化、环保化和国产化等方向发展。

检测仪器自动化与集成化

现如今国内多数医院的检验科还在使用单机自动化的各类分析仪器，而国外的检测仪器均开始向集中化发展，也就是将相关的几台自动化仪器进行串联，形成全实验室自动化，特点是采用流水作业模式、规模大且整个检验过程都属于自动化。它的组成部分主要有：前处理系统、运送系统、分析系统、后处理系统和保存系统等。（见图1）

相关人员采集样本后，只需将其放到传送带上或由机器人代为传送至检验科便可，接下来的工作将由分析仪器按照之前设计好的程序自动完成。它会将样本通过条形码进行分类，然后再自动分送到各检测仪进行分析，检测结果出来后会经仪器的接口送到本科的电脑进行储存并进入全院的计算机网络系统进而提供给临床的科室。上世纪八十年代的日本就已经出现全自动化临床试验技术，采用样本传送系统和自动化控制技术，检验人员将样本放入传送带后就不再接触样本，仪器的系统会自动取样、报告，使相关人员感染疾病的几率大大降低，也在很大程度上节省了劳动力、提高了工作效率。

随着现代检验学以及计算机技术的不断发展，科研及临床部门进一步提高了对临床实验室的要求，自动化仪器也逐渐替代了人工检验，从而大大提高了检验项目的数量以及检验速度。若检验结果的计算、记录与报告仍然采用人工方法来进行，将很难适应以及跟紧实验室的正常运作，我们需要运用计算机网络来解决这一问题。但装备全自动检验系统需要的费用很高，因此在一些中小型医院和经济欠发达地区基层医院的发展被限制。

1、检测仪器模块化

根据医院的资金以及用量有限等需求可将各任务模块进行组合式安装使用，这些模块既可以独立工作也可以组合起来构成全自动系统。紧密结合的设计使其成为一个功能多、质量高的检验系统，基本达成了一台仪器就可完成常规、特种蛋白、药物治疗、特殊生化、免疫、滥用药物等多种项目的检测，另外还可以通过增添各种部件达到扩展其功能的目的。这种模块化的仪器具有检测项目多、节省资金、体积小、自动化程度高等特点，比较适合大中型的医院使用。例如AdivaLabcell――是由Bayer诊断仪器公司所生产，既有可以独立工作的系统单元也有全自动系统，使用的工作人员在某一终端便可操作整台仪器系统。HI-TACHI日立7600是一台大型组合式的全自动生化分析仪。它是在原有的日立生化分析仪的基础上进行开发的，采用了模块化结构和先进的控制技术，而且拥有非常高的扩展性和灵活性。用户可以根据自己的需要来进行自由组合，在此基础上再配备上样品投入部、输入部、缓冲部和收纳部等，由windowsNT enthernet网控制，可以随意随时地增减单元部。由中央计算机来智能多线程控制整个工作流程，通过合理分配实现高效与高速的测定。通过设定还可使仪器进行无人状态下的一体化程序控制和自动关机、保养及清洗。7600型为多模块化设计，当其中的一块模块发生故障时，其余模块不会受其影响仍可继续运行，在一天24小时当中的任意时间可对模块进行交替保养与维护，不会影响到日常的工作。模块式接入系统要比全自动化的实验室投资小、经济适用，而且使用起来也更加方便灵活。

2、检测仪器智能化与简约化

由仪器取代人工一次完成标本的送入、输入条码、检测完成到数据的存储、输出以及连接网络等工作，缩短了出报告的时间，便于查询存储的结果，提高了完成各项任务的准确度与速度。而且仪器能够定期地进行自动校检，排除了非标准以及人为因素的干扰，从而减少误差的情况出现。在设计上也逐渐（通常发生在有特殊体质的人身上），其中表现最严重的是过敏性休克；出现毒副作用（表现为患者的神经系统、血液循环系统、肾脏出现异常，最常见的是肾脏异常）。造成抗生素滥用的主要原因有患者本身的原因；政府机构部门对抗生素管理及制度的不健全的原因；医生临床用药的原因。针对我国滥用抗生素的现状的原因，提出合理的措施以便日后科学使用抗生素药物。滥用抗生素带给人类较大的危害，科学使用抗生素是一项巨大的系统工程，需要政府机构、医疗卫生部门、广大医务工作者以及患者的重视[3]，再有就是政府做好宣传；医院直接做好监控；改革医疗体制；做好样本实验，为临床药师提供准确数据，进而充分发挥临床药师的作用。

参考文献：

[1]吕勇.滥用抗生素产生的危害及滥用的原因[J].辽宁中医药大学学报，2008，（09）：108―109.