爱情感言范文
时间：2023-03-22 07:05:25
导语：如何才能写好一篇爱情感言，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
1、你的爱是我一生的盼望，所以你的每一滴泪，都化作了我的哀愁。我思恋的人啊，愿你一生幸福。
2、我们的故事还没开始已经结束，一种想见不敢见的伤痛，所以，我隐姓埋名。
3、我是一只孤独的小船，渴望那温暖的港湾。不管天涯海角多么遥远，我会驶来轻轻地靠岸，诉说风浪中的思念。
4、我们在轻雾缭绕的清晨分别。露，莹莹的，像你纯真的眼睛;雾，蒙蒙的，像我浓浓的离愁。
5、一首小情歌，一个小小的我，想你的时候感动太多，忍不住掉下眼泪一颗，化作了云儿一朵，化作了河畔一个，愿你抬头看到我，心烦想到我，是时时刻刻知道爱你的人是我，是我，还是我，亲爱的，冬天快乐。
6、有些时候，我们以为，蒙上了眼睛，就可以看不见这个世界;以为捂住了耳朵，就可以听不到所有的烦恼;以为脚步停了下来，心就可以不再远行;以为我需要的爱情，只是一个拥抱。
7、曾经有一份真诚的爱情放在我面前，我没有珍惜，等我失去的时候我才后悔莫及，人世间最痛苦的事莫过于此。你的剑在我的咽喉上割下去吧!
8、你来时，撞开了我的心扉;你走时，却锁上了我的心房。从此，我的心像关不上的窗，风起时一片冰凉。只有你，能走进我的世界，抚慰我淡淡的忧伤。
9、傻是我的特长，痴是我的理想，当傻和痴交织在一起的时候，便是我梦境里最美的天堂!别笑我，我就这么痴心，我会傻傻地爱你痴痴地恋你，一直到老!
10、我站在世界的最高处，看着这个世界，原来我们的缘分那么渺小，其实可能也没有，但我会把握住我的生活，不会让它流失。
11、谢谢你在我脆弱的时候给我这冷漠的一刀，不知道是你手软，还是我坚硬。给我点时间，我把你的这把刀磨的锋利一点，再还给你。
12、有颗心在痛苦中，有个灵魂在麻木中歌唱。这就是我那颗得不到慰藉的悲伤的心;这就是我那个灵魂，在燃烧着思念你的忧伤。
13、有一句话能点得着感情的火，有一句话说出来就是幸福。这一句话，你为什么不愿说破?我等着、等着你不再缄默……
14、总有一天我会从你身边默默地走开。不带任何声响。我错过了很多。我总是一个人难过。
15、分手的时候，我们都转身走了，但我依旧等你转身过来抱住我，可是这条路走完后，我转过头你却早已不见了，看着昏暗的天空，我在想我怎么会这么傻，我竟然还在期待你是爱我的。
16、你美丽的身影，永远在我眼前;你婉妙的声音，时刻在我耳边;你精灵的眼睛，忽闪忽闪亮在我心里……是的，我们没有分离，你永远在我的思念里。
17、深爱一个人会醉;恨一个人会碎;最痛苦的是等待!不知道你会等我多久，可我知道我会等你一生一世!
18、我们只是匆匆告别，列车带走了短暂的春天。春雨替我留下淅沥的眷恋，梦境中你我再见……
19、悬崖上花儿依旧坚强的活着，火上上的草依旧 保护着自己，但是坐在这里的我却没有他们的坚强，只有懦弱，懦弱着你能爱上我，哪怕是一分钟也可以。
20、有了你，我的笑容从清晨一直洋溢到深夜;有了你，我的世界终结了所有的悲伤;有了你，我的幸福从此不再有缺憾。一辈子一段情，因为有了你，足矣
21、有一片天涯叫咫尺，有一亩桑田叫沧海，有一束爱情叫至死不渝，有一股思念叫刻骨铭心。我愿在你的天涯，守护桑田，散播思念，期待爱情玫瑰开花。
22、或许时间会带走一切，但我会永远记得，那段和你同在月光下喁喁而语的时光……
23、你已远远的走开了，但我的爱依旧在这里，你带走了所有东西，却忘记带走我这一份爱，把我一直遗留在墙角里，没人发现。
篇2
其实，一开始我真系好中意呢套剧噶，觉得距好贴近我地既生活，但系后来，随住乐天送同茹初见慢慢挞着之后，我就唔系甘中意啦。
可能系因为我本身就神化左爱情呢样野，我觉得爱情应该系最单纯，最干净噶。你爱呢个人，就唔应该系后来将距忘得一干二净，就好似距重来无出现过甘样。曾经，乐天送系甘爱emma，Emma系距既唯一，但系后来咧？Emma走左无几耐，乐天送就开始同乐小姐“擢手机”啦。乐先生失去Emma唔系自己企起身噶，而系因为岩好出现左一个好似岩既人，填补左Emma既空位。我一d都唔觉得距甘样有咩值得赞赏既地方咯，呢d唔系就系大家成日抨击到十一十既“稳备胎”咩？如果Emma唔系走左，如果茹小姐唔系甘岩分手，如果无悠悠的存在，乐先生又点会同茹小姐一起？距地先了解左几耐？距地甘样就叫爱？我愣甘多系需要，系合适吧。岩好乐先生同茹小姐都需要疗伤，都岩好两个人都需要倒垃圾，都岩好悠悠对茹小姐唔反感，所以嘛岩好合适咯，所以嘛岩好一起咯。
每次望住距地衣衣一一，我唔系觉得甜蜜啊，我系觉得好恶心。因为可能某一日，乐先生sayIloveu既对象又唔知会变成边个，茹小姐既“天下无双”又唔知几时会变成陈先生，或者罗先生。
对于我来讲，呢出戏最好既结局系，Emma系加拿大翻来，同乐先生、悠悠好好生活。因为可以想象，乐先生同茹小姐宜家的所有甜蜜行为，之前乐先生同Emma都一样做过。当我愣到一个男仔都两个或以上女仔做出相同的示爱行为的时候，我就觉得好假。爱情系我心目中系应该独一无二噶。无人可以代替你爱的人。最多都只系稳另外一个位置卑新的人，而唔系稳新的人调补旧的位置。同样，爱情系我心目中都系好纯洁噶。因为爱一起，唔爱就分开。就算结婚，爱就系爱，我唔接受什么爱情变成亲情先会长久的谎言。爱情同亲情系可以并列噶，而唔系互相排斥，结婚之后，两个人之间除左爱情多左一样也——亲情，而唔系爱情转换成亲情。如果真系甘样，我宁愿唔结婚。同样，爱情唔应该因为性而产生或者维持。
篇3
邂逅名人，爱得欲罢不能
出生辽宁一个沿海城市的林娅菲，2001年大学毕业后进学校当了一名中学老师。两年后，不甘寂寞的林娅菲辞去了学校工作，凭着不凡的气质应聘到电视台当了一句文艺节目主持人。让她竟想不到的是，她的生活就此发生了改变。
2004年初，著名作家狄柯来签名售书，台里派林娅菲到售书现场实地采访。由于时间仓促，林娅菲一个人扛着摄像机跑到现场，因为事先没和狄柯联系，一上午的时间林娅菲只好在旁边苦苦等待，搭不上话。现场来买书签字的人络绎不绝。
其实．林娅菲的到来，狄柯早看在了眼里。临近中午，狄柯离开售书现场．主动和林娅菲打起了招呼，邀请林娅菲一起去酒店用餐。对于林娅菲来说，这真是意外的收获。席间，狄柯出口成章，成了焦点。由于酒桌旁都坐着各界社会名流，一向能说善言的林娅菲也沉默寡言起来。狄柯不说话的时候，总是和林娅菲耳语几句，为她挟菜，看得出．这是不想让林娅菲看起来太尴尬。
临走，狄柯递给林娅菲一张名片，说明天还要签名售书。希望她能再来采访、这让林娅菲喜出望外。狄柯不但接受了采访，还配合电视台录制了名人专访节目。林娅菲算是顺利完成了任务还得到了同事们的赞赏-为了回报狄柯的慷慨大方，林娅菲主动回请狄柯吃饭，以表崇拜和感激之情。
在一个特色的烧烤店里，两人坐在单间里，远离了嘈杂的人群。在人们的印象里，狄柯是个放荡不羁很不合群的人，想不到他对林娅菲却是有求必应。狄柯跟林娅菲谈起了他是怎样走上写作之路的，溢干言表的兴奋，话里话外在倾述着他的浪漫。林娅菲被狄柯的才气折服了，她前不久从网上得知狄柯刚离婚不久。看着狄柯，林娅菲有一种莫名的欣慰，因为她感觉自己已经喜欢上了狄柯儒雅、成熟的一举一动，虽说狄柯的年龄超出了她10岁。
一个星期后，狄柯回了昆明。狄柯走后，林娅菲陷入了痛苦的思恋中，像是丢了魂魄。夜里，林娅菲在想．像狄柯这样一个有名望的人，自己只是他生命中的过客而已，那短暂、似乎还有些难舍难分的日子是经不起推敲的。
大约半个月后的一个夜晚，狄柯的电话居然来了，狄柯说最近又去了另一千城市宣传自己的新书，所以没有及时来电话联系她，电话里的狄柯温文尔雅地道歉。接到电话的林娅菲早已泪流满面。她不想再错过这个千载难逢的机会．“我天天都在想你，我们见面好吗，无论你在哪里。”“我同样也在想你，你真的能来我这儿吗?那你的工作怎么办？”狄柯用无限柔情的话语询问着林娅菲。林娅菲已经决定了，为了爱，她什么也不顾了。
2004年春节刚过，林娅菲在家人和台里领导的极力反对下，还是毅然辞去主持人的工作，背着简单的行李去了昆明。飞机场狄柯捧着一束艳丽的玫瑰，一脸灿烂的笑。林娅菲再也抑制不住自己的感，扑在狄柯的怀里。
林娅菲住到了狄柯的家里。由于水土不服。林娅菲高烧不断，还不停地拉肚子，卧床不起。狄柯亲自照顾林娅菲的饮食起居，每天都做些有营养而不腻的食物给她这让林娅菲感激涕零。一个鼎鼎有名的大作家竟然为地下橱做饭，这难道不是爱吗？
在狄柯的细心照料下，林娅菲很快就恢复了健康。两人开始正式同居。在此前，狄柯一直在打造一部20集的电视剧剧本，他每天都要在电脑前写作到后半夜。林娅菲担起了买菜做饭的任务，成了一个十足的家庭主妇却乐此不疲。当然，狄柯还是抽出时间，陪林娅菲四处走走，欣赏美景如画的昆明。这是一段甜蜜的时光。
莫名分手，大作家不告而别
如果日子能一直这么平静浪漫地走下去就好了，可爱往往难以把握2004年5月，狄柯完成了电视剧本，在导演陈翰柏的要求下前往河北拍摄现场，并被聘为编剧。林娅菲也一起去了。谁知电视剧拍了两个月。第二女主角因为片酬的问题，和导演陈翰柏发生了争端，结果戏拍了一半就不辞而别了，气得陈翰柏直骂娘。
第二女主角离开的当天晚上，狄柯和林娅菲说：“我看你完全可以代替她，你们长得很像，再说你还在电视台干过，你可以顶她的缺。”林娅菲笑了笑说 ：“别难为我了，我可不想被导演训来呼去的，他太凶了。”
陈翰柏是靠拍广告起家的，后来涉足到影视圈，已有了一定的知名度。由于林娅菲的拒绝出演，陈翰柏找她谈话：“救场如救火，凭我和狄柯的关系，你也该帮帮我，那个空缺的角色有太多的人想尝试，不过，我还是觉得你的气质最合适，机会不要错过。”陈翰柏一脸真诚地祈求着林娅菲，完全没了往日的盛气凌人。
就这样，林娅菲投入了后10集的拍摄中。林娅菲落落大方，不怯场，对陈翰柏提出的要求精心琢磨，慢慢地从一个门外汉，有了一个演员应有的素质。陈翰柏似乎对林娅菲情有独钟，拍戏的时候既耐心又细心，言语不像对别的演员那样刻薄。休息吃饭的时候。陈翰柏总是单独给林娅菲讲戏，这让别的演员即妒忌又有些无可奈何。
拍戏期间，狄柯倒清闲起来，不再和林娅菲腻在一起，而是跟别的女演员在一起说说笑笑。3个月后，完满完成拍摄任务，到了相互洒泪而别的时候。林娅菲和狄柯说：“我们去海南玩玩吧，真的好累。”狄柯面带难色地看了看林娅菲说：“现在还不成，我又接了一部电视剧，时间很紧，想静下心写完它。再说，陈翰柏还需要你去北京进行电视剧后期制作。
晚上，陈翰柏将大家召集在一起开庆功宴。席间，陈翰柏对林娅菲赞不绝口，并要她做下部戏的主角。林娅菲低头不语，喝着酒，她心里想的是刚才狄柯的话，她感到事情有了变化。散席后，林娅菲和狄柯回到宾馆，因为狄柯明天就要离开，有些话她不得不问他：“我们相处有半年多了，我真的想和你守一辈子，答应我好吗，”狄柯沉默半晌说：“怎么可能，婚姻对我来说就像牢笼，我好容易冲了出来，还要和你结婚？爱一个人为什么要他的全部呢？我们早晚也会各奔东西的。”
狄柯的话让林娅菲心凉如冰，才半年时间，狄柯居然就对她失去了兴趣，当初的热恋已烟消云散林娅菲说：“我绝对不是你想象的那种女人，我付出了全部感情，而你却像扔掉一个棋子那样对待我，难道你过去对我的感情都是假的？”狄柯也有些气急败坏，向林娅菲咆哮起来，过去的绅士风度荡然无存。林娅菲被眼前的狄柯气晕了，摔上房门，跑出了宾馆。
已是深夜，林娅菲走进了街旁的一家酒吧，一个人借酒浇愁起来。不一会儿，手机响起来，她原本以为是狄柯打来道歉的，可电话那头却是陈翰柏。半小时后，陈翰柏来到酒吧，劝慰起林娅菲来：“狄柯刚才找
到我，说你跑了出来，我们大家都在找你，这里人生地疏的，一个女子不安全，还是和我回去吧。”在林娅菲伤心欲绝的时候，是陈翰柏来到了她身旁，而不是狄柯，林娅菲感觉她和狄柯的关系算是彻底完结了。
狄柯都没来得及和林娅菲说声道别，两人的情感就草草收场了。而林娅菲和陈翰柏去了北京，进行电视剧的后期制作。两个月后，电视剧顺利通过了终审，允许在各地方台播出，林娅菲也小有了名气。
爱再次碰壁，
心灰意冷逃离爱情现场
陈翰柏确实是个呼风唤雨的人，他不单单是个导演，他还有一个大型饭店和快餐店，货运公司及广告公司。
又到了冬天，北京的冬天干冷干冷的，陈翰柏花了5万元为林娅菲买了件貂皮大衣。穿在身上，林娅菲心里暖暖的，这满足了她虚荣和寂寞难耐的心绪。陈翰柏隔三差五就给林娅菲买贵重的礼物，目的只有一个，就是想让林娅菲做他的情人。而林娅菲被陈翰柏的一次次真诚打动，顺其自然地成了他的情人。这次林娅菲也以为自己找到了归宿。
林娅菲住进了陈翰柏的别墅,不再抛头露面。2005年3月的一天夜里，两人正在缠绵，陈翰柏的手机铃声打断了他们的温存。原来陈翰柏的广告公司有一桩大买卖被别的公司抢走了，陈翰柏马上吩咐手下的弟兄教训那个不知趣的公司经理一顿，陈翰柏阴狠的一面暴露无遗，这让林娅菲担忧起来，原来陈翰柏也是个为了钱而不择手段的人。虽说陈翰柏是个知名的大导演，人前儒雅气十足，任谁也想不到他会用暴力手段控制着自己的利益。林娅菲忽然明白，这样的人怎么能和自己长久呢？至少没有安全感。
陈翰柏在拥有林娅菲的同时。还同时和几个女人有着暧昧关系，而且越来越明张胆，这让林娅菲又气又恨。有一天，陈翰柏把一个女孩子领回了家，并大言不惭地和林娅菲说：“这是我朋友的女儿，是下部电视剧的主角，临时住这里。“林娅菲看着那个满脸浓妆艳抹所谓朋友女儿的女人，彻底失去了信心，那是一种无奈和对自己再一次错误选择的自嘲。半夜，陈翰柏偷偷下了床去了那个女孩的房间。林娅菲看在眼里，痛在心上，她辗转反侧，根本无法入睡。林娅菲怎么会猜不出陈翰柏的意图呢， 他无非是想找个借口让自己走。
林娅菲的容忍让陈翰柏肆无忌惮。有一天，林娅菲独自去酒吧喝了许多酒，哭干了眼泪，她梦想中轰轰烈烈的爱是那样的稍纵即逝，越是想强留的越是背叛她。半夜，林娅菲摇摇晃晃地回到别墅，却看到陈翰柏和那个女孩百般调情。忍无可忍的林娅菲开始歇斯底里地摔东西，破口大骂这对狗男女，她发泄着，其中还包含着对狄柯的憎恨。而陈翰柏显得心平气和，他说：“我们是啥不要紧，关键你也强不到哪去；当初我答应给狄柯的稿酬应该是20万，可我看中了你．多给了他10万，让他把你转让给我．没想到他却同意了。”
篇4
关键词 胆固醇 肝癌 血液
资料与方法
将研究对象分为四组：①肝癌患者组：2002～2007年经病理确诊的未经治疗首次入院的肝癌患者74例。平均年龄56.4岁，测定其血清总胆固醇(糖尿病、冠心病等除外)。②非肿瘤患者对照组：随机抽取非肿瘤住院患者86例，均已排除冠心病、糖尿病及严重肝肾功能障碍，平均年龄52.3岁。③健康对照组：体检患者88例，平均年龄50.6岁。④低蛋白癌症患者组：血清白蛋白0.05)。
方法：四组患者均空腹、抽静脉血，用酶法分别检测血清总胆固醇含量，其中低白蛋白癌症患者测定蛋白纠正前后的胆固醇含量。测定仪器为日立7170型全自动生化分析仪，试剂合由迈克公司提供，我院检验正常值为2.9～5.5mmol/L。
统计学处理：测定结果用X±S表示，组间比较采用t检验。
结 果
肝癌患者组总胆固醇均值3.42±0.14mmol/L，非肿瘤患者组总胆固醇均值4.95±0.81mmol/L，健康对照组总胆固醇均值5.01±0.63mmol/L。肝癌组与非肿瘤组比较差异有显著性(t=2.135，P0.05)。低蛋白
讨 论
国外学者报道死于癌症的人其基线血胆固醇水平显著低于存活者，并且指出癌症患者血胆固醇水平每3年以0.13mmol/L速度递减[1]。有文献报道宫颈癌、卵巢癌、肝癌、肝癌、胃癌等患者体内LDL代谢率明显增加，使细胞大量从血液中LDL颗粒内摄取胆固醇，导致血胆固醇含量降低[2，3]。低胆固醇血症可能通过影响免疫细胞膜的稳定性而干扰机体的防御机能，使机体免疫力下降而致癌的发生。
本资料显示，血清总胆固醇水平与肝癌之间呈负相关。血清总胆固醇降低是癌性病灶存在时过多地消耗胆固醇所致。低白蛋白的癌症患者在纠正蛋白治疗后胆固醇水平明显提高，提示低血清胆固醇水平可能是疾病进展中代谢变化的结果；也说明癌症代谢消耗或营养情况引起血胆固醇水平下降。因此，血清胆固醇水平在临床上可作为肝癌患者的诊断及预后的一项辅助指标。
参考文献
1 Cambein F.Total serum cholesterol and cancer mortility in a middleaged male population.Am J Epidemol，1980，112(4)：388.
篇5
爱国，是一面飘扬在世界各国上空的永不退色的旗帜。这面旗帜在我国更是绚丽多姿。?亚洲第一飞人?柯受良用自己的的实际行动表达了他对祖国的深爱，也向世界宣告：中国人不是懦夫。钱三强冲破重重阻力，放弃了优厚的生活待遇，毅然回国，实现了她的人生价值。在为她的人格魅力深深钦佩之余，我觉得一个人要想获得人生价值，爱国情操将是他的强有力的后盾，由此可见，爱国需要实干家。纵观历史长廊，多少成名人物都有一颗爱国之心。岳飞的?精忠报国?，范仲淹的?先天下之忧而忧，后天下之乐而乐?，陆游的?但悲不见九州同?，霍去病的?匈奴未灭，何以为家?……她们那个不是由于强烈的爱国情感？那一位不是爱国的实干家，那一个不是为了中国之奋起而鞠躬尽瘁的仁人志士？相反，只图个人利益，而不顾国家利益的人，非但不会流芳百世，反而落的个千古罪人。就如吧！他满足了个人私欲，做成了他的皇帝梦，功绩不可为不大，然而到头来，他获得了什么？不过是人们的唾弃，不过是?窃国大盗?的千古骂名。杰出的音乐家，冼星海曾经说过，?我的人格，良心不是金钱所能收买的。?而他也正是这样做的，他用满腔的爱国热情谱写的歌曲，为我国的革命音乐史添上了光辉得一笔。俱往矣，数风流人物还看今朝。不错，当今我们国家正以令世界瞩目的速度前进着，人们看到的是一个站起来的国家。当前就更需要一批批爱国实干家去创造祖国的辉煌。
篇6
爱国，是一面飘扬在世界各国上空的永不退色的旗帜。这面旗帜在我国更是绚丽多姿。?亚洲第一飞人?柯受良用自己的的实际行动表达了他对祖国的深爱，也向世界宣告：中国人不是懦夫。钱三强冲破重重阻力，放弃了优厚的生活待遇，毅然回国，实现了她的人生价值。在为她的人格魅力深深钦佩之余，我觉得一个人要想获得人生价值，爱国情操将是他的强有力的后盾，由此可见，爱国需要实干家。
纵观历史长廊，多少成名人物都有一颗爱国之心。岳飞的?精忠报国?，范仲淹的?先天下之忧而忧，后天下之乐而乐?，陆游的?但悲不见九州同?，霍去病的?匈奴未灭，何以为家?……她们那个不是由于强烈的爱国情感?那一位不是爱国的实干家，那一个不是为了中国之奋起而鞠躬尽瘁的仁人志士?相反，只图个人利益，而不顾国家利益的人，非但不会流芳百世，反而落的个千古罪人。就如吧!他满足了个人私欲，做成了他的皇帝梦，功绩不可为不大，然而到头来，他获得了什么?不过是人们的唾弃，不过是?窃国大盗?的千古骂名。杰出的音乐家，冼星海曾经说过，?我的人格，良心不是金钱所能收买的。?而他也正是这样做的，他用满腔的爱国热情谱写的歌曲，为我国的革命音乐史添上了光辉得一笔。
俱往矣，数风流人物还看今朝。不错，当今我们国家正以令世界瞩目的速度前进着，人们看到的是一个站起来的国家。当前就更需要一批批爱国实干家去创造祖国的辉煌
篇7
【关键词】肝癌手术治疗放射治疗化学治疗介入治疗生物治疗热治疗中医药治疗
目前多采用放射免疫法(RIA)或AFP单克隆抗体酶免疫(EIA)快速测定法检测血清AFP含量正常人血清中可没理微量小于20μg/L水平肝细胞癌增高者占70～90%通常AFP浓度与肿瘤大小有相关但个体差异较大一般认为病理分化接近正常肝细胞或分化程度极低者AFP常较低或测不出国外公认标准往往偏高易于漏诊我国重视中等和低浓度AFP增高的动态观察临床实践中对AFP低浓度者常须结合影像诊断技术进行随访有助于及早确立诊断肝癌常发生在慢性活性肝病基础上故须加以鉴别慢性肝炎肝炎后硬化有19.9%～44.6%患者AFP增高浓度多在25～200μg/L之间良性肝病活动常先有丙转氨酶明显升高AFP呈相随或同步关系先高后低一般在1～2月内随病情好转转氨酶下降AFP随之下降呈“一过性”有时良好肝病活动AFP亦可呈反复波动持续低浓度等动态变化但必须警惕肝病活动的同时可能有早期癌存在
其他肝癌标志物的检测：近年来现血清AFP阴性的原发性肝癌有增多趋势因此开发更新更特异更敏感的标志物已成为紧迫的课题寻找癌胚特性的同工酶及异质体;寻找特异亚组成成份为当前肝癌血清标志物研究的方向近年来国内外报道对肝癌诊断具有较高价值的有：
①r-GT同工酶(GGTⅡ)：应用聚丙烯酰胺梯度电泳分离法可显示同工酶12条带Ⅰ´ⅡⅡ´带是原发性肝癌的特异条带阳性率为79.7¯P阴性者此酶阳性率为72.7%
②甲胎蛋白异质体(FucAFP)：目前以扁豆凝集素(LCA)亲和交叉免疫自显影法测定AFP异质体诊断价值为高有二种异质体即LCA非结合型(AFP-N-L)和结合型(AFP-R-L)肝癌含AFP-N-L平均49.13±27.20%(0～100%)<75%为肝癌诊断标准阳性率86.0%随病情恶化而降低非癌肝病AFP-N-L为93.30±7.66%假阳性率为1.6%
③异常凝血酶原：肝脏合成凝血酶原无活性前体经维生素Kr羧化为活性形式肝癌时肝癌细胞的微粒体内维生素K依赖性羧化体系功能障碍羟化酶活力下降导致谷氨酸羧化不全从而形成异常凝血酶原最近人们发现肝癌细胞自由具有合成和释放异常凝血酶原的功能国内用放射免疫自显影法测定异常凝血酶原≥250μg/L为标准肝癌阳性率为69.4¯P低浓度和AFP阴性肝癌的阳性率分别为68.3%和65.5%小肝癌符合率为62.2%多数资料表明异常凝血酶原对原发性肝癌有较高的特异性性各种非癌肝病继发性肝癌及良性肝肿瘤的假阳性极低可能成为有价值的肝癌标志物
④血清岩藻糖苷酶(AFu)：AFu属溶酶体酸性水解酶类主要生理功能是参与岩糖基的糖蛋白糖脂等生物活性大分子的分解代谢AFu超过110Kat/L应考虑原发性肝癌国内报道AFu诊断原发性肝癌的阳性率为81.2%对AFP阴性肝癌和小肝癌阳性率分别为76.1%和70.8%继发性肝癌良性肝占位病变均阴性但肝硬化慢性肝炎的假阳性较高
⑤M2型丙酮酸激酶(M2-PyK)：丙酮酸激酶(PyK)是糖酵解中的关键酶有LRM1M2(k)型4种同工酶胎肝及肝癌组织中主要是M2(K)可视为一种癌胚蛋白ELIS夹心法可测到Pg级微量灵敏度高的癌标志正常值为575.8±259.5ng/L肝癌者较正常高5倍在小肝癌阶段即明显增高分化愈差M2-PyK值得高愈明显阳性率5.2%消化道肿瘤亦可升高而肝炎良性肝肿瘤不高
⑥同工铁蛋白(AIF)：同工铁蛋白在肝癌时由于肝癌细胞合成增多释放速度加快故对肝癌诊断有一定意义正常人为16-210μg/L300μg/L为诊断界值肝癌患者72.1%超过此值假阳性为10.3¯P阴性或低浓度AFP肝癌阳性率66.6%<5cm的小肝癌阳性率62.5%
肝癌手术治疗方法是临床上比较常用的治疗方法之一，早期诊断、早期治疗是肝癌的手术治疗成功的关键。肝癌手术治疗主要是针对早期肝癌，是指肿瘤在3公分以下的肝癌患者。肝癌由于起病比较隐匿，治疗效果也不明显，一般患者就诊时肝癌已经发展成中晚期，原发性肝癌俗称“癌中之王”。对于肝癌的治疗研究领域还需要长时间的积极探索。
肝癌的化学治疗也就是我们俗称的肝癌化疗，肝癌化疗利用特制的抗癌药物扰乱癌细胞的繁殖，藉此杀死癌细胞。化疗药物有口服的，但通常是静脉注射剂，甚至直接注射入为癌肿输送养份的动脉（通常所说的介入治疗）。每个疗程通常为时数天。由于有化学治疗有副作用，疗程后会暂停几个星期，让身体复原，然后才进行下一个疗程。疗程数视肝癌的类型而定。化疗是转移性肝癌的主要治疗方式，所用的药物都需要考虑原发性癌肿是从哪里开始的。化学治疗一般有副作用，会引起一些不适。但也有些患者几乎不受影响。所有的副作用都可以用药物控制。化疗药物对癌细胞作用的时候，会令血液中正常细胞的数目下降，使你比较容易受感染和疲倦。接受化疗时，会为你定期验血。必要时，会给你输血、使用抗生素、服用中药提高免疫力以应付感染。有些治疗原发性肝癌用的药物会引起恶心、呕吐和腹泻。医生会视需要给你使用止吐药及中药对证治疗。有些化疗药物会令口腔疼痛甚至溃烂。必须按照指导，经常漱口。如果接受治疗时没有胃口，可饮用营养饮品或软性食物。虽然单独化疗在肝癌治疗中的价值有限，但其与手术、介入等方法联合应用仍是治疗肝癌的主要手段。
由于肝癌的放疗是姑息治疗性质,放射野只需包括局部的肿瘤,不必包括肝的淋巴引流区。对巨块型肝癌,只能作局部放疗或术中插植后装治疗。若射野面积>200c时,可用移动条照射野技术。对巨块型伴有肝内播散的,先作局部肿块照射,若局部肿瘤对放疗有反应，肿瘤消退,则可再使用全肝照射。对弥漫型的病灶,一开始就可使用全肝照射。用移动条照射技术较使用两个相对大照射野为好。对因肝门区受肿瘤压迫而引起黄症和脱水者,先行照射肝门区,以缓解症状。关于照射总剂量,以照到病人肝功能不严重损害为限,尽可能给予较高的剂量。放射剂量给予的速度不能太快。如用常规的每日1次,每周5次的照射方法,局部小野照射(面积小于200厘米)，150-200cGy/次;全肝大野照射100-150cGy/次;全肝移动条照射150-200cGy/次。肝癌如采用局部照射,准确定位至为重要,必须力求使照射野覆盖整个肿瘤而不使漏网,并采用较小剂量,较长疗程,累计总剂量足够大,合并健脾理气中药,与化疗交替并同时合并适用免疫治疗。放疗期间要密切随访病人的AFP、肝功能、局部肿瘤的消退和病人的一般情况。放射治疗的最大缺点为全肝照射导致肝功能损害一一放射性肝炎,并可明显抑制机体免疫功能,为此宜合并免疫治疗。局部放疗对肝癌的骨转移有明显的姑息性止痛作用。目前有用光子刀治疗肝癌的报道,但其具体疗效尚需考证。
上述方法，无论手术治疗还是非手术治疗都各有优缺点，单独应用的效果不甚满意。目前肝癌治疗尚缺乏特异性方法，随着基础研究的成果和先进技术的融合，新的治疗方法将不断出现，然而，针对原发性肝癌的治疗，更应重视综合及序贯治疗，即由单一的治疗模式，转变为联合治疗的多种治疗模式，以期提高患者的生存治疗，延长患者的生存时间。
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篇8
天降厄运，农妇身患绝症盼救助
1986年10月29日，罗玮出生于四川广元市苍溪鸳溪镇，尽管家境贫穷，但善良的父母给了她一颗善良的心，打小就乐于助人。
2005年3月12日，在成都打工的罗玮从电视上看到一则报道：蒲江县农妇廖红霞因患肝硬化，上呼吸道大出血，住进了成都华西医院，生命岌岌可危。廖红霞的丈夫张元林含泪求助当地媒体，表示要“卖肾救妻”。罗玮不仅被张元林夫妇的患难真情感动，也为挣扎在死亡线上的廖红霞深深担忧。她不禁想起几年前，身患重病的爷爷就是因为无钱医治去世的。于是，罗玮萌生出了一个大胆的想法，她要为廖红霞捐肝！
第二天一大早，罗玮匆匆赶到华西医院，通过与廖红霞的亲友及医护人员的交谈，她对廖红霞有了更多的了解和同情。
今年33岁的廖红霞家住蒲江县寿安镇松华村，1990年与张元林结为夫妇，一年后生下女儿小雪。廖红霞勤劳贤惠，体贴丈夫，孝敬公婆，是村里人公认的好媳妇。
谁知，命运多舛。就在小雪1岁多的时候，丈夫因触犯刑律被法院判处有期徒刑5年。张元林入狱后，廖红霞一人挑起了家庭重担，服伺老人，抚养女儿，耕田种地……闲时，她还常常带着女儿去探望丈夫，鼓励他好好改造。在妻子的帮助下，张元林因表现较好被提前一年释放。
可是因为长期的超负荷劳动，廖红霞积劳成疾。2002年3月，正在地里忙活的她突然大口吐血，昏倒在地。张元林立即抱起妻子，跌跌撞撞地赶到镇卫生院。检查结果，竟是肝硬化。
为了救治妻子，张元林四处举债，先后花去5万多元，家里早已一贫如洗。然而廖红霞的病情却日渐沉重，几次吐血都险些要了她的命。
2005年3月2日，廖红霞因连续吐血被丈夫送进华西医院，医生神色凝重地告诉张元林，廖红霞的病情已处于高危期，如不尽快施行肝移植，等待廖红霞的只有死亡。
面对如此残酷的现实，张元林惊呆了，亲友们惊呆了！尽管进行肝移植，廖红霞还有活下去的希望，可15万元的巨额医疗费用从哪里来？活体肝源从哪里来？
走投无路的张元林向华西医院严律南教授哭诉了妻子的遭遇，并表示愿意为妻子捐肝。严教授被这个农家汉子的真情打动，当即决定启动医院的免费活体肝移植机制。他说：“如果你们夫妻的血型及其他指标均能符合，医院将尽快安排手术。”
可是，无情的现实泯灭了张元林的希望――经检查，他的血型与妻子不符。焦急万分的张元林转只好向亲戚求助。张元林的弟弟、弟媳、表妹、表弟甚至年过花甲的父亲张国文和母亲蒲淑元都表示愿意捐肝。化验结果给所有人一丝希望：这么多人中惟有张国文与廖红霞的血型一致。张元林又喜又忧，喜的是妻子终于有救了，忧的是父亲年老体弱，他能承受得了吗？
张国文是个深明大义的老人，为了救儿媳，他戒掉了烟酒，并做了肝穿等一系列捐肝前的检查。然而结果显示，老人的肝不适合移植。
廖红霞的不幸遭遇深深刺痛了罗玮，从那一刻起，她捐肝的决心愈发坚定。
这时，有人给她忠告：捐肝很危险。国际上肝移植供体死亡病例大约是肾移植的10倍，此外，供体还有并发症、生活质量、完全康复时间、经济压力等严重的潜在风险。有人对她表示怀疑：“你为啥要这样做？捐肝还是卖肝？义举还是为了出名？”有人则劝阻：“就算你不为自己着想，也该为父母着想，他们养你这么大容易吗？爱心重要，孝心更重要。”
面对这些，罗玮平静地说：“我这么做，主要是不想让小雪失去妈妈，失去母爱。爱心和孝心都重要，我现在先献爱心，将来再尽孝心。”
亲情碰撞，花季少女挺身而出献爱心
得知女儿将无偿为陌生人捐肝的消息，远在广元的罗玮父母马上表示反对：“你疯了，给一个无亲无故的人捐肝，你是咋个想的？”见电话里劝不动女儿，父母急忙通知在成都的熟人阎女士，再三叮嘱她一定要守住罗玮，不要让她去冒险。
出乎意料的是，阎女士非但没有看住罗玮，反而被廖红霞的不幸遭遇打动，被罗玮的一番真情感动，陪罗玮一起到医院。
一脸憔悴的廖红霞拉着罗玮的手，激动而又悲怆地说：“我实在不忍心在妹妹身上寻找第二次生命。”罗玮却满脸笑容，坦然答道：“廖姐，几天前我从报纸上看到你公公张国文的照片，觉得他很像我爷爷，帮你就像帮我爷爷。”
检查结果很快出来了：罗玮的血型与廖红霞匹配。罗玮很高兴，她想如果自己的肝脏能够挽救廖红霞的生命，那该是一个怎样的奇迹啊！
为了表示决心，罗玮主动提出要签一份协议，主要条款是：甲方（罗玮）同意捐肝给乙方（廖红霞），乙方表示接受；甲方在签订协议书前，已充分考虑到本手术对甲方有风险，甲方自愿承担因手术造成的风险；甲乙双方无需承担手术费用，手术中的所有费用由华西医院承担；鉴于本手术的特殊风险，丙方（张元林）自愿与甲方共同承担因手术造成甲方的风险，甲方表示接受。
3月14日下午3点，在人们褒贬不一的议论中，罗玮毫不犹豫地在《协议书》上签上了自己的名字。
就在签下协议书的当晚，罗玮的父亲胡仲双和母亲罗景连心急火燎地赶到成都，他们此行的目的是说服女儿放弃捐肝，于是，一场特殊的亲情碰撞开始了。
胡仲双不解地问女儿：“玮玮，你怎么会做出这样的决定呢？是我们家里穷，还是生活上亏待了你？”
“爸爸，你千万莫乱想，我自愿捐肝是因为血型合适，廖姐太惨了，还有一个12岁的女儿，小雪不能没有妈妈。”罗玮回答道。
“肝脏是人体的主要器官，草割了要长，人死不能复生，你想过吗？”
“我人年轻，身体又好，医生说3个月就可以长出来，你放心，我会没事的。”
罗景连忍不住说：“你有没有想过爸爸、妈妈，万一你有个三长两短让我们怎么活？”
胡仲双接过话题：“捐肝以后怎么办？你以后的生活呢？有什么保障没有？”
“我是自愿的。”罗玮头也不抬地说。
“你还年轻，要捐就捐我们父母的。”胡仲双提高了声音。
“我都签字了。”罗玮的声音依然坚定。
时间已到第二天凌晨，经过一番激烈的亲情对决，胡仲双夫妇仍然没有说服女儿，他们只有使出最后一招――强行带着女儿离开成都。
3月15日一大早，胡仲双花600元租了辆面包车，将女儿带回了广元。胡仲双无奈地说：“我主要怕新闻媒体追踪报道，如果有了社会舆论压力，再加上已经签字的协议，可能就将女儿逼上手术台了。她才19岁，未来的路还很长，我们不敢开玩笑。”
爱女心切的胡仲双已经许多天没有吃饭了。一方面，他并不反对女儿做善事，另一方面，他却不愿让女儿去冒险，这种矛盾的心理煎熬得他食不知味，夜不能眠。也许是害怕伤了女儿的心，特别是看到女儿回家后整天哭哭啼啼，于是，他答应让女儿陪廖红霞走完人生的最后路程。
3月16日，当人们为找不到罗玮而焦急的时候，张元林突然接到罗玮的电话：“请您和廖姐放心，我一定尽快回来。”
2005年3月19日，胡仲双携妻女赶到成都华西医院，他试图当面劝阻廖红霞。
胡仲双一席话，让廖红霞百感交集，作为母亲，她非常理解他此时此刻的心情，她当即表示不接受罗玮捐肝，更不愿牺牲胡仲双一家的幸福。廖红霞还拉着罗玮的手说：“好妹妹，你的心意我领了，但说什么我也不会同意你捐肝，你一定要答应我，一定要听父母的话，千万不要伤老人的心，因为他们都很爱你……”罗玮不情愿地点了点头，但捐肝的愿望却没有改变。
2005年3月25日，罗玮在律师的陪同下来到省公证处，公证处负责人李安科严肃地问罗玮：“你的父母知道你为廖红霞捐肝的事吗？”“知道。”“他们同意吗？”“他们没说同意，但是尊重我自己的选择。”为了表示不改初衷，罗玮郑重地写下了一份声明：“我在无任何欺诈、胁迫的情况下，自愿捐赠肝脏……”
手术最终定在3月30日上午进行。
为了预防不测，罗玮在手术前写下一份遗书：“明天手术，如果我失败了，我愿捐掉自己所有的器官，然后我很希望有单位聘用我爸爸，我不能孝顺他，觉得对不起他，只有下辈子好好还了……”
义无返顾，断肠捐肝感天动地震世人
做手术那天早晨，许多人赶到医院。有记者问罗玮：“后悔吗？现在还来得及的”。她摇摇头：“不后悔，决不后悔！”
手术室门口，罗玮拨通了父亲的电话：“爸爸，你的声音咋这么嘶哑，你们要保重身体。”当得知父亲已说服了母亲，同意自己捐肝时，罗玮高兴地笑了起来。那神情，好像不是去捐肝，而是即将踏上愉快的旅途。
麻醉前一分钟，医生问罗玮：“小姑娘，想清楚没有，现在还可以反悔。”其他医护人员也纷纷劝道：“你还年轻，为将来着想，不必这么固执地捐肝。”罗玮坚定地回答：“我要是想反悔，现在也不会躺在这里了。”
上午8时20分，手术正式开始。4个小时以后，廖红霞被推进了手术室。
下午2点30分，爱女心切的罗景连流着眼泪急赴成都，一到华西医院就几乎晕倒，众人把她扶进病房时，她整个人已经崩溃，除了痛哭就是狠命敲打自己的头，爱女之情，令人动容。
不久，罗玮的哥哥罗坤也来到医院，他原准备到昆明打工，听说妹妹上了手术台，于是心急如焚地赶到成都。
就在亲人们为罗玮担心时，医生切下她550克的右半肝，植入了廖红霞的体内。
下午5点20分，罗景连挣扎着从床上爬起来，在众人的搀扶下，摇摇晃晃地来到手术室外等女儿。很快，一台推车从手术室里推了出来，上面躺着眼睛紧闭、还处于全麻状态的罗玮。罗景连一把抓住推床扶手，眼泪哗哗往下掉，口里反复念着：“我要等玮玮醒来，不然她醒来看不见我咋办？”
当晚10点30分，医生为廖红霞缝上最后一针，历时14个小时的手术顺利结束，廖红霞得救了。
罗玮的大善之举感动了成都。很多市民不约而同地来到华西医院看望罗玮，许多人纷纷慷慨解囊：一位老人带来一个1000元的红包，一家公司的老总捐助了2万元，并表示等罗玮康复后，将根据罗玮及其父亲的情况为他们安排工作……
罗玮的大爱之举感动了家乡的父老乡亲。广元市委宣传部、市妇联、市总工会、团市委、市交通局联合发出倡议书，呼吁社会各界捧出热忱、奉献爱心，帮助罗玮度过难关。一时间，慰问信和捐款如雪片飘来；“罗玮救助别人，我们帮助罗玮”的呼声似春潮涌动在广元上空。
罗玮的大义之举感动了医生。“罗玮是一个善良得让人心痛的女孩，我们的心始终是沉甸甸的。”华西医院肝移植中心主任严律南教授说，“中国目前还没有器官移植法，由于世界各国禁止器官买卖，因此在实际操作中活体肝移植大都在亲人之间开展。罗玮为素昧平生的陌生人捐肝，这在世界上都是首例，或许将促使中国的器官移植法早日出台。”
篇9
【摘要】
目的观察田基黄不同提取物的含药血清体外抗乙肝和抗肝癌的作用。方法采用酶链免疫法，观察田基黄不同提取物的含药血清对2215细胞分泌HBeAg和HBsAg的抑制作用。采用MTT技术，观察田基黄不同提取物的含药血清对肝癌细胞BEL-7404增殖的抑制作用。结果当含药血清浓度为5％时，田基黄乙醇总提取物和正丁醇提取物对HBeAg和HBsAg呈现较好抑制作用，抑制率分别为34.84％和57.95％，以及76.02％和53.15％（P＜0.05）；当含药血清浓度为20％时，醋酸乙酯提取物对HBeAg和HBsAg呈现较好的抑制作用，抑制率分别为79.79％和57.22％（P＜0.05）；水提取物3种浓度的含药血清对HBeAg和HBsAg都有较好的抑制作用，抑制率分别达到了70％和30％以上（P＜0.05）。田基黄各提取物对肝癌BEL-7404细胞都有一定的抑制作用，该抑制作用呈明显的量效关系，当含药血清浓度为20％时，乙醇总提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物的抑制率分别为29.74％，53.80％，40.79％和54.24％（P＜0.01）。结论 田基黄不同提取物含药血清能抑制2215细胞分泌HBeAg和HBsAg，并且能抑制肝癌细胞BEL-7404的增殖。其抗乙肝的有效成分主要分布在田基黄的水提取物中，而抗肝癌的有效成分则均衡分布于各种极性部位。
【关键词】 田基黄 2215细胞 BEL-7404细胞 血清药理学
Abstract：ObjectiveTo observe the anti- hepatitis B and anti-hepatoma effect of different extracts in serums of Hypericum japonicum Thunb. in vitro. MethodsEnzyme linked immune response was used to investigate the effect of the different extracts in serums of Hypericum japonicum Thunb. on HBeAg and HBsAg excreted by 2215 cell in vitro.MTT technique was used to investigate the effect of the different extracts in serums of Hypericum japonicum Thunb. on the growth of hepatoma BEL-7404 cell in vitro. ResultsEtOH and BuOH extracts showed better inhibitory rates on HBeAg and HBsAg as 34.84％，57.95％ and 76.02％，53.15％（P＜0.05）in 5% serum respectively. EtOAc extracts showed better inhibitory rates on HBeAg and HBsAg as 79.79％ and 57.22％（P＜0.05）in 20% serum respectively. H2O extracts had stable inhibitory rates on HBeAg and HBsAg in the three different concentration of serum and the inhibitory rates were all more than 70% and 30% respectively. All extracts showed the inhibitory activity on the growth of hepatoma BEL-7404 cell in vitro and there was obvious dose-effect relationship. The inhibitory rates of EtOH，EtOAc，BuOH and H2O extracts in 20% serum were 29.74％，53.80％，40.79％ and 54.24％，respectively(P＜0.01).ConclusionThe different extracts of Hypericum japonicum Thunb. in serum have the inhibitory effect on HBeAg and HBsAg excreted by 2215 cell and on the growth of hepatoma BEL-7404 cell in vitro. The stable active compounds of anti- Hepatitis B mainly distribute in H2O extracts and the active compounds of anti-hepatoma evenly distribute in each extracts.
Key words：Hypericum japonicum Thumb.; 2215 Cell; BEL-7404 Cell; Seropharmacology
田基黄原名地耳草，始载于《生草药性备要》《植物名实图考》，别名雀舌草，系藤黄科金丝桃属植物地耳草Hypericum japonicum Thumb.的干燥全草。味甘、微苦，性凉，归肝、胆、大肠经。具有清热利湿、散瘀止痛、消肿解毒的功效［1］。现已研究发现田基黄中含有内酯、香豆素、酚类、蒽醌、黄酮类、维生素类等化学成分［1～4］。现代药理研究表明，田基黄具有明确的保肝、抑制癌细胞药理学功效；临床用于治疗急、慢性肝炎，传染性肝炎，原发性肝癌，伤寒，副伤寒等。但是直至目前，田基黄的抗乙肝和肝癌有效成分或有效部位仍然不够清晰。本实验研究旨在阐明田基黄的抗乙肝和肝癌有效部位，为进一步确定其有效化学成分奠定基础。
1 材料
1.1 药物 田基黄经广西中医学院药用植物教研室韦松基副教授鉴定为藤黄科金丝桃属植物地耳草Hypericum japonicum Thumb.的干燥全草。
1.2 动物 昆明种小鼠，体重22～26 g，雌雄兼用，由广西中医学院实验动物中心提供，合格证号：桂医动字第11004号。
1.3 试剂 Eagles MEM干粉、RPMI-1640培养基（美国Gibco公司产品，批号：1041001，批号：1243098）；G418、L-谷氨酰胺（北科化学试剂公司进口分装）；新生牛血清(NBS，杭州四季青公司，批号：060720)；卡那霉素、青霉素、链霉素（Sigma分装）；二甲基亚砜（DMSO，上海生物工程有限公司，批号：54186）；HBsAg，HBeAg检测试剂盒（上海荣盛生物科技有限公司，批号：20070605，20070711）；MTT (北京拜尔迪生物公司分装，Amresco0793)。
1.4 细胞系及培养液 HBV-DNA克隆转染人肝癌细胞的2215细胞（购自中国医学科学院中国医药生物技术研究所）： 2215细胞用MEM培养液培养，培养液含10%胎牛血清，0.03%谷氨酰胺，G418 380μg·ml-1，卡那霉素50 U·ml-1，pH7.2。细胞消化液含0.25%胰蛋白酶，用D-Hangs配制。
肝癌BEL-7404细胞(广西民族医院惠赠)：肝癌BEL-7404细胞用RPMI-1640培养液培养，培养液含10%胎牛血清、青霉素100 U·ml-1，链霉素100 U·ml-1。细胞消化液含0.25%胰蛋白酶，用D-Hangs配制。
1.5 器材 培养瓶（丹麦Tunclon公司产品）；96孔细胞培养板（美国Corning公司产品）；二氧化碳培养箱(美国Forma公司)；倒置显微镜(德国Leica公司)；酶标仪(奥地利Sunrise公司)；吉尔森微量移液器(法国Pipetman公司)；BDX-35BI型座式自动电热压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)。
2 方法与结果
2.1 田基黄不同提取物的制备 取田基黄95％乙醇提取干浸膏37.6 g（每克干浸膏相当于9.1 g生药），溶于300 ml水中，用醋酸乙酯萃取5次，300 ml/次；水层再用正丁醇萃取5次，300 ml/次。分别合并水层，正丁醇层和醋酸乙酯层，减压回收溶剂，备用。另取37.6 g田基黄干浸膏，和上述各层提取物，分别溶于适量水中，最后定容成100 ml，4℃保存备用。
2.2 含药血清的制备［5］ 取小鼠40只， 体重22～26 g，雌雄兼用。分为5组：空白血清组(灌胃给予生理盐水)，田基黄乙醇总提取物血清组，田基黄醋酸乙酯提取物血清组，田基黄正丁醇提取物血清组，田基黄水提取物血清组。含药血清组按每次20 ml·kg -1（68.4 g生药/kg）剂量灌胃给药，每天给药两次（每天的总给药量约为田基黄半数致死量的50%），连续3 d，末次给药后1 h，摘眼球取血，离心分离血清，56℃灭活30 min。分别用不含血清的MEM培养液和RPMI-1640培养液稀释成40%，20％和10％的血清浓度，分别过滤，4℃保存备用。
2.3 细胞培养
2.3.1 2215细胞培养在长满2215细胞培养瓶内用0.25%胰酶，37℃消化3～4 min，加培养液吹散，1∶3传代；10 d长满。消化后计数，配制成1×105个/ml的细胞悬液，接种于96孔培养板，每孔100μl，在37℃，5％的CO2培养箱中培养24 h，细胞长成单层后进行实验。将含各浓度血清的MEM培养液加入到96孔板中，每种血清每浓度平行3孔，每孔100μl，使含药血清最终浓度分别为20％、10％和5％。同时设无药物细胞对照组和培养液空白对照组各3孔。收集第4天细胞培养上清液，在450 nm波长处用酶标仪测OD值。应用SPSS14.0统计软件进行组间t检验，并按以下公式计算抑制率。结果见表1。
抑制百分率(%)＝无血清细胞对照组OD值均数－田基黄提取物血清组OD值均数无血清细胞对照组OD值均数－培养液空白对照组OD值均数×100％
2.3.2 肝癌BEL-7404细胞的培养将培养瓶中的7404细胞株用0.25%胰蛋白酶、0.2% EDTA消化后，加入RPMI-1640培养液，将细胞配制成5×104个/ml的细胞悬液，加入96孔培养板中，每孔100μl，置于37℃，5% CO2培养箱中培养。待细胞贴壁生长后(约15 h)，每孔分别加入含不同浓度血清的RPMI-1640培养液，每种血清每浓度平行6孔，每孔100μl，使含药血清最终浓度分别为20％，10％和5％。每个96孔培养板中设无血清细胞对照组各6孔。继续培养48 h，然后加入0.5％MTT溶液，10μl/孔，继续培养4h。2000 r·min-1离心15 min，弃去上清液；每孔加入200μl DMSO，轻振10 min后在490 nm波长处用酶标仪测OD值。应用SPSS14.0统计软件进行组间t检验，并按以下公式计算抑制率。结果见表2。
抑制率（%）＝空白血清组OD值均数－田基黄提取物血清组OD值均数空白血清组OD值均数×100%
对2215细胞分泌HBeAg和HBsAg的影响实验结果显示：当含药血清浓度为5％时，田基黄乙醇总提取物和正丁醇提取物对HBeAg和HBsAg呈现较好抑制作用，抑制率分别为34.84％和57.95％，以及76.02％和53.15％（P＜0.05）；当含药血清浓度为20％时，醋酸乙酯提取物对HBeAg和HBsAg呈现较好的抑制作用，抑制率分别为79.79％和57.22％（P＜0.05）；水提取物3种浓度的含药血清对HBeAg和HBsAg都有较好的抑制作用，抑制率分别达到了70％和30％以上（P＜0.05）。提示田基黄中的水溶性化学成分对HBeAg和HBsAg存在较稳定的抑制作用，并且没有明显的量效关系；同时各极性部位单独用药对HBeAg的抑制效果明显优于混合用药的抑制效果。
对肝癌BEL-7404细胞的影响实验结果显示：田基黄不同提取物对肝癌BEL-7404细胞都有较好的抑制作用，该抑制作用呈现明显的量效关系，当含药血清浓度为20％时，乙醇总提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物的抑制率分别为29.74％，53.80％，40.79％和54.24％（P＜0.01）。提示田基黄抗肝癌的有效成分均衡分布于各种极性部位中，而且各极性部位单独用药的效果要优于混合用药的效果。
表1 田基黄不同提取物的血清在2215细胞培养中对乙肝HBeAg和HBsAg的抑制作用（略）
与细胞对照组比较，①表示P＜0.01，②表示P＜0.05，③表示P＞0.05；n=3
表2 田基黄不同提取物的血清对肝癌BEL-7404细胞的抑制作用（略）
与空白血清组比较，①P＜0.01，②P＜0.05，③P＞0.05；n=6
3 讨论
中药血清药理学是指在动物经口服给药后一定时间采血分离血清，用此含药血清进行体外实验的一种实验方法［6］。这种新的实验方法可排除在体外实验中各种干扰因素的影响，比较接近药物在体内环境中产生药理效应的真实过程。作者利用血清药理学方法，研究田基黄不同提取物在体外对2215细胞分泌HBeAg和HBsAg的抑制作用和对肝癌BEL-7404细胞的抑制作用，结果表明田基黄不同提取物含药血清有良好的体外抗乙肝和抗肝癌作用。其抗乙肝的有效成分主要分布在的水提取物中，今后可以考虑从水层部位筛选出活性更强的抗乙肝单体化合物。抗肝癌的有效成分均衡分布于各种极性部位，并且各极性部位单独用药对肝癌BEL-7404细胞的抑制效果明显优于混合用药的抑制效果，今后可以考虑从这几个活性部位中筛选出活性更强的抗肝癌单体化合物。实验结果显示空白血清组的OD值与无血清细胞对照组的OD值无显著性差别（P＞0.05），说明血清对实验没有干扰。至于田基黄是通过何种途径实现其抑制2215细胞分泌HBeAg和HBsAg，以及抑制肝癌BEL-7404细胞生长的，还有待于进一步研究；而其具有抑制作用的化学单体有哪些，还有待于进一步筛选。
【参考文献】
［1］ 《中华本草》编委会．中华本草［M］.上海：上海科学技术出版社，1999：598.
［2］ 陈丽云，杨立伟，苏薇薇，等．田基黄及其注射液的研究进展［J］.中药材，2002，25（7）：525．
［3］ 顾明国，冯淑珍，王小燕．地耳草抗疟有效成分的研究——地耳草素A，B，C，D的分离和结构［J］.化学学报，1988，46(3)：246．
［4］ 郁建平，古练权，周 欣．田基黄茎、花叶挥发油化学成分的研究［J］.中国药学杂志，2001，36（3）：199．
篇10
【摘要】 目的观察三叶青黄酮对SMMC-7721肝癌细胞诱导凋亡的作用。方法通过四氮噻唑蓝(MTT)比色法检测三叶青黄酮对细胞的抑制增殖作用;光学显微镜、荧光显微镜下形态学观察;DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪(FCM)研究分析三叶青黄酮对肝癌细胞的诱导凋亡作用。结果三叶青黄酮能显著的抑制SMMC-7721肝癌细胞的生长，并具有浓度依赖性。光学显微镜、荧光显微镜下观察，发现细胞凋亡现象;DNA琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带;流式细胞仪(FCM)检测分析出现凋亡亚二倍体峰。结论三叶青黄酮对肝癌细胞具有诱导凋亡作用，有抗肝癌的药用价值。
【关键词】 三叶青黄酮; 肝癌细胞; 凋亡
三叶青具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛等功效[1]，用于治疗高热惊厥、肺炎、哮喘、肝炎、风湿、月经不调及恶性肿瘤，具有很好的疗效。大量的研究表明该中药具有免疫调节作用 ， 其不仅直接作用于细胞免疫，而且通过整体作用来控制细胞免疫与细胞因子的活动。近几年，三叶青黄酮抗肿瘤作用日益受到重视。为进一步探讨三叶青抗肿瘤作用的机制，更好地开发利用三叶青， 本实验通过(MTT)比色法、光学显微镜下形态学观察、荧光显微镜观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪(FCM)测定法研究三叶青黄酮对SMMC-7721肝癌细胞诱导凋亡进行研究。
1 仪器与材料
1.1 仪器酶联免疫检测仪，国营华东电子管厂研制，型号，DG-3022;流式细胞仪(FCM)，美国B&D公司产品，型号，FACS.calibur;电泳仪，北京六一仪器厂产品，型号DYY-Ⅲ1;紫外透射分析仪，上海长兴机器厂产品，型号: 2F-3。
1.2 药物与试剂三叶青，宁夏明德饮片厂提供，宁夏药品检验所鉴定。青霉素，宁夏启元药业生产，规格，160万单位，批号080912;链霉素，安徽淮南国瑞药业产品，规格，0.75 g，批号20090308;RPMI1640，美国Sigma公司产品;四氮噻唑蓝(MTT)，美国Sigma公司产品。
1.3 细胞株及培养肝癌细胞株SMMC-7721由第四军医大学口腔医学院引进。接种于100 L玻璃培养瓶中，在含10%小牛血清、青霉素100 mg·L-1、链霉素100 mg·L-1的RPMI1640培养基中， 37℃、pH7.2置5%CO2培养箱中培养48 h，经0.25%的胰酶消化后，制成2×105·ml-1细胞悬液。
1.4 三叶青黄酮的提取、分离和制备称取三叶青块根1 000 g ，采用碱性稀醇提取法[2] 提取得三叶青黄酮7.2 g 。聚酰胺柱层析[2] 后，分别用10% ，30% ，50% ，70% ，95% 的乙醇洗脱，回收得浓缩物，真空干燥至恒重，分别标记为HT10，HT30，HT50，HT70 和HT95。分别称取HT10，HT30，HT50，HT70 和HT95各2 mg ，溶解于200 μl 二甲基亚砜中，旋涡振荡，全部溶解后，加入800 μl RPMI1640培养液旋涡震荡混匀后放置于4 ℃ 冰箱保存备用， 终浓度为10 mg ·ml-1 。用时按比例配制成2，4，6，8，10 mg ·ml-1的浓度液。
2 方法
2.1 实验分组实验组分加药组和对照组，加药组分别加入HT10，HT30，HT50，HT70 和HT95。各自加入100 μl 2，4，6，8，10 mg ·ml-1的药液，每计量组6个复空，对照组加等量的培养基，混匀后放入5%CO2培养箱中培养。
2.2 四氮噻唑蓝(MTT)比色法取对数生长期SMMC-7721细胞，接种于96孔板，每孔加入100 μl细胞悬液，培养24 h，待细胞贴壁后，进行换液和药物处理[3] ，弃上清液，加入100 μl HT10，HT30，HT50，HT70 和HT95各浓度的药液100 μl。对照组加100 μl的培养液，混匀。37℃、pH7.2置5%CO2培养箱中培养。培养48 h后，弃上清液，在各孔中加入5 g·L-1MTT 30 μl ，继续培养4 h，弃上清液，每孔加二甲亚砜100μl，振摇5 min，用酶联免疫检测仪测定570 nm处吸光度，计算出细胞抑制率。
2.3 光学显微镜下形态学观察取实验组细胞，用PBS(pH7.2)洗涤1次，做离心涂片，用甲醇固定3～5 min，滴加Wright染色2 min，入Wright磷酸缓冲稀释液4～10 min，用蒸馏水冲洗[3] ，在油镜下观察细胞形态。
2.4 荧光显微镜观察取实验组细胞，吹打均匀，取30 μl悬液加到载玻片上，加10 μl吖啶橙染色，加盖玻片后置荧光显微镜下观察SMMC-7721细胞形态并照相，在显微镜下数400个细胞，计算细胞凋亡率[3]。
2.5 DNA琼脂糖凝胶电泳收集药物作用组及对照组培养细胞，常规方法提取细胞DNA ，1.5%琼脂糖凝胶孔中电泳，在室温、50 V、恒流60 mA电泳2 h，紫外灯下观察并照相[3]。
2.6 流式细胞仪(FCM)分析将经药物处理的细胞，1 000 r·min-1离心5 min，弃上清液，PBS洗涤2次，1 000 r·min-1离心5 min，弃上清液，加冷的70%(体积分数)乙醇4℃固定24 h，离心，弃乙醇，PBS洗1次，1 000 r·min-1离心5 min，弃上清液，滴加0.5 ml 100 mg·L-1RNase，放置4 h，离心，弃上清液，PBS洗1次，300目筛网过滤1次， 1 000 r·min-1离心5 min，弃上清液，加0.5 ml PI过夜[3]。上流式细胞仪测定。
2.7 统计学处理采用SPSS11.0 软件，不同药物浓度组间的比较采用完全随机设计的方差分析，各药物浓度组与对照组的比较采用Dunnett t 检验，以α= 0.05 为检验水准。
3 结果
3.1 三叶青黄酮对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用结果见图1。从图1可以看出，不同浓度乙醇层析分离的三叶青黄酮(HT10、HT30、HT50、HT70和HT95) 均能抑制SMMC-7721 细胞的增殖;随着药物浓度的增加，其生长抑制作用增强，呈浓度-效应关系。其中HT50作用最强，随着加入药物浓度的增加，其对SMMC-7721细胞生长抑制率分别为38.6%，47.2%，65.1%，70.1 %和71.6%。图1 三叶青黄酮对SMMC-7721肝癌细胞增殖抑制作用
3.2 光学显微镜下形态学变化取对照组细胞及实验组细胞，光学显微镜下观察，可见实验组细胞染色质浓集，细胞核固缩、碎裂，细胞膜起泡，有核碎片的凋亡小体形成。
3.3 荧光显微镜下形态学变化取对照组及实验组细胞，荧光显微镜下可见对照组细胞为黄色或桔红色，给药组细胞核或细胞质内可见致密浓集的黄绿色染色，可见黄绿色碎片，细胞核固缩、核碎裂、细胞膜起泡及凋亡小体形成，检测其凋亡率， 其中HT50组不同浓度的凋亡率分别为29.5%，36.3%，52.5% ，62.8%和70%;随着浓度的不断增加，细胞凋亡率呈上升趋势。
3.4 DNA琼脂糖凝胶电泳结果取对照组及HT50组的8，10 mg ·ml-1两个浓度的细胞，经琼脂糖凝胶电泳后，给药组均出现凋亡特有DNA Lad-der带，而对照组则无此带。3.5 流式细胞仪(FCM)测定结果取对照组及HT50组的8，10 mg ·ml-1两个浓度的细胞，流式细胞仪(FCM)测定，对照组未出现亚2倍体峰，给药组均可见明显的亚2倍体峰。
4 讨论
三叶青具有多方面的生物活性，其中抗肿瘤作用日渐被人们重视。本研究通过定量和定性的细胞凋亡研究方法，对5种不同浓度的乙醇分离的三叶青黄酮作用后的细胞进行凋亡研究，发现各组均有直接抑制肿瘤细胞增殖作用，且呈浓度-效应正相关。其中HT50的10 mg ·ml-1浓度抑制作用最强。通过光学显微镜、荧光显微镜对细胞形态学的观察，可见细胞核固缩、核碎裂、细胞膜起泡及凋亡小体形成等形态， 随着浓度的增加凋亡率也不断升高。 DNA琼脂糖凝胶电泳显示实验组细胞，DNA电泳图上呈现“梯状”条带，这是细胞凋亡最具特征的生化改变;流式细胞仪分析，三叶青黄酮作用后的细胞均出现明显的亚2倍体峰。三叶青黄酮对SMMC-7721肝癌细胞具有明显的诱导凋亡作用，是很有潜力的抗癌药物。
参考文献
[1] 中国医学科学院药物研究所，北京医学院，南京药学院，等. 中药志(第2册) [M]. 北京:人民出版社，1984:219.
