表白情书范文
时间：2023-03-29 23:49:16
导语：如何才能写好一篇表白情书，这就需要搜集整理更多的资料和文献，欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文，供你借鉴。
篇1
清纯
请允许我这么称呼你，凝视着你时，总让我有种错觉，四周是朗朗的星空，而你坐在月牙上泛出银白色的光芒，洒落在每一个角落。来源:
皎洁的月光华丽而明亮，而你举手投足之间竟是满地伤感的气息。
月儿，自从我与你熟识以后我就在心里默念着这个名字，而我的手机里，你所有的来电信息上也赫然显示着“月儿”
来到这个学校本是父母之命，而我自己是想考美术学院的，可是认识你却是改变了我最初的想法，来这个学校不再充满后悔。上天安排我们的相识，对我也是一种眷顾。和你在一起的那段时光，将是我这一生最美的回忆。
大一紧凑的课程把课余时间塞得满满的，但课上你也是一道美丽的风景。你的与众不同让我对你逐渐留意起来，你从不会不像其他女生那样叽叽喳喳，三五成群地跑来串去，更多时间都是趴在桌子上不停地写着，课间也很少出去。总是看见别人还你笔记，然后对于别人的感谢你莞尔一笑。第二排最左边的角落里，那是你的专属座位，后来才知道你不喜欢第一排，但也不喜欢别人挡住你的视线，真是奇怪女孩的思想。你是个文静绢雅的女孩，虽然不是班里最漂亮动人的，但却让人看得有所悸动。你的性格孤僻，很少与人多语，但我能感受到你笑容里的温度。
而我，是整个联大公认的校草，无论是长相还是学业，都是佼佼者。可你却对我视而不见，让我烦躁不安。不清楚是佯装不知，还是根本对我漠视。
开学几个月之久，我们却从未说一句话，擦身而过的时候，我真的很想不小心把你绊倒，不，那样我会心疼的，应该不小心撞翻你手中的书籍，那样我就有借口帮你捡起，有对话的机会就是好的开始啊!可是我却没有那么做，我承认我爱面子，平常都是漂亮女生来主动撞我，接着道歉跟我聊天。习惯于做王子的感觉，而今却只想认识你，了解你，究竟是个怎样的女孩，目光总忍不住锁定在你的身上。
那天是班里的一个活动，男女混合篮球比赛，很幸运的是我们分到了一组。我的篮球技术是公认的，灌蓝高手流行的时候，那群小女生总围着我转，怎么会有樱木花道性格的流川枫呢?高中的我就已经风靡全校了。这小小的比赛怎么能难得了我呢?我们队显胜一筹，我们很自然得说了第一句话!我故意问你的名字，其实很早之前就已经了然于心了。那天晚上，我兴奋得一夜未眠，因为我终于可以理直气壮地跟你交谈打招呼了。
知道你喜欢篮球，我就经常叫上你一起打球，去之前总会让哥们帮我占个球架，然后喊上班里其他男生女生一起玩，大汗淋漓的样子真是舒坦。而你很少出汗，也许还是没有完全放开的缘故。
第一次帮你办事是退票，班级里统一定的火车票，你由于却有个外校同学同行，必须及时退掉然后和你同学一起重买。当你问我退票窗口在哪里时，我很肯定地就应下来了，说陪你一起去，其实我很少买票去外地，更没有退过票，这是难得的与你单独相处的机会啊!于是我问了哥们，并坐地铁，亲自去了趟，熟悉了路段才给你打电话。陪你乘地铁，绕到退票处办事，然后再乘地铁回校，一路上我们无话不谈，突然发现你的性格并不是想象中那么内向自闭。为了答谢我，你是要请我吃麦当劳，而我欣然同意了。不知有没有人说过，你吃东西真的很淑女，开始我以为你只是在男生面前如此细嚼慢咽，仪态大方，后来在食堂偶遇以后才真正知晓原来你一直这样吃饭，而你吃东西的样子一样好看。
常常看到荷花池边你读书的身影。你那柔弱的纤影，总让我心随你动，望着你一汪秋水般灵动闪烁的大眼睛，我似乎可以读出你是个有故事的女孩。总是打声招呼，然后一闪而过。
熟识了以后，渐渐发现你的很多迷糊可爱的一面。原来你是有男朋友的，他在你的家乡——杭州，当你动容的淡淡地描述起他时，我的心在那一刹那被人狠狠地锤了一下，为什么不早点与你相识?为什么我没有出生在西湖?可是我依然泰然自若地面对你。做不成男女朋友，还是做好朋友吧，只怪上天没有安排我们最初的邂逅。
坦然的朋友关系，许多事情来得更轻松自如，但我潜意识里把你放在了好朋友的最上面。
中午的饭堂是最拥挤不堪，人满为患的时刻，为了让你可以不用辛苦地站在旁边看着别人吃完了才有位子，我改变了原先的吃饭时间。我宁愿故作饥饿状提前闪人跑到食堂打饭占位，然后等你迈进食堂的时候，向你挥手，若无其事地说：“真巧，我刚吃完，你坐这吧!先走一步了!”怕你会引来闲言碎语，我从不与你同桌吃饭。
会有女生托你递情书给我，可我却丝毫没有兴趣。我调侃地笑道：“我不喜欢低俗的女子，与其和她们交往浪费时间，倒不如和哥们一起挥洒在球场上!”于是，你更放心地与我相处，无所顾忌地同我开玩笑，我们度过了一个个阳光灿烂的日子。
你住学校，而我走读，每逢梅雨季节，我故意把老妈塞给我的雨伞放在家中，只为下了课向你借伞。在你宿舍楼下等你的片刻，其他女生递来的雨伞都被我拒绝了，我向你嘟囔着：“我可不想欠那些小女生的人情!”
渐渐地，我们更加默契起来。一些大课是几个班合在一起在一个偌大有回音的阶梯教室进行的，我会发短信提醒你帮我占座位。其实我心里清楚你一定不会忘记的，但是那样就可以顺便询问你在做什么，然后引出其他话题。
也许我们太亲密了，超出了友情，变得稍有暧昧。
这都是周围人给予的压力，终于有一天你忍不住发短信问我：“你不会喜欢我吧?”
在反应了三分钟以后，我打下了那一行违心的字：
“当然不了，我们是好哥们啊!只要你不喜欢我就行，哈哈……”
“那我就放心啦~~~”你肯定的回复几乎同步发来，让我大失所望。
而我内心最真实的声音是：当然喜欢了，从第一眼见到就注定了对你情有独钟。对你一见倾心，但是和你现在的关系我很满足，至少可以看着你笑，看着你哭。我明了如果这样发给你，会给你带去困扰，不是我对自己不自信，而是我明白你不是一个对感情说变就变的女子。
你很少哭，偶尔遇到很感人的事情你会眼眶红润，而后坚强的隐忍过去。而那一次，让我无法忘怀，他伤了你的心，而我的心也如刀割一般疼痛。
对于你们的爱情，我很少过问，你偶尔不经意地提到他的名字，看到你妩媚的笑容我的心竟隐隐作痛。但我反复安慰着自己，你幸福就好!然而，你和他的爱情始终是无法延续下去的，从你一次次跟我提起他的频率中就能察觉出来，高中的单纯青涩情感脆弱稚嫩，经不起时间与空间的阻隔。他在城市那边有了新的女朋友，而你们自然而然地成了最熟悉的陌生人。
偶尔看见你眼泛泪光，我真的很想拦你入怀。但我是君子，不能乘人之危，唯一做的只是在网上搜索一些冷笑话，逗你开心，看见你的笑容越来越多，我的心里那块大石头渐渐有了着落。
一切来得太突然，让对感情本来就迷糊不清的你更加惶然，而我在这个时候是你最好的倾诉者。我知道不能乘虚而入，所以迟迟没有表白。
篇2
我爱你！
每天我的动力就是见到你，并和你说说话。
你快回来，好吗？没有你我一人承受不来。你快回来，把我的思念带回来，别让我的心空如大海，好吗？
因为我相信真爱是经得起考验的。
那天我们相识，是在秋雨缠绵的季节里，秋色洒满山间，我在山间欣赏秋叶如血，欣赏秋的丰硕，秋高气爽。
有一座山，名字叫心情，心情种满了相思的树，我的心里种下了对你永不变的爱！
不论天涯海角，只要你需要我的时候，我就会“飞”回你的身边。
我永远爱你。
我爱你，可我不敢说，我怕说了，我马上就会死去，我不怕死，我怕我死了，再没有人像我一样爱你，这首诗是我在一本杂志上抄的，它是那么的吸引人，它的每一句都那么的浪漫，而又那么的简单。每当我想起着首诗时，我就情不自禁地想起了你，你的美丽吸引着我，你的欢笑想是雨后?
炙热之后，心中一片淡漠，瞬间的辉煌并不能带给我刻骨铭心的向往；
好喜欢你揉我头发的感觉，好怀念你那双手的温暖，却不知什么时候，你才会再揉我的头发，再握我的手……
常常想你，在每个深夜里；从没忘记，你和我的约定；依然爱你，在冰天雪地里；永不分离，不管多少世纪。思念着你，我时刻想着你，深爱着你！
世界上绝对没有人比我更爱你了。
你的身影越来越频繁地出现在我的眼前，渐渐地，意如呼吸一般，一秒钟也不中断，弄得我吃不好饭，睡不好觉。
天知道地知道，我爱你。
篇3
我爱你！
当我走进网络的时候，我的心跳加快，当我看到你的出现，我激动万分，当我走出网络，我感觉失意，没有你的日子，我无法度过！
记得那个下雨天/向天空邂逅了闪电/你站在人群中/长发飘呀飘/玫瑰般的脸/心中有了爱的箭……
看着我的眼睛/你不要怀疑我的感情/不是说爱你/就代表了真心/看着我的眼睛/把一切都已经说明/初恋的心情/为你永远不停……
每一次望见你那轻盈的双眼，每一次听到你那美妙的声音，每一次……我爱你！是那么深！你哟永远在我梦里！
在电话中，你纯纯的声音让我幻想我真的是有了可以牵挂可以爱恋的女友了，幻想可以真的有一天见到你，可以在现实中象网上那样随意而自然的交谈说笑，甚至幻想我真的开始了一种幸福。
我找到了可以让我去洗涤心灵的一方净土，可以让我把压抑在现实中的也是最真实的情绪无所顾忌地表白出来，就象大家常说的那样，找到一个寄托，那就是——你！
第一次哭是因为你不在，第一次笑是因为遇到你，第一次笑着流泪是因为拥有你！
假如你是爱的港湾，当所有的小船最终休整好，都要起航的时候。我宁愿放弃远航的收获，飘荡在你的岸边，陪伴你暂时孤寂。
亲爱的，请听我说： "为了你，我可上九天揽月，可下五洋捉鳖！"因为：那"月"是你，那"鳖"也是你！
我渴望黑夜中我睁大双眼，耳边有你温柔的话语在回响；我渴望思念里我丢手在空中，能牵到你跨越千里的深情！
我知道你就是我今生要等的人，所以我要用我的今生来爱你！
在你抑郁的时候，我就是你的开心果。在你忧伤的时候，我愿作你的忘忧树！
爱一个人好辛苦，不知被爱的你是否有心有灵犀？哪怕一句普通话语、一丝安慰动作对我来说倍加珍惜难忘，使我牵肠挂肚！
不知道你今天好不好，我的情况可不妙。只觉得前前后后，左左右右，脑子里里外外，嗡嗡的都是你，你想我吗？
当岁月燃烧我的一切时，不能忘记的是你那一眼的风情；当我合上双眼时，我渴望的仍是你那一眼的风情！
路遥千里，难断相思；人虽不至，心向往之（表白情书 fanwen.chazidian.com）。
篇4
给女朋友表白的情话
1、你离我远吗?一点也不，藏在我的心里呢。
2、看著你的眼，我看见了大海，蓝天;更看到了美丽的未来。
3、纵世间百媚千红，却独爱一种;奈何落花流水情，惟叹相逢恨晚!
4、我有所念人，隔在远远乡。我有所感事，结在深深肠。
5、人生无常，最重要的不是你处的位置，而是你所朝的方向。
6、今天是我们认识的第天，在一起的第天。希望我们能长长久久的。
7、爱上一个人也就爱上了，不需要解释理由。
8、你瘦的时候在我心里，胖了就在里面卡着出不来了。
9、我希望你永远记得我，永远记得我这个人，我曾经在你身边。
10、那些以前说着永不分离的人，早已经散落在天涯了。
11、当你对着我笑的那一刻，我真的很想把全世界都给你!
12、我一觉醒转，你一定就在彼岸沏一壶茶，等一树桃花。
13、两个人在一起就已经很幸福了，别强求太多。
14、听说结婚很便宜，民政局9块钱搞定，我请你吧!
15、爱的真是深，爱的真是真，爱你直到终点是永远不会分。
16、不是除了你，我就没人要了。只是除了你，我谁都不想要。
17、你的眼睛像一颗恒星，撑着黑夜照亮我的生命。
18、一辈子和你在一起，才叫将来;换了别人，那叫将就。
19、你本无意穿堂风，偏偏孤倨引山洪。
20、爱情让我变笨，但是笨一点才显得无比快乐。
21、一花一世界，一叶一追寻，一曲一场叹，一生为一人。
22、对你我一如往昔，对我你今非比。我仍深情似海，你却一变千里。
一天一句告白短情话
1、你在身边 春夏秋冬 你不在身边 四季轮回。
2、我将目不斜视 而且永远如此。
3、我对未来的诸多期待中当然也包括你。
4、我心切慕你如鹿切慕溪水。
5、我一走向你，就感到无限温柔呐。
6、轻轻地，不惊你梦;只愿你，梦中有我。
7、我本来是要行走江湖的，但遇见你我觉得可以先停一停。
8、想见你，在吞云吐月的疾风后，在日复一日的寻常里。
9、你是我一时的冲动，也是我良久的喜欢。
10、何止是野心，我预谋了一辈子的念想，从遇见你开始，不到黄土不死心。
恋爱情话大全短句
不会了解，你不经意的一句话可以影响我一天的心情。
不是我喜欢的样子你都有，而是你所有的样子我都喜欢。
春风十里不如你，梦里梦外来爱你。
此生，你不来，我不老，你若不离我便不弃。
对于世界而言，你是一个人；但是对于我而言，你是我的整个世界。
将你心再加上我的心，就算痛苦滋味也愿意尝。
篇5
记得那个下雨天/向天空邂逅了闪电/你站在人群中/长发飘呀飘/玫瑰般的脸/心中有了爱的箭……
看着我的眼睛/你不要怀疑我的感情/不是说爱你/就代表了真心/看着我的眼睛/把一切都已经说明/初恋的心情/为你永远不停……
每一次望见你那轻盈的双眼，每一次听到你那美妙的声音，每一次……我爱你！是那么深！你哟永远在我梦里！
在电话中，你纯纯的声音让我幻想我真的是有了可以牵挂可以爱恋的女友了，幻想可以真的有一天见到你，可以在现实中象网上那样随意而自然的交谈说笑，甚至幻想我真的开始了一种幸福。
我找到了可以让我去洗涤心灵的一方净土，可以让我把压抑在现实中的也是最真实的情绪无所顾忌地表白出来，就象大家常说的那样，找到一个寄托，那就是——你！
第一次哭是因为你不在，第一次笑是因为遇到你，第一次笑着流泪是因为拥有你！
假如你是爱的港湾，当所有的小船最终休整好，都要起航的时候。我宁愿放弃远航的收获，飘荡在你的表白的话岸边，陪伴你暂时孤寂。
亲爱的，请听我说：“为了你，我可上九天揽月，可下五洋捉鳖！”因为：那“月”是你，那“鳖”也是你！
我渴望黑夜中我睁大双眼，耳边有你温柔的话语在回响；我渴望思念里我丢手在空中，能牵到你跨越千里的深情！
我知道你就是我今生要等的人，所以我要用我的今生来爱你！
在你抑郁的时候，我就是你的开心果。在你忧伤的时候，我愿作你的忘忧树！
篇6
评书大师刘兰芳的大弟子,在全国首创个人表演品牌――情景书。
跟刘朝电话沟通采访事宜,刚一声“喂”,就让人浑身为之一震。声音饱满、中气十足,字字清晰有律动――不愧是刘兰芳大师的大弟子。而刘朝本人,却如她的名字一样朝气蓬勃。一双灵动的杏眼,高兴了还会摆几个可爱造型,说话手舞足蹈,心态极为年轻。活泼的性格虽然跟武警身份有点距离,却是一个极好的艺术基础。
刘朝是天生的舞台表演艺术家。
最受欢迎的女演员
刘朝出身于艺术世家,父母均是资深话剧表演艺术家,师从著名剧作家和戏剧表演艺术家、教育家欧阳予倩。刘朝从小受到很多艺术门类的熏陶,歌舞团、杂技团、京剧团都居住在那个大院。这样的耳濡目染,让刘朝从小对艺术有着浓厚的兴趣。
学了8年芭蕾,跳了段舞剧《白毛女》里面的“喜儿”,刘朝顺利考入昆明军区国防文工团。后来,为了发展曲艺事业,刘朝又调入四川曲艺团。当兵那几年,刘朝在成都、湖南、云南等很多少数民族的地方生活很久,打下了很好的少数民族艺术基础。在成都,刘朝还拜著名声乐教授刘崇义为师,在刘老师的指导下,进行了8年专业的声乐学习。刘朝艺术天分很高,学习声乐的第二年,就受四川音乐学院院长的邀请,在四川音乐学院开了个人音乐会,并成功驾驭了民族、歌剧、曲艺、戏曲四大艺术板块。
在四川的时候,刘朝参加中央电视台的“全国青年歌手电视大赛”,在四川赛区连续三年第一名。刘朝是那种天生吃舞台饭的人,往舞台上一站,自有一股抓人的气场,她的演出总是最受观众欢迎。上世纪80年代,刘朝在四川攀枝花演出,第一天在电厂演出完,第二天转战到炼钢厂。电厂的工人们坐着拖拉机集体追到炼钢厂看刘朝演出,办公室的人跟刘朝说:“刘老师,你看你整的人家跟着你搬迁。”
刘朝在西昌卫星发射基地说《岳云传》,这一锤砸下去,“欲知后事如何,咱们下回再讲。” 下面观众不干了,拍着手齐声喊:“刘朝!来一个!刘朝!来一个!”把同台的演员气得不行,西昌发射基地都是高层次的军官,文化程度特别高,“刘朝怎么那么火?我们十多分钟一个炮都没出。”在四川康定海拔2000多米的高原上演出,缺氧,气都喘不匀,聚精会神地演出完毕,累得快虚脱了。好不容易到后台休息一下,接到观众递来的条子,“请这个演员再返场。”硬咬牙上场,一边唱一边喘,刘朝觉得特别对不住观众,观众却依然报以热烈的掌声。这大概就是所谓的观众缘吧。
不会假唱的女歌手
1994年,刘朝到北京报考刚成立不久的武警北京第二总队文工团,监考人是著名歌唱家李双江,他当场给了刘朝一个简短但分量很重的评语:“这个演员可取。”
同年,中央电视台现场直播“郭兰英舞台生涯60周年大型演唱会”,郭兰英亲自给刘朝发出邀请函。刘朝唱了一首《八月十五月儿明》,第一嗓子出去,立刻掌声雷动。刘朝说她压根儿不能假唱,有时候需要电视还声,她就关着麦克风唱,“我就想现场唱,过瘾。不让出声可急死我了!”所以她只会“假假唱”。
刘朝在武警二总队担任了3年团长,经常带兵下部队演出,业务基本荒废了。热爱艺术的刘朝心里很焦急。有一次她听说一个故事,3个男特警去墨西哥参加国际射击比赛,在机场因为携带枪支被拦下来。后来好不容易转机来到了墨西哥,谁知道人到了,枪却托运丢了。报到截至时间在即,3个男特警决定借枪报到。可是枪支等于是自己的孩子呀!天天擦卸维护,已经用惯了手。射击场上失之毫厘差之千里,到了墨西哥才知道比赛规则有变。3个男特警翻越半个地球代表中国参加比赛,时差还没有倒过来,连夜熟悉枪支,装卸,瞄准,掏枪,练习新规则,最终比赛获得第二名。
刘朝立刻去男特警体验生活,随后创作出一个本子《目标正前方》。这个作品获得了全军比赛的最高奖。刘朝因此被调入中国武警总部。在总部干了3年,刘朝依然深深惦记着她的艺术梦想。部队给了刘朝发展的空间,这些年刘朝把全国全军的曲艺金奖统统收入囊中。但她是一个不安于安逸的人,朋友说她“艺术张力比较大”。47岁的时候,刘朝提前退伍,准备开始放开脚步追寻她多年的梦想。
退伍后,刘朝创作并演播了《双枪老太婆》《女子特警队》《欢喜虫》《野火春风斗古城》《东厂与西厂》,配乐评书《女神》6部长篇作品。而这仅仅是刘朝退伍生涯的序幕。她还有一个更大的梦想:创立自己的曲艺品牌――情景书。
开创新式评书“情景书”
刘朝是在部队成长起来的文艺兵,她有着无限的艺术创新想象力,她想创“情景书”这个品牌已是多年的梦想了。以往传统评书的表演是一身大褂、一张桌子、一块手帕、一块醒木。但刘朝更渴望能张开艺术想象的翅膀,调动多方面表演元素为观众服务。她要将自己多年来积累的形体、声乐、说唱表演,甚至各种音色的打击乐等姊妹艺术巧妙地融入作品和人物中去。刘朝现在的表演已由一台专业电子演奏琴代替了书桌,一身迷彩服和她自己设计的服装替代了大褂。由刘朝一人表演、演奏并演唱的歌曲、背景音乐、各种音效声在作品中恰当地起到烘托作用。相信观众一定能在丰富多彩的讲述意境中达到全新的视听效果。
刘朝正在创作的情景书《多彩女警》就是这种尝试――女特警队长说:“同志们,总部马上要搞一台春晚,要求我们赶排一个反映女特警的节目,来!展示展示!”有的女特警就“我来表演一段山东快书,当里个当,当里个当……”接着就说开了;有的说:“我是四川的,我给大家唱一段四川青衣吧……”正当大家都踊跃表现的时候,队长发现一个湖南湘西的小战士,特别文静地坐在角落,也不说话。队长问她:“湘妹子你怎么回事?你在练武场上那么虎虎生威,到这种场合怎么一言不发了呢?”她说:“我不会跳舞,唱歌五音又不全。”队长说:“听说你的苗族铜鼓打得非常好啊,你打给我们看看嘛!”刘朝顺手演奏起电子琴,用鼓的音效来了一段精彩的打击乐。
情景书可以说完全建立在刘朝的多才多艺上,在她评书的语言、吐字、气息等功底上,插入其他艺术元素,创造出更加丰富生动的人物形象。在乐器的选用上,刘朝用了电子琴。电子琴的音色非常丰富,可以模拟出很多种音效,为场景的拟定提供了很好的条件。想起以前演出的时候,刘朝皱起了眉头,“我把本子标得清清楚楚,跟音响师商量:‘我刚说完这句话,音乐立刻起。’但音响师往往配合不好。演员在台上讲究一个节奏,你停两秒钟都难受,整个气氛就干了。所以我很愿意一个人把音效都搞定。”
情景书还是个暂定名,有一次刘朝跟奇志吃饭,奇志说:“你这个想法非常好啊!要叫情景故事有点儿直白,叫‘情景龙门’怎么样?”刘朝觉得“龙门”有地域性,北方人可能不懂,就暂定为“情景书”的名字了。
刘朝说,情景书是她18年前的一个梦想。但是一直囿于各种想法的桎梏,比如传统艺术的传承等。情景书的想法也引起了一些老艺术家的讨论。但刘朝认为艺术争议很正常,“18年前我没有做,我已经很后悔了。我浪费了18年的光阴,因为给自己设限。现在到了一定的年龄,艺术视角是不一样的。我想该到时候了,成不成是一回事,做不做是一回事。”
艺术积淀厚积薄发
情景书充分地发挥出刘朝几十年积累的舞台经验。因为兼任北大语言和表演的教授,刘朝经常接触正在学习艺术的学生,她对这些学生常有深深的忧虑。现在条件好了,学生们都去追求学历,而舞台经验贫瘠,有的学生研究生毕业只有几场演出经验。浮躁,沉不下心来刻苦也是一大现象。刘朝说起《我的丑娘》的演员张少华老师,“我跟张少华老师配过戏。看看人家的艺术精神,她在后台什么时候都在默戏、看台词,就跟我父亲那代人很像,饭不吃茶不喝觉不睡,首先把这个作品拿下。唐国强老师有句话说得特别好:拼艺术拼到最后拼的是文化。”
的确,艺术积淀不深厚,艺术道路走不远。而刘朝好像正相反,是那种特别沉得住气的人。别人都替她着急,这么好的舞台功底,为什么一直在沉寂?刘朝却说:“十年磨一剑,着什么急?”不把情景书研究到几近完美,刘朝是不会轻易拿出手的。这是刘朝对艺术的严谨。
篇7
[关键词] 肺纤维化；基质金属蛋白酶-2；基质金属蛋白酶-9
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）05（c）-0014-03
肺纤维化是多种慢性肺疾病的共同结局，表现为肺间质细胞大量增殖、细胞外基质（ECM） 异常增生及肺组织结构的重构，疾病早期表现为弥漫性肺泡炎，肺泡结构破坏，肺泡上皮细胞和基底膜的损伤是肺间质纤维化病理过程的特征性改变，MMP-2和MMP-9可以降解肺泡壁基底膜的重要成分Ⅳ型胶原，因此，MMP-2和MMP-9在肺纤维化的发生过程中起着重要的作用。清肺化痰通络方是全国名老中医邱幸凡教授的临床经验方，在临床应用中取得了较好疗效。本实验借鉴博莱霉素A5（BLMA5）诱发的大鼠肺纤维化模型，利用免疫组化法检测肺内MMP-2和MMP-9的表达，以探讨清肺化痰通络方防治肺纤维化的作用及可能机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物
雌性Wistar大鼠72只，SPF级，体重（200±20）g，购于武汉大学试验动物中心。
1.2 试验药物
清肺化痰通络方由黄芩、瓜蒌、桃仁、地龙、黄芪、当归、鱼腥草（购于湖北省中医院）组成；常规水煎后，水浴浓缩药液至每1 mL含生药2 g，4℃保存。将BLMA5（8 mg/支，天津太和制药有限公司，批号：030705）制成5 mg/mL的生理盐水溶液。MMP-2单克隆抗体（产品编号：ZM-0330）、MMP-9单克隆抗体（产品编号：ZM-0335）及Sp试剂盒（产品编号：SP-9000）由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。
1.3 肺纤维化模型制作
参照文献[1]，将大鼠麻醉，趁动物吸气瞬间，在额镜的直视下迅速将焊锡制成圆头的12号腰穿针头，通过声带插入气管约3~4 cm，缓慢注入BLMA5生理盐水溶液1 mL/kg。立即将大鼠直立旋转。
1.4 动物分组及处理方法
将72只大鼠随机分为三组：① 模型组（24只）：造模2 h后，生理盐水灌胃，15 mL/（kg·d）；② 干预组（24只）：造模2 h后，清肺化痰通络方水煎剂灌胃，15 mL/（kg·d）；③对照组（24只）：不造模，生理盐水灌胃，15mL/（kg·d），灌胃前禁食4 h，不禁水。以上各组动物分别在实验第3、7、14、28天各处死6只。
1.5 标本采集及处理
经0.5%戊巴比妥钠溶液腹腔内注射麻醉后，称重；颈动脉放血处死，10％甲醛溶液固定右肺上叶，制作石蜡切片，用于HE染色和Masson染色及肺组织MMP-2和MMP-9表达检测。
1.6 指标检测
1.6.1 病理染色分析 依据Szapiel等[2]方法，确定肺泡炎及肺纤维化程度。①肺泡炎分级，0分：无明显病变；1分：轻度肺泡炎，病变占全肺20%以下；2分：中度肺泡炎，病变局限在全肺20%~50%；3分：弥漫性肺泡炎，病变范围超过50%。②肺间质纤维化分级，0分：无肺间质纤维化；1分：轻度肺间质纤维化，病变范围局限在全肺20%以下；2分：中度肺间质纤维化，病变范围占全肺20%~50%；3分：重度肺间质纤维化，病变范围超过50%，肺泡结构消失，肺组织结构紊乱。
1.6.2 免疫组织化学分析 Sp法测定肺组织的MMP-2和MMP-9表达，采用HUMIAS-2000医学图文分析系统，对免疫组织化学结果定量分析。每张切片在高倍视野（×400）下随机选择不相重叠的5个视野，细胞核为蓝色，MMP-2和MMP-9阳性细胞为棕黄色，阴性对照片以PBS替代MMP-2和MMP-9。测定阳性细胞的积分光密度，观察MMP-2和MMP-9免疫阳性细胞的分布，以反映各组肺组织中MMP-2和MMP-9表达的变化。
1.7 统计学方法
采用SPSS 12.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，三组间比较采用单因素方差分析，用q检验进行不同组间的两两比较，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 清肺化痰通络方对肺纤维化大鼠肺组织的影响
2.1.1 肉眼观察 对照组可见大鼠肺呈粉红色，表面光滑，弹性良好。模型组第3、7天可见大鼠双肺呈鲜红色，有数个的散在出血点，体积增大，第14天双肺可见暗红色陈旧出血，第28天时双肺苍白、表面凸凹不平、体积缩小、弹性较差，硬度增加。干预组与模型组病变基本一致，但程度稍轻，肺体积略增大，弹性稍差。
2.1.2 镜下观察 对照组大鼠肺组织结构清晰，肺泡壁完整，肺泡上皮细胞形态正常，均未见明显病变。模型组第3天时肺内出现肺泡间隔增宽、炎性细胞浸润等急性肺泡炎改变；第7天时炎症表现更明显，镜下见大片炎性细胞浸润，成纤维细胞开始增殖；第14天时肺泡炎持续加重，纤维组织开始增生；第28天肺泡炎较前有所减轻，部分肺泡腔消失，被大量成纤维细胞、增生的胶原纤维所取代，已基本呈现肺纤维化改变。干预组大鼠肺部病理表现的变化规律与模型组基本一致。三组间同时段的肺泡炎程度，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）；干预组和模型组同时段肺泡炎程度差异有统计学意义（P ＜ 0.05），特别是第7天和第14天干预组肺泡炎程度较模型组轻，两组间差异有高度统计学意义（P ＜ 0.01）。干预组和模型组在第3天肺纤维化程度差异无统计学意义（P ＞ 0.05），三组在第7、14、28天的肺纤维化程度，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）；第28天干预组肺纤维化程度较模型组轻，差异有高度统计学意义（P ＜ 0.01）。见表1。
2.2 三组MMP-2和MMP-9蛋白表达比较
对照组肺组织中可见MMP-2少量阳性表达，主要分布在肺泡巨噬细胞、肺泡上皮细胞、成纤维细胞和气道上皮细胞胞浆内。模型组、干预组第3天时，肺内MMP-2阳性表达细胞均多于对照组，肺泡间隔内可见少量成纤维细胞呈阳性反应，血管、支气管周围及肺泡腔镜下内可见大量单核巨噬细胞呈强阳性反应，三组间比较，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）；第7天模型组和干预组MMP-2表达明显增强，可见大量肺泡巨噬细胞和间质内的成纤维细胞呈阳性表达； 第14天模型组和干预组肺内阳性细胞表达最强，与第3、7、28天比较，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）；第28天时，模型组和干预组阳性细胞较同组第14天时明显减少，但仍高于对照组。见表2。
对照组肺内可见MMP-9少量弱阳性表达，表达主要分布于肺胞巨噬细胞和支气管上皮细胞。第3天时模型组、干预组大鼠肺内血管、支气管周围及肺泡腔内的单核巨噬细胞呈强阳性反应，与对照组比较，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）；第7天模型组和干预组肺内MMP-9表达增强，除支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞外，还见大量间质内的成纤维细胞和肺泡巨噬细胞呈阳性表达，与同组第3、14、28天比较，差异有高度统计学意义（P ＜ 0.01）；第14天模型组和干预组肺内阳性细胞略有减少；第28天模型组和干预组MMP-9表达较第7天时明显减弱，但仍高于对照组（P ＜ 0.05）。干预组阳性细胞明显少于同时段模型组，两组间差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。见表2。
3 讨论
现代医家根据肺纤维化临床表现及病机变化将其归为咳嗽、肺胀、喘证、气短、肺痿、肺痹、痰饮等范畴，正气亏虚为本，血瘀内阻为标，正虚邪实为其基本病机，其中，痰阻肺络、肺阴不足、瘀血阻滞、内闭喘脱为临床多见的病变类型。消肿化痰通络方中黄芩、瓜蒌为君药，黄芩味苦寒主入肺经，可泻火解毒，治肺热所致咳吐黄痰；瓜蒌药味甘、微苦，性寒，归肺、胃、大肠经，清热化痰，宽胸散结、痛疮肿毒，两者相伍则肺之热清痰化而气机调畅；鱼腥草味辛，性微寒，归肺经具有清热解毒、消痈排脓功效，肺萎之人久咳入络，必兼气虚血瘀，故以地龙、桃仁活血化瘀、通络，且地龙性寒味咸，善下行可平抑上逆之肺气而止咳平喘；佐以黄芪、当归养血补气，与君药相配，苦寒、甘温并用，使肺热得清而不伤肺津，共奏清热化痰、止咳平喘、活血益气之功。
实验结果显示，造模大鼠均有不同程度的耸毛、活动减少、嗜睡，少吃等症状。造模初期可见大鼠体重明显下降，约3 d后逐渐缓解，其中，干预组体重恢复较快，第28天时体重已与空白对照组相近，而模型组体重恢复较慢，第28天时仍明显低于对照组。通过HE光镜观察模型组早期即出现肺泡炎，14 d后以肺纤维化病变为主，28 d出现典型的肺纤维化改变，符合肺纤维化的病理改变过程[3]，提示造模成功。干预组肺泡炎程度明显的轻于模型组，提示清肺化痰通络方可以减轻早期肺泡炎的改变，第14、28天干预组肺纤维化程度轻于同时段的模型组。提示清肺化痰通络方可以减轻模型动物的症状，并在肺组织结构上减轻和延缓纤维化的发生。
组织纤维化的发生是由于ECM代谢失衡，打破了脏器原有的组织结构，纤维结缔组织大量增生的结果[4]。ECM包括纤维性成分、连接蛋白和间质成分，主要为糖胺聚糖等，其对细胞增殖和分化发挥重要调控作用，合成和降解这些蛋白质的ECM代谢酶可分为基质金属蛋白酶类 （MMPs）和基质金属蛋白酶组织抑制物（TIMP）。MMPs的明胶酶（MMP-2、MMP-9）主要降解Ⅳ胶原纤维、纤维连接蛋白、肺基膜等成分，由于肺基膜及结构支架的损伤与肺纤维化密切相关，因此，MMPs在肺纤维化发生中的作用日益受到重视[5]。有报道MMP抑制剂巴马司他等能降低MMP-9活性，抑制TNF-α和TGF-β1释放，减轻动物模型的肺纤维化[6-7]。Lemjabbar等[8]测定了肺间质纤维化患者支气管肺泡灌洗液中蛋白和MMP-2 mRNA的表达，显示激素及免疫抑制剂治疗可以降低肺内MMP-2表达。上述研究均表明损伤肺组织可能通过持续性高表达MMPs，使基膜不可逆性损伤断裂，阻碍新生上皮组织重构正常肺泡腔，最终导致肺纤维化。
本实验研究显示，第3天开始模型组和干预组肺内MMP-2、MMP-9的表达均开始增加，模型组和干预组MMP-9在第7天时已经达到高峰，然后干预组快速下降，到第28天时MMP-9水平基本接近正常，模型组在第7天出现MMP-9表达高峰，第14、28天也出现明显的下降，但是28天时MMP-9的水平仍高于对照组。肺纤维化大鼠在造模的第3~14天以肺泡炎的病理改变为主，提示MMP-9可能与早期上皮基底膜损伤有关，参与了细胞外基质和基底膜的降解。干预组的MMP-9明显下降，且在第14天时MMP-9的表达明显低于模型组，推测清肺化痰通络方可能是通过抑制MMP-9表达，从而延缓、减轻早期肺泡炎的发生。模型组和干预组MMP-2在第14天时达到高峰，然后缓慢下降，第28天时，模型组和干预组仍高于对照组。第14、28天时以肺纤维化为主要病变，提示MMP-2则可能在肺泡上皮细胞的再生与肺组织的异常修复中起重要作用。第14、28天MMP-2在干预组的表达低于模型组，且干预组肺纤维化程度比模型组轻，提示清肺化痰通络方通过延缓或者抑制MMP-2表达，达到延缓以及抑制肺纤维化的目的。
综上所述，本实验结果提示，BLMA5诱导的肺纤维化模型在不同时期MMPs的表达不同，早期病变肺组织以MMP-9的增加为主，晚期则以MMP-2增加为主，与有关报道一致[9]。清肺化痰通络方可能通过抑制MMP-9在肺纤维化大鼠肺内的表达，减轻早期的肺泡炎，抑制MMP-2的表达，延缓和抑制后期肺纤维化的发生。
[参考文献]
[1] 陈佰义.博莱霉素致大鼠肺纤维化肺泡巨噬细胞氧化和抗氧化损伤的动态研究[J].中国医科大学学报，1995，24（3）：240.
[2] Szapiel SV，Elson NA，Fulmer JD. Bleomycin induced interstitial pulmonary disease in thende，athymice mouse [J]. Am Rev Respir Dis，1979，120：893.
[3] 柴文戍，李永春，刘玉玲，等.博来霉素致肺纤维化大鼠形态学变化的实验研究[J].中国实验动物学报，2003，11（2）：77-80.
[4] 卢韶华，王岫南，谭云山，等.基质金属蛋白酶与弥漫性肺间质纤维化[J].国外医学：呼吸系统分册，2004，24（z1）：31-34.
[5] 朱礼星，钟南山，徐军，等.基质金属蛋白酶与肺纤维化[J].现代临床医学生物工程学杂志，2001，7（5）：382-385.
[6] Corbe MS，Caulet-Maugendre N，Germain S，et al. Inhibition of bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice by the matrix metalloproteinase inhibitor batimastat [J]. J Pathol，2001，193（4）：538-545.
[7] Underwood DC，Osborn RR，Bochnowicz S，et al. SB 239063，a p38 MAPK inhibitor，reduces neutrophilia，inflammatory cytokines，MMP-9，and fibrosis in lung [J]. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol，2000，279（5）：895-902.
篇8
【关键词】肺结核;基质金属蛋白酶-9;血管内皮细胞生长因子
Investigation of the serum MMP-9 and VEGF and its role in active pulmonary tuberculosis patients
HE QinWei
【Abstract】Objective To study the relationship between the serum expression of MMP-9 and VEGF with the clinical characteristics in active pulmonary tuberculosis patients. Methods Expression of MMP-9 and VEGF were detected by ELISA method in 42 patients with active pulmonary tuberculosis and with a control of 42 health cases. Results The serum levels of MMP-9 and VEGF in active pulmonary tuberculosis patients were significantly higher than that of healthy group(P
【Key words】Pulmonary tuberculosis;Matrix metalloproteinase-9;Vascular endothelial growth factor
【中图分类号】R521 【文献标识码】A 【文章编号】1006-1959(2009)08-0045-02
结核是威胁人类健康的重要疾病之一。目前全世界每年结核发病率以大于1%的速度增长,即全世界每年有800万的新增结核病例,而每年有200万人直接死于结核病[1]。结核发病率的增加除与现在流行的结核菌株抗菌性增加有关外,对结核感染机制可能由T淋巴细胞介导的细胞免疫反应,多种炎症性细胞因子和血管生成因子参与了该过程[1]。本研究即利用双抗体夹心ELISA法检测活动性肺结核患者血清中MMP-9及VEGF的表达,探讨其在肺结核发生发展中的作用及与临床特点的关系。
1 病例与方法
1.1病例:
活动性肺结核患者42名。近2个月内无其它感染性疾病,其中男性20名,女性22名,年龄20～56岁(平均33.4岁)。42例患者中痰结核分枝杆菌涂片阳性22例,阴性20例;42例均经高分辨CT区分为空洞型肺结核18例和无空洞型肺结核24例;病变局限23例,病变广泛19例。健康对照者42例,其中男性21名,女性21名,年龄20～50岁(平均32.9岁)。
1.2 方法:①仪器:Dynatech MR5000酶标仪。②试剂:MMP-9和VEGF定量ELISA试剂盒为美国PBM公司产品。③ 标本收集:采患者和健康对照者静脉血5ml,立即离心机离心,2 500rpm离心10min,吸取血清-70℃保存待测。④ 操作方法:首先以标准品/标本稀释液将冻干标准品复溶,静置15min后混匀(浓度为2000pg/ml);进行倍比稀释成7个浓度。取出所需板条,除空白孔外,分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中,用封板胶纸封住反应孔,温室(20~25℃)孵育120min,洗板4次;除空白孔外,加入检测剂工作液(100ul/孔),封住板孔,温室20~25℃)孵育60min;洗板4次;加入底物(50ul/孔),避光室温25min。加入终止液(50ul/孔)均匀后即刻测量OD450值(5min内)。
1.3 统计学分析:采用SAS 8.01 for windows 进行统计分析, 实验数据以(x±s)表示,组间比较采用秩和检验。
2 结果
2.1 肺结核患者及健康志愿者血清中MMP-9、VEGF表达水平的比较:活动性肺结核患者组血清中两种因子水平显著高于健康志愿者组 (P
2.2 痰结核涂片阳性组与痰结核涂片阴性组血清中MMP-9、VEGF表达水平的比较:痰结核涂片阳性组血清中两种因子水平显著高于痰结核涂片阴性组 (P
2.3 肺内空洞病变组与肺内无空洞病变组血清中MMP-9、VEGF表达水平的比较:肺内空洞病变组血清中两种因子水平显著高于肺内无空洞病变组 (P
2.4 肺内广泛病变组与肺内局限病变组血清中MMP-9、VEGF表达水平的比较:肺内广泛病变组血清中两种因子水平显著高于肺内局限病变组 (P
3 讨论
MMP是一组在结构与功能上极为相似的含锌内肽酶,依其结构与底物特异性分为5个亚型:胶原酶(MMP-1、-8、-13)、明胶酶(MMP-2、-9)、间质溶素(MMP-3、-7、-10、-11、-12)、膜型MMP(MT1-、MT2-、MT3-、MT4-MMP或称MMP-14、-15、-16、-17)和其它MMP[2,3]。MMP不仅参与正常组织的发生、塑形及修复过程,而且在许多病理过程中起重要作用,如急性与慢性炎症、紫外线诱导的皮肤损伤、血管生成、自身免疫性大疱病、类风湿性关节炎及肿瘤侵袭与转移等[4]。MMP-9是一类依赖锌粒子的蛋白水解酶,能够降解细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的主要成分Ⅳ 、V型胶原和明胶,其中Ⅳ型胶原对维持正常组织的结构和功能意义重大,MMP-9能够与其特异性位点结合,使其降解[5]。在慢性炎症过程中,MMP-9能诱导炎性细胞如中性粒细胞、淋巴细胞等通过基底膜[6],而被降解的ECM蛋白产生的趋化因子又使更多的炎性细胞聚集。在促血管生成的各种调节因子中,VEGF是一种主要调节因子,它通过血管内皮生长因子受体转导其促血管生成的信号,促使血管通透性增加及血管内皮细胞增生、迁移,促进血管构建,最终导致新生血管形成[7]。此外,VEGF参与细胞外蛋白水解和基底膜的降解,利于血管内皮细胞的迁移和增生,并增加血管的通透性,使血浆蛋白包括纤维蛋白外渗,形成纤维素网络,为毛细血管延伸生长提供良好条件, 而且它能诱导MMP-9的表达[8]。MMP-9及VEGF均参与了组织的修复和重建、血管的生成、肿瘤侵袭和转移、慢性炎症反应等许多重要的生理病理过程。有研究表明结核杆菌细胞壁中的糖脂以及其他多种成分能促使单核/巨噬细胞分泌产生MMP-9及VEGF[6,9]。
本实验结果显示,肺结核患者血清MMP-9及VEGF表达水平明显高于健康对照组,空洞型肺结核患者血清MMP-9及VEGF表达水平明显高于非空洞型患者组,广泛病变患者MMP-9及VEGF表达水平明显高于局限患者组,表明肺结核患者过度表达的MMP-9及VEGF加速肺组织中EMC的降解,促进新生血管形成,反之,而新生血管形成进一步促使病灶结核杆菌播散。近期的研究表明MMP-9导致的蛋白水解可能是形成肺结核空洞的原因之一[10],本研究结果亦显示了空洞型患者MMP-9的表达水平明显高于无空洞型患者,较多量的MMP-9导致更强的蛋白水解作用,结核杆菌更容易形成空洞。综上所述,MMP-9及VEGF水平与其临床特点密切相关,推测阻断MMP-9及VEGF表达可能为肺结核的治疗提供新的思路。
参考文献
[1] Chakrabarti B, Calverley PM, Davies PD. Tuberculosis and its incidence, special nature, and relationship with chronic obstructive pulmonary disease. Int J Chron Obstruct Pulmon Dis. 2007,2(3):263-272
[2] Airola K, Fusenig NE. Differential stromal regulation of MMP-1 expression in benign and m alignant keratinocytes. J Invest Dermatol, 2001, 116(1): 85-92
[3] Kerkel E, Ala-aho R, Jeskanen L, et al. Differential patterns of stromelysin-2 (MMP-10) and MT1-MMP (MMP-14) expression in epithelial skin cancers. Br J Cancer, 2001, 84(5): 659-669
[4] Johansson M, Airola K, Grénman R, et al. Expression of collagenase-3 (matrix metalloproteinase-13) in squamous cell carcinomas of the head and neck. Am J Pathol, 1997, 151(2): 499-508
[5] Kleiner DE, Stetler-Stevenson WG. Matrix metalloproteinases and metastasis. Cancer Chemother Pharmacol. 1999,43:Suppl:S42-51
[6] Jin HY, Lee KS, Jin SM, et al. Vascular endothelial growth factor correlates with matrix metalloproteinase-9 in the pleural effusion. Respir Med, 2004,98(2):115-22
[7] Alatas F, Alatas O, Metintas M, et al. Vascular endothelial growth factor levels in active pulmonary tuberculosis. Chest, 2004, 125(6):2156-2159
[8] Brekken RA, Thorpe PE. Vascular endothelial growth factor and vascular targeting of solid tumors. Anticancer Res, 2001,21(6B):4221-4229
[9] Rivera-Marrero CA, Schuyler W, Roser S, et al. Induction of MMP-9 mediated gelatinolytic activity in human monocytic cells by cell wall components of Mycobacterium tuberculosis. Microb Pathog, 2000, 29(4):231-244
篇9
【关键词】 心肌再灌注损伤；nf-κb；血管紧张素ⅱ；葛根素
preconditioning of puerarin reduce the myocardial ischemia/reperfusion injury by inhibiting the transcription of nf-κb/wu liming，jiang ting，yei rong,jin ting,yang rui,wang fenzhen//chinese journal of cardiovascular rehabilitation medicine,2009,18(2):185
abstract：objective:to investigate whether preconditioning of puerarin could inhibit both nf-κb 65protein activation and circulatory or cardiac local ras in rat with myocardial ischemia/reperfusion injury(i/r).methods:thirtysix healthy male sd rats were randomly divided into shamoperated group (sham group)， i/r model group and puerarin preconditioning group (n=12).myocardial infarct size was measured by ttc.serum myocardial enzymes were measured and light microscopic study was performed; the localization of nf-κb was detected by immunohistochemistry and the quantitation of activated nf-κb was detected by enzymelinked immunosorbent assay(elisa); the plasma and myocardium angⅱ content was measured by radioimmunoassay method. results:compared with i/r group, infarction area was significant smaller in the puerarin pretreatment group (p<0.05) and myocardial enzyme levels were significantly lower (p<0.05 all).the angⅱ content in circulation and cardiac myocyte significantly decreased(p<0.05 all).conclusion:preconditioning of puerarin could reduce i/r by inhibiting nf-κbp65 protein activity and reducing the levels of angⅱ both circulation and local heart.
author′s address：department of cardiology,union hospital,fujian medical university,fuzhou,fujian,350001,china
key words：myocardial reperfusion injury；nf-kappa b ；angiotensinⅱ ；puerarin
核因子－κb （nf-κb）是一组多向性核转录调节因子，参与炎症、免疫反应、细胞凋亡和肿瘤发生等多种生物进程。心肌缺血再灌注损伤（miri，i/r）时可激活对氧化还原敏感的nf-κb，并同时迅速激活肾素- 血管紧张素系统(ras)。葛根素(puerarin)具多种药理作用，已报道其抑制nf-κb的活性并延缓抑制型κb（iκb）的降解而降低循环和组织血管紧张素angⅱ(angⅱ)含量。有报道葛根素预处理可明显减轻大鼠miri，类似于缺血预处理[1]。本研究旨在初步验证葛根素预处理对miri的保护作用是否与抑制nf-κbp65蛋白的活性，而减轻ras激活相关。
1 资料与方法
1.1 实验动物分组
健康雄性清洁级sd大鼠共36只，均分为3组（每组12只）：（1）假手术组；（2）缺血(30min)再灌注(60min )（ir）组；（3）葛根素预处理组：葛根素 100mg/kg，于miri前15 min颈外静脉缓慢推注。
1.2 实验材料
（1）tkr-200c小动物呼吸机：江西特力麻醉呼吸设备公司;（2） 组织脱水机: 德国tp 1020；（3） 组织包埋机: 湖北孝感亚光电子技术研究所；（4）组织切片机:德国leica-rm 20259；（5） 数码相机: 日本尼康coolpix 2500；（6）心电图机：rm-6200c型生理记录仪；（7） 全自动生化分析仪：日本东芝120fr13；（8） 解剖显微镜：日本olypus；（9）电子天平：美国al104；（10）葛根素注射液（2ml：0.1g）：浙江康恩贝制药股份有限公司。
1.3 方法
1.3.1 模型制备：参照文献报道方法 [2～4]。
1.3.2 标本的采集与处理：每组随机抽取6只大鼠均于实验结束相应时间点取材。①取下腔静脉血4ml，每份2ml，其中一份加入促凝管, 3000 g，25℃离心4min, 吸取上层血清常温放置，检测血清心肌酶含量；另一份检测angⅱ含量；②剪取左室前壁ir心肌组织冲洗，分为3块, 其中3块经福尔马林固定、酒精脱水、石蜡包埋后做病理组织切片，光镜下观察组织病理学改变，其余组织用于检测其它指标。
1.3.3 血清心肌酶检测：东芝120fr全自动生化分析仪检测。
1.3.4 心肌梗死范围测定：参照collins等[]方法测定各组心肌梗死范围。
1.3.5 免疫组织化学分析法
（1）实验材料：①免疫组化笔：福州迈新生物技术开发有限公司；②兔抗nf-κbp65多克隆抗体：美国santa cruz sc－109；③羊抗兔maxvisiontm二抗试剂盒(一步法): 福州迈新生物技术开发有限公司； ④dab显色试剂盒：福州迈新生物技术开发有限公司；⑤显微数码成像系统：日本olympus bx－41。按试剂盒说明书操作，显微镜下心肌细胞中棕黄色颗粒为阳性表达，定位于细胞核者为nf-κbp65蛋白活化细胞；（2）心肌组织nf-κbp65蛋白活性检测 ： ①核蛋白提取试剂盒：德国pierce公司 no.78833； ②酶联免疫吸附测定（elisa）试剂盒：美国active motif公司 catalog nos 40096；③准蛋白：美国active motif公司 catalog nos 31102；④考马斯亮兰蛋白测定试剂盒：南京建成生物工程研究所；⑤高速低温离心机：德国eppendorf centrifuge 5810r；⑥雪花机：上海f-m-70；⑦漩涡混匀器 ：北京市六一仪器厂；（3）大鼠心肌组织细胞核蛋白提取：① 心肌组织剪碎后加入适量预冷磷酸盐缓冲液（pbs），匀浆过滤未研磨碎组织，以500 r/min，4℃离心3min，清除上清留下组织细胞； ② 分离约30mg组织加入150μl冰浴的cer1（含蛋白酶抑制剂）；③ 以2 500 r/min涡旋15s，重新悬浮组织团块，冰上孵育10min；④ 加入8.25μl冰浴的cer2；⑤ 以2 500 r/min涡旋5s，冰上孵育1 min；⑥ 2 500 r/min涡旋5s，微量离心机4℃，14 000 g，离心5min；⑦ 弃上清部；⑧ 加入100μl冰浴ner（含蛋白酶抑制剂），以2 500 r/min涡旋15s重新悬浮未溶解组织，冰上冰浴10min，反复冻融，共40min；⑨ 以2 500 r/min涡旋5s，微量离心机4℃，14 000 g，离心10min；⑩ 立即转上清于干净预冷的ep管中，储于-80℃冰箱待用；（4）细胞核蛋白定量 ：按照考马斯亮兰蛋白测定试剂盒说明书操作。
1.3.6 酶联免疫吸附测定（elisa）：检测nf-κbp65蛋白的dna结合活性：按transam nf-κbp65蛋白检测试剂盒说明书操作。
1.3.7 放射免疫分析法测定血浆和心肌组织angⅱ含量：①血浆angⅱ含量测定：放射免疫分析药盒购自北京北方生物技术研究所, sn-682b－3型放射免疫γ－计数器，严格按试剂盒说明书检测样本，试剂盒测定范围10～2000pg/ml，灵敏度5pg/ml，批内变异系数cvw<10%，批间变异系数cvw<15%，与血管紧张素i(ang i)交叉反应率<0 .01%；②心肌组织angⅱ含量测定： 根据文献报道[6]检测样本，同时用考马斯亮兰蛋白测定试剂盒测定对应心肌组织总蛋白含量。最终心肌angⅱ含量pg/100mg 表示。
1.4 统计学分析
采用spss 13.0软件包进行统计分析。两两之间比较采用snk-q检验。计量资料以均数±标准差(±s)表示，p<0.05为差异有显著性。
2 结 果
2.1 葛根素预处理对miri大鼠血清心肌酶和心肌梗死范围的影响
与ir组比较，葛根素预处理组的血清肌酸激酶（ck）、肌酸激酶-同功酶（ck-mb）含量明显下降ck（8552.00±47.39）u/l∶（7165.67±83.46）u/l；ck-mb（5071.50±61.54）u/l∶（4226.33±96.11）u/l，p均<0.05；心梗范围明显减少，氯化四唑（ttc）为（43.54±1.10）%∶（40.44±0.73）%，p<0.05。
2.2 葛根素预处理对miri大鼠心肌组织学影响
光镜下葛根素预处理组心肌间质血管扩张充血较ir组明显减轻,肌纤维轻度肿胀,有少量心肌纤维断裂及中性粒细胞浸润。
2.3 葛根素预处理对miri大鼠心肌组织nf-κbp65蛋白激活的影响
较之ir组，葛根素预处理组nf-κbp65的蛋白活性明显受抑（11.93±5.05）ng/μl ∶（8.65±0.24） ng/μl，p<0.01。
2.4 葛根素预处理对miri大鼠血浆及心肌组织angⅱ含量的影响
葛根素预处理组的血浆和心肌组织angⅱ含量虽较假手术组明显增高，但与ir组比较则显著降低（p均<0.05），见表1。表1 葛根素对大鼠血浆及心肌血管紧张素ⅱ（angⅱ）含量的影响注：ir：缺血再灌注。与ir组比较 p<0.05；与假手术组比较p<0.05。
3 讨 论
nf-κb由多个亚单位组成，静息细胞nf-κb的p65亚基与其抑制性蛋白（iκb）结合形成复合体，以非激活的形式存在于胞浆中。细胞刺激后iκb降解，nf-κb从iκb释放，并转移到细胞核，暴露核定位序列，结合到靶基因的启动子或增强子的κb结构域，引起靶基因转录[7]。
nf-κb是参与炎症反应的一个重要转录因子，参与许多基因表达的调控，其激活在多种细胞因子、粘附分子、趋化因子释放中起关键性作用[8]；miri激活nf-κb的可能因素包括氧化应激、复氧、内质网钙离子超载、游离基、no和内毒素等；其可诱导表达细胞间粘附分子（icam）-1、诱导型一氧化氮合成酶（inos）、肿瘤坏死因子（tnf）α和angⅱ 等，进而造成心肌炎症反应、损伤、凋亡和坏死，已发现小鼠胚胎心肌细胞ir模型nf-κbp65与心肌细胞凋亡及坏死有关[9]。
葛根素为豆科多年生落叶藤本植物的干燥根提取物,其有效成份为单体－异黄酮，已知葛根素减轻miri是减少无复流现象、抑制钙超载、减少白细胞损伤、抗自由基等多种机制的共同协调作用的组合[10]，葛根素可抑制过氧化氢诱导的大鼠晶状体上皮细胞中的nf-κb活化表达和抑制iκb的降解及nf-κb活性表达，抑制脑ir后炎症反应[11，12]。葛根素预处理可模拟经典缺血预处理的保护作用而显著减轻大鼠miri，但是否与抑制nf-κb p65蛋白表达并减少循环和局部angⅱ含量而发挥心肌保护作用，尚未见国内外文献报道。
本试验于在体大鼠miri模型上观察了葛根素预处理对心梗面积、心肌酶学及对nf-κbp65蛋白表达的影响，结果显示,较之ir组，葛根素预处理在明显缩小在体大鼠心梗面积和明显降低心肌酶学水平的同时明显抑制nf－κbp65蛋白的dna结合活性，提示葛根素预处理在明显改善心肌损伤程度，能与抑制nf-κbp65蛋白表达相关。
已知葛根素可降低急性心梗患者肾素活性和angⅱ水平[13]。本试验结果进一步显示，葛根素预处理亦显著降低循环及局部的angⅱ含量，推测葛根素预处理此效应可使与血管紧张素受体1（at1r）的angⅱ数量明显减少，从而阻滞at1r导致的炎症性心肌损伤减轻与nf-κb受抑制相关[14]。文献报道angⅱ诱导炎症因子的产生是通过nf-κb依赖途径[15] ；nf-κb也可上调心肌细胞表面的at1r而在心肌重构中发挥作用[16]。组织ras激活后, angⅱ可经过at1-r/nf-κb通路正反馈地进一步刺激血管紧张素原的产生[17]。另有报道葛根素减轻儿茶酚胺诱导的心肌损伤[18]，并从分子水平证明了葛根素为β-受体阻滞剂[19]，故笔者推测葛根素预处理一方面经抑制nf-κbp65蛋白的表达而减少循环及局部的angⅱ含量和/或下调at1r，减轻了在体大鼠miri的炎症反应而呈现心肌保护作用；另一方面减轻心脏交感神经末梢儿茶酚胺递质对β受体激活，此两种作用共同切断了儿茶酚胺与ras相互促进形成的恶性循环，但葛根素预处理是否确实具有类似血管紧张素转换酶抑制剂（acei） 的药理作用，抑制局部组织和循环中 angⅱ生成，尚待进一步研究。
【参考文献】
[1]高 翔, 李 涛, 高 全，等．葛根素预处理与缺血预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用［j］.贵阳医学院学报，2006，31（6）：523-526.
［2］masaharu a , hideo o , minoru h , et al. myocardial ischemia induces differential regulation of katp channel gene expression in rat hearts［j］. j clin invest, 1997，100（12）:3053-3059.
［3］覃 数，陈运贞，王志华．大白鼠实验性心肌缺血再灌注模型制备与心电图改变的特点［j］.重庆医科大学学报，1998，23（1）：8-11.
［4］刘付平，姚宏伟，李 俊．大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的改进［j］.安徽医科大学学报，2003，38（3）：234-6.
［5］collins t, read ma, neish as, et al. transcriptional regulation of endothelial cell adhesion molecules: nf-kb and cytokine inducible enhancers［j］.faseb j, 1995，9（10）:899-909.
［6］王华军，谢良地，晋学庆，等.自发性高血压大鼠左心室肥厚与血压、心肌局部血管紧张素ⅱ的关系［j］.中国实验动物学杂志，1999，9（3）：133-136.
［7］thompson je,phillips rt,erdjumentbromage h,et al.iκb-regulates the persistent response in a biphasic activation of nf-κb［j］.cell，1995，80:573-582.
［8］timothy s,blackwell,christman jw.the role of nuclear factor-κb in cytokine gene regulation［j］.am j respir cell mol biol，1997，17:3-9.
［9］brar bk，stephanoua a,okosib a,et at.grh-like peptides proctect cardiac myocytes from lethal ischaemic injury［j］.mol cell endocrinol，1999，20：55-63.
［10］孙 鹏，刘金龙.葛根素对组织缺血再灌注损伤保护机制的研究进展［j］.现代中西医结合杂志，2006，15(3)：405-407.
［11］陈燕启,刘德红,杨光田.葛根素在大鼠全脑缺血再灌注时对核因子κb表达的影响［j］.中国中西医结合急救杂志，2004，11（1）：21-25.
［12］赵宏伟,唐罗生,李国栋，等.葛根素对过氧化氢诱导鼠晶状体上皮细胞nf－κb活化表达的抑制作用［j］.眼科，2004，13（2）：103-108.
［13］李淑梅，刘 斌，陈海芬，等．葛根素注射液对急性心肌梗塞患者血浆内皮素及肾素－血管紧张素系统影响［j］.中国中西医结合杂志，1997，17(6):339-341.
［14］yamamoto k, shioi t，uchiyama k, et al.attenuation of virusinduced myocardial injury by inhibition of the angiotensin ⅱ type 1 receptor signal and decreased nuclear factor-kappa b activation in knockout mice［j］.jacc，2003，42（11）：2000-2006.
［15］tsuchiya k, yoshimoto t, hirono y, et al.angiotensin ⅱ induces monocyte chemoattractant protein-1 expression via a nuclear factor-b-dependent pathway in rat preadipocytes［j］. am j physiol endocrinol metab，2006，291: 771-778.
［16］cowling rt, gurantz d, peng j,et al. transcription factor nf-kappa b is necessary for up-regulation of type 1 angiotensin ⅱ receptor mrna in rat cardiac fibroblaststreated with tumor necrosis factor-alpha or interleukin-1 beta［j］.j biol chem，2002，277:5719-5724.
［17］nagai n，izuminagai k，oike y,et al. suppression of diabetesinduced retinal inflammation by locking the angiotensin ⅱ type 1 receptor or its downstream nuclear factor-κb pathway［j］.invest ophthalmol vis sci,2007,48( 9):4342-4350.
篇10
媒体调查发现，七夕之前网购情书销售火爆，一些淘宝店家的月销量已经破千。虽然大多数店家的服务口号是――只要你说出故事，我们就能写到你满意，但实际上这些情书还是东拼西凑、粗制滥造的比较多。而这样的情书，又有多少人能接受呢？
七夕网购情书 织女读不懂牛郎的爱
不知道S先生的这封情书到了女友的手里，女友会作何反应。但是，有一点可以想见，女友可能会看出情书不是男友所写。这是因为，两人之间已经很熟悉，她知道以身为理工男的男友的文学水平，写不出如此优美的情书。那么，当女友知道这封情书是花钱买来的时候，她又会作何感想呢？
七夕是爱情的节日。在这个广为流传、感动人间的爱情故事里，牛郎无疑是木讷的、笨拙的、不善表达的。因为他就是一个普普通通的凡人，也没有多少文化知识。要说对爱情的表白，天上的神仙哪一个不超过牛郎千百倍？可是，织女没有看上那些巧舌如簧的神仙，偏偏看上了凡人牛郎。而且为了这段爱情付出了惨痛的代价，哪怕一年只见一次面，也要和牛郎相守相牵。这是为何？织女看上的恰恰是牛郎没有那么多的花花肠子。即使牛郎不善表达，也不影响他们之间的纯美爱情。
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网购情书让七夕节变了味