艾叶炭化学成分分析

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摘要：目的对艾叶炭中化学成分进行分离及结构鉴定，为炒炭存性理论以及艾叶炭质量标准的提升提供实验依据。方法采用回流提取法、CC（柱色谱）、HPLC及NMR对艾叶炭进行提取、分离纯化及化合物结构鉴定。结果从艾叶炭中分离出2个化合物，化合物1为槲皮素，化合物2为二十八烷醇。结论进一步验证了炒炭存性理论，为艾叶炭的活性研究及临床应用奠定基础。

关键词：艾叶炭；槲皮素；二十八烷醇

艾叶炭由菊科多年生草本植物艾（ArtemisiaargyiLévl，etVant）的干燥叶经高温炮制而来。中药艾叶被广泛用作食物和草药，具有温经止血、散寒止痛的功效。艾叶中含有挥发油、黄酮类、鞣质类、三萜类等多种化学成分[1-8]，具有抗菌抗病毒、平喘镇咳祛痰、保肝、抗肿瘤、抗氧化等多种药理活性作用[9-12]。根据中药炒炭存性理论，艾叶高温炒炭过程是炭化而非灰化，炒炭后原指标性成分桉油精消失[13]，但仍有部分有机物未炭化，且有新的化学成分生成[14]。同时炒炭后难溶性草酸钙簇晶大幅减少产生游离钙离子，止血作用明显增强[15-17]。目前艾叶炭的化学研究十分稀少，在本课题组前期研究基础上，艾叶炭地方质量标准已被收载于2020年版《吉林省中药饮片炮制规范》第40页，本研究旨在对艾叶炭化学成分进行研究，进一步阐明中药炒炭存性理论并为临床应用奠定基础。

1材料与仪器

1.1药材艾叶炭为实验室自制，产品批号为20200511。艾叶炮制过程：将艾叶饮片净选，除去杂质、梗及灰屑，揉散置滚筒式炒药机中，设置锅底温度为180℃，转速为20r·min-1，待艾叶炒制冒黄烟，取少量水均匀喷洒，翻炒16min左右，待艾叶表面焦黑色，炒干，灭尽火星，取出，放凉得艾叶炭。其外观呈不规则碎片，表面为黑褐色，符合2020年版《吉林省中药饮片炮制规范》中的艾叶炭标准。1.2试剂与仪器乙腈（HPLC，FisherCo.，美国），磷酸（HPLC，国药集团化学试剂有限公司，中国）甲醇（AR，HPLC，国药集团化学试剂有限公司，中国），正己烷（AR，HPLC，北京化工厂，中国），乙酸乙酯（AR，HPLC，广东光华科技股份有限公司，中国），纯化水为实验室自制；核磁共振光谱仪（1HNMR：400MHz，13CNMR：100MHz，MerkCo.，德国），使用CDCl3和DMSO-d6为溶剂，高效液相色谱仪（Aglient：1260InfinityII，美国；Waters：600Controller，Delta600，2487，美国），精密电子天平（FA1204B上海菁海仪器有限公司，中国），层析用硅胶（200-300目，青岛海洋化工厂，中国），高效液相色谱柱（SHIMADZUC1810mm×250mm；GSA10250SIL1900110mm×250mm，环球色谱有限公司，中国），三用紫外分析仪（ZF-6，安灵股份有限公司，中国），旋转蒸发器（RE-52A，上海亚荣生化仪器厂，中国），水浴锅（HH-6，邦西仪器科技上海有限公司，中国）。

2方法与结果

2.1提取与分离艾叶炭1.0kg甲醇回流提取2次，每次30min，合并提取液，浓缩得到20.10g提取物。经硅胶柱色谱（200～300目），以正己烷-乙酸乙酯（10:0～0:10）溶剂系统梯度洗脱，经TLC检识合并相似流分，得到Fr.1-5。将Fr.1通过半制备正向高效液相色谱法（正己烷:乙酸乙酯=10:1，2.0mL·min-1），分离得到化合物2（68.72mg，Rt35.7min），高效液相色谱图1B；从Fr.4通过半制备反向高效液相色谱法（乙腈:0.1%磷酸=55:45，2.0mL·min-1），分离得到化合物1（75.69mg，Rt22.4min），高效液相色谱图见图1A。2.2结构鉴定化合物1黄绿色粉末；1HNMR（600MHz，DMSO-d6，TMS），δH：9.58（1H，s，OH-3），12.50（1H，s，OH-5），6.21（1H，d，J=2.0Hz，H-6），10.76（H，s，OH-7），6.42（1H，d，J=2.0Hz，H-8），7.69（1H，d，J=2.2Hz，H-2´），9.35（1H，s，OH-3´），9.30（1H，s，OH-4´），6.90（1H，d，J=8.5Hz，H-5´），7.56（1H，dd，J=8.5Hz，2.2Hz，H-6´）；13C-NMR（150MHz，DMSO，TMS），δC：148.1（C-2），136.2（C-3），176.3（C-4），161.2（C-5），98.6（C-6），164.9（C-7），93.8（C-8），156.6（C-9），103.5（C-10），120.4（C-1´），116.1（C-2´），145.5（C-3´），147.2（C-4´），115.5（C-5´），122.4（C-6´）。以上数据与文献[18-19]报道一致，故鉴定化合物1为槲皮素（Quercetin），化学结构见图2A。化合物2白色粉末；LR-EIMS（m/z，392），1H-NMR（600MHz，CDCl3，TMS），δH：3.59（2H，t，J=6.78Hz，H-1），2.02（H，d，J=5.16Hz，OH-1），1.52（2H，m，H-2），1.29（50H，m，H-3～27），0.85（3H，m，H-28），13C-NMR（150MHz，CDCl3，TMS），δC：63.1（C-1），32.8（C-2），31.9（C-3），29.7（C4～24），27.1（C-25），25.7（C-26），22.7（C-27），14.1（C-28）。以上数据与文献[20-22]报道一致，故鉴定化合物2为二十八烷醇（Octacosanol），化学结构见图2B。

3讨论

近年来艾叶以其温经止血为疗效被大量开发应用，其相关炮制品也广泛用于临床。传统中医药理论中炒炭存性是指药物只能部分炭化，更不能灰化，未炭化部分仍应保存药物的固有气味。艾叶炭由艾叶高温炮制而来，利用传统性状和总黄酮含量的双重综合评价确定180℃为其最佳炮制温度。炒炭后原指标性成分桉油精消失，无法用其含量评价艾叶炭质量。同时，难溶性草酸钙簇晶大幅减少产生游离钙离子增加止血作用，这与“炒炭止血”的传统中医药理论相一致。因此，对于艾叶炭中化学成分尤其是指标性成分研究尤为迫切。本研究在从艾叶炭中分离出2个黄酮类化合物，分别为槲皮素和二十八烷醇，并对其进行了综合光谱解析，通过1D&2D光谱对其进行了完整的结构归属，纠正了部分数据的归属错误，不仅为中药炒炭存性理论提供依据，同时，为日后艾叶炭质量标准的进一步完善与提升奠定坚实基础。

作者：谷乐 邵信婷 王雪钰 杨昭怡 段明华 王烨 李勇 单位：长春中医药大学药学院