十八大公报范文

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篇1

关键词：大坝工程；质量控制

中图分类号：O213.1 文献标识码：A 文章编号：

0前言

大坝工程是水利水电的基础工程，对水利水电投入生产后的安全与稳定起着非常重要的作用，因此确保大坝工程施工质量是非常必要的。因此在大坝施工全过程中应采取有效的措施，对施工全过程进行控制，确保施工质量达到预期的质量目标，为投入生产后的可靠运行奠定基础。

1制定水利水电大坝工程施工质量管理措施

针对大坝工程实际建立健全质量保证体系，严格按质量保证体系要求进行施工，根据分工负责、互相协调的管理原则，层层落实责任、风险和利益，做到各司其职、各负其责，使工程全过程、全方位处于质量受控状态。认真贯彻“预防为主”和“事先把关”的质量管理方针，调动一切积极因素，充分发挥项目部质安部门专职质检工程师的作用，以工序质量控制为核心，通过设置工序预控点，进一步强化工序质量的自检、互检和交接检查的管理，做到自检和专检相结合，普检与抽检相结合，确保严格按照施工图设计和施工规范、规程的要求组织施工，把各种可能发生的事故消灭在萌芽状态。配齐满足工程施工需要的人力资源和设备资源。有针对性地组织各类施工人员学习，进行必要的施工前岗位培训，以保证工程施工的技术要求，特殊工种作业人员须持有效上岗操作证，技术人员、组织管理人员将熟悉本工程的技术、工艺要求，了解工程的特点和现场情况，以确保工程施工能正常运转。保证施工中的资料齐全，根据工程验收和公司质量体系对工程竣工资料和施工管理控制资料的要求，做好各类资料的收集、保存、归档工作，保证文件资料控制的有效性和可追溯性，确保工程竣工资料的准确性、及时性和完整性。合理的施工进度也是保证工程质量的必要手段之一，对进度进行合理的计划和实施，确保实现优质、高效、低成本的目标。加强施工过程的试验与检验也是确保水利水电大坝工程质量的关键。

2完善水利水电大坝工程施工的技术措施

认真学习、领会设计意图、技术标准、施工规范，优化施工方案。以优化的施工方案要求，进行设备选型，确保进场设备的先进性，以先进的施工设备保证工艺的实施，以科学的施工工艺保证工程质量目标的实现。做好图纸会审及技术交底，施工前对会审无问题的施工技术资料按标准要求加盖“有效文件”、“受控文件”印章，以防图纸等资料误用，对所有施工人员将进行书面技术交底，使之明确标准、操作规范、注意事项等，并落实在施工全过程中。严格按程序施工，严格执行开工报告制度、方案审批制度、隐蔽工程检查制度、变更设计批复制度。不得违背施工程序，超越施工权限，自行安排施工。对关键工艺、工序将有技术人员跟班作业，指导、督察，将设主要负责人带班，使质量工作的每一环节落到实处。测量，根据设计图纸给定的测量基线和坐标，利用全站仪、经纬仪进行定位和施工放样，利用水准仪进行标高控制，坚持测量复核制度，不经换手复核签字的测量资料不用于指导施工。做好水泥、砂浆、砼、钢材、石料、砂、碎石等的取样试验，确保材料及配合比质量。根据工程的具体要求和特点，组织专业技术人员编写具体的施工组织设计，严格按照公司质量体系程序的内容，编写施工计划、优化施工方案，确定适用、先进的施工设备并落实配备，施工过程中着重控制手段，检验设备、辅助装置、资源（包括人力）以达到规定的质量要求，并根据施工技术要求，对各重要工序，将分部分项制定详尽的施工方案，编写施工工艺，以保证该工程的质量达到要求。若工程施工时因客观原因发生变化，及时对已制定的施工方案和有关程序进行修订和变更，并严格按照质量体系控制程序的要求，报送有关部门论证审批后方可实施，确保程序的科学性和可行性，并做好变更后的标识和记录工作。开工前做好各部位、各工序的技术交底工作，确保施工操作的准确性和规范性。

3做好水利水电大坝工程施工全过程的质量控制

围堰施工，按监理人批准的施工图纸进行围堰和导流建筑物的施工，围堰施工的上升速度确保满足安全渡汛标准及挡水的施工断面要求，并保证围堰的施工断面在各种运行工况下处于稳定和安全状态。施工时，注重基础岩石开挖爆破对围堰安全的影响，确保围堰内侧与开挖区留有一定的距离。土方开挖，坝基、岸坡土方开挖，从上至下分层分段依次进行，施工中随时作成一定的坡势，以利排水，开挖过程中尽量避免边坡稳定范围内形成积水。对坝基和岸坡易风分化崩解的土层，开挖后不能及时回填的，采取预留保护层的方法，机械开挖土方时，实际施工的边坡坡度适当留有修坡余量，再人工修整，以满足图纸要求的坡度和平整度。在开挖过程中，随挖随校核测量开挖平面位置、水平标高、控制桩号、水准点和边坡坡度是否符合施工图纸要求，在平地开挖时，在开挖区周围设挡水坝和开挖周边排水沟及集水坑抽水等措施，阻止外水流入场地，并有效排除积水。石方开挖，石方开挖前，将山坡上所有危石及不稳定岩体撬挖排除，开挖采用自上而下，对高度较大的边坡，分梯段开挖，河床部位开挖深度较大时，采用分层开挖方法，梯段高度根据爆破的方式，施工机械性能及开挖区布置等因素确定，垂直边坡梯段高度不大于10m，随高开挖高程下降，及时对坡面进行测量检查以防偏离设计开挖线，避免形成高边坡后再进行处理，开挖边坡的支护在分层开挖过程中逐层进行，上层的支护保证下一层的开挖顺利进行。基础开挖，对邻近水平建基面，预留保护层，保护层厚度由现场爆破试验确定，并采用小炮分层爆破的开挖方法。砼工程质量保证措施，模板经过结构设计，保证有足够的强度和刚变，装拆方便，能承受砼浇筑和振捣的侧向压力和振动力，防止产生移位，确保砼结构外形尺寸准确，并有足够的密封性，以免漏浆。钢筋作业包括钢筋、钢筋网、钢筋骨架和锚筋等的制作加工、绑焊、安装和预埋工作。钢筋采购必须有出厂质量保证书，没有出厂质量保证书的钢筋，不能采购，对使用的钢筋，将严格按规定取样试验合格后方能使用。钢筋焊接，操作人员将持证上岗，焊接头经过试验合格后，才允许正式作业，在一批焊件中，进行随机抽样检查，并以此作为加强对焊接作业质量的监督考核。气压焊施焊前，钢筋端面应切平，钢筋边角毛刺及端面上的铁锈、油污等清除干净，并经打磨露出金属光泽。钢筋绑扎完毕，经过监理工程师验收合格后，方可浇筑砼，在砼浇筑过程中，将派钢筋工值班，以便及时处理在施工过程中发生的钢筋及预埋移位等问题。砼的质量保证措施，根据砼等级要求进行砼配合比试验，并将试验成果申报监理工程师审批，监理工程师同意后方可使用，使用过程中，将严格按配合比执行。混凝土浇筑作业应连续进行，如因故发生中断，其中断时间应小于前次混凝土的初凝时间，超过中断时间，则按工作缝处理，并立即向监理工程师报告。在浇筑分层的上层砼浇筑前，对下层砼的施工缝面，按监理人批准的方法进行冲毛或凿毛处理。为避免砼面板表面发生干缩现象，采取保温、保湿措施，温度控制措施，面板砼浇筑时，选择在相对的低温时段，砼终凝后铺盖草袋。保持长流水养护直至水库蓄水为止。

篇2

[关键词] 表没食子儿茶素没食子酸酯；HeLa；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶

[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）08（c）-0029-05

Effects of EGCG on cell apoptosis in cervical cancer HeLa cells and expression of bcl-2/bax

QIN Jing HONG Li

The Second Department of Gynecology， Renmin Hospital of Wuhan University， Hubei Province， Wuhan 430060， China

[Abstract] Objective To explore the effect of EGCG on cell apoptosis in cervical cancer line HeLa cells and expression of bcl-2/bax. Methods HeLa cells were cultured in vitro， and they were divided into two groups， including control group and experimental group. The control group was received only the culture medium， and the experimental group was treated by EGCG at different concentrations for 24、48、72 h respectively. The cell survival of the two groups were determined by the MTT method； the changes of cell morphology were observed by inverted microscope； apoptosis and cell cycle were analyzed by flow cytometry； the relative activity of caspase-3 was monitored by spectrophotometer； the changes of protein expression of bcl-2 and bax were detected by Western blot. Results From the data of MTT， the cell proliferation of human cervical cancer HeLa cells was inhibited by EGCG （10-100 μg/mL） in a dose-dependent and time-dependent manner. Typical apoptosis morphology of HeLa cells was observed by inverted microscope. Flow cytometry assays showed that EGCG significantly induced apoptosis in HeLa cells. 48 h after treated with EGCG （20， 40， 80 μg/mL）， the apoptosis rate of the experimental group were increased gradually， they were 12.4%， 23.4%， 35.4% respectively， higher than that of the control group （3.3%） obviously. Flow cytometry assays demonstrated that EGCG blocked the cell cycle at the G1 to S transition and decreased the percentage of S-phase cells. The relative activity of Caspase-3 of experimental group were （1.36±0.07）， （1.85±0.06） and （2.45±0.07） respectively， higher than that of the control group （0.93±0.06）， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The data of Western blot showed that EGCG down-regulated bcl-2 and up-regulated bax in a dose-dependent manner. Conclusion EGCG can inhibit the proliferation of HeLa cells and promote apoptosis， and the anticancer effect of EGCG may be associated with the down regulation of bcl-2 expression and up regulation of bax expression， as well as the increase of relative activity of Caspase-3. EGCG may be a promising antitumor agent for cancer treatment.

[Key words] EGCG； HeLa cell； Caspase-3

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，其在全球恶性肿瘤中发病率高居第2位，病死率居第4位，而在发展中国家其发病率和病死率均高居第2位，全球每年有超过25万患者死于宫颈癌[1]。近年来，宫颈癌发病率趋于年轻化，严重危害着妇女的健康。宫颈癌患者死亡的主要原因是肿瘤复发和转移。化疗药物在一定程度上能抑制肿瘤细胞增殖和转移，但传统的化疗药物毒性大且由于肿瘤耐药性，临床上患者疗效并不理想，且部分患者难以耐受。因此从天然植物中寻找高效低毒的具有抗肿瘤活性的成分成为了国内外研究热点。绿茶是公认的健康饮料，近年来发现其富含有抗肿瘤成分，包括表儿茶素（epicatechin，EC）、表儿茶素没食子酸酯（epicatechin gallate，ECG）、表没食子儿茶素（epigallocatechin，EGC）和表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）。在这些茶多酚中，EGCG是含量最高且药理活性最强的单体，其具有广泛的药理活性，包括抗肿瘤、降血压、降脂、降血糖及抗氧化等。研究证实，EGCG对肝癌、乳腺癌、前列腺癌等多种肿瘤均有拮抗作用[2-5]。本研究旨在探讨EGCG对宫颈癌HeLa细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响，以期为临床应用提供理论研究基础。

1 材料与方法

1.1 材料

人宫颈癌细胞系HeLa细胞购自中国科学院上海细胞库；EGCG购于Sigma公司（E4143，纯度≥95%）；胎牛血清购自Invitrogen公司；RPMI1640培养液购于杭州四季青生物材料研究所；噻唑蓝（MTT）试剂盒购于武汉谷歌生物科技有限公司；AnnexinV/PI细胞凋亡检测试剂盒购于Bender公司；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-3）活性检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司。Bcl-2、bax抗体购于美国Cell Signaling Technology公司；辣根酶标记兔抗山羊IgG购自武汉博士德生物科技有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养 将HeLa细胞培养于含10%小牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素的PMI1640培养液中，置于37℃，5%CO2，湿度饱和，培养箱内培养，取对数生长期细胞用于实验。

1.2.2 MTT法检测细胞增殖抑制率 取对数生长期的HeLa细胞，调整细胞浓度，以1×104/mL的浓度接种于96孔板，每孔200 μL，待细胞贴壁后分别加入EGCG终浓度为0、10、20、40、60、80、100 μg/mL的培养液，并设立调零孔。每个浓度设5个复孔，继续培养24、48、72 h，于实验结束前4 h加入MTT试剂20 μL/孔，继续孵育4 h，吸掉上清，加入二甲基亚砜（DMSO）150 μL/孔，摇床上振荡10 min，结晶充分溶解后酶标仪上检测570 nm处的吸光值（A值），细胞增值抑制率=[1-（实验组平均A值-调零孔A值）/（对照组平均A值-调零孔A值）]×100%。

1.2.3 显微镜下观察细胞形态 取对数生长期细胞，调整浓度接种于12孔板中，贴壁后加入EGCG终浓度为0、10、20、40、60、80、100 μg/mL的培养液连续培养24、48、72 h后置于倒置显微镜下观察细胞生长、形态等情况。

1.2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡 将对数生长期细胞以1×106/mL浓度接种于6孔培养板内，贴壁后分别加入EGCG终浓度分别为0、20、40、80 μg/mL的培养液，培养48 h后，收集细胞，离心固定后加入AnnexinV-FITC和PI，室温避光染色。筛网过滤后送流式细胞仪检测。

1.2.5 流式细胞仪检测细胞周期 细胞接种及分组同上，培养48 h后，收集细胞，70%乙醇4℃固定过夜，37℃水浴30 min，加入PI，4℃避光孵育15 min。筛网过滤后流式细胞仪检测。

1.2.6 分光光度法检测Caspase-3活性变化 细胞接种及分组同上，培养48 h后，收集细胞，分别加入预冷裂解缓冲液，冰浴裂解15 min，1200 r/min离心15 min，取上清按试剂盒说明书操作，酶标仪上405 nm测定Caspase-3的酶活性，OD405为样品中Caspase-3催化产生pNA（p-nitroaniline）产生的吸光度，可反映Caspase-3活性强弱。

1.2.7 Western blot检测bcl-2、bax蛋白表达变化 细胞接种及分组同上，处理48 h后收集细胞，参照细胞浆蛋白抽提试剂盒说明书进行操作，提取细胞总蛋白，并测定蛋白浓度，蛋白样品加入1/5体积的5×上样缓冲液，沸水煮沸5 min，根据蛋白浓度以每孔20 μg/孔上样，行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后电转至PVDF膜上，用室温封闭1 h，分别加入1∶1000稀释的兔抗人bcl-2、bax蛋白，4℃过夜。β-actin作为内参，TBST洗膜3次，加入1∶1000稀释的辣根酶标记的兔抗山羊IgG，室温孵育2 h，同样洗膜3次，ECL发光液显色，观察各条带深浅变化。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EGCG对HeLa细胞增殖的影响

如图1所示，EGCG在10～100 μg/mL范围内均可抑制HeLa细胞增殖，且随着EGCG浓度的升高和处理时间的延长，增殖抑制作用也逐渐增强，呈浓度和时间依赖效应。

图1 不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯对HeLa细胞抑制率的影响

2.2 细胞形态观察

显微镜下对照组细胞生长旺盛，折光率较高，胞体较大，成梭形或多边形，胞质均匀透明，几乎无漂浮细胞，且随培养时间的延长形态变化不明显。EGCG处理组的细胞增殖明显受到抑制，且随着药物浓度的增加和处理时间的延长，细胞逐渐变小、变圆、折光率减弱、核浓缩等，部分脱落漂浮于培养瓶中。

2.3 EGCG对HeLa细胞凋亡的影响

流式细胞仪检测结果显示，EGCG能诱导HeLa细胞凋亡。如图2所示，EGCG（浓度分别为20、40、80 μg/mL）处理HeLa细胞48 h后，细胞凋亡率分别为12.4%、23.4%、35.4%，明显高于对照组凋亡率（3.3%）。

A：0 μg/mL；B：20 μg/mL；C：40 μg/mL；D：80 μg/mL

图2 流式细胞仪检测表没食子儿茶素没食子酸酯对HeLa细胞

凋亡率的影响

2.4 EGCG对HeLa细胞周期的影响

流式细胞仪检测细胞周期数据显示，EGCG浓度分别为0、20、40、80 μg/mL处理HeLa细胞48 h后，能抑制HeLa细胞的G1期行进和G1/S转换，S期细胞比例降低，表示EGCG能够阻滞细胞周期。见图3。

A：0 μg/mL；B：20 μg/mL；C：40 μg/mL；D：80 μg/mL

图3 流式细胞仪检测表没食子儿茶素没食子酸酯

对HeLa细胞周期的影响

2.5 EGCG对HeLa细胞Caspase-3活性的影响

对照组HeLa细胞Caspase-3相对活性为（0.93±0.06），实验组（EGCG浓度分别为20、40、80 μg/mL）处理HeLa细胞48 h后，HeLa细胞Caspase-3相对活性分别为（1.36±0.07）、（1.85±0.06）、（2.45±0.07）。与对照组比较，EGCG组Caspase-3相对活性升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。见图4。

与0 μg/mL比较，#P < 0.05

图4 表没食子儿茶素没食子酸酯对HeLa细胞半胱氨酸天冬氨酸

蛋白酶相对活性的影响

2.6 EGCG对HeLa细胞bcl-2、bax蛋白表达的影响

EGCG处理HeLa细胞48 h后，结果显示随着EGCG浓度的升高，bax蛋白表达量也逐渐升高，而bcl-2蛋白表达量逐渐降低，灰度值分析显示，实验组与对照组比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见图5。

A

B

A：Western bloting图；B：bcl-2和bax灰度值分析；与0 μg/mL比较，#P < 0.05

图5 表没食子儿茶素没食子酸酯对HeLa细胞bcl-2、bax表达的影响

3 讨论

细胞凋亡是多细胞机体维持内环境稳定的重要自我调节机制[6]，细胞凋亡与细胞增殖之间的平衡在肿瘤发生发展中具有重要意义[7]，细胞凋亡是程序化、多基因调控的细胞死亡过程，通过诱导细胞凋亡可能是肿瘤治疗最有效的途径之一，因此促进细胞凋亡已经成为抗肿瘤研究的热点。国内外细胞实验和动物实验证实，EGCG在体内外对多种肿瘤细胞的增殖具有抑制作用，并可促进细胞凋亡[8-13]。本研究也发现，EGCG在10～100 μg/mL浓度范围均能抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖，且呈现明显的剂量依赖及时间依赖效应。在倒置显微镜下可见到凋亡细胞的形态；流式细胞仪检测结果显示，EGCG处理HeLa细胞48 h后可诱导凋亡，且随着药物浓度的升高细胞凋亡率亦增加，呈浓度依赖效应。细胞凋亡研究认为，Caspase家族的激活在细胞凋亡过程中起了关键性作用，被认为是诱发凋亡的直接效应物。已发现的Caspase家族有10余种，其中Caspase-3是该家族的重要成员，是细胞凋亡过程中的关键酶。本研究发现，EGCG呈浓度依赖性的增加HeLa细胞Caspase-3相对活性，提示EGCG能抑制细胞增殖，并可能是通过增强细胞Caspase-3活性从而促进细胞凋亡。

为进一步探讨EGCG诱导细胞凋亡，本研究检测bcl-2、bax蛋白表达的变化，研究发现不同EGCG处理后，HeLa细胞bcl-2表达下调，bax表达上调。bcl-2是一种内膜蛋白，主要存在于线粒体、内质网和核膜上，bcl-2在多种肿瘤细胞中表达，能通过增强线粒体膜电位，抑制钙离子释放，阻止核酸内切酶活化，进而发挥抗凋亡作用；bax属于bcl-2家族成员，其与bcl-2作用相反，可直接激活死亡效应因子Caspase或改变细胞膜通透性引起细胞色素C释放某些离子和小分子通过细胞膜，进而促进细胞凋亡。细胞bcl-2和bax比例改变可调节细胞凋亡[14]，当bcl-2占优势时，细胞具有抗凋亡作用；当bax过表达时，细胞容易在诱导剂作用下发生凋亡[15]。

综上所述，EGCG可抑制HeLa细胞增殖并诱导细胞凋亡，其诱导细胞凋亡机制可能是通过上调bax蛋白表达并下调bcl-2蛋白表达，增加细胞Caspase-3活性。

[参考文献]

[1] Jemal A，Bray F，Center MM，et al. Global cancer statistics [J]. CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69-90.

[2] 张金焕，蔡林儿.绿茶提取物茶多酚抗癌作用的研究进展[J].华南国防医学杂志，2012，26（5）：522-523.

[3] 刘晓亮，袁长吉，庄平，等.EGCG对口腔鳞癌细胞增殖及信号传导通路的影响[J].华中科技大学学报：医学版，2013，42（5）：530-534.

[4] 赵刚，李红，史海涛，等.EGCG对肝癌细胞HepG2凋亡及脂肪酸合酶表达的影响[J].西安交通大学学报：医学版，2014，35（2）：245-248.

[5] 邹少娜，林敏，陈波，等.EGCG诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡相关基因的差异表达[J].中国肿瘤临床，2013，40（13）：758-762.

[6] LaCasse EC，Mahoney DJ，Cheung HH，et al. IAP-targeted therapies for cancer [J]. Oncogene，2008，27（28）：6252-6275.

[7] Huang WS，Wang JP，Wang T，et al. ShRNA-mediated gene silencing of beta-catenin inhibits growth of human colon cancer cells [J]. World J Gastroenterol，2007，13（48）：6581-6587.

[8] Van-Aller GS，Carson JD，Tang W，et al. Epigallocatechingallate （EGCG），a major componet of green tea，is a dual phosphoinositide-3-kinase/mTOR inhibitor [J]. Biochem Biophys Res Commun，2011，406（2）：194-199.

[9] Tudoran O，Soritau O，Balacescu O，et al. Early transcriptional pattern of angiogenesis induced by EGCG treatment in cervical tumor cells [J]. J Cell Mol Med，2012，16（3）：520-530.

[10] Wu LY，De L，Watanabe T， et al. Metabolite modulation of Hela cell response to ENOX-2 inhibitors EGCG and phenoxodiol [J]. Biochm Biophys Acta，2011，1810（8）：784-789.

[11] 范丽萍，沈建箴，付海英，等.没食子儿茶素没食子酸酯对人急性单核细胞白血病细胞株U937的作用及机制研究[J].中国实验血液学杂志，2010，18（2）：286-290.

[12] Wang H，Bian S，Yang CS，et al. Green tea polyphenol EGCG suppresses lung cancer cell growth through upregulating miR-210 expression caused by stabilizing HIF-1α [J]. Carcinogenesis，2011，32（12）：1881-1889.

[13] 蒋莎莉，罗朝阳，曹慧秋，等.表没食子儿茶素没食子酸酯对人结肠癌HT-29细胞G1期的阻滞作用[J].现代生物医学进展，2010，10（18）：3438-3442.

[14] Kim KY，Seol JY，Jeon GA，et al. The combined treatment of aspirin and radiation induces apoptosis by the regulation of bcl-2 and caspase-3 in human cervical cancer cells [J]. Caner Lett，2003，189（2）：157-166.