国庆对联范文
时间：2023-03-23 15:13:18
导语：如何才能写好一篇国庆对联，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
上联：大好河山千古秀；
下联：小康社会万民祥。
上联：中秋国庆节双至；
下联：花好月圆民永安。
上联：举国欢歌颂盛世；
下联：普天起舞赞中华。
上联：特色生辉，百业腾飞兴禹甸；
春风化雨，三农举动乐荛天。
上联：以人作本，江山永固；
下联：立党为公，日月同辉。
上联：改革开放三十载，与时俱进，神州处处流光溢彩；
下联：奋发图强六秩年，捷报频传，大业行行动地惊天。
上联：一国两制，千秋大业匡青史；
下联：两岸三通，百载华章展彩虹。
上联：花开盛世，喜盛会腾欢，盛情感染八方客；
下联：心醉神邦，庆神州贺诞，神笔勾描万代春。
上联：特色江山春永驻；
下联：和谐社会政常新。
上联：两制鸿猷收港澳；
下联：三通善举对台彭。
上联：万管笙箫歌盛世；
下联：九州灯火庆小康。
上联：大江南北，天然画卷成仙境；
下联：华夏古今，不尽诗情入梦乡。
上联：海晏河清，神州十月江山美；
下联：风和日丽，玉宇五星天地红。
上联：一穷二白，群龙立业群芳笑；
下联：万户千门，六秩谋生六味全。
上联：六十年风雨，三代愚公，创业豪情昭日月，
下联：八千里路程，九州才俊，革新睿智转乾坤，
上联：扬国粹，树文明，炎黄儿女追科学，扶摇万里，
下联：重民生，倡廉洁，黎庶政权致和谐，彪炳千秋。
上联：六十年岁月如歌，发展填词，和谐谱曲；
下联：九万里河山似锦，文明作线，科学为梭。
上联：花甲回眸，贫年己丑，昌年己丑；
下联：金秋庆典，诗里中华，画里中华。()
上联：当年己丑，今年己丑，六十年革故鼎新，领先世界；
下联：古代中华，现代中华，数千代星移斗转，换了人间。
上联：物阜民康歌大有；
篇2
一天日月明大庆延年莺歌燕舞乐昌时
花灯万盏贺华夏
美酒千杯祝母亲
国富金瓯固
民安玉镜圆
天时地利人和祖国前程似锦
虎跃龙骧凤舞神州喜庆如春
盛世腾飞基昨日
神州崛起看今朝
好儿女志四方胸怀热土千千结
众干群心筹百策力振中华五五秋
腾飞零五年小康社会千秋盛
欢度十一节大好河山万里新
龙飞五五秋谋国振国威与时俱进声声慢
心系千千结解民悬达民意跟党同行步步高
万紫千红百花争艳
五湖四海一体同贺
九州春*莺歌燕舞
四海征程虎跃龙腾
象九进一跨大步,
卒三退二奔小康.
横批:开拓创新
同甘共苦声声唤,
与时俱进阵阵风.
食丰衣锦豪门乐,
国泰民安图画新.
上;十月山河秀祖国
下;一天日月明大庆
横;十一国庆
上;民富国强看今朝欢笑迎国庆
下;山南海北赞改革歌舞颂党恩
横;举国欢腾
十月山河秀祖国溢彩火树银花称盛世
一天日月明大庆延年莺歌燕舞乐昌时
花灯万盏贺华夏
美酒千杯祝母亲
国富金瓯固
民安玉镜圆
天时地利人和祖国前程似锦
虎跃龙骧凤舞神州喜庆如春
盛世腾飞基昨日
神州崛起看今朝
好儿女志在四方胸怀热土千千结
众干群心筹百策力振中华五五秋
腾飞零五年小康社会千秋盛
欢度十一节大好河山万里新
龙飞五五秋谋国是振国威与时俱进声声慢
心系千千结解民悬达民意跟党同行步步高
十月山河秀祖国溢彩火树银花称盛世
一天日月明大庆延年莺歌燕舞乐昌时
花灯万盏贺华夏
美酒千杯祝母亲
国富金瓯固
民安玉镜圆
天时地利人和祖国前程似锦
虎跃龙骧凤舞神州喜庆如春
盛世腾飞基昨日
神州崛起看今朝
好儿女志在四方胸怀热土千千结
众干群心筹百策力振中华五五秋
腾飞零五年小康社会千秋盛
欢度十一节大好河山万里新
龙飞五五秋谋国是振国威与时俱进声声慢
心系千千结解民悬达民意跟党同行步步高
万紫千红百花争艳
五湖四海一体同贺
九州春*莺歌燕舞
四海征程虎跃龙腾
象九进一跨大步,
卒三退二奔小康.
横批:开拓创新
同甘共苦声声唤,
与时俱进阵阵风.
食丰衣锦豪门乐,
国泰民安图画新.
篇3
上联：伟大祖国气像万千江山似锦；
下联：英雄人民奋发向上气势如虹。
上联：展宏图院内百花绽放迎国庆；
下联：奔前程创先争优全厂讲奉献。
上联：欢度国庆，翘首遥望台湾山水；
下联：迎来中秋，举杯祝福骨肉同胞。
上联：民富国强数今朝，欢笑迎国庆；
下联：山南海北赞改革，歌舞颂党恩。
上联：苦尽甜来，经过多少坎坎坷坷；
下联：星移月转，跃向无限辉辉煌煌。
上联：同德同心同忧同乐，金瓯永固；
下联：载歌载舞载笑载言，玉局新开。
上联：多娇江山脱素呈红，春花烂熳；
下联：伟大祖国布新除旧，岁月峥嵘。
上联：国旗红艳艳，五星拱照九州伟；
下联：庆典盛隆隆，万众同欢四化兴。
上联：赤县腾飞，力献群星，耀辉华宇；
下联：中华崛起，志酬猛士，勇克难关。
上联：四化干同心，浩荡东风龙腾虎跃；
下联：九州歌宪治，恒昌国运海晏河清。
上联：祖国远景灿烂，千帆竞发争先进；
下联：四化蓝图辉煌，万马奔腾战犹酣。
上联：十亿人民，十亿红心，心心向四化；
下联：九州新貌，九州旭日，日日传佳音。
上联：巨手回天，喜四化业绩，彪炳史册；
下联：群贤向党，看万里江山，再展宏图。
上联：放眼中华，百业描新景，千姿竞秀；
下联：举目九州，四化绘宏图，万马奔腾。
上联：碧水扬波，鱼跃龙腾，共歌国德厚；
下联：苍山吐翠，花繁叶茂，齐赞党恩深。
上联：载歌载舞迎国庆，赞颂华夏秋色好；
下联：同心同德干四化，喜看人民幸福多。
上联：一国存两制，山河归一统，炎黄崛起；
下联：九天启三阳，瑞气满九州，华夏腾飞。
上联：团结花，胜利花，神州大地繁花似锦；
下联：幸福曲，丰收曲，祖国长空乐曲如潮。
上联：描绘振兴中华宏图，给子孙后代造福；
下联：实现统一祖国大业，为祖宗先辈争光。
上联：指点山河，翻新山河，令山河流金溢彩；
下联：热爱祖国，建设祖国，让祖国昌盛繁荣。
上联：旭日融融，看碧水霞飞，春江鱼跃，地富民殷歌盛世；
下联：红旗猎猎，喜群英胆壮，志士情浓，龙腾虎跃续。
上联：好儿女志在四方胸怀热土千千结；
下联：众干群心筹百策力振中华五五秋。
上联：腾飞零五年小康社会千秋盛；
下联：欢度十一节大好河山万里新。
上联：改革开放三十载，与时俱进，神州处处流光溢彩；
下联：奋发图强六秩年，捷报频传，大业行行动地惊天。
上联：六十年风雨，三代愚公，创业豪情昭日月，
下联：八千里路程，九州才俊，革新睿智转乾坤。
上联：扬国粹，树文明，炎黄儿女追科学，扶摇万里，
下联：重民生，倡廉洁，黎庶政权致和谐，彪炳千秋。
上联：六十年岁月如歌，发展填词，和谐谱曲；
下联：九万里河山似锦，文明作线，科学为梭。
上联：九万里，千里千畴千幅画；
下联：六十年，一年一步一重天。
上联：柳烟拂岸，麦浪盈川，发展赢来千野绿；
下联：村貌如花，民情似日，和谐绘出万家春。
上联：六十年发展篇：神舟探月，藏铁腾龙，长电播春光，宏开一代惊天业；
下联：九万里和谐路：奥运燃情，荆莲映日，三通连两岸，大赋千秋动地诗。
上联：南湖树党旗，北阙擎国旗，九万里耕云播雨，烨烨锤镰开富路；
下联：昨日迎新世，今朝颂盛世，六十年动地惊天，蒸蒸事业奏华章。
上联：一国行两制，三地归心，四海扬眉，五星光灿烂。举世同欢，百族起舞千秋颂；
下联：十月乐九州，八方瞩目，七音悦耳，六秩典恢宏。普天共庆，亿众开怀万里歌。
上联：新华迎六秩寿辰，天鹅舞翩翩，急管繁弦，奏响和谐社会主旋律；
下联：盛世建三门强市，黎庶情切切，浑金璞玉，绘描锦绣湖滨美画图。
上联：六秩纵豪情，回眸昨日，鸟巢拔地，龙裔巡天，豪情已铸辉煌业；
下联：祖国登胜境，放眼今朝，云雁题跋，梅花落款，胜境正逢烂漫春。
上联：几番风雨，送走一穷二白；
下联：六十春秋，迎来万紫千红。
上联：千年古国，一片新天，长施沛雨春风，且将特色融春*；
下联：十亿龙人，六旬大典，共庆民丰物阜，更喜中华造物华。
上联：十月神州，万众腾欢，三军慷慨，铁马金戈雄大典；
下联：六旬圣诞，千山祝嘏，四海开樽，琼浆玉液庆长春。
上联：燕绕新梁，鱼游活水，如歌岁月千秋旺；
下联：牛耕喜雨，凤舞谐庭，似画江山万代春。
上联：六十页新书，精彩纷呈，每多悦目赏心处；
下联：万千支韶乐，悠扬动听，尽是富民强国歌。
上联：往事忆先驱，何曾示弱？从艰辛路挺来，仰有豪情，俯无愧色；
下联：今朝兴伟业，不复积贫！向发展潮望去，下排浊浪，上起和风。
上联：数千年历史，俯万里江山，民无今日强，国无今日盛；
下联：庆甲子生辰，歌三旬改革，人在此时乐，梦在此时圆。
上联：卅年改革潮，浩荡奔腾，皆汇作春天故事；
下联：六秩沧桑史，辉煌壮丽，正谱成盛世新篇。
上联：六十年伟业辉煌，国强实力，民乐小康，盛世承平清九曲；
下联：千万里征程壮阔，挟势而来，与时俱进，奔流直下叩三门。
上联：站起来，富起来，强起来，六秩完成三级跳；
下联：家兴旺，乡兴旺，省兴旺，卅年改革九州雄。
上联：庆母亲寿诞，九曲放歌，五岳捧花，四海擎觞诗佐酒；
下联：展龙裔雄姿，七番探宇，三通接轨，万方逐梦业流金。
篇4
上联：中秋节国庆节 节节同庆节节高
下联：芙蓉饼荷叶饼 饼饼团圆饼饼香
上联：中秋猜谜觅知音 谜谜皆有因
下联：众客作对来助兴 对对颇用心
上联：十八年擦肩而过，今日喜相逢，十一国庆庆中秋，双节迎双喜
下联：一地球可分为二，南北两半球，北边金秋南边春，中秋变中春
上联：十月山河秀祖国溢彩火树银花称盛世
下联：一天日月明大庆延年莺歌燕舞乐昌时
上联：花灯万盏贺华夏
下联：美酒千杯祝母亲
上联：国富金瓯固()
下联：民安玉镜圆
上联：天时地利人和祖国前程似锦
下联：虎跃龙骧凤舞神州喜庆如春
上联：盛世腾飞基昨日
下联：神州崛起看今朝
上联：好儿女志四方胸怀热土千千结
下联：众干群心筹百策力振中华五秋
上联：腾飞零五年小康社会千秋盛
下联：欢度十一节大好河山万里新
上联：龙飞五五秋 谋国振国威 与时俱进声声慢
下联：心系千千结 解民悬达民 跟党同行步步高
上联：万紫千红百花争艳
下联：五湖四海一体同贺
上联：九州春*莺歌燕舞
下联：四海征程虎跃龙腾
上联：象九进一跨大步
下联：卒三退二奔小康
横批：开拓创新
上联：同甘共苦声声唤
下联：与时俱进阵阵风
上联：食丰衣锦豪门乐
下联：国泰民安图画新
上联：十月山河秀祖国
下联：一天日月明大庆
横批：十一国庆
上联：民富国强看今朝欢笑迎国庆
篇5
关键词：U18女冰世青赛；中国队；差距；分析
中图分类号：G808 文献标识码：A 文章编号：1008-2808(2012)04-0040-04
1研究目的
目前世界女子冰球运动的蓬勃开展带动了青少年冰球运动的普及和提高。18岁以下女子冰球近年来发展也很快，在欧洲和北美国家尤其受欢迎，组织的比赛也越来越多。国际冰联从2008年开始举办U18女子冰球世锦赛。这也引领和推动了女子冰球的发展。U18世锦赛的参赛队，分成3个级别组进行比赛。分组情况是：8个队参加的U18世锦赛、有6个队参加的U18世锦赛甲级比赛和有6个队参加的U18世锦赛甲级资格赛。中国青年队第一次参加这个级别的赛事，自然就要从资格赛开始努力争夺晋级，在6个队中取得了3胜2负的战绩，表现出了较好的竞技水平和能力，但是与本组的匈牙利、意大利、青年队相比较在很多方面还存在差距与不足。文章运用世青赛比赛中的技术统计数据，揭示了运动员的个人基本技术不扎实，队的整体得分点不多，防守薄弱等问题和差距，针对性的研究分析中国青年队与其他各队存在差距的原因，为促进我国青少年女子冰球运动的进一步发展，将具有至关重要的意义。
2研究对象与方法
2.1研究对象
以参加U18世青赛中国队、匈牙利、意大利、英国、法国、哈萨克斯坦队为研究对象。
2.2研究方法
2.2.1文献资料法
根据需要查阅相关论文30余篇，收集国际冰联历届女冰青年比赛成绩资料作为研究理论依据。
2.2.2观察法
观看录像，对世青赛的全部比赛进行分析。
2.2.3数理统计法
对各队比赛中各项技术统计数据进行数理统计与分析。
3研究结果与分析
3.1参赛队得分能力分析
本次参赛队共有6支。分别是法国、哈萨克斯坦、匈牙利、英国、意大利和中国。比赛采用单循环赛制，即每个队都要分别和其它5个队进行一场比赛。最终前两名将获得2012年世青赛甲级组比赛资格。这次比我国是首次组队参加。5场比赛，3胜2负。以8:2胜哈萨克斯坦，2:1胜法国队，3比2胜英国队，以1:10负于匈牙利，1:4负于意大利。从整个比赛各队得分一项分析，中国队平均每场比赛得3分，匈牙利队(7.4分/场)、英国队(3.8分/场)、意大利队(4.2分/场)与强队相比还有一些差距(见表1)。这在一定程度上反映出，中国青年队的进攻得分能力还有待加强。
此外，还有一项技术统计就是世青赛个人技术表现及得分排名(见表2)，6个队前30名中国队仅有4人，占世青赛技术表现及得分前30名个人的13.3％，匈牙利11人，占36.6％，英国队7人，占23.3％，意大利6人，占20％，法国2人，占6.6％。中国队在个人排名上，强于法国队和哈萨克斯坦队，但是与匈牙利、英国、意大利这些注重个人技术的强队，中国青年队在进攻上个人基本技术不扎实，进攻点不多，队员射门技术及意识不强，由于射门技术欠缺失去很多得分机会，然而，更重要的是中国青年队的尖子队员少而不精，关键时刻缺乏多点进攻射门，门前抢、补、垫得分意识。中国青年队往往因为缺乏优秀的核心球员的作用，减弱了与对手的对抗能力，而放大了对手的个人技术的表现与发挥。在这点上我们要更加重视个人技术能力的培养，尤其是青少年的早期培养，根据运动员的特点要充分发挥她们的创造力和想象力是在今后的训练中亟待解决的问题。
尽管中国青年队在本次比赛中，有着良好的表现，但从比赛实际反映，前锋后卫攻守对抗能力较弱，遇见对手的严密阻截时往往采取迂回避让的策略，攻击行动缺乏自信及有威胁的对抗手段。由于中国青年队个人技术能力不强，在攻守转换上导致队的整体战术组织失衡，限制了队的战术组织数量和质量，这也是应引起我们重视的一个重要环节。
3.2后卫、守门员防守能力分析
中国队在本届世青赛总失分为19分，位居倒数第2位，倒数第1位的是哈萨克斯坦队失44分。失分少于中国青年队的是匈牙利队失4分，法国队失9分，意大利队失14分，英国队失16分。从失分情况观察，中国队防守问题较多，平均每场失3.8分，一场比赛超出了不超过+-3分常规标准。造成失分因素主要有两个方面，一是后卫防守不够坚固，门前架、推盯人不够凶狠，看球不看人而漏位，给对方创造了二次射门机会，同时后卫和守门员之间缺乏默契，对门前球的处理没有配合，相互犹豫，不够果断。二是守门员基本技术运用能力较差，连续动作反应缓慢，对来球角度的封堵，侧向移动的卡位不够准确，更重要的是大赛经验不足，心理压过大，怕进球，怕输球。
3.3组织进攻能力分析
冰球比赛的攻守转换转眼即逝，一场比赛攻守转换次数多达300次以上，尤其是在中区形成抢断后的组织有效进攻是各队控制主动权的关键。中国队在全部5场比赛，依靠整体战术实施组织有效进入攻区次数为117次，与匈牙利183次，英国133次，意大利120等强队相比较还有一定差距(见表3)。从这组数字就可以分析得出，她们在组织进攻上具备很好的战术素养，队员之间战术配合能力强，战术特点简单实用成功率高，这是着眼追求世界先进水平的中国女冰值得学习的环节。
中国青年队在组织有效进攻表现一般，说明了我们目前在训练中存在的问题：运动员的基本功不扎实，技术运用不合理，传接球时机掌握不够准确。本届世锦赛中国青年队的传接球、控球、射门等技术存在视野不够开阔，隐蔽性差，在有对抗干扰的情况下动作幅度过大，缺乏短拉快传、快射的动作速度，进而反映出了教练在训练安排上缺乏实战性和针对性。中国队在与匈牙利队、意大利队的前两场比赛中失误较多，其主要是存在基本技术不扎实之外，同时还存在心理素质差、缺乏实战经验及队中核心队员的领军作用。在今后的训练中教练员要加强基本功训练，重视技战术意识培养，提高心理素质适应场上各种变化能力，关键时刻不放弃，打硬仗，这样才能使中国青年女冰逐渐走向成熟。
通过表3数据还可以看出，匈牙利、英国和意大利的战术打法上主要以中区形成压力快速拼抢，制造防守反击这一特点，有效的减轻了自己的防守压力。而中国队主要将防守重点撤回到守区，这就说明了我们在比赛中对攻区和中区拼抢不够凶猛，而导致守区压力过大，失分过多，尤其是对匈牙利队和意大利队的比赛，我们打得过于拘谨保守，这一点也是我们教练员在战术安排上过于注重守区防守，放弃了中前场拼抢的主动防守意识。通过这个数据对比，在今后的训练和战术安排上应多考虑攻区、中区、守区三线防守的战术打法，给对方制造麻烦的同时，也可以缓解直接到守区的防守压力。
3.4中国青年队与各队控球时间分析
冰球比赛时间为60min。中国青年队在本届世锦赛5场比赛总控球时间为137min，双方总控球时间为275min，平均每场控球时间为27.4min，平均控球率达49.8％(见表4)，尽管两项数据平均已经接近对阵双方的正常指标，但与匈牙利队、意大利队和英国队相比仍然存在控制球，掌握球权的差距。尤其是在与匈牙利、意大利、英国队比赛中我队控球时间明显少于对手，比赛节奏始终掌控在对方手里。匈牙利队是整个比赛中最强的对手，在控制球时间统计上，匈牙利队比中国青年队多13min，因此，我队以1：10较大比分失利，意大利队比我队控制球时间多8min，我队以1：4失利。以上两组数据足以说明了控制球体现了一个队的基本技术、战术配合、控制比赛节奏的综合能力。在这方面欧美球队做得很好，在早期训练中注重个人基本技术的培养，具备了良好的基本能技术才能完成传、接配合、组织有效进攻。中国青年队整个控球时间处于中下游水平，除基本技术与我们训练有关外，其力量、身高等个人基本素质也有一定差距。要想提高控球率，我们必须抓好个人基本技术训练，注重个人技、战术综合能力的培养，在控球上发挥亚洲人的快速、灵活、多变的移动特点，利用快慢结合，变向起动等速度变化控制比赛节奏，将是亚洲女子冰球的唯一出路。
3.5多打少、少防多成功率分析
通过多打少，少放多数据可以观察到，本届世青赛在多打少上中国队表现了较高的成功率(见表5)，多打少成功率13％，次于匈牙利队21％，数据显示其它各队多打少成功率均低于中国队。中国队在同英国、法国、哈萨克斯坦的三场比赛总得分15分，其中，利用多打少得了8分，这说明中国队在多打少的战术上是合理的，中国队采用了攻区门侧和蓝线三角的有效打法，使门侧补拍屡屡凑效得分，表现出了多打少方面的突出能力。在与匈牙利队和意大利队比赛，中国队获得了4次多打少机会，时间少，次数少是没有得分的一个原因，但更重要的原因是这两支队实力较强，得分机会不多，与两队整场比赛仅得2分。
少防多的原因自然是犯规所造成的，中国青年队本届比赛犯规较多，少防多时间32min，6个队犯规排名第三。犯规多失分的概率就会高，所以各队都尽可能的减少不必要的犯规来控制不必要的失分。中国青年队这方面近些年有提高、有认识，犯规次数相对有所减少，而少防多能力有所提升，少防多成功率88％。匈牙利队92％，仍然显现出了少防多的防守能力。中国青年队与其它各队相比较防守成功有微弱优势，但并不明显，不足以说明了什么。观其少防多4-5、3-5比赛场面，问题是；其一少防多行进间回防注意力集中在球上，其二守区站位锋线过高、离球门过远，中间形成了空隙，给对方造成更大射门空间。少防多应更多的注意加强门前的紧缩防守，根据对方控制球的位置，变化不同的方形、菱形、三角形防守阵型。
4结论与建议
4.1结论
(1)中青队无论从个人技术、比赛经验、心理素质等都与国外运动员有较大差距，尤其是经验方面的不足，使基本技术没有充分的得到运用和发挥。
(2)中国青年队缺乏运、控、传、接、射门等串联技术，射门得分意识较弱，得分方法、手段少，射门技术过于单一，对于弹射、挑射、反手射技术掌握不够熟练。
4.2建议
(1)中国青年队在训练中着重培养球队中的核心队员、领军人物，对有潜质的优秀运动员，在青少年的训练阶段应给予更多的鼓励和扩展才能的空间。
(2)加大青少年投入，增加与国际比赛与交流，多打国际比赛、国内比赛，以赛促练增加比赛经验，培养比赛能力提高整体技、战术水平。
(3)学习日本队选择适合自己特点的发展道路，针对世界女子冰球更加强调少身体接触，以技术为主流发展趋势，亚洲人将根据身材灵活多变，反应快的优势，寻找适合中国自己的发展道路坚定不移地走下去。
参考文献：
[1]范爱苓，青少年冰球运动员创造思维能力的培养[J]，冰雪运动，2005(1)：30-32.
[2]党红，女子冰球运动员运用身体阻截技术训练探析[J]，冰雪运动，2008,30(4)：45-47.
[3]陈静，青少年冰球运动员训练中应注意的几个问题[J]，冰雪运动，2010,32(5)：30-34.
[4]张岩，必须重视对我国青少年冰球守门员的专项技术的训练[J]，冰雪运动，2001(1)：26.
[5]刘世辉，浅析中国女子冰球训练中的几个问题[J]，冰雪运动。1997(1)：30-32.
[6]吴兴军，对冰球比赛射门技术和区域的研究[J]，哈尔滨体育学院学报，2004,22(4)：126-127.
[7]黄玉涛，冰球运动员专项力量特征与训练方法的研究[J]，冰雪运动，2009,31(3)：32-35.
[8]武彦羽，温哥华冬奥会男子冰球进球特征的分析[J]，哈尔滨体育学院学报，2010，28(6)：15-17.
篇6
关键词：足球训练；综合素养；队伍现状
青少年足球训练效果的好坏是影响我国整体足球水平的关键，提高青少年足球训练水平，长期以来都是我国足球发展规划的核心战略。但是我国青少年足球训练水平在实际中并不受重视，足球训练制度存在严重缺陷，训练方法缺乏技术性和创新性。青少年足球训练是一项长期巨大的投资，成本高，短期效益不明显，投入与产出不一致，再加上我国青少年足球训练过分依赖足球俱乐部的培养方法，这使得我国足球水平远远落后于其他发达国家。因此，我们必须从全新的角度思考我国青少年足球训练存在的问题，将青少年足球训练和文化机制相结合，培养全面的青少年足球运动员，解决我国足球人才匮乏的问题，加强我国青少年足球训练的合理化，打造一支高水平的足球队伍。
一、我国青少年足球训练的现状认识
1.我国青少年足球训练教练员队伍现状
体育竞技归根结底还是人才的较量，除了运动员之间的竞争，还有教练员的竞争。名师出高徒，优秀的教练相当于半支技艺高超的球队。我国教练员普遍存在以下特点：年龄老化、知识结构单一、数量不足、学历不高等。目前我国教练员的来源除了专业院校培养，更多的是由退役球员任教，这在一定程度上影响了我国青少年的足球训练水平。
2.我国青少年足球训练制度的现状
我国青少年足球训练只采用单一化的培养机制，即以专业的足球俱乐部为主，足球院校、业余足球俱乐却等为辅，这样很大程度上限制了我国青少年足球运动员的发展。另外，我国青少年足球训练俱乐部受重视程度不高，绩效考评机制不科学、管理机制不完善、商业化越来越严重，阻碍了我国青少年足球的进步。
3.我国青少年足球运动的教育理念现状
我国青少年足球运动的教育理念存在一定的不足，运动员素质不高、技术水平、控制能力、创新性等比较低下。这就要求我们必须结合实际情况注重训练的实战性，从而树立科学合理的教育理念。
二、对我国青少年足球训练问题的思考
1.完善足球管理机制，加强对足球赛制的管理
（1）改变足球发展体制，调动足球培训市场的活力
我国青少年足球训练体制应该以俱乐部训练为主体，多种训练方式共同发展。发展专业足球训练学校，培养专业人才，这样不仅有利于更好地进行训练，还能培养运动员的专业素养。以企业培训为依托，利用政府支持，社会资源和民间组织的积极参与是我国青少年训练的重要保证。政府应该加大资金的投入、政策的支持。
（2）创建对外交流合作平台，建立多渠道人才培养体系
建立国际交流平台，派遣学生与球技精湛的国流、学习。建立教员交流机制，使我们的教练出国学习，借鉴发达国家的教学模式、技能技巧等先进的足球培训科学理念。
（3）完善足球管理监督机制，信息透明公开
信息公开化、管理透明化，规范的管理操作流程是保证青少年足球训练队伍纯洁性的根本。只有清正廉洁、公平公开的组织才能源远流长，赢得人民群众的拥护和尊重，充分发挥中国足协的监督机制。
2.提高我国青少年足球训练团队的综合素养
在足球训练中，教练是整个团队的核心人物，他们是整个团队的策划者和实行者，教练的作用不容小觑。首先，要规范青少年足球教练的上岗制度，根据能力、年龄、学历来规定任教资格。其次，制定科学的青少年足球教练技能培训计划，让国内外的优秀教练给我们的教练分享经验，不断提高青少年足球教练的技术水平。最后，对青少年足球教练进行科学的绩效考评，建立相应的奖惩制度。这样有利于整体的公平性，也有利于教学水平的提高。
加强对青少年足球运动员的文化素质教育，制定相应的思想素质训练和基础技能训练，防止因大量的技能训练而使青年运动员个人素质下降的现象发生。在发展技能训练的基础上，应该加强情感方面的训练，培养出全面发展、职业道德高尚、热爱生活的复合型人才。
综上所述，我国青少年足球训练事业发展仍需努力，与其他国家还有一定的差距，但是我们应该对我国青少年足球训练充满信心。任何事物的发展都需要一定的时间，只要我们勇于创新，不断完善青少年足球管理制度，改变教学管理模式，优化教练人员的训练方法，丰富我们的实践经验，国家和社会大力扶持青少年足球事业，将中国青少年足球发扬光大便指日可待。
参考文献：
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[关键词] 变异链球菌； 乳过氧化物酶； 碘离子； 硫氰酸根离子； 葡萄糖基转移酶； 水不溶性细胞外多糖
[中图分类号] R 780.2 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2014.04.020
唾液过氧化物酶系统（peroxidase system，PS）是唾液中的抗菌成分，主要包括3个组分：过氧化物酶（peroxidase，PO）、过氧化氢（peroxide，H2O2）和底物，底物包括含硫氰酸根离子（thiocyanate，SCN-）、碘离子（iodine，I-）等的化合物。只有当3个组分都存在时，PS才具有活性。PO可催化H2O2将含I-、SCN-的底物分别氧化为次碘盐OI-、次硫氰酸盐OSCN-[1]。OI-和OSCN-均为强氧化剂，能氧化对巯基敏感的酶，干扰微生物代谢，有效抑制多种细菌和真菌的生长[2]。口腔PO主要存在于口腔唾液和龈沟液中，主要由唾液过氧化物酶（salivary peroxi-dase，SPO）和髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）组成。SPO和MPO不易获取，至今尚未得到纯品。乳过氧化物酶（lactoperoxidase，LPO）存在于乳汁中，因其来源广泛，容易获取，结构和功能与SPO非常相似，所以实验中多以LPO作为SPO的替代物。乳过氧化物酶系统（lactoperoxidase system，LPS）已应用于多种口腔保健品中[3]，这些口腔保健品中多以SCN-作为底物，I-的应用还较少。虽然I-氧化产物的抑菌效果远远超过SCN-氧化产物，但是唾液中固有的生理浓度的SCN-存在时会显著抑制LPO-I-的抗菌效应[4]，所以LPO-I-系统的抗菌效应未能得到有效的开发和利用。
本研究拟通过增加I-的量来抵消生理浓度SCN-对I-的抑制作用，从而探索有效发挥I-抗变异链球菌（Streptococcus mutans，S. mutans）作用的途径，并进一步研究含不同浓度I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统对S. mutans的黏附、葡萄糖基转移酶（glucosyltrans-ferase，GTF）活性和水不溶性细胞外多糖生成等多个致龋毒力因子的影响，为I-在防龋口腔保健中的应用和推广提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 实验菌株与主要试剂
S. mutans ATCC 25175（血清型C，由四川大学口腔疾病研究国家重点实验室提供）；脑心浸液补充（brain heart infusion-supplemented，BHI-S）琼脂培养基、脑心浸液（brain heart infusion，BHI）液体培养基（青岛高科园海博生物技术有限公司）；硫氰酸钾、碘化钾、30%H2O2（天津市福晨化学试剂厂）；LPO（Sigma公司，美国）；二硫苏糖醇（di-thiothreitol，DTT）（北京索莱宝科技有限公司）。
1.2 溶液Ⅰ的配制
溶液Ⅰ（当实验中底物为I-和SCN-时，pH值为6.5）配方[4]如下：9 mmol・L-1 Na2HPO4 0.651 g，
24 mmol・L-1 KH2PO4 0.656 g，1.5 mmol・L-1 MgSO4 0.036 g，67 mmol・L-1 Na2SO4 1.922 g，加蒸馏水溶解稀释至200 mL，调节pH值为6.5，备用。
1.3 细菌的复苏及培养
将S. mutans冻干粉菌株接种于BHI-S琼脂培养基上于37 ℃及80%N2、10%H2、10%CO2环境下培养48 h，鉴定为纯培养物后，接种于BHI液体培养基培养24 h，收集细菌，并用溶液Ⅰ调整，调整溶液Ⅰ的菌悬液密度，使其OD600=0.9，备用。
1.4 试剂的配置及分组
实验中分别配制LPO（5 μg・mL-1），H2O2（终浓度100 μmol・L-1），SCN-（终浓度1 mmol・L-1）和I-（终浓度分别为0、10、100、1 000、10 000 μmol・L-1）。将S. mutans分为6组，分别加入不同的试剂：5个实验组分别加入不同浓度I-，并设1个对照组；每组又分为A、B管，A管加H2O2、SCN-和I-，不加LPO；B管加H2O2、SCN- 、I-和LPO。
1.5 含I-的LPO-H2O2-SCN-系统对S. mutans生长的影响
将S. mutans分为6组，每组加入0.1 mL菌悬液，2.5 mL SCN-，B管加2.5 mL LPO（A管以2.5 mL溶液Ⅰ代替），2.5 mL I-，2.5 mL H2O2，对照组加10.0 mL溶液Ⅰ。30 min后加10 μL DTT（终浓度为1 mmol・L-1）终止反应，进行10倍系列稀释得到3个浓度梯度，将稀释液体涂布到BHI琼脂培养皿上，厌氧培养24 h，计数菌落形成单位（clonal formation unit，CFU），换算成lgCFU・mL-1。
1.6 含I-的LPO-H2O2-SCN-系统对S. mutans黏附作用
的影响
取菌液0.3 mL，与含2%蔗糖的BHI液体培养基按体积比1∶10的比例接种S. mutans，各组加入 SCN- 0.1 mL，I- 0.1 mL，H2O2 0.1 mL，B管加入LPO 0.1 mL（A管以0.1 mL溶液I代替LPO），对照组加0.4 mL溶液Ⅰ，30 min后加DTT终止反应，试管与水平面呈30°，厌氧培养48 h后收集试管壁上黏附的细菌，置于分光光度计下测量OD600值，计算细菌的黏附抑制率。黏附抑制率=（对照组OD600-实验组OD600）/对照组OD600×100%。
1.7 含I-的LPO-H2O2-SCN-系统对S. mutans生成水不
溶性细胞外多糖的影响
试剂加入量同步骤1.6。取菌液0.3 mL，与含2%蔗糖的BHI液体培养基按体积比1∶10的比例接种S.
mutans，加入各试剂反应30 min后加DTT终止反应，厌氧培养24 h后离心收集细菌，蒸馏水洗涤，再用0.5 mol・L-1 NaOH洗涤，收集上清液，用蒽酮法检测水不溶性细胞外多糖的质量浓度（μg・mL-1）。
1.8 含I-的LPO-H2O2-SCN-系统对S. mutans GTF活性
的影响
试剂加入量同步骤1.6。取菌液0.3 mL，与含2%蔗糖的BHI液体培养基按体积比1∶10的比例接种S. mutans，加入各试剂反应30 min后加DTT终止反应，厌氧培养24 h后离心收集上清液，用盐析法提取GTF粗酶，蒽酮法测定酶-底物反应液中的还原糖量，计算GTF活性。
1.9 统计学分析
实验数据由SPSS 17.0软件进行统计学处理，采用t检验比较相同I-浓度组A、B管间S. mutans数量是否有差异，各组总体均数的比较采用单因素方差分析，各组间均数的两两比较采用LSD检验，两变量之间的相关分析采用Pearson检验，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 含I-的LPO-H2O2-SCN-系统对S. mutans生长的影响
各组的lgCFU・mL-1见图1。A管不加LPO，各实验组与对照组之间lgCFU・mL-1无明显差异。B管加入LPO，反应30 min后，各实验组lgCFU・mL-1较A管明显变小，差异有统计学意义（P
2.2 含I-的LPO-H2O2-SCN-系统对S. mutans黏附作用
的影响
A管不加LPO，各实验组和对照组间OD600值无明显差异；B管加入LPO反应30 min，各实验组OD600值较A管明显变小（图2）。B管各组OD600测量值和黏附抑制率见表1，可见随着I-浓度的升高，OD600值减小，LPO-H2O2-SCN-抗菌系统对S. mutans的黏附抑制率升高。除10、100 μmol・L-1浓度组外，其他I-浓度组间的差异有统计学意义（P
2.3 含I-的LPO-H2O2-SCN-系统对S. mutans生成水不
溶性细胞外多糖的影响
各组S. mutans生成水不溶性细胞外多糖的质量浓度见图3。A管中，各实验组和对照组间水不溶性细胞外多糖的质量浓度无明显差异（P>0.05）。B管加入LPO反应30 min后，水不溶性细胞外多糖的质量浓度较A管明显降低，其差异有统计学意义（P
0.05）；随着I-浓度的升高，水不溶性细胞外多糖的质量浓度随之减少，当I-≥100 μmol・L-1时，水不溶性细胞外多糖生成量明显减少，与对照组比较差异具有统计学意义（P
2.4 含I-的LPO-H2O2-SCN-系统对S. mutans GTF活性
的影响
各组S. mutans的GTF活性见图4。A管中，各实验组和对照组间S. mutans GTF活性的差异无统计学意义（P>0.05）。B管加入LPO反应30 min后，GTF活性较A管明显变小，其差异有统计学意义（P
2.5 GTF酶活性与水不溶性细胞外多糖含量的Pear-
son相关分析
以GTF酶活性为自变量，水不溶性细胞外多糖的质量浓度为因变量，经Pearson相关性分析，二者之间有明显的正相关关系（r=0.806，P=0.000）。
3 讨论
I-为底物时，LPO-H2O2-I-抗菌系统的有效杀菌成分主要为碘及其氧化物、单线态氧等物质[5]。碘和碘氧化物可以与蛋白质氨基酸侧链基团结合导致蛋白质变性沉淀；也能氧化核酸，破坏DNA和rRNA等[6]；另外，碘还可氧化攻击还原型辅酶Ⅱ进而影响细菌代谢[7]。单线态氧是高活性氧化基团，可以氧化损伤微生物细胞膜，氧化攻击蛋白质和酶，也能与DNA分子中的鸟嘌呤反应，影响酶的合成，干扰细菌代谢[8]。由此可见，LPO-H2O2-I-抗菌系统有多种机制可以共同作用导致微生物生长抑制或死亡。
本实验中，各组均设置了A、B两个管，A管不加LPO，底物（I-、SCN-）不能被H2O2氧化为OI-、OSCN-等物质，含不同浓度I-的LPO-H2O2-SCN-系统的抗菌效应无法发挥，仅在I-（10、100、1 000、
10 000 μmol・L-1）和微量H2O2（100 μmol・L-1）作用下，S. mutans的生长、黏附、产水不溶性细胞外多糖和GTF活性的抑制作用并不明显。B管加入LPO反应30 min，底物（I-、SCN-）被氧化，含不同浓度I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统可以显著抑制S. mutans生长、黏附、产水不溶性细胞外多糖和GTF活性。这说明，虽然I-有一定的抑菌作用，但是LPS抗菌效应的发挥依赖于氧化性物质（碘及其氧化物、单线态氧等）的生成，同时也说明只有当LPO、H2O2和底物（SCN-、I-等）这3个组分同时存在时，LPS才能显示出强大的抗菌活性[9]。
B管在实验时间（30 min）内，随着I-浓度的升高，抗菌系统抑制S. mutans生长的能力增强，当I-浓度达到1 000 μmol・L-1时，含双底物的LPS对S. mutans的抑制作用明显高于只含SCN-的实验组，说明随着I-浓度增加，生理浓度的SCN-对LPO-H2O2-I-的竞争性抑制作用可以被抵消，且当I-浓度足够大时可发挥显著的抗菌作用。
黏附实验中B管结果显示，随着I-浓度的升高，黏附S. mutans的OD600值减小，含不同浓度I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统对S. mutans的黏附抑制率升高，在I-浓度增至100 μmol・L-1时，黏附抑制率超过50%。虽然LPO-H2O2-SCN-抗菌系统和含不同浓度I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统都可有效抑制S. mutans黏附，但随着I-的加入，抗菌系统抑制S. mutans黏附能力显著增强。含I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统的自由基（单线态氧等）和底物的活性氧化态（OSCN-/HOSCN和OI-/HOI）可能通过氧化氨基酸残基、使S. mutans黏附素、GTF和葡聚糖结合蛋白（glucan-binding protein，GBP）失活而抑制其黏附能力。
于晓霞[10]采用闪烁计数法测定酶活性，发现LPO可抑制GTFD的活性。Korpela等[11]的研究结果表明，LPO-H2O2-SCN-抗菌系统可抑制吸附于羟磷灰石上的GTFC和GTFD活性。本实验结果也表明，含I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统能够有效抑制GTF的活性和水不溶性细胞外多糖的生成，且抑制能力随着I-浓度的升高而增强。经Pearson相关检验，GTF活性与水不溶性细胞外多糖含量之间有明显的正相关关系（r=0.806，P=0.000），含I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统抑制了GTF酶的活性，则水不溶性细胞外多糖含量也随之减少。由此结果可见，除了强大的抑菌作用，含I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统防治龋病的另一主要机制可能是抑制GTF活性，进一步抑制了S. mutans的黏附能力和降低了水不溶性细胞外多糖的生成。
综上所述，只有当3个组分（LPO、H2O2和底物）都存在时，LPS才能显示出强大的抗菌活性；增加I-的浓度，可以抵消生理浓度的SCN-的抑制作用，使含I-的LPO-H2O2-SCN-抗菌系统发挥显著的抑制S. mutans生长、黏附、生成水不溶性细胞外多糖和GTF活性的作用；因此LPO-I--H2O2系统在预防龋病方面有着比较优越的应用前景，有望成为一种有效的防龋药物。
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篇8
[关键词] 高效氯氰菊酯; 纳米乳剂; 德国小蠊; 乙酰胆碱酯酶; 谷胱甘肽S-转移酶; P450-O脱甲基酶
[中图分类号] R184.39 [文献标识码] A [文章编号] 1671-7562(2010)04-0329-04
doi:10.3969/j.issn.1671-7562.2010.04.001
Two kinds of formulations of beta-cypermethrin against German cockroaches enzyme activity
FAN Xin-tian1, SHEN Yan2, SHEN Xiao-bing2
(1. Nanjing Railway Centre for Disease Control and Prevention, Nanjing 210042, China;
2. School of Public Health, Southeast University, Nanjing 210009, China)
[Abstract] Objective: To discuss the activity of application cycle of betacypermethrin nanoemulsions, betacypermethrin ordinary emulsion on resistancerelated enzyme of German cockroaches. Methods: Microdrip method for application German cockroaches with disposable medicine for 18 days of application as a cycle, activity trends was measured at different times after druging German cockroaches. Related activity of German cockroaches was measured by spectrophotometric determination. The relationship between application cycle of betacypermethrin nanoemulsion or betacypermethrin ordinary emulsion and enzyme activity was analysed with contour analysis. Results: The contours of acetylcholinesterase (AchE), glutathione Stransferase (GST)and cytochrom P450O systemactivity of German cockroaches were not parallel between betacypermethrin nano emulsion group and beta-cypermethrin ordinary emulsion group (F values were174.025, 1 017.969 and 1 364.271, all P
[Key words] betacypermethrin; nanoemulsion; German cockroaches; acetylcholine esterase; glutathione Stransferase; cytochrom P450-O systemactivity
从以往研究中我们得出这样的结论:德国小蠊酶活性改变不但与杀虫剂的种类和施药浓度有关,还与杀虫剂施药周期长短有关[1-2]。因此,有必要就施药周期对德国小蠊体内抗性相关酶活性的影响进行研究分析。这样才能更好地了解纳米乳剂和普通乳油对德国小蠊的解毒酶的毒作用机制。
1 材料与方法
1.1 试剂
TritonX100:上海市化学试剂厂产品;对硝基苯甲醚(P-NA)、对硝基酚:北京育才精细化工厂产品;碘化硫代乙酰胆碱、5,5′-二硫双硝基苯甲酸(DTNB): Sigma 公司产品;还原性谷胱甘肽(GSH):华美生物工程公司产品;十二烷基硫酸钠(SDS)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二硫苏糖醇(DTT)、2,4-二硝基氯苯(CDNB):上海市试剂一厂产品;还原型辅酶Ⅱ(NADPH):上海Roche公司产品;苯甲基磺酰氟(PMSF):南京生兴技术公司产品;对硝基苯磷酸二钠、考马斯亮蓝:上海化学试剂站分装厂 Fluka 公司产品;95%高效氯氰菊酯原粉:江苏省农药研究所南京农药厂;2.85%高效氯氰菊酯纳米乳剂:原液由本中心自行研制,乳液呈淡黄色、外观透明均匀、流动性好,试样装瓶密封,于室温下长期静置存放,在自然状态下外观透明、无沉淀或分层,流动性和乳化性能均无变化。纳米乳剂平均粒径为11.2 nm。稀释液使用时现配;其它试剂均为国产分析纯或化学纯。
1.2 供试虫源
德国小蠊由江苏省疾病预防控制中心昆虫饲养室提供,为敏感株系的德国小蠊。
1.3 施药
对羽化后的健康德国小蠊的成年雄虫以微量进样器一次性以1 μl给药,保证在最短的时间内点药,将点药时间差造成的酶活性的差异降到最低。点滴0.000 1%(W/V)的高效氯氰菊酯普通乳剂(用CP级丙酮稀释)或0.000 1%(W/V)的高效氯氰菊酯纳米乳剂(用水稀释)于试虫胸腹背板上,使死亡率
1.4 生存情况观察
观察给药后德国小蠊的生存情况,取走死亡的德国小蠊,并分别于给药后第1、2、3、4、8、13、18 天,每天取30只小蠊进行酶活性检测。加上施药后正常死亡的德国小蠊数10只以及对照组的10只,所以一个施药周期的样本量达到230只就可保证实验正常进行。
1.5 酶活性的测定
酶活性的测定均在反应量和反应时间呈直线关系的区段内进行。生成物的生成速度可反映酶活性,在反应量和反应时间呈直线关系的区段内,生成物的生成速度是指单位时间内每毫克蛋白对应产物的增加量。其中生成物是指各种检测酶在一定反应体系中生成的化学物质,对应产物是指具体检测酶相应的反应产物。
1.5.1 酶源制备
1.5.1.1 乙酰胆碱酯酶(AchE)酶液制备 德国小蠊施药后禁食24 h,用流动的蒸馏水冲洗2 min,然后放在滤纸上吸干,取头部,加磷酸盐缓冲液(pH 8.0,1/15 mol・L-1,含有0.5%的TritonX-100),冰浴匀浆,然后再以4 000 r・min-1(离心半径为5 cm)离心15 min,取上清液作酶液。
1.5.1.2 谷胱甘肽-S-转移酶(GST)酶液的制备 德国小蠊施药后禁食24 h,用流动蒸馏水冲洗2 min,然后放在滤纸上吸干,在4 ℃下解剖,去掉消化道中的食物,用中肠制备酶液。于磷酸盐缓冲(pH 6.5,0.1 mol・L-1)中冰浴匀浆,在10 000 r・min-1(离心半径为5 cm)离心15 min后,取上清液作酶液。
1.5.1.3 P450-O脱甲基酶酶液的制备 德国小蠊施药后禁食24 h,用流动的蒸馏水冲洗2 min,然后放在滤纸上吸干,在4 ℃下解剖,去掉消化道中的食物,用中肠制备酶液,加磷酸盐缓冲液冰浴匀浆(pH 7.8,0.1 mol・L-1,含1 mmol・L EDTA、1 mmol・L-1 DTT、1 mmol・L-1 PMSF),再以10 000 r・min-1(离心半径为5 cm)离心15 min后,取上清液作酶液。
1.5.2 酶活性的测定
1.5.2.1 AchE活性的测定 按Groun改进的Ellman方法,反应体系终体积为0.2 ml,100 μl的1/15 mol・L-1 pH 8.0的磷酸盐缓冲液,50 μl的0.75 mmol・L-1底物(碘化硫代乙酰胆碱),50 μl酶源(调整蛋白含量在40～80 μg・ml-1),30 ℃反应15 min,加入1.8 ml DTNB试剂,在412 nm波长下进行比色测定。
1.5.2.2 GST活性的测定 将100 μl酶液加入至反应体系中:磷酸缓冲液(pH 6.5,0.1 mol・L-1)2.5 ml,还原型GSH(100 mmol・L-1)0.1 ml,CDNB丙酮液(50 mmol・L-1)20 μl。混合均匀置于25 ℃条件下保温20 min后,加入0.5 ml SDS(2.5%)混匀,放置稳定10 min后,用紫外分光光度计于340 nm下,每隔1 min记录1次光密度值,共记录3 min。取3 min内光密度变化值计算反应速度,以反应速度表示酶活力[mOD・(mg・min)-1]。
1.5.2.3 P450-O脱甲基酶活性的测定 在96孔酶标板中每孔加入100 μl 2.0 mmol・L-1P-NA,10 μl 9.6 mmol・L-1NADPH和90 μl酶液,用酶标仪在412 nm波长下,每隔25 s记1次光密度值,共记录10 min。酶促反应阶段的温度为30 ℃。取光密度值0～0.2范围之间的数据计算反应速度,以反应速度表示酶活力[nOD・(mg・min)-1]。
1.5.3 蛋白浓度的测定
按Bradford方法,取0.1 ml酶液,加入5 ml考马斯亮蓝,在595 nm处测OD值,在标准曲线上查得其对应的蛋白浓度。1.6 统计学处理
数据以x±s表示,采用SPSS 13.0软件进行重复测量资料的方差分析,检验水准为0.05。
2 结果与分析
2.1 高效氯氰菊酯纳米乳剂与普通乳剂的施药周期对德国小蠊AchE影响的比较
高效氯氰菊酯纳米乳剂组的AchE活性随施药时间延长呈抑制趋势,且与对照组酶活性经Dunnetts t检验均有统计学差异;而高效氯氰菊酯乳油组的AchE活性施药后也呈现出受抑制表现。采用SPSS 13.0软件按施药类型分组作重复测量资料的方差分析,对处理因素主效应(施药)进行分析结果可推断:高效氯氰菊酯纳米乳剂和普通乳油施药后的AchE活性变化是有差异的,即变化趋势不同(F=174.025,P
2.2 高效氯氰菊酯纳米乳剂和普通乳剂的施药周期对德国小蠊GST影响的比较
高效氯氰菊酯纳米乳剂对GST活性的抑制作用于第2天时达最大,随着施药周期延长酶活性呈现不稳定性的抑制状态;而高效氯氰菊酯乳油组GST的活性于施药后第2天抑制作用达到最大,而后逐渐恢复。采用SPSS 13.0软件按施药类型分组作重复测量资料的方差分析,对处理因素主效应(施药)进行分析结果可推断:高效氯氰菊酯纳米乳剂和普通乳油施药后的酶活性变化是有差异的,即两种剂型对德国小蠊GST活性的影响趋势不同(F=1 017.969,P
2.3 高效氯氰菊酯纳米乳剂和普通乳剂的施药周期对德国小蠊P450-O脱甲基酶影响的比较
施药第1天纳米乳剂组的P450-O脱甲基酶的活性即被抑制,而后稍有恢复,第3天又下降,呈现波动性抑制;而乳油组P450-O脱甲基酶的活性,施药后第4天受抑制作用最强。采用SPSS 13.0软件按施药类型分组作重复测量资料的方差分析,对处理因素主效应(施药)进行分析结果可推断:高效氯氰菊酯纳米乳剂和普通乳油施药后的P450-O脱甲基酶活性变化是有差异的,即变化趋势不同(F=1 364.271,P
3 讨 论
昆虫解毒酶能力的增强被认为是最普遍的抗性机制。解毒酶系中的酯酶、GST在某些情况下也是重要的抗性机制[3-4],曾晓等[5-6]的相关研究结果也证明了这一点。而拟除虫菊酯类杀虫剂的作用普遍认为主要是由于直接同神经膜上钠离子通道相互作用的结果。一些学者也认为这类杀虫剂同时也作用于其他的靶标位点,如Ca2+-2ATP酶、烟碱型乙酰胆碱受体等[7-10]。
而GST活性的升高势必造成德国小蠊对拟除虫菊酯类杀虫剂的耐药力增强和抗药性水平升高。不同浓度的高效氯氰菊酯引起德国小蠊GST活性的时序变化提示,在使用拟除虫菊酯类杀虫剂的过程中,必须考虑由此引起的德国小蠊耐药力变化问题,应合理控制用药浓度和科学制定施药时间,延缓德国小蠊抗药性的出现和延长杀虫剂的使用寿命。高效氯氰菊酯纳米乳剂施药后AchE活性出现反复波动,可能是由于纳米乳剂中含有高分子化合物[11]TritonX-100,纳米乳剂的有效成份高效氯氰菊酯被TritonX-100、SDS(表面活性剂)和无水乙醇(助乳化剂)包裹,施药后纳米乳剂中的有效成分必须透过包裹层逐步释放出来,因此释放缓慢,酶活性出现间断性抑制,从而表现为酶活性反复出现波动。纳米乳剂施药后GST活性也呈现出波动性抑制,且在施药周期内酶活性恢复状态较明显,提示小剂量多次接触纳米乳剂可能会使德国小蠊产生抗药性。P450-O脱甲基酶也出现和AchE、GST类似的酶活性波动性抑制情况,可能都是纳米乳剂的缓释效应,但其酶活性在第18天时受抑制作用仍较强,提示此种酶的恢复或改善作用较慢。
高效氯氰菊酯普通乳剂施药后AchE和GST都是先抑制而后酶活性逐渐恢复,虽然在施药周期内还未恢复至正常水平,但从恢复趋势可看出,若延长施药周期,可能就会恢复至正常酶活性水平。说明低剂量多次接触高效氯氰菊酯普通乳剂,AchE和GST酶活性会受高效氯氰菊酯普通乳剂诱导合成,造成其酶量恢复、受抑制的程度改善,从而降低德国小蠊对高效氯氰菊酯普通乳剂的敏感性。普通乳剂施药后GST在施药周期中期出现诱导现象可能是由于施药浓度(0.000 1%)较低,不能完全抑制酶活性,反而引起相关酶被激活活性升高。有研究表明抗性小菜蛾GST酶的活性明显高于敏感品系[12]。
综上所述,随施药时间的延长,高效氯氰菊酯纳米乳剂、普通乳剂对德国小蠊各种抗性酶活性呈现不完全相同的作用方式。
[参考文献]
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篇9
“我对感情非常认真，一共谈过的恋爱，一只手都能数得了的。”
我们似乎很难通过媒体将邓紫棋的性格具象化。在网络上，关于她的种种描述极易勾勒出一个年轻气盛个性乖张的蹿红偶像轮廓。而在接触过她的部分记者口中，她又是热情善谈、周到有礼的优质艺人。采访当天，邓紫棋比原定的时间晚来了一小会儿。在等待她到来的间隙，工作人员提前为她准备了一杯温水和几块糖果，为了怕水冷掉，工作人员还贴心地往杯口上铺了一层纸巾。这个容易被忽略的细节在随后的采访中被邓紫棋捕捉到，她告诉本刊记者最近让她有所触动的事情：《Queen of hearts》演唱会广州站的数度泪崩，看《美女与野兽》时被爱感动得泪流不止，随后，她指了指自己眼前的这杯水，“你会感觉到有人在想着我，在某一个时候ta想到了我，就这么细微的一个感觉，其实就已经是最重要的那些事情。”
邓紫棋自认是个对爱敏感的人，至今她还会每天写日记，日记里是“完全无过滤的，会很傻也很珍贵的自己”，遗忘掉某些重要瞬间被她视为一场场小小的“个人死亡”。一些灵感和感悟也被邓紫棋融入她演唱会中。在她近期巡回的《Queen of Hearts》演唱会中就有这样一个环节：邓紫棋鼓励那些暗恋的人在摄像机和一万两千人面前向自己喜欢的人表白，“那个画面是很有爱。”但矛盾的是，@个在镁光灯下看上去特别放得开的姑娘却说自己在生活中不敢表达爱。很多她在言语上表达不了的事情她会通过写歌来表达，比如暗恋，又比如分手都能在她的歌里寻觅到痕迹。“像《睡公主》，或者是《我的秘密》，那些全部都是在我暗恋的期间写的一些歌，因为我不敢说，就算人家告白了，问我是什么感受，我都只是跟他说，什么什么歌你去听。”
邓紫棋言谈中的含蓄和羞涩跟外界描摹的那个绯闻缠身的她有着明显的分歧。关于爱情，她对另一半有着巨大的包容和近乎苛刻的要求：完全的坦诚。这意味着没有秘密和自我的完全袒露，“什么开心不开心，破碎、黑暗、阳光，任何的一面你们都能够在彼此面前表露出来。”至今邓紫棋都不能接受娱乐八卦将她形容为把爱情用来炒作的人，她语气严肃地为自己辩解道：“我对感情非常认真，一共谈过的恋爱，一只手都能数得了的。”甚至此前在演唱会上宣布在结婚前都不会透露感情生活。本次采访结束后的数天，有网友曝出邓紫棋在日本街头同一位白衣男子牵手逛街，举止亲昵，而邓紫棋回应绯闻时带着自我调侃：把我的腿拍粗了。这或许就是邓紫棋现在的态度，可以拿自己的身材和衣着大肆自嘲，但对于感情还是小心保留。 负面新闻消耗才华？
“如果你不想去分享自己的经历的话，那你的作品是没有意义的。”
邓紫棋自己回忆，她的红是始于2014年1月在《我是歌手》的舞台唱完《泡沫》之后。但红给她带来更细微感受的是她的另一首粤语歌曲《喜欢你》，“你到哪里唱这首歌，台下无论讲不讲广东话，他们都可以唱到所有的歌词。”但还没过半年，本被寄予飞升“未来乐坛天后”厚望的邓紫棋遭遇了一波黑料的历劫，伴随着一系列的炒作恋情、第三者、耍大牌事件的频频曝光，邓紫棋陷入了负面新闻的泥淖之中。邓紫棋还记得同年5月自己在演唱会上台前突然被网络暴力摧垮的心情，“上台前那一刻我还一直在哭，觉得为什么那么多人黑我？”红的爆发和黑的反噬都比她想象中快和迅猛。
篇10
[关键词] 诺和灵；二甲双胍；2型糖尿病；超敏C反应蛋白；临床观察；效果
[中图分类号] R587.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）02（b）-0067-02
Clinical effect and hs-CRP changes of Novolin 30R combined with Metformin in the treatment of patients with type 2 diabetes
XU Jianfang
Department of Internal Medicine, Xinteng Hospital of Xiuzhou District in Jiaxing City, Zhejiang Province, Jiaxing 314015, China
[Abstract] Objective To study clinical effect and hs-CRP changes of Novolin 30R combined with Metformin in the treatment of patients with type 2 diabetes, for accumulating clinical experience and directing clinical work. Methods 170 patients of type 2 diabetes were divided into two groups. The observation group (85 cases) was treated with Novolin 30R combined with Metformin. The control group (85 cases) was treated only by Novolin 30R. The effects and impacts on hs-CRP of the two groups were observed. Results The blood sugar was controlled well in both groups. But the everyday dosage of Novolin 30R was lower in observation group than in the control group [(35.30±4.14) U vs (41.24±5.31) U] （P ＜ 0.05）. The change value of hs-CRP was obviously higher in the observation group [(4.83±1.49) ng/L] than the control group [(1.17±0.68) ng/L]. Conclusion The treatment of Novolin 30R combined with Metformin can increase the clinical effect, decrease the expression of hs-CRP, is worthy to be appilied in patients with type 2 diabetes.
[Key words] Novolin 30R; Metformin; Type 2 diabetes; Hs-CRP; Clinical observation; Effect
2型糖尿病是危害人类健康的重大疾病之一，笔者在治疗中发现，应用磺酰脲类药物治疗后，患者会出现继发性失效。继发性失效是指磺酰脲类降糖药治疗初期能有效控制血糖，长期服用后疗效持续下降，致血糖不能控制[1]，因此如何选用最佳方案是临床医生治疗的重要课题。近年有研究认为，糖尿病患者血清中急性时相蛋白的超敏C反应蛋白（hs-CRP）表达升高[2]，并可能在糖尿病的发生发展中具有重要作用。笔者收集2型糖尿病患者，应用诺和灵联合二甲双胍进行治疗，观察疗效及对血清中hs-CRP的改变，以期为临床工作提供理论支持。现报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集2009年11月～2011年12月确诊为2型糖尿病的患者。患者均有典型糖尿病症状（多尿、多饮和不能解释的体重下降）者，任意血糖≥11.1 mmol/L或空腹血糖≥7.0 mmol/L。排除标准：①伴有并发症的患者；②妊娠及哺乳的妇女；③有严重内脏器官疾病的患者；④伴有感染的患者。本组共观察170例糖尿病患者，其中，男98例，女72例；年龄34～68岁，平均46.5岁；体重49～98 kg，平均76.5 kg。在实验设计时依随机原则分为两组，观察组85例，其中，男50例，女35例；年龄34～66岁，平均46.3岁；体重49～91 kg，平均76.3 kg。对照组85例，其中，男48例，女37例；年龄34～68岁，平均46.7岁；体重49～98 kg，平均76.7 kg。两组在性别、年龄、体重及病史等相关因素的比较中，差异无统计学意义（P ＞ 0.05），具有可比性。
1.2 方法
患者均于治疗前、治疗4周后次日空腹抽取静脉血进行hs-CRP的检测。hs-CRP的检测应用免疫比浊法，均由同一检验师进行操作，严格质控。本实验选用药物为丹麦诺和诺德公司的诺和灵30R，血糖测定采用上海强生血糖仪。对照组单纯应用诺和灵30R进行治疗，于餐前30 min给药，观察组在此基础上加用二甲双胍口服，每日1 500 mg，治疗期间观察血糖变化，适时调整诺和灵30R的用量。用药4周观察结果。
1.3 统计学方法
统计学分析应用SPSS 13.0软件，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，以P ＜ 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组疗效及诺和灵用量比较
两组均能很好地控制血糖，并能有效降低糖化血红蛋白。但是观察组每天诺和灵的用药量明显低于对照组[（35.30±4.14）U vs （41.24±5.31）U]（t = 5.40，P ＜ 0.05）。
2.2 两组治疗前、后血清中hs-CRP的含量比较
观察组与对照组患者治疗前血清中hs-CRP的含量差异无统计学意义（P ＞ 0.05），具有可比性。两组患者在治疗后血清中hs-CRP的含量均下降，但观察组患者血清中hs-CRP含量的下降值明显高于对照组（t = 4.03，P = 0.030 4）。见表1。
表1 两组治疗前、后血清中hs-CRP的含量比较（x±s，ng/L）
3 讨论
糖尿病是危害人体健康的严重疾病，有效地控制血糖并保持血糖的平稳是减少糖尿病各种并发症，从而提高糖尿病患者生活质量的唯一方法[3-4]。有研究认为，2型糖尿病达到诊断时β细胞的功能已丢失达50%左右[5]。二甲双胍是双胍类降血糖药的代表性用药，主要作用是延缓葡萄糖由胃肠道的摄取，通过提高胰岛素的敏感性而增加外周葡萄糖的利用，以及抑制肝、肾过度的糖原异生而起到降糖作用。而且二甲双胍还可以增加胰岛素受体的数量和亲和力，改善肌肉、脂肪组织胰岛素受体酪氨酸激酶活性[6]，提高组织对胰岛素的敏感性，增强内源性胰岛素活性，缓解体内的高胰岛素血症状态，与外源性胰岛素联用，可以有效控制血糖，减少胰岛素的用量[7]。诺和灵30R是通过基因重组技术利用酵母生产的预先混合型的生物人胰岛素，含30%可溶性胰岛素和70%低精蛋白锌胰岛素混悬液，它与人体产生的胰岛素抗体，能有效解决继发性失效的问题[8-9]。二者联合应用，可以加强诺和灵的降糖作用，并减少诺和灵的用量。
本文结果显示观察组与对照组的治疗方法均能较好的控制血糖，但观察组诺和灵的用量明显低于对照组，且均能有效调节机体的糖化血红蛋白的含量，临床价值明显。二甲双胍能增加肝细胞胰岛素受体的酪氨酸激酶的活力，增加胰岛素抵抗患者脂肪细胞的IR与胰岛素的结合力，在肌肉水平能增加IR的数量、亲和力、IR酪氨酸激酶的活性。二甲双胍可以作用于肝脏、骨骼肌，改善胰岛素的抵抗。早期应用诺和灵是保护并恢复胰岛β细胞分泌功能的重要措施，加用二甲双胍除了可增加无氧酵解、降低肝糖输出等抗血糖作用外，还可降低游离脂肪酸，改善胰岛素抵抗，增加周围组织对胰岛素的敏感性。本实验结果显示，观察组对患者血清中hs-CRP表达的下调作用明显，显示在治疗过程中使糖尿病患者血清中炎性介质减少，其对减少相关并发症、阻断病情快速进展均有重要价值。
综上所述，诺和灵联合二甲双胍治疗2型糖尿病，效果明显，并能减少诺和灵用量，调节血清中hs-CRP的表达，临床可以应用。
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